專利名稱：蒟蒻薯的離體快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物品種的培植方法，具體的是蒟蒻薯的離體快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
蒟蒻薯(Tacca chantrieri Andre)，又名箭根薯，老虎須，黑蝴蝶等，是箭根薯科的多年生草本植物，是我國(guó)箭根薯科的重要代表品種，多生于熱帶雨林中。蒟蒻薯的花序大型，花、花序總苞和內(nèi)苞片均紫黑色，這在花卉中是鮮有的。其內(nèi)苞片條形、長(zhǎng)達(dá)幾十厘米，相當(dāng)獨(dú)特、漂亮；蒟蒻薯的株型挺拔，葉帶革質(zhì)，無(wú)論花、花序、植株均具有很高的觀賞價(jià)值。根壯莖常用于治胃潰瘍、高血壓、肝炎、外敷燒傷、燙傷、瘡傷，民間用于減肥，根壯莖具有很高的藥用價(jià)值。由于蒟蒻薯的自然繁殖受環(huán)境的影響較大，加上人為的干擾，其賴以生存的生態(tài)環(huán)境日益受到嚴(yán)重的破壞，目前，蒟蒻薯的分布日趨縮小，植株數(shù)量不斷減少，在91年公布的《中國(guó)植物》中，蒟蒻薯被列為三級(jí)保護(hù)漸危種。
蒟蒻薯在自然條件下主要依靠種子繁殖。但需即采即播，種子自然發(fā)芽率很低，蒟蒻薯也可用分株繁殖，但繁殖系數(shù)小。蒟蒻薯的果實(shí)為漿果，但其漿果無(wú)論是中途干癟或發(fā)育良好者都一直掛在花亭上需靠外力傳播，但其依靠外力的本領(lǐng)不強(qiáng)，因而影響其傳播和繁殖；一方面雖為漿果，但植株有一定的毒性，難于靠昆蟲(chóng)傳播，此外，沒(méi)有顯著風(fēng)媒傳播的特征。此外，民間有用蒟蒻薯作藥用的習(xí)慣，因而受人為的干擾大。蒟蒻薯為林下植物，森林環(huán)境的破壞也使蒟蒻薯的生境受到了威脅，因此，在自然界，蒟蒻薯的日益減少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)，提供了一種蒟蒻薯的離體快速繁殖方法，使這類瀕危的蒟蒻薯的種群得以擴(kuò)大，進(jìn)行其優(yōu)良種苗規(guī)模生產(chǎn)，從而在保護(hù)珍貴植物資源的基礎(chǔ)上使其得到開(kāi)發(fā)與利用。
本發(fā)明的蒟蒻薯的離體快速繁殖方法包括以下步驟第一步、引種將從云南引入的蒟蒻薯成株剪去葉留根狀莖、根帶回，置于遮陰度為80～90％的蔭棚中。種植在塘泥∶泥碳土∶粗沙＝6∶3∶1的基質(zhì)中，保持空氣的濕度在80％以上。
第二步、無(wú)菌外植體的獲得種子的無(wú)菌實(shí)生苗的獲得可以通過(guò)無(wú)菌播種來(lái)得到；種子的無(wú)菌播種有以下兩種方法(1)室內(nèi)無(wú)菌播種種子從母株采后馬上用自來(lái)水沖洗，70％酒精處理10～15s，無(wú)菌水沖洗3～5次，再用0.1％升汞消毒3-5min，無(wú)菌水沖洗5次后接種，黑暗培養(yǎng)，溫度保持在25～30℃。
(2)室外播種種子從母株采后馬上用自來(lái)水沖洗，用點(diǎn)播的方式播到泥碳土中，置遮蔭度為80～90％的蔭棚中，保持泥碳土濕潤(rùn)，空氣的相對(duì)濕度保持在80％以上。
第三步、芽的誘導(dǎo)及增殖芽的誘導(dǎo)與增殖主要從無(wú)菌實(shí)生苗開(kāi)始，當(dāng)無(wú)菌實(shí)生苗長(zhǎng)高到1.5～2.0cm時(shí)，將莖尖切下，接種到培養(yǎng)基(3)、(4)中培養(yǎng)。開(kāi)始第一、二代培養(yǎng)時(shí)，莖尖基部膨大，顏色開(kāi)始轉(zhuǎn)為淡黃色，并長(zhǎng)出白色到淡黃色的小芽，從第三代起，開(kāi)始抽出綠色葉片，在葉片抽出后的第二或三代，幼葉強(qiáng)烈誘導(dǎo)出直徑約0.1～0.2cm的白色小芽，將這些小芽接到培養(yǎng)基(3)、(4)中，約30～35天，這些小芽均長(zhǎng)成直徑約0.3～0.5cm、高約1.5cm、帶1～2片葉的適宜生根的壯芽。
培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基為MS，附加不同濃度的6-BA、KT、NAA、IBA，主要的培養(yǎng)基為(1)1/2MS，(2)MS；(3)MS+6-BA1.0～0.5+NAA0.3～0.05mg/L(以下單位同)；(4)MS+6-BA2.0～0.5+KT2.0～1.0+NAA0.3～0.05；(5)MS+6-BA0.5+IBA0.3(6)1/2MS+IBA0.5；以上培養(yǎng)基附加瓊脂7g/L，pH5.4～5.6，培養(yǎng)基(1)、(2)、(6)糖的用量為20g/L，培養(yǎng)基(3)～(5)的糖用量為30g/L，培養(yǎng)溫度為25～30℃。種子在萌芽前用暗培養(yǎng)，其余培養(yǎng)光照強(qiáng)度為1500～2000lx，每天光照10～12h；第四步、根的誘導(dǎo)與培養(yǎng)將步驟3中得到的直徑大于0.3mm的叢芽接種到含NAA、IBA的1/2MS中，再接到培養(yǎng)基(6)中培養(yǎng)，30～35天后植株基部即會(huì)長(zhǎng)出粗壯新根；步驟3中得到的直徑大于0.3mm的叢芽可直接接種到培養(yǎng)基(6)中進(jìn)行生根培養(yǎng)。
第五步、試管苗的移栽把即將移植的試管苗置于培養(yǎng)室外或即將移栽的蔭棚內(nèi)煉苗10～15天，洗凈試管苗附著的培養(yǎng)基，種植到河沙∶泥碳土＝6∶4的基質(zhì)中，苗床需遮蔭90％，保持空氣濕度80％以上，溫度保持在22～30℃，移栽后每3天噴施1/2MS營(yíng)養(yǎng)液。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)1、在自然界蒟蒻薯以種子或分株繁殖，繁殖的速度慢，這是其瀕危的原因之一。本項(xiàng)蒟蒻薯的離體快繁技術(shù)，在國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道。利用本方法可大規(guī)模生產(chǎn)蒟蒻薯優(yōu)良組織苗，從而大大提高蒟蒻薯的種群數(shù)目，保護(hù)了該瀕危物種。
2、本方法采用的無(wú)性快繁方法克服了種子繁殖中產(chǎn)生的變異，在選優(yōu)的基礎(chǔ)上，可大規(guī)模提供蒟蒻薯優(yōu)良種苗和無(wú)菌組培苗。
3、無(wú)論是種子繁殖還是分株繁殖，由于蒟蒻薯在自然界自然繁殖率低、種群稀少，其進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)利用受到限制，而本方法可大規(guī)模生產(chǎn)蒟蒻薯優(yōu)良組織苗，這為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用蒟蒻薯提供了廣闊的前景。
具體實(shí)施例方式
1、引種1996年12月從云南西雙版納熱帶植物園引入產(chǎn)于云南的蒟蒻薯成株5株剪去葉留根狀莖、根帶回，置遮蔭度為85％的蔭棚中，種植在塘泥∶泥碳土∶粗沙＝6∶3∶1的基質(zhì)中，保持空氣的相對(duì)濕度為90％。
2、無(wú)菌外植體的獲得種子的無(wú)菌實(shí)生苗的獲得可以通過(guò)室內(nèi)、室外無(wú)菌播種來(lái)得到從1997～2000年分別采種進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)，在每年的8月份漿果成熟后(以其在花亭上干枯為標(biāo)準(zhǔn))采播，播后60天統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率。
室內(nèi)播種的方法種子從母株采后馬上用自來(lái)水沖洗，70％酒精處理12s，無(wú)菌水沖洗5次，再用0.1％升汞消毒3min，無(wú)菌水沖洗5次后接種，黑暗培養(yǎng)，溫度保持在25℃。第一年(1997年)收的種子只接種在1/2MS和MS培養(yǎng)基中，結(jié)果全部不發(fā)芽，為此，在1998、1999年用上述方法直接無(wú)菌播種，得到無(wú)菌種子235粒，但所有種子均不發(fā)芽。2000年，分兩組，用上述方法直接無(wú)菌播種，但在其中一組加消毒紗布，將種子置于紗布上，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在有紗布一組上有兩粒種子發(fā)芽，發(fā)芽率為0.8％(見(jiàn)表1)。
室外播種種子從母株采后馬上用自來(lái)水沖洗，用點(diǎn)播的方法播到泥炭土中，置遮蔭度為85％的蔭棚中，保持泥炭土濕潤(rùn)，空氣的相對(duì)濕度保持在80％以上。
3、芽的誘導(dǎo)及增殖芽的誘導(dǎo)與增殖主要從無(wú)菌實(shí)生苗開(kāi)始，當(dāng)無(wú)菌實(shí)生苗長(zhǎng)高到1.8cm時(shí)，將莖尖切下，接種到培養(yǎng)基(3)、(4)中培養(yǎng)。開(kāi)始第一、二代培養(yǎng)時(shí)，莖尖基部膨大，顏色開(kāi)始轉(zhuǎn)為淡黃色，并長(zhǎng)出白色到淡黃色的小芽，從第三代起，開(kāi)始抽出綠色葉片，在葉片抽出后的第二或三代，幼葉強(qiáng)烈誘導(dǎo)出直徑約0.1cm的白色小芽，將這些小芽接到培養(yǎng)基(3)、(4)中，過(guò)32天，這些小芽均長(zhǎng)成直徑0.35cm、高1.5cm、帶1片葉的適宜生根的壯芽。
培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0～0.5+NAA0.3～0.05mg/L。
培養(yǎng)溫度為30℃。種子在萌芽前用暗培養(yǎng)，其余培養(yǎng)光照強(qiáng)度為15001x，每天光照12h。
4、根的誘導(dǎo)與培養(yǎng)將步驟3中得到的直徑大于0.3mm的叢芽接種到培養(yǎng)基(6)中培養(yǎng)，33天后植株基部即會(huì)長(zhǎng)出粗壯新根。(表二為蒟蒻薯生根率統(tǒng)計(jì)表)。
5、試管苗的移栽把即將移植的試管苗置于培養(yǎng)室外或即將移栽的蔭棚內(nèi)煉苗15天，洗凈試管苗附著的培養(yǎng)基，種植到河沙∶泥碳土＝6∶4的基質(zhì)中，苗床需遮蔭90％，保持空氣濕度85％，溫度保持在25℃，移栽后每3天噴施1/2MS營(yíng)養(yǎng)液。(表三為蒟蒻薯的成苗率統(tǒng)計(jì)表)。
表一 蒟蒻薯種子的發(fā)芽率

表二 蒟蒻薯生根率統(tǒng)計(jì)表

表三 蒟蒻薯的成苗率統(tǒng)計(jì)表

權(quán)利要求
1.一種蒟蒻薯的快速繁殖方法，依次由以下幾個(gè)步驟組成第一步、引種將從云南引入的蒟蒻薯成株剪去葉留根狀莖、根帶回，置于遮陰度為80～90％的蔭棚中，種植在塘泥∶泥碳土∶粗沙＝6∶3∶1的基質(zhì)中，保持空氣的濕度在80％以上；第二步、無(wú)菌外植體的獲得種子的無(wú)菌實(shí)生苗的獲得可以通過(guò)無(wú)菌播種來(lái)得到；種子的無(wú)菌播種有以下兩種方法(1)室內(nèi)無(wú)菌播種種子從母株采后馬上用自來(lái)水沖洗，70％酒精處理10～15s，無(wú)菌水沖洗3～5次，再用0.1％升汞消毒3-5min，無(wú)菌水沖洗5次后接種，黑暗培養(yǎng)，溫度保持在25～30℃；(2)室外播種種子從母株采后馬上用自來(lái)水沖洗，用點(diǎn)播的方式播到泥碳土中，置遮蔭度為80～90％的蔭棚中，保持泥碳土濕潤(rùn)，空氣的相對(duì)濕度保持在80％以上；第三步、芽的誘導(dǎo)及增殖芽的誘導(dǎo)與增殖主要從無(wú)菌實(shí)生苗開(kāi)始，當(dāng)無(wú)菌實(shí)生苗長(zhǎng)高到1.5～2.0cm時(shí)，將莖尖切下，接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，開(kāi)始第一、二代培養(yǎng)時(shí)，莖尖基部膨大，顏色開(kāi)始轉(zhuǎn)為淡黃色，并長(zhǎng)出白色到淡黃色的小芽，從第三代起，開(kāi)始抽出綠色葉片，在葉片抽出后的第二或三代，幼葉強(qiáng)烈誘導(dǎo)出直徑約0.1～0.2cm的白色小芽，將這些小芽接到培養(yǎng)基中，約30～35天，這些小芽均長(zhǎng)成直徑約0.3～0.5cm、高約1.5cm、帶1～2片葉的適宜生根的壯芽；第四步、根的誘導(dǎo)與培養(yǎng)將步驟3中得到的直徑大于0.3mm的叢芽接種到含NAA、IBA的1/2MS中，再接到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，30～35天后植株基部即會(huì)長(zhǎng)出粗壯新根；第五步、試管苗的移栽把即將移植的試管苗置于培養(yǎng)室外或即將移栽的蔭棚內(nèi)煉苗10～15天，洗凈試管苗附著的培養(yǎng)基，種植到河沙∶泥碳土＝6∶4的基質(zhì)中，苗床需遮蔭90％，保持空氣濕度80％以上，溫度保持在22～30℃，移栽后每3天噴施1/2MS營(yíng)養(yǎng)液。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種蒟蒻薯的快速繁殖方法，該方法包括以下五個(gè)步驟(1)引種；(2)無(wú)菌外植體的獲得；(3)芽的誘導(dǎo)及增殖；(4)根的誘導(dǎo)及培養(yǎng)；(5)試管苗的移栽。利用本方法較好地使這類瀕危的蒟蒻薯的種群得以擴(kuò)大，進(jìn)行其優(yōu)良種苗規(guī)模生產(chǎn)，從而在保護(hù)珍貴植物資源的基礎(chǔ)上使其得到開(kāi)發(fā)與利用。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1528114SQ0314698
公開(kāi)日2004年9月15日 申請(qǐng)日期2003年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月28日
發(fā)明者劉頌頌 申請(qǐng)人:東莞市林業(yè)科學(xué)研究院