專利名稱：：鑒定表現(xiàn)出變色減輕的植物材料的方法，由此鑒定的植物以及該鑒定的植物用于生產(chǎn)表...的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及與對照植物材料相比，鑒定植物材料中存在表現(xiàn)出變色減輕尤其是傷口誘導的表面變色減輕的物質的方法。本發(fā)明進一步涉及由此鑒定的植物材料、其在育種中的用途以及由其獲得的植物。
背景技術：
：產(chǎn)品的收荻以及隨后的加工、包裝和儲藏引起了植物材料的強烈反應，這通常導致最終產(chǎn)品質量的快速下降。這里所述的質量指的是由消費者作為新鮮度感知的幾種屬性，例如顏色、味道、氣味、脆性。產(chǎn)品針對加工的反應可以是導致萎蔫、變色和老化的物理、生化和生理性質的組合。為了提高加工產(chǎn)品的質量，培育加工后表現(xiàn)出變質水平減輕的植物品種變得日益重要。目前，萵苣成為以加工過的形式(即切割、清洗、包裝的形式)越來越多地提供給消費者的新鮮產(chǎn)品之一。這種即食食品給消費者提供了方便，此外還促使了新產(chǎn)品的研發(fā)，如不同葉型或其他類型蔬菜的混合物。萵苣加工和儲藏期間發(fā)生的最重要的問題是傷口表面變色。這種病癥顯示為在切割葉片的傷口表面的粉紅色或棕色顯色。尤其是中脈部分在這方面表現(xiàn)出強烈的變色。這種負面的質量性狀是在加工期間需要控制的最重要的性狀，因為消費者認為帶有粉紅色或棕色變色的包裝萵苣是變質的產(chǎn)品。雖然采收后的處理，例如在受控大氣壓下的包裝，可以防止變色，并且提高新鮮切割的、包裝萵苣的質量，但是遺傳學的解決辦法是優(yōu)選的。這是因為，盡管接受了這些處理，但是由于例如破壞性的包裝等原因，仍然損耗了相當一部分的產(chǎn)品。在由最終用戶打開包裝后的保存期限也是非常短的。并且重要的是，這需要相當高的成本。因此，具有改善的加工性狀，尤其是減輕的表面變色的萵苣的培育是萵苣加工產(chǎn)業(yè)中最重要的。同樣適用于其他植物材料的加工，如菊苣和茄子。因而，本發(fā)明的目的是提供快速有效的植物材料鑒定方法，該植物材料具有減輕的表面變色，用于生產(chǎn)不易于采收后變質的作物。發(fā)明概述傷口誘導的變色過程是植物保護自身抵抗病原體、害蟲或物理因素(風、雨、干旱、寒冷、熱等等)通過傷口表面引起的損害的一種方式。因此我們希望通過自然選擇使得傷口誘導的變色的天然變異消失。那些不能保護自己抵抗外部威脅的植物是脆弱的，并且因此很少能從這些威脅下幸存。然而，根據(jù)本發(fā)明令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，基因庫物質在變色方面，尤其是在傷口誘導的變色方面具有顯著變異。發(fā)明人通過與對照植物或植物部分相比，使用檢驗表現(xiàn)出變色減輕或不存在的植物或植物部分的方法能夠證明這一點。該方法包括a)提供獲自表現(xiàn)出遺傳變異的植物種群，特別是基因庫的植物或植物部分；b)任選地在植物或植物部分上形成傷口表面；c)培育植物或植物部分或其上形成的傷口表面，使得在其中或其上發(fā)生變色；d)觀察植物或植物部分之中或之上的變色；e)將觀察到的變色與對照植物或植物部分中觀察到的變色相比較，以評價植物或植物部分與對照植物或植物部分相比是否表現(xiàn)出無變色或變色減輕；和f)將與對照植物或植物部分相比表現(xiàn)出無變色或變色減輕的植物或植物部分鑒定為具有減輕的傷口誘導的表面變色性狀的植物。在該方法中，變色是內(nèi)源性底物轉變的結果。當植物或植物部分在某些環(huán)境中培養(yǎng)一段時間后，這種變色會自然產(chǎn)生。這種情況中的變色是傷口誘導的。本發(fā)明尤其涉及自然產(chǎn)生的酶促的粉紅或褐變反應。本發(fā)明的方法旨在鑒定與對照相比，沒有表現(xiàn)出該反應或表現(xiàn)出反應減輕的植物?？蛇x地，可以通過與對照植物或植物部分相比，使用檢驗表現(xiàn)出變色減輕或不存在的植物或植物部分的方法來檢驗變色的變異，該方法包括a)提供獲自表現(xiàn)出遺傳變異的植物種群，特別是基因庫的植物或植物部分；b)植物或植物部分與可轉變成有色顏料的底物一起培養(yǎng)，使得在其中或其上發(fā)生變色；c)觀察植物或植物部分之中或之上的變色；d)將觀察到的變色與對照植物或植物部分中觀察到的變色相比較，以評價植物或植物部分與對照植物或植物部分相比是否表現(xiàn)出無變色或變色減輕；和e)將與對照植物或植物部分相比表現(xiàn)出無變色或變色減輕的植物或植物部分鑒定為具有減輕的變色性狀的植物。在第二種方法中，變色是由外源性添加的底物的轉變引起的，當植物內(nèi)發(fā)生反應時，該底物可以轉變成有色底物，其可變成可視的。這樣的顏色反應可以是或者不是傷口誘導的。其還可以在例如完整的種子的種皮中發(fā)生。本發(fā)明的篩選方法意在鑒定與對照相比沒有表現(xiàn)該出反應或表現(xiàn)出減輕反應的才直物。一旦通過這些方法中的任一種方法鑒定出具有減輕的變色性狀，尤其是減輕的傷口誘導的表面變色性狀的合適植物材料，將根據(jù)本發(fā)明來使用這種植物材料，以將這種特性引入到經(jīng)濟作物中。這種改良的作物也是本發(fā)明的一部分。因此，本發(fā)明是基于使用經(jīng)檢驗的植物材料的特定來源。培養(yǎng)的原料沒有表現(xiàn)出太多關于變色的變異。出乎意料地發(fā)現(xiàn)了，相反地，基因庫里發(fā)現(xiàn)的種質，如登記入冊的資源(accession),在變色方面，尤其是在傷口表面誘導的變色方面具有顯著變異。登機入冊的物質是一個物種的一個樣本，其具有給定的區(qū)域性。將登記入冊的資源儲存在例如基因庫或文庫中。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，上述的變色測定用作篩選農(nóng)作物物種中自然發(fā)生的遺傳變體的有效工具。本發(fā)明對于檢驗萵苣種質特別有用，例如來自Zac^i/casa">a種以及相關的種如L9C^ucaser/o/a,本發(fā)明還可以用于葉或莖部分用(苦苣，菊苣)、根或塊莖用(馬鈴薯，甘薯，塊根芽菜)、果實部分用(茄子，蘋果，香蕉，絝梨，桃子，梨，杏，芒果)，花或花部分用(朝鮮薊，大丁草，菊花)的作物和蘑菇。在這方面也可以使用其他檢驗萵苣的變色，尤其是傷口誘導的表面變色的測定，例如在不同成熟階段加工的萵苣的目測。通過使用這種測定，鑒定了不同登記入冊的萵苣種，它們在特別是葉的傷口誘導的表面變色方面具有顯著變異。通過本發(fā)明所述方法鑒定的、具有減輕的或不存在傷口誘導的變色的個體植物用于育種，以培育在采收后加工特性方面，特別是傷口表面變色方面改善的萵苣植物。這種品種尤其適用于便利市場。此外，一組基因庫登記入冊的茄子的篩選也揭示了具有減輕的變色的登記入冊的資源。這些登記入冊的資源在具有減輕的變色的茄子的培育中的用途也是本發(fā)明的一部分。本發(fā)明進一步涉及通過本發(fā)明的方法鑒定的植物作為減輕的傷口誘導的表面變色性狀的來源的用途。這種來源可以用作常規(guī)雜交的親本或作為成為該性狀基礎的遺傳物質的供體。發(fā)明詳述具有通過育種得到減輕的傷口表面變色的植物，以及最終的植物變種的形成起初需要對該特性進行遺傳變性的鑒定。本發(fā)明牽涉到該初始鑒定步驟和進一步的將該特性引入到經(jīng)濟作物中的步驟。一旦提供所需特性的第一代親體植物得到鑒定，那么植物品種的培育就只是熟練育種者的一個常規(guī)程序問題了。傷口誘導的表面變色是經(jīng)受切割或其他機械破壞的植物針對傷口治愈和防御病原入侵的特殊反應。傷口反應是植物對物理損傷的一種復雜生物反應，其表現(xiàn)為局部地或全身地。局部反應主要是為了閉合傷口表面，其通過在切割表面時或之后的局部細胞的壞死來完成?？梢栽谠S多植物品種中觀察到傷口表面的木質化或栓化，這形成了植物體和環(huán)境之間一道有效的新絕緣屏障。除了這些可視的效應之外，已知誘導了其他反應，如增強的呼吸作用或乙烯生成。在生化水平上，研究顯示創(chuàng)傷可以導致苯基丙酸類合成路徑的誘發(fā)，這是多酚或木質素的生成尤其需要的。該途徑的關鍵酶是苯丙氨酸氨裂解酶(PAL)，其在創(chuàng)傷時通過至少一個PAL異型基因表達的誘導而增強。該反應導致多酚的形成，多酚被多酚氧化酶(PP0)氧化。PP0位于質體中，并且在創(chuàng)傷時得到釋放和活化。多酚的氧化導致高反應性醌的形成。這些醌可以與氨基酸或蛋白質反應，這將導致粉紅色、棕色或者有時甚至黑色變色。在萵苣中，也可以觀察到這種反應。當切割的萵苣葉儲藏在置于空氣中的塑料袋中時，切割的表面開始在傷口表面形成粉紅色的部分，這將在延期儲存后逐漸變成褐色。詳細的生化分析顯示，該反應需要多酚的重新合成，隨后被氧化，引起一連串的反應，最終在傷口表面觀察到粉紅色或棕色顯色。已經(jīng)研發(fā)的并且目前應用于萵苣加工工業(yè)的采收后處理可以抵消這種特殊反應。本發(fā)明提供了一種遺傳學的方法以針對這種特殊反應，其可應用于減少或消除針對傷口誘導的變色的釆收后處理。為了可以研發(fā)具有改良加工特性的農(nóng)作物，使用了根據(jù)本發(fā)明的方法，其可以有效地測定出表面變色，這種變色是創(chuàng)傷的切割農(nóng)作物，尤其是萵苣采收后變色的診斷特征。這些方法在共同未決申請PCT/EP2007/000226和PCT/EP2007/000230中已經(jīng)有描述。在優(yōu)選的實施方案中，獲得萵苣植物的葉盤，并且在浸濕的濾紙之間將其培養(yǎng)。培養(yǎng)時，將會形成粉紅色變色，這是加工萵苣的傷口誘導的粉紅色變或褐變的診斷特征。因此，該方法可以非常有效地篩選具有遺傳變異的萵苣種群，以確定具有減輕的傷口表面變色的遺傳變異的存在，從而提高加工質量。通過這種個體植物的成功鑒定，它們可用于育種改良的萵苣植物，并且最終培育出特別適合加工的萵苣品種。為了鑒定具有減輕的傷口誘導的表面變色性狀的植物，利用了自然遺傳變異。自然遺傳變異是DNA—級結構中的變異，其發(fā)生在這些品種的種質之中，并且其是復制期間出錯的結果，同時保留在了生殖細胞的DNA中。這種種群中遺傳多態(tài)現(xiàn)象的發(fā)生通過給定的遺傳背景中的自發(fā)性突變的適應性以及環(huán)境的選擇而決定。對于萵苣，這種天然變異存在于Zac^cass〃m品種和其他萵苣品種中，如Ls"i/caserr/(7s、sa/Zg/za或L3"wcsWrosa。因此，根據(jù)本發(fā)明鑒定的植物也可以在這些品種中被鑒定，并且用于生產(chǎn)具有減輕的傷口誘導的表面變色的萵苣。基礎的原因在于天然的、種間雜交障礙并不是絕對的，如果需要的話，這可以通過本領域技術人員所知的技術例如胚胎拯救所克服。天然變異在育種公司或協(xié)會的植物材料中發(fā)生，如種子形式的基因庫中。為了確定具有減輕的傷口表面變色的變體的存在，植物材料在常規(guī)條件下進行培養(yǎng)，例如在溫室中或田間。在幼苗階段，從個體植物獲取樣品，例如葉盤，并且使用前述方法之一確定變色的程度。這種鑒定具有減輕的傷口誘導的變色的萵苣或其他作物的方法相比較作物已經(jīng)長到成熟階段、采收、加工并且對加工質量進行評價的方法更力o有效o此外，種植的萵苣的野生親緣植物可以以完全不同的方式培養(yǎng)，這使得比較分析不太明顯。因為發(fā)現(xiàn)了顯示粉紅色表面變色的葉盤反應是采收后變色的診斷特征，本發(fā)明的方法可以根據(jù)生物化學反應在早期發(fā)育階段鑒定植物，這可以用于提高萵苣或其他作物采收后的特性。這種方法提供了不同植物型更簡單和更可靠的對照。令人驚訝地發(fā)現(xiàn)在萵苣屬中可以觀察到傷口誘導的變色的顯著變異。根據(jù)本發(fā)明獲得的具有減輕水平的或不存在傷口誘導變色的萵苣植物可以用于常規(guī)的育種程序以培育符合加工產(chǎn)業(yè)特定需要的品種。在這樣的育種程序中，育種者可以使用常規(guī)的、熟知的育種方法，例如QTL圖譜，標記輔助選擇，和回交，以將減輕水平的傷口誘導的變色與其他栽培用萵苣的所需特性相結合，例如抗病原和抗蟲性，無抽薹和頂燒，等等。本發(fā)明還涉及制備具有減輕的傷口誘導的表面變色植物的方法，包括步驟a)將具有減輕的傷口誘導的表面變色的第一個親本植物與第二個親本植物雜交獲得Fl種子；b)培養(yǎng)Fl種子獲得Fl植物，并且將Fl植物自體受精以獲得F2種子；c)選擇傷口誘導表面變色水平至少低于第二個親本植物水平的F2植物作為具有減輕的傷口誘導的表面變色性狀的植物。這些保留減輕的傷口誘導的表面變色性狀的植物以及后代就是本發(fā)明的植物。優(yōu)選，第二個親本植物是具有農(nóng)藝學可接受特性的栽培型親本植物，特別是萵苣。在優(yōu)選的實施方案中，第一個親本選自列于表2中的植物。第二個親本植物可以是任何萵苣，但優(yōu)選栽培型萵苣，例如球萵苣SilvinasRZ。當實施例1中所述的粉紅色變試驗中分數(shù)小于3，優(yōu)選地小于2，更優(yōu)選地小于l時，這里所述的性狀"減輕的傷口誘導的表面變色性狀"存在于植物中。現(xiàn)在表明變異可以在天然發(fā)生的種群中發(fā)現(xiàn)，也可以由誘變作用誘導。這產(chǎn)生了結合不同變異來源以產(chǎn)生不可預測的低水平傷口誘導變色的可能性。不同減輕的傷口誘導變異來源的結合可以通過將它們雜交完成，這形成了一種或多種雜種種子。如果來自那些種子之一的雜種植物表現(xiàn)出更優(yōu)異的減輕的傷口誘導的變色，那么它就可以直接用于實踐中。無論如何，雜種植物可以自受精以獲得F2種群。該F2種群可用于測試等位性，即兩種來源在相同的基因座提供表現(xiàn)減輕的變色的等位基因。當不存在等位性時，就可能發(fā)現(xiàn)具有常規(guī)的、高水平傷口表面變色的F2個體，以及相比兩個親本具有水平減輕很多的傷口表面變色的F2個體。后一種F2植物帶有來自兩個親本的減輕的變色等位基因，可以用于進一步的育種。減輕的變色的等位基因的結合過程可以得到分子標記的支持，如AFLP、SFP,等等。用于辨別不同的變色減輕水平的其他測定，如成熟植物儲藏的切割葉片的目測，可以用于鑒定由不同來源的結合等位基因獲得的傷口表面變色高度減輕的植物。本發(fā)明將通過下面的實施例進一步說明，并且只作為說明目的給出。在實施例中，參考以下附圖圖1:萵苣登記入冊資源的葉盤粉紅色變測定。不同登記入冊資源之間觀察到表現(xiàn)為不同程度粉紅色變的反應差異。圖2:具有減輕的變色的07V.67586球萵苣頭和具有常規(guī)變色的cv.'Silvinas'的圖片。圖3:新鮮切割茄子的褐變反應。左邊顯示的是切割后在室溫下儲藏幾個小時后的果實組織。右邊顯示的是在室溫下培養(yǎng)了24小時后的果實組織?？梢郧宄^察到種子的褐變。圖4:茄子的切割薄片和褐變反應。左邊，兩個半薄片于室溫下在50mMpH-5.5的mes緩沖液中培養(yǎng)24小時。右邊，半薄片在同樣的條件下培養(yǎng)，但添加了lOmML-半胱氨酸。圖5:茄子種子在含有4mML-D0PA的溶液中培養(yǎng)的黑色變色?？?:陰性對照(只有緩沖液)，孔2-6:4mML-D0PA，孔3-6:分別添加了0.1、1.0、5.0和10mML-半胱氨酸。圖6:基于具有PP0底物L-D0PA的種子的培養(yǎng)，種子相關的PP0活性有變異的茄子遺傳物質的篩選。柱2、4和6的孔含有4mML-D0PA，而柱1、3和5只含有緩沖液。在該平板中測定茄子種子形式的不同遺傳物質。將各批種子并排進行分析，在位置Al和A2，A3和A4，A5和A6,Bl和B2，B3和B4，B5和B6，Cl和C2,C3和C4，C5和C6，D1和D2，D3和D4，D5和D6具有和不具有L-D0PA。在位置C5和C6，D1和D2，D3和D4，D5和D6的批次表現(xiàn)出最高的種子相關的PP0活性。實施例實施例1減輕的傷口表面變色的萵苣種群的篩選對可能顯示傷口誘導的變色的萵苣登記入冊資源進行篩選。使用標準條件在溫室中含有盆栽土壤的盤子中使種子萌芽，以長成萵苣。使用木塞穿孔器將形成3-4片真葉的幼林進行采樣。將由此所得的葉盤在容器中在6'C下在浸濕的濾紙之間培養(yǎng)。大約一周以后，以1-5的尺度對粉紅色變進行打分，其中1表示沒有可檢驗的粉紅色變，而5表示非常清楚、最大水平的粉紅色變。結果顯示在表1中。該表顯示了內(nèi)部參考及其各自的分數(shù)。以下鑒定了證實具有減輕的粉紅色變的登記入冊資源。使用粉紅色變?nèi)~片測定的、在不同登記入冊資源的粉紅色變反應中觀察到差異的實例顯示在圖1中。令人驚訝地，發(fā)現(xiàn)了一些登記入冊的資源表現(xiàn)出減輕的變色。這是出乎意料的，因為認為該形狀在天然和種植條件下是一個缺點，因為認為導致變色的過程是保護植物對抗通過創(chuàng)傷點進入的不利的生物和非生物的威脅因素。根據(jù)上述相同的實驗方案對該測試中最令人感興趣的登記入冊資源進4亍再播種和再測試。證實編號651968(L.virosa;plotnr.366,NCIMB41489)為粉紅色變減輕。根據(jù)上述相同的實驗方案對另外的登記入冊資源進行了測試，并再測試以進行確i/v。發(fā)現(xiàn)并證實編號650147(L.saligna;NCIMB41485)粉紅色變減輕。發(fā)現(xiàn)的具有減輕的傷口誘導表面變色的資源列于表2中。熟知的例如'Iceberg'和'Salinas'的登記入冊資源在該測試中沒有表現(xiàn)出任何粉紅色變減輕的征象。表2具有減輕的傷口表面變色的登記入冊資源的概況<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>編號651968、650147和07V.67586的種子由NCIMBLtd,FergusonBuilding,CraibstoneEstate,Bucksburn,Aberdeen,Scotland,AB219YA,UK.保藏。表1不同萵苣登記入冊資源的粉紅色變分數(shù)。各區(qū)域的數(shù)字涉及單個登記入冊資源。對每種登記入冊資源的兩個植物進行采樣。分數(shù)表明了粉紅色變的水平1=無粉紅色變至5=強烈的粉紅色變。如果這兩個植物粉紅色變不同，則給出兩個分數(shù)。如果給出了一個分數(shù)，則說明這兩個植物在測試中反應相同。實施例2田間篩選通過切割的結球萵苣頭的目測進行田間篩選。在一個登記入冊的資源中，觀察到減輕的傷口表面變色(圖2)。該登記入冊資源具有編號07V.67586。通過以下田間試驗中的目測對其進行再試驗，并且確認具有減輕的變色。該目測在切割后一天完成。令人驚訝地，根據(jù)實施例1中所述的實驗方案進行的追蹤試驗并沒有表現(xiàn)出減輕的粉紅色變。這可能表示編號07V.67586變色減輕的遺傳原因不同于實施例1中所述的其他登記入冊的資源。"0ft19161026m$194SVWtfnr.S"r2"2en3cn302364mS6T柳S71m3T4mm3"mmS80n23V,ttfn,.Itoktoln222302"2"2"2342"瀏2"2"2422432""72"2"2S0"12032642"3參n'53n65，4,09，01234667豕oo12s40t78ttlo，4l494s49789o123456T0001.9999，00000000001-11，1-11,，14|2229|229|<:2豕M29t2222豕222222222222224_09900000<V000011111114*，實施例3茄子中減輕的變色在切割并且包裝的茄子果實中，可以觀察到快速的褐變反應。切割的果實組織的傷口表面快速轉變?yōu)楹稚?，這減輕了產(chǎn)品的質量。更重要的是，包裹在果肉中的種子表現(xiàn)出強烈的褐變，在圖3中相對背景而突出。對于新鮮切割茄子的工業(yè)使用或茄子作為新鮮產(chǎn)品的使用來講，需要防止種子的褐變。為了確定切割的茄子果實的棕色變色的生化特性，在使用或不使用L-半胱氨酸時觀察褐變反應，L-半胱氨酸是多酚氧化酶(PP0)的強烈抑制劑。該分析的結果顯示于圖4中。圖4所示結果表明，褐變反應可以通過外源提供的PP0抑制劑L-半胱氨酸得到抑制。因此，褐變反應明顯地是PPO介導的。為了使用遺傳方法來防止由種子引起的茄子褐變，為種子相關的PP0活性變異而篩選遺傳物質。為了達到該目的，使用了依賴于底物如L-DOPA轉變成有色顏料如黑色素的方法。將茄子種子培養(yǎng)在含有作為PPO底物的左旋多巴(L-D0PA)的溶液中時，可以清楚地觀察到以黑色變色表現(xiàn)的黑色素形成。這種黑色變色是PPO介導的，因為其可以被L-半胱氨酸完全抑制，這顯示于圖5中。這種L-D0PA介導的茄子種子變色用于鑒定具有減輕的種子相關PP0活性的遺傳物質。該篩選致成了表現(xiàn)出種子相關PP0活性顯著減輕的遺傳物質的鑒定。這種篩選的結果顯示于圖6中。通過篩選方法獲得的并且在種子相關PP0活性方面表現(xiàn)出強烈減輕的茄子原料概括于表3中。在該篩選中，某些育種品系表現(xiàn)出種子相關PP0活性的顯著減輕(13、14、42、49)，而其他的表現(xiàn)出強烈的褐變(7、27、34、47)。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>通過顯示出種子相關PP0活性減輕的兩個品系之間的雜交，從而獲得更適于工業(yè)和新鮮市場使用的雜種。此外，發(fā)現(xiàn)了野生登記入冊資源與茄子(19)近緣而與(22、24、25)遠緣，并且種子相關PPO活性表現(xiàn)出強烈的減輕。將這些登記入冊資源用作回交程序的起始物質，從而獲得更適合產(chǎn)業(yè)和新鮮市場目的的品系和雜種。在回交程序中，上述篩選方法用于幫助選擇最強烈的種子相關PPO活性減輕。權利要求1、檢驗與對照植物或植物部分相比表現(xiàn)出減輕的或不存在的傷口誘導表面變色的植物或植物部分的方法，該方法包括a)提供獲自表現(xiàn)出遺傳變異的植物種群，特別是基因庫的植物或植物部分；b)任選地在植物或植物部分上形成傷口表面；c)培育植物或植物部分或其上形成的傷口表面，使得在其中或其上發(fā)生變色；d)觀察植物或植物部分之中或之上的變色；e)將觀察到的變色與對照植物或植物部分中觀察到的變色相比較，以評價植物或植物部分與對照植物或植物部分相比是否表現(xiàn)出無變色或變色減輕；和f)將與對照植物或植物部分相比表現(xiàn)出無變色或變色減輕的植物或植物部分鑒定為具有減輕的傷口誘導的表面變色性狀的植物。2、如權利要求1中所要求的方法，其中植物為栽培葉或莖部分用的蔬菜植物。3、如權利要求2中所要求的方法，其中植物選自萵苣、苦苣、菊苣。4、如權利要求1中所要求的方法，其中植物為栽培根用或塊莖用的蔬菜植物。5、如權利要求4中所要求的方法，其中植物選自馬鈴薯、甘薯、塊根芽菜。6、如權利要求1中所要求的方法，其中植物為栽培果實部分用的結果植物。7、如權利要求6中所要求的方法，其中植物選自茄子、蘋果、香蕉、鱷梨、杉&、梨、杏和芒果。8、如權利要求1中所要求的方法，其中植物是栽培花用或花部分用的開花植物。9、如權利要求8中所要求的方法，其中植物選自朝鮮薊、大丁草和菊花。10、如權利要求1中所要求的方法，其中植物為蘑菇。11、如權利要求l-3任一項中所要求的方法，其中植物屬于紫菀科，特別是萵苣屬，更特別是萵苣種("c"c3。12、如權利要求l-3任一項中所要求的方法，其中植物屬于菊苣屬，特別是歐洲苦苣種(。'c力oW咖//0^us)和苦苣種(C/c力oWw歷e/7^f/F/a)。13、如權利要求l-12任一項中所要求的方法，其中植物部分選自葉，頭，莖千，根，塊莖，莖，花，果實，種子，發(fā)芽的種子，或其碎塊和細胞。14、如權利要求11或12中所要求的方法，其中植物部分是葉盤。15、如權利要求11或12中所要求的方法，其中植物部分是來自中脈組織的葉盤。16、如權利要求l-15任一項中所要求的方法，其中在含水環(huán)境中進行培養(yǎng)。17、如權利要求16中所要求的方法，其中含水環(huán)境包括浸濕的濾紙。18、如權利要求16中所要求的方法，其中含水環(huán)境包括水或溶液。19、如權利要求17或18中所要求的方法，其中含水環(huán)境含有選自L-3，4-二羥苯丙氨酸、氯原酸、異氯原酸、L-酪氨酸和兒茶酚的化合物。20、如權利要求17或18中所要求的方法，其中植物為蘋果，并且含水環(huán)境含有選自氯原酸(用于檢驗果肉)，兒茶酚，兒茶素(用于檢驗果皮)，咖啡酸，黃酮醇苷，3，4-二羥苯丙氨酸(DOPA)，3,4-二羥苯甲酸，對甲酚，4-甲基兒茶酚，無色花青素，對香豆酸的化合物。21、如權利要求17或18中所要求的方法，其中植物是杏，并且含水環(huán)境含有選自異氯原酸，咖啡酸，4-曱基兒茶酚，氯原酸，兒茶素，表兒茶素，連苯三酚，兒茶酚，黃酮醇，對香豆酸衍生物的化合物。22、如權利要求17或18中所要求的方法，其中植物是鱘梨，并且含水環(huán)境含有選自4-甲基兒茶酚，多巴胺，連苯三酚，兒茶酚，氯原酸，咖啡酸，D0PA的化合物。23、如權利要求17或18中所要求的方法，其中植物是香蕉，并且含水環(huán)境含有選自3，4-二羥苯乙胺(多巴胺)，無色飛燕草素，無色花青素的化合物。24、如權利要求17或18中所要求的方法，其中植物是茄子，并且含水環(huán)境含有選自氯原酸，咖啡酸，香豆酸，肉桂酸衍生物的化合物。25、如權利要求17或18中所要求的方法，其中植物是萵苣，并且含水環(huán)境含有選自酪氨酸，咖啡酸，氯原酸衍生物的化合物。26、如權利要求17或18中所要求的方法，其中植物是芒果，并且含水環(huán)境含有選自多巴胺-HCl，4-曱基兒茶酚，咖啡酸，兒茶酚，兒茶素，氯原酸，酪氨酸，D0PA，對甲酚的化合物。27、如權利要求17或18中所要求的方法，其中植物是蘑菇，并且含水環(huán)境含有選自酪氨酸，兒茶酚，D0PA,多巴胺，腎上腺素，去甲腎上腺素的化合物。28、如權利要求17或18中所要求的方法，其中植物是桃子，并且含水環(huán)境含有選自氯原酸，連苯三酚，4-曱基兒茶酚，兒茶酚，咖啡酸，沒食子酸，兒茶素，多巴胺的化合物。29、如權利要求17或18中所要求的方法，其中植物是梨，并且含水環(huán)境含有選自氯原酸，兒茶酚，兒茶素，咖啡酸，D0PA,3,4二羥苯甲酸，對曱酚的化合物。30、如權利要求17或18中所要求的方法，其中植物是馬鈴薯，并且含水環(huán)境含有選自氯原酸，咖啡酸，兒茶酚，D0PA，對曱酚，對羥苯基丙酸，對羥苯基丙酮酸，間甲酚的化合物。31、如權利要求17或18中所要求的方法，其中植物是甘薯，并且含水環(huán)境含有選自氯原酸，咖啡酸，咖啡酰胺的化合物。32、如權利要求l-31任一項中所要求的方法，其中對照植物是當其葉盤在兩片浸濕的濾紙之間5'C培養(yǎng)7天時在邊緣處表現(xiàn)出粉紅色變色的植物。33、檢驗與對照植物或植物部分相比表現(xiàn)出變色減輕或無變色的植物或植物部分的方法，該方法包括a)提供獲自表現(xiàn)出遺傳變異的植物種群，特別是基因庫的植物或植物部分；b)將植物或植物部分與可轉變成有色顏料的底物一起培養(yǎng)，使得在其中或其上發(fā)生變色；c)觀察植物或植物部分之中或之上的變色；d)將觀察到的變色與對照植物或植物部分中觀察到的變色相比較，以評價植物或植物部分與對照植物或植物部分相比是否表現(xiàn)出無變色或變色減輕；和e)將與對照植物或植物部分相比表現(xiàn)出無變色或變色減輕的植物或植物部分鑒定為具有減輕的傷口誘導的表面變色性狀的植物。34、如權利要求33中所要求的方法，其中底物選自權利要求20-31中所列的化合物。35、如權利要求34中所要求的方法，其中化合物為L-D0PA。36、如權利要求33、34或35中所要求的方法，其中植物或植物部分在與底物一起培養(yǎng)前受傷，并且在傷口處或傷口附近觀察到變色。37、如權利要求33-36任一項中所要求的方法，其中植物部分是種子、發(fā)芽的種子或葉盤。38、如權利要求1-37任一項中所要求的方法，其中變色可以由L-半胱氨酸來抑制或逆轉。39、可通過實施權利要求l-38任一項中所要求的方法獲得的植物作為作物生產(chǎn)中減輕的變色性狀，特別地減輕的傷口誘導的表面變色性狀來源的用途，所述作物表現(xiàn)出減輕的變色，特別地減輕的傷口誘導的表面變色和可接受的農(nóng)藝學特性。40、如權利要求39中所要求的用途，其中表現(xiàn)出可接受的農(nóng)藝學特性的植物是經(jīng)濟型作物。41、如權利要求39或40中所要求的方法，其中所述減輕的變色性狀，尤其是減輕的傷口誘導的表面變色來源的植物選自L.virosa登錄號651968(NCIMB41489)、L.saligna登錄號650147(NCIMB41485)和L.sativa登錄號07V.67586(NCIMB41569)。42、如權利要求39-41任一項中所要求的用途，其中所述表現(xiàn)出減輕的變色性狀，尤其是減輕的傷口誘導的表面變色和可接受的農(nóng)藝學特性的作物是通過育種和選擇生產(chǎn)的，其中選擇通過權利要求1-38任一項的方法來進行。43、如權利要求39-41任一項中所要求的用途，其中所述表現(xiàn)出減輕的變色性狀，尤其是減輕的傷口誘導的表面變色和可接受的農(nóng)藝學特性的作物是通過將可以從來源植物獲得的減輕的變色性狀，尤其是減輕的傷口誘導的表面變色性狀經(jīng)遺傳修飾引入到受體植物中生產(chǎn)的。44、生產(chǎn)表現(xiàn)減輕的變色，尤其是減輕的傷口誘導的表面變色的農(nóng)藝學可接受的植物的方法，包括步驟a)將具有減輕的傷口誘導的表面變色的第一個親本植物與第二個親本植物雜交獲得Fl種子；b)種植Fl種子獲得Fl植物，并且使Fl植物自體受精以獲得F2種子；c)選擇變色，特別是傷口誘導的表面變色水平至少低于第二個親本植物水平的F2植物作為具有減輕的變色性狀，特別是減輕的傷口誘導的表面變色性狀的植物。45、表現(xiàn)減輕的變色，尤其是減輕的傷口誘導的表面變色的植物，是通過權利要求44中所要求的方法可獲得的。46、權利要求45中所要求的植物，該植物為茄子。47、權利要求44-46任一項中所要求的植物的后代。全文摘要本發(fā)明涉及一種檢驗與對照植物或植物部分相比表現(xiàn)出減輕的或不存在的傷口誘導的表面變色的植物或植物部分的方法，該方法包括提供得自表現(xiàn)出遺傳變異的植物種群、尤其是基因庫的植物或植物部分；任選地在植物或植物部分上形成傷口表面；培育植物或植物部分或其上形成的傷口表面使得在其中或其上發(fā)生變色；觀察植物或植物部分之中或之上的變色；將觀察到的變色與對照植物或植物部分中觀察到的變色相比較，以評價植物或植物部分與對照植物或植物部分相比是否表現(xiàn)出無變色或變色減輕；和將與對照植物或植物部分相比表現(xiàn)出無變色或變色減輕的植物或植物部分鑒定為具有減輕的傷口誘導的表面變色性狀的植物。文檔編號A01H5/12GK101677518SQ200880016411公開日2010年3月24日申請日期2008年7月4日優(yōu)先權日2007年7月6日發(fā)明者C·M·P·梵鄧恩,J·W·舒特,W·范維利特申請人:瑞克斯旺種苗集團公司