專利名稱：一種普陀樟的離體繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物的培育方法，更具體地說是普陀樟(Cinnamomum japonicum var. chenii)的培育方法。
背景技術(shù)：
普陀樟系樟科(Lauraceae)樟屬常綠喬木，間斷分布于我國華東地區(qū)、朝鮮、日本 等東亞一帶(丁陳森，1993 ；張若蕙，1994)。該樹種高大挺拔、材質(zhì)堅(jiān)實(shí)、紋理優(yōu)美、耐腐力 強(qiáng)；枝葉濃密、冠型飽滿、觀賞性佳，因而具有很好的商業(yè)用材和景觀綠化等方面的應(yīng)用價(jià) 值(俞慈英等，2008)。然而，普陀樟的自然株群日漸稀少，1991年被《中國植物紅皮書—— 稀有瀕危植物(第一冊)》確立為瀕危植物(傅立國，1991)，1999年被《國家重點(diǎn)保護(hù)野生 植物名錄(第一批)》列為國家二級(jí)重點(diǎn)保護(hù)植物品種(于永福，1999)。2005年自然界尚存普陀樟母樹320株，在經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)動(dòng)下，周邊農(nóng)民加大了對 普陀樟種子的采摘強(qiáng)度，甚至毀樹采種，使得普陀樟的瀕危狀況日益加重。因此，目前迫切 需要一種能夠快速培育普陀樟的方法。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明人為了盡快緩解普陀樟的瀕危狀況，通過研究離體培養(yǎng)普陀樟幼苗的條件， 實(shí)現(xiàn)了普陀樟的離體快繁。因此，本發(fā)明的目的是提供一種能夠?qū)崿F(xiàn)普陀樟離體培養(yǎng)的方 法。在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了 一種培養(yǎng)基，含有ML培養(yǎng)基，所述ML培養(yǎng)基含 有KN03 1200mg/l ；NH4N03 825mg/l ；MgS04. 7H20 150mg/l ；KH2P04170mg/l ；NH4C1 530mg/ 1 ；Ca (N03)2 2H20 660mg/l ；KC1 65mg/l ；H3B036. 2mg/l ；ZnS04 7H20 8. 6mg/l ；MnS04 H20 22. 3mg/l ；Na2Mo04 2H200. 25mg/l ；KI 0. 83mg/l ；CuS04 5H20 0. 25mg/l ；CoCl20. 025mg/ lFeS04 7H20 27. 8mg/l ；Na2 EDTA H20 37. 3mg/l ；肌醇 150mg/l ；甘氨酸 2. Omg/1 ；鹽酸硫 胺0. 5mg/l ；煙酸0. 2mg/l ；鹽酸吡哆醇0. 2mg/l ；其中各組分含量可士25%;還含有生長因 子，選自0. 5-3mg/l 6-芐氨基腺嘌呤，0. l-0.5mg/l萘乙酸；0.5-3mg/l 6-芐氨基腺嘌呤， 0. 1-0. 5mg/l萘乙酸，和大于0至0. 01mg/l的噻二唑苯基脲；大于0至0. 6mg/l的6-芐氨 基腺嘌呤，大于0至0. 06mg/l的萘乙酸和大于0至0. 6mg/l的赤霉素；和0. 1-0. 5mg/l吲 哚丁酸。在該方面的一個(gè)優(yōu)選例中，該培養(yǎng)基所含的生長因子為0.5_3mg/l 6_芐氨基 腺嘌呤，0. l-0.5mg/l萘乙酸。更優(yōu)選的，所含生長因子為1-2. 5mg/l 6-芐氨基腺嘌呤、 0. 3mg/l萘乙酸。最優(yōu)選的，所含生長因子為1. 75mg/l 6-芐氨基腺嘌呤和0. 3mg/l萘乙酸。在該方面的另一個(gè)優(yōu)選例中，該培養(yǎng)基所含生長因子除了 0. 5-3mg/l 6_芐氨基 腺嘌呤，0. 1-0. 5mg/l萘乙酸，還含有大于0至0. 01mg/l，更優(yōu)選為0. 005mg/l的噻二唑苯基脲。
在該方面的還有一個(gè)優(yōu)選例中，該培養(yǎng)基所含生長因子為大于0，至0. 6mg/l的 6-芐氨基腺嘌呤，大于0，至0. 06mg/l的萘乙酸和大于0至0. 6mg/l的赤霉素。更優(yōu)選的，所含生長因子為0. 3mg/l 6-芐氨基腺嘌呤、0. 03mg/l萘乙酸和0. 3mg/ 1赤霉素°在該方面的再一個(gè)優(yōu)選例中，該培養(yǎng)基所含生長因子為0. l-o. 5mg/l吲哚丁酸更 優(yōu)選為0. 3mg/l吲哚丁酸。在本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供了一種普陀樟離體幼苗培養(yǎng)方法，包括步驟a)用上述含有ML培養(yǎng)基和0. 5_3mg/l 6_芐氨基腺嘌呤，0. 1-0. 5mg/l萘乙酸的 培養(yǎng)基在光照40-80 u mol. m_2. s—1，12-20小時(shí)/天，溫度為20-28°C下培養(yǎng)所述段，從普陀 樟上胚軸切段誘導(dǎo)出原始不定芽；b)用上述含有ML培養(yǎng)基、0. 5-3mg/l 6_芐氨基腺嘌呤、0. 1-0. 5mg/l萘乙酸、和 大于0至0. 01mg/l的噻二唑苯基脲的出芽培養(yǎng)基在光照40-80 u mol. m—2. s—1，12-20小時(shí)/ 天，溫度為20-28°C下培養(yǎng)所述原始不定芽，使所述原始不定芽生長成不定芽；c)用上述含有ML培養(yǎng)基，大于0，至0.6mg/l的6_芐氨基腺嘌呤，大于0，至 0. 06mg/l的萘乙酸和大于0至0. 6mg/l的赤霉素的培養(yǎng)基在光照40-80 y mol. m—2. s—1， 12-20小時(shí)/天，溫度為20-28°C下培養(yǎng)所述不定芽，使所述不定芽伸長，形成芽苗，再避光 培養(yǎng)3-7天；d)分離單株所述芽苗，剝?nèi)バ∶缧螒B(tài)學(xué)下端葉片，用50mg/l IBA(吲哚丁酸)預(yù)處 理0-36h后，用上述含有ML培養(yǎng)基和0. 1-0. 5mg/l吲哚丁酸的培養(yǎng)基加上2-5%蔗糖(w/v) 在光照60-100 u mol. m_2. s—1，12-20小時(shí)/天，溫度為20_28°C下誘導(dǎo)不定根，得到生根苗；e)將所述生根苗在光照60-100 u mol. m_2. 12-20小時(shí)/天，溫度為24_32°C下 培養(yǎng)1-2周，在大氣下培育得到普陀樟幼苗。在該方面的一個(gè)優(yōu)選例中，其中所述普陀樟上胚軸切段是通過將種子置于泥炭、 菜園土和珍珠巖，其體積比為7 2 1的混合物上，在25-30°C下培養(yǎng)15-30天。更優(yōu)選 的，在播種前將普陀樟果實(shí)用自來水浸泡1周，搓洗去掉表面肉質(zhì)層，獲得普陀樟種子；將 種子在4-10°C的濕沙中沉積2月-2年后，置于22-28°C的濕介質(zhì)上1_4周，保濕。然后消 毒，將上胚軸切成2-4毫米切段獲得的。在該方面的另一個(gè)優(yōu)選例中，優(yōu)選消毒是用水洗滌干凈，用70%體積酒精消毒 30-90秒，用0. 1-0. 2%體積升汞浸泡5-8分鐘，用無菌水洗滌5_8次。在該方面的另一個(gè)優(yōu)選例中步驟a)、步驟b)中是在光照60 ii mol. m—2. s—1，16小時(shí) /天，溫度為23士 1°C下培養(yǎng)。在該方面的還有一個(gè)優(yōu)選例中，步驟c)中是在光照60iimol.m_2. ^，16小時(shí)/天， 溫度為22 士 1°C下培養(yǎng)。在該方面的甚至還一個(gè)優(yōu)選例中步驟d)中是在光照80iimol.m_2. ^，16小時(shí)/ 天，溫度為24士 1°C下培養(yǎng)。在該方法的另選一個(gè)優(yōu)選例中，步驟e)中是在光照80iimol.m_2. ^，16小時(shí)/天， 溫度為28士2°C下培養(yǎng)。在更優(yōu)選的例子中，還包括在大氣下加水10-20ml再培育5_8天。該方法的另一個(gè)優(yōu)選例中，還包括步驟f)將得到的普陀樟幼苗移栽到基質(zhì) 中，在22-32°C下生長成普陀樟再生植株。優(yōu)選基質(zhì)是泥炭、菜園土和珍珠巖其體積比為
47:2: 1的混合物。還優(yōu)選生長是在28士2°C，自然光照下。在本發(fā)明的第五個(gè)方面，還提供了上述含有ML培養(yǎng)基和0. 5-3mg/l 6_芐氨基腺 嘌呤，0. 1-0. 5mg/l萘乙酸的培養(yǎng)基的用途，用于誘導(dǎo)普陀樟上胚軸長出不定芽。在本發(fā)明的第六個(gè)方面，還提供了上述含有ML培養(yǎng)基、0. 5-3mg/l 6_芐氨基腺嘌 呤、0. 1-0. 5mg/l萘乙酸、和至多為0. 01mg/l的噻二唑苯基脲的培養(yǎng)基的用途，用于誘導(dǎo)不 定芽伸長。在本發(fā)明的第七個(gè)方面，還提供了上述含有1/2ML培養(yǎng)基和0. 1-0. 5mg/l吲哚丁 酸的培養(yǎng)基的用途，用于誘導(dǎo)普陀樟不定芽生根。在本發(fā)明的第八個(gè)方面，提供了 ML培養(yǎng)基，其含有KN03 1200mg/l ；NH4N03 825mg/l ；MgS04. 7H20 150mg/l ；KH2P04 170mg/l ；NH4C1 530mg/l ；Ca (N03)2 2H20 660mg/ 1 ；KC1 65mg/l ；H3BO3 6. 2mg/l ；ZnS04 7H208. 6mg/l ；MnS04 H20 22. 3mg/l ；Na2Mo04 2H20 0. 25mg/l ；KI 0. 83mg/l ；CuS04 5H20 0. 25mg/l ；CoCl2 0. 025mg/l ；FeS04 7H20 27. 8mg/l ； Na2 EDTA H20 37. 3mg/l ；肌醇 150mg/l ；甘氨酸 2. Omg/1 ；鹽酸硫胺 0. 5mg/l 煙酸 0. 2mg/ 1鹽酸吡哆醇0. 2mg/l ；其中各組分含量可士25%。在本發(fā)明的第九個(gè)方面，提供了 1/2ML培養(yǎng)基，含有KN03 6 00mg/l ；NH4N03412mg/ 1 ；MgS04. 7H20 75mg/l ；KH2P04 85mg/l ；NH4C1 265mg/l ；Ca(N03)2 2H20 330mg/l ；KC1 37mg/l ；H3BO3 3. lmg/1 ；ZnS04 7H204. 3mg/l ；MnS04 H20 11. 15mg/l ；Na2Mo04 2H20 0. 125mg/l ；KI 0. 415mg/l ;CuS04 5H20 0. 125mg/l ；CoCl2 0. 013mg/l ；FeS04 ‘ 7H20 13. 9mg/lNa2 -EDTA .H20 18. 7mg/l ；肌醇 150mg/l ；甘氨酸 2. Omg/1 ；鹽酸硫胺 0. 25mg/l ；煙 酸0. 2mg/l ；鹽酸吡哆醇0. 2mg/l ；其中各組分含量可士25%。


圖1A顯示了上胚段切段的近子葉端開始膨大。比例尺為2mm。圖IB顯示了形態(tài)模糊的原始不定芽。比例尺為4mm。圖1C顯示了形態(tài)清晰的不定芽。比例尺為6mm。圖1D顯示了伸長的叢芽。比例尺為8mm。圖1E顯示了誘導(dǎo)出不定根的生根小苗。比例尺為1cm。圖1F顯示了再生植株。比例尺為4cm。
具體實(shí)施例方式發(fā)明人通過長期而深入的研究，找到了一種普陀樟(Cirmamomum japonicum var. chenii)離體快繁的方法，即以普陀樟的上胚軸再生成植株。本發(fā)明的方法通過培育條件的 優(yōu)化，克服了現(xiàn)有技術(shù)中自然條件栽培普陀樟種子發(fā)芽困難且栽培周期長的技術(shù)缺陷。如本文所用，所述的“上胚軸”指子葉著生處以上的胚軸部分。該來自普陀樟種子 發(fā)芽而成的上胚軸可以來自任何來源，例如天然生成的(獲自天然環(huán)境中的種子萌發(fā))，或 實(shí)驗(yàn)室條件誘導(dǎo)萌發(fā)生成的。如本文所用的培養(yǎng)基中各成分的計(jì)量是以培養(yǎng)基總體積計(jì)。植物離體培養(yǎng)成功的關(guān)鍵是找到適宜的培養(yǎng)基，確定最佳的培養(yǎng)條件。植物激素是植物細(xì)胞、組織、器官離體培養(yǎng)中必不可少的物質(zhì)，植物激素中的生長素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞脫分化、分裂和再分化的關(guān)鍵性激素，細(xì)胞分裂素/生長素比 值高時(shí)有利于不定芽的分化，抑制根的分化。本申請人通過大量試驗(yàn)，意外發(fā)現(xiàn)了適合普 陀樟誘導(dǎo)不定芽的是細(xì)胞分裂素BA(6_芐氨基腺嘌呤)、TDZ (噻二唑苯基脲)和生長素 NAA (素萘乙酸)。以細(xì)胞分裂素BA (6-芐氨基腺嘌呤)為主，配合使用較低濃度的NAA (萘 乙酸)和TDZ (噻二唑苯基脲)可十分有效地誘導(dǎo)普陀樟的上胚軸切段分化形成不定芽。加 入赤霉素后，可使不定芽得到有效伸長。培養(yǎng)基的成分主要可以分水、無機(jī)鹽、有機(jī)物、天然復(fù)合物、培養(yǎng)體的支持材料等 五大類。本領(lǐng)域常用的是MS培養(yǎng)基是組織培養(yǎng)過程中常用的培養(yǎng)基，特點(diǎn)是無機(jī)鹽和離子 濃度較高，為較穩(wěn)定的平衡溶液。其養(yǎng)分的數(shù)量和比例較合適，可滿足植物的營養(yǎng)和生理需 要。它的硝酸鹽含量較其他培養(yǎng)基為高，廣泛地用于植物的器官、花藥、細(xì)胞和原生質(zhì)體培 養(yǎng)，效果良好。由于其濃度較高，因此常用的是1/2MS或1/4MS培養(yǎng)基。在本說明書實(shí)施例 中使用的本發(fā)明使用的1/2MS培養(yǎng)基中各組分濃度如下硝酸銨825mg/l，硝酸鉀950mg/l， 磷酸二氫鉀85mg/l，七水硫酸鎂185mg/l，氯化鈣440mg/l，七水硫酸亞鐵27. 8mg/l,乙二胺 四乙酸二鈉37. 3mg/l，四水硫酸錳11. 15mg/l，七水硫酸鋅4. 3mg/l，硼酸3. lmg/1，碘化鉀 0. 415mg/l，二水鉬酸鈉0. 125mg/l，五水硫酸銅0. 0125mg/l，六水氯化鈷0. 0125mg/l，甘氨 酸lmg/1，鹽酸硫胺素0. 25mg/l，鹽酸吡哆素0. 25mg/l，煙酸0. 25mg/l，肌醇200mg/l，其中 1/2MS培養(yǎng)基中各組分可含量士25%。雖然在一般常規(guī)操作中常常使用MS培養(yǎng)基，但是本發(fā)明人經(jīng)過摸索，配制了獨(dú)特 的ML培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基特別適合普陀樟的生長。使用常規(guī)的MS培養(yǎng)基，如下文實(shí)施例所示， 其誘導(dǎo)生成普陀樟幼苗的效率僅是ML培養(yǎng)基的一半。培養(yǎng)基中加入的有機(jī)成分主要有碳水化合物、維生素、肌醇、氨基酸、天然復(fù) 合物等，還包括植物激素，選自生長素類，例如NAA(萘乙酸)等，還含有細(xì)胞分裂素類 (cytokinin)，這類激素是腺嘌呤的衍生物，包括6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)、Kt (kinetin激動(dòng) 素)、ZT(zeatin玉米素)等。其中Zt活性最強(qiáng)，但非常昂貴，在本發(fā)明中優(yōu)選的是6-BA。 培養(yǎng)基中還包括支持物，例如瓊脂等。適當(dāng)還可加入抗生物質(zhì)抑菌。還可加入抗氧化物。在離體培養(yǎng)過程中，保證無菌狀態(tài)也很重要。對于原始的植株組織、工具和培 養(yǎng)基都應(yīng)進(jìn)行消毒，例如使用70% -75%體積的酒精溶液，2% -5%體積的次氯酸溶液， 0. 1%-0. 2%體積的升汞溶液，整個(gè)操作在無菌超凈臺(tái)中進(jìn)行。優(yōu)選使用0. 體積的升汞 溶液。培養(yǎng)基中還可含有其它常規(guī)的成分，例如瓊脂糖、抗菌物質(zhì)等。這些都是本領(lǐng)域技 術(shù)人員可以常規(guī)確定的。溫度是植物離體培養(yǎng)中的重要因素，所以植物離體培養(yǎng)在最適宜的溫度下生長分 化才能表現(xiàn)良好，大多數(shù)植物離體培養(yǎng)都是在23-27°C之間進(jìn)行，一般采用25士2°C。低于 15 °C時(shí)培養(yǎng)，植物組織會(huì)表現(xiàn)生長停止，高于35 °C時(shí)對植物生長不利。但是，不同植物培 養(yǎng)的適溫不同。對于主要生長在我國和亞洲其它地區(qū)的溫帶環(huán)境中的普陀樟，其最適合的 溫度是在20-30°C之間，最適溫度為22-25°C。在誘導(dǎo)和增殖階段優(yōu)選為23士 1°C，在生根 階段，優(yōu)選為24士 1°C。同時(shí)，在步驟e)中還包括提高培養(yǎng)溫度從而使得生根苗耐受環(huán)境 因素變化的步驟。具體說，是在強(qiáng)度較大的光照條件下(60-100，優(yōu)選8(^11101.111_2.8_1)，在 28士2°C下(較高的溫度)下培養(yǎng)1-2周。
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光照強(qiáng)度對培養(yǎng)細(xì)胞的增殖和器官的分化有重要影響，從目前的研究情況看，光 照強(qiáng)度對外植體、細(xì)胞的最初分裂有明顯的影響。一般來說，光照強(qiáng)度較強(qiáng)，幼苗生長的粗 壯，而光照強(qiáng)度較弱幼苗容易徒長。本申請中誘導(dǎo)和生長階段的光照強(qiáng)度為40-80 ymol.
m_2. s—1，優(yōu)選為60umol.ni-2. s-1。在生根階段，可適當(dāng)增加光照強(qiáng)度，優(yōu)選為SOymol.nT2.
-1 S o在不同的組織培養(yǎng)階段，光照時(shí)間視情況有所不同。對于普陀樟來說，其光照時(shí)間 一般為12-20個(gè)小時(shí)，優(yōu)選16個(gè)小時(shí)。在培養(yǎng)中為了保濕所采用的濕介質(zhì)可以使用各種常規(guī)的方便獲得且價(jià)格低廉的 材料，例如紗布或牛皮紙等。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于首次建立了普陀樟的離體培養(yǎng)方法。并且，使用本發(fā)明的方法 極利于高度集約化和高密度工廠化生產(chǎn)，也利于自動(dòng)化控制生產(chǎn)。在短時(shí)間內(nèi)可生產(chǎn)大量 種苗，供應(yīng)市場，獲得經(jīng)濟(jì)效益，拯救瀕危物種。本發(fā)明的方法能夠在短時(shí)間內(nèi)生產(chǎn)大量的普陀樟優(yōu)質(zhì)種苗，而且這種種苗的發(fā)生 不受季節(jié)限制，可以常年生產(chǎn)。使用這種方法，人們便不再對自然界僅存的百來株母樹進(jìn)行 掠奪性采種，從而起到保護(hù)該物種的作用。本發(fā)明首次使普陀樟上胚軸培養(yǎng)成功再生成植株。按本發(fā)明的方法重復(fù)三次試 驗(yàn)，平均每個(gè)上胚軸切段能產(chǎn)生再生植株12. 7株，且與親本表型一致性高。下文的實(shí)施例進(jìn)一步說明了本發(fā)明，但需要注意它們不是為了特別限定。實(shí)施例本實(shí)驗(yàn)中采用的試驗(yàn)材料為采自浙江舟山的普陀樟種子。操作步驟如下(1)基本培養(yǎng)基(Mulan basal medium,簡稱ML培養(yǎng)基)的制備按照表1配制基 本培養(yǎng)基，PH5. 8，121°C滅菌15-25分鐘。不定芽的誘導(dǎo)和伸長均使用該培養(yǎng)基。表1ML培養(yǎng)基的組成成分一覽表
權(quán)利要求
一種培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基含有ML培養(yǎng)基，所述ML培養(yǎng)基含有KNO3 1200mg/l；NH4NO3 825mg/l；MgSO4.7H2O 150mg/l；KH2PO4170mg/l；NH4Cl 530mg/l；Ca(NO3)2·2H2O 660mg/l；KCl 65mg/l；H3BO36.2mg/l；ZnSO4·7H2O 8.6mg/l；MnSO4·H2O 22.3mg/l；Na2MoO4·2H2O0.25mg/l；KI 0.83mg/l；CuSO4·5H2O 0.25mg/l；CoCl20.025mg/l；FeSO4·7H2O 27.8mg/l；Na2·EDTA·H2O 37.3mg/l；肌醇150mg/l；甘氨酸2.0mg/l；鹽酸硫胺0.5mg/l；煙酸0.2mg/l；鹽酸吡哆醇0.2mg/l；其中各組分含量可±25％，還含有生長因子，選自0.5 3mg/l 6 芐氨基腺嘌呤，0.1 0.5mg/l萘乙酸；0.5 3mg/l 6 芐氨基腺嘌呤，0.1 0.5mg/l萘乙酸，和大于0至0.01mg/l的噻二唑苯基脲；大于0至0.6mg/l的6 芐氨基腺嘌呤，大于0至0.06mg/l的萘乙酸和大于0至0.6mg/l的赤霉素；和0.1 0.5mg/l吲哚丁酸。
2.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基中所含生長因子是0.5-3mg/l 6-芐氨基腺嘌呤，0. 1-0. 5mg/l萘乙酸。
3.如權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基還含有大于0至0.01mg/l的噻二唑苯基脲。
4.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其中所述培養(yǎng)基中所含生長因子是大于0至0.6mg/l 的6-芐氨基腺嘌呤，大于0至0. 06mg/l的萘乙酸和大于0至0. 6mg/l的赤霉素。
5.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基中所含生長因子是0.1-0. 5mg/l吲哚丁酸。
6.一種普陀樟離體幼苗培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括步驟a)用權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)基在光照40-80u mo 1. m_2. s-1，12-20小時(shí) 20-28°C下，從普陀樟上胚軸誘導(dǎo)出原始不定芽；b)用權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)基在光照40-80y mol. m_2. 12-20小時(shí) 20-28°C下培養(yǎng)所述原始不定芽，使所述原始不定芽生長成不定芽；c)用權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)基在光照40-80ii mol.m_2. s—1，12-20小時(shí) 20-28°C下培養(yǎng)所述不定芽，形成芽苗，再避光培養(yǎng)3-7天，；d)分離單株所述芽苗，剝?nèi)バ∶缧螒B(tài)學(xué)下端葉片，用50mg/l吲哚丁酸預(yù)處理0-36h后， 用權(quán)利要求5所述的培養(yǎng)基，其中ML培養(yǎng)基中無機(jī)鹽濃度減半，加上2-5%重量/體積的 蔗糖在光照60-100 u mol. m_2. s—1，12-20小時(shí)/天，溫度為20_28°C下誘導(dǎo)不定根，得到生根 苗；e)將所述生根苗在光照60-100u mol. m_2. 12-20小時(shí)/天，溫度為24_32°C下培養(yǎng) 1-2周，在大氣下培育5-8天，得到普陀樟幼苗。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述上胚軸切段是通過將普陀樟種子置于泥炭、菜 園土和珍珠巖，其體積比為7 2 1的混合物上，在25-30°C下培養(yǎng)15-30天使其萌發(fā)得 到上胚軸，經(jīng)消毒處理后將所述上胚軸切成2-4mm切段。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述步驟a)、步驟b)中是在光照eOymol.nT2.s—1， 16小時(shí)/天，溫度為23士 1°C下培養(yǎng)。
9.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述步驟c)中是在光照60u mol. m_2. s—1，16小時(shí)/ 天，溫度為22士 1°C下培養(yǎng)。
10.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述步驟d)中是在光照SOiimol.nT2.s^ie小時(shí) /天，溫度為24士 1°C下培養(yǎng)。 /天，溫度為 /天，溫度為 /天，溫度為
全文摘要
提供了普陀樟離體培養(yǎng)的不定芽誘導(dǎo)、伸長、生根等關(guān)鍵步驟的培養(yǎng)基配方和通過離體培養(yǎng)獲得大量普陀樟幼苗的具體方法。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101933455SQ20091005435
公開日2011年1月5日 申請日期2009年7月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月3日
發(fā)明者朱木蘭, 黃繼榮 申請人:中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院