專利名稱：使用網(wǎng)粘菌目微生物來(lái)生產(chǎn)含有pufa的油的方法
使用網(wǎng)粘菌目微生物來(lái)生產(chǎn)含有PUFA的油的方法
背景技術(shù)：
不同的多不飽和脂肪酸(PUFA)，特別是ω-3脂肪酸(η3脂肪酸)是人類膳食的基 本成分。但是，公知的是在大部分工業(yè)國(guó)家中，n3脂肪酸的攝入是不足的。另一方面，膳 食中的總脂肪含量以及飽和脂肪酸和η6脂肪酸的攝入過(guò)高。這歸因于我們膳食組成的 變化，其主要發(fā)生在最近大約150年，并且其與不同的慢性文明病的發(fā)生相關(guān)，例如諸如 心血管病，這是工業(yè)國(guó)中主要的死亡原因(Simopoulos, A. P.，1999，Am. J. Clin. Nutr. 70， 560-569)。其后，大量的研究表明心血管疾病的危險(xiǎn)可以通過(guò)有計(jì)劃的增加n3脂肪 酸，特別是二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)的攝入而顯著降低(Dietary supplementation with n_3 polyunsaturated acids and vitamin E after myocardial infarction :results of GISSI-prevenzione trial.，Lancet 354，447-455 ；Burr 等人， 1989, Effects of changes in fat, fish and fire intake on death and myocardial reinfarction :diet and reinfarction trial (DART)，Lancet 2，757-761)。因此，許多不 同的組織(WHO, FAO, AHA ；ISSFAL, British Nutrition Foundation 及其他許多組織)推 薦顯著增加 n3 脂肪酸的攝入(Kris-Eherton 等人，F(xiàn)ish Consumption，F(xiàn)ish 0il，0mega_3 Fatty Acids，and Cardiovascular Disease。Circulation2002，2747-2757)。獲得PUFA和特別是n3脂肪酸的來(lái)源主要是海洋冷水魚和獲自它們的油，但是在 近些年，將海洋微生物作為市售PUFA源也成為可能。它們具有這樣的優(yōu)點(diǎn)，即，它們能夠用 于在發(fā)酵桶中，在廉價(jià)和受控的條件下生產(chǎn)PUFA。在發(fā)酵生產(chǎn)中，沒有混入雜質(zhì)(重金屬， 二氧雜芑，PCB)的風(fēng)險(xiǎn)，例如經(jīng)常有描述可從魚或者魚油中獲得的這些雜質(zhì)(Olsen SF. Int J Epidemiol. 2001 1279-80)。此外，通過(guò)選擇有機(jī)體能夠生產(chǎn)所規(guī)定組成的油。另外， 發(fā)酵生產(chǎn)不受季節(jié)性波動(dòng)的影響，而季節(jié)性波動(dòng)是魚和魚產(chǎn)品所遇到的(Gamez-Meza等人 Lipids 1999:639-42)。此外，它是一種環(huán)境友好的生產(chǎn)方法，因此首先是保護(hù)了天然資源 (關(guān)鍵詞過(guò)度捕撈)，其次是在發(fā)酵中使用了可再生的原材料。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)適于獲得PUFA的微生物是例如處于弧菌屬的細(xì)菌中(例如海 產(chǎn)微螺菌)或者處于腰鞭毛蟲(甲藻類)中，特別是Crypthecodinium屬，例如隱 甲藻或者處于 stramenopiIes 中，例如 Pinguiophyceae 例如 i者如 Glossomastix, Phaeomonas, Pinguiochrysis, Pinguiococcus 禾口 Polydochrysis。優(yōu)選白勺用于發(fā)酵生 產(chǎn)PUFA的微生物屬于stramenopiIes (或者labyrinthulo-mycota)，特別是破囊壺菌 巨(Thraustochytriidea),還特另Ij 是 Japonochytrium，Schizo-chytrium,破囊壺菌屬， Althornia, Labyrinth-uloides, Aplanochytrium 禾口吾肯氏壺菌(Ulkenia)屬。已知的是一些所述的微生物能夠用于工業(yè)生產(chǎn)脂肪酸，并且已經(jīng)公開了相應(yīng)的方 法。因此國(guó)際專利申請(qǐng)W091/07498A1公開了用裂殖壺菌和破囊壺菌屬的微生物來(lái)生產(chǎn) PUFA。W091/11918A1公開了用隱甲藻來(lái)生產(chǎn)PUFA，W096/33263A1和相應(yīng)的歐洲專利申請(qǐng) EP0823475A1描述了用裂殖壺菌屬微生物來(lái)生產(chǎn)PUFA，而專利申請(qǐng)W098/03671公開了用吾 肯氏壺菌屬微生物來(lái)生產(chǎn)PUFA。
雖然PUFA油的發(fā)酵獲得具有高品質(zhì)和其他前述的優(yōu)點(diǎn)，但是比單純的魚油高的 生產(chǎn)成本仍然是一個(gè)問(wèn)題。為了提高成本效率，已經(jīng)進(jìn)行了一定范圍的嘗試來(lái)提高PUFA油 發(fā)酵生產(chǎn)率。這些主要是嘗試提高生物量生產(chǎn)，通常是通過(guò)在發(fā)酵過(guò)程中供給營(yíng)養(yǎng)物和/ 或延長(zhǎng)發(fā)酵時(shí)間來(lái)實(shí)現(xiàn)的。但是，二者同時(shí)也都提高了成本(原材料成本和/或生產(chǎn)運(yùn)行 時(shí)間)。還公開了通過(guò)加入發(fā)酵添加劑來(lái)提高產(chǎn)率的嘗試。例如US000006410282B1 (W000 2001073099A1)描述了將PVP(聚乙烯吡咯烷酮)加入到培養(yǎng)基中來(lái)提高產(chǎn)率(DHA生物量 或者EPA/生物量)。

發(fā)明內(nèi)容
因此，由于現(xiàn)有技術(shù)的狀況，本發(fā)明的目標(biāo)是提供一種方法，用于有計(jì)劃的改變脂 肪酸組成，同時(shí)提高發(fā)酵PUFA生產(chǎn)的產(chǎn)率。該目標(biāo)是通過(guò)提高期望的脂肪酸(PUFA，例如 DHA,DPA)的濃度和降低不期望的脂肪酸(例如飽和脂肪酸例如棕櫚酸)的濃度，來(lái)對(duì)所述 的油進(jìn)行質(zhì)量改進(jìn)。除此之外，生物量中的產(chǎn)物濃度和整體產(chǎn)率(時(shí)空產(chǎn)率)也應(yīng)當(dāng)提高。這些問(wèn)題，和其他沒有明確提到，但是能夠從此處所引入討論的內(nèi)容中容易的得 出或者推出的問(wèn)題，是通過(guò)本發(fā)明的權(quán)利要求中所述的主題來(lái)解決的。權(quán)利要求1所述的方法提供了一種培養(yǎng)網(wǎng)粘菌門微生物的有利的方法。該方法 包括在合適的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該培養(yǎng)基加入了明確的絡(luò)合劑，優(yōu)選的加入濃度是高到 0. 5mM,并且如果需要，隨后將PUFA與微生物和/或培養(yǎng)培養(yǎng)基分離。本發(fā)明進(jìn)一步包括一種生產(chǎn)高純PUFA的方法。本發(fā)明優(yōu)選的PUFA是DHA、DPA和 EPA。 具體的，前述方法導(dǎo)致了生物量中DHA濃度增加了大于5 %，優(yōu)選大于10 %，和非 常特別優(yōu)選大于15%。具體的，前述方法導(dǎo)致了 DHA產(chǎn)率(g/L)的增加大于5%，優(yōu)選大于10%，和非常 特別優(yōu)選大于15%。具體的，前述方法導(dǎo)致了所述油中DHA濃度的增加大于2%，優(yōu)選大于3%和非常 特別優(yōu)選大于4%。具體的，前述方法導(dǎo)致了所述油中棕櫚酸(PA)濃度的降低大于2%，優(yōu)選大于3% 和非常特別優(yōu)選大于4%。由此，DHA與PA比值的增加大于4%，優(yōu)選大于6%和非常特別優(yōu)選大于8%?？傊?，前述方法使得能夠在一個(gè)步驟中同時(shí)提高數(shù)量(生產(chǎn)率)和油的品質(zhì)(提 高DHA濃度，降低PA (飽和脂肪酸)濃度)。完全令人驚訝的是這樣的可能性，S卩，通過(guò)加入少量明確的絡(luò)合劑，對(duì)脂肪酸組成 以及同時(shí)對(duì)生物量中目標(biāo)產(chǎn)物的濃度和發(fā)酵的整體產(chǎn)率產(chǎn)生了如此明顯的有利影響。通過(guò)在培養(yǎng)之后，將PUFA從微生物(生物量)和/或水性培養(yǎng)物中分離出來(lái)，能 夠獲得高產(chǎn)率和高純度的PUFA。此外，本發(fā)明還包含一種生產(chǎn)生物量的方法，其中該生物量是通過(guò)使用本發(fā)明的 培養(yǎng)方法來(lái)獲得的。該生物量可以以任何可能的方式來(lái)使用。具體的，該生物量，例如處于干態(tài)(干生 物量)中時(shí)，能夠直接作為食品或者飼料使用。
此外，本發(fā)明還包含一種油，其是通過(guò)進(jìn)行本發(fā)明的培養(yǎng)方法來(lái)獲得的，并且將該 油與微生物和/或水性培養(yǎng)物進(jìn)行分離。具體的，這是這樣的一種油，其能夠有利的用于人的營(yíng)養(yǎng)，以及許多其他優(yōu)選的使 用目的。根據(jù)本發(fā)明，“油”被理解為表示至少70%含量的中性脂質(zhì)和至少2%的磷脂，其對(duì) 應(yīng)于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的破囊壺菌的正常脂肪酸光譜。這里該中性脂質(zhì)優(yōu)選的組成為至 少80%的甘油三酸酯和其他化合物例如諸如雙酰基甘油酯，固醇等等。此外，甘油三酸酯優(yōu) 選的重量含量組成為大約95%脂肪酸和5%甘油。根據(jù)本發(fā)明，PUFA是不飽和的長(zhǎng)鏈脂肪酸，鏈長(zhǎng)為> C12，并且具有至少兩個(gè)雙 鍵。通過(guò)本發(fā)明的方法生產(chǎn)的PUFA具體是n3脂肪酸和η6脂肪酸。在本發(fā)明的含義中，π3脂肪酸(ω-3脂肪酸，ω3脂肪酸)被理解為是多不飽和長(zhǎng) 鏈脂肪酸，鏈長(zhǎng)> C12，并且具有至少兩個(gè)或多個(gè)雙鍵，其中第一個(gè)雙鍵是在從烷基端基開 始的碳原子C3和C4之間建立的。相應(yīng)的在π6脂肪酸中，第一個(gè)雙鍵位于在從烷基端基開 始的碳原子C6和C7之間。對(duì)于通過(guò)本發(fā)明的方法來(lái)生產(chǎn)PUFA而言，可以考慮網(wǎng)粘菌門微生物。破囊壺菌目 微生物(Thrausto-chytriidea)是優(yōu)選的(Lewis，Τ. Ε.，Nichols, P. D.，McMeekin, Τ. Α.， The Biotechnological Potential of Thraustochytrids, Marine Biotechnology,1999, 第 580-587 頁(yè)禾口 Porter，D. Phylum Labyrinthulomycota in Handbook of protoctista ；
:Margulis, L.，Corliss, J. 0.，Melkonian, Μ.禾口 Chapman，D. J.，Jones and Bartlett Publishers, ISBN0-86720-052-9,1990，第 388-398 頁(yè))。特別優(yōu)選的是 Japonochytrium， 裂殖壺菌屬，Thrausto-chytrium, Althornia, Labyrinthuloides, Aplanochytrium 禾口吾 肯氏壺菌屬的微生物。在它們中非常特別優(yōu)選的是裂殖壺菌，破囊壺菌和吾肯氏壺菌。特 別優(yōu)選的是 Japonochytrium ATCC28207，金黃色破囊壺菌(Thraustochytrium aureum) (特別是 ATCC28211 或者 ATCC34304)，粉紅色破囊壺菌(Thraustochytrium roseum) ATCC28210, Thrausto-chytrium ATCC20890, ATCC20891, ATCC20892 和 ATCC26185，聚合 裂殖壺菌(Schizochytrium aggregatum) ATCC28209,裂殖壺菌 ATCC20888 和 ATCC20889， Schizo-chytrium SR21 和吾肯氏壺菌 SAM2179 和 SAM2180。適于本發(fā)明方法的微生物都是野生型形式的以及由其衍生的突變異種和菌株以 及相關(guān)有機(jī)體的重組體菌株。本發(fā)明包含了顯著量的突變異種或者重組體菌株，來(lái)提高 PUFA的生產(chǎn)。在本發(fā)明中，微生物是通過(guò)用這些有機(jī)體的預(yù)培養(yǎng)物接種液體或者固體培養(yǎng)基來(lái) 進(jìn)行培養(yǎng)的。對(duì)于網(wǎng)粘菌門微生物來(lái)說(shuō)，合適的培養(yǎng)技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。典型的， 但是非排他的，該培養(yǎng)是依靠在合適的容器中的水性發(fā)酵來(lái)進(jìn)行的。用于這樣的發(fā)酵的 典型的容器的例子包含振蕩燒瓶或者生物反應(yīng)器，例如諸如STR(攪拌的槽式反應(yīng)器)或 者氣泡柱。培養(yǎng)典型的是在下面的溫度進(jìn)行的10°C -40°C，優(yōu)選20°C _35°C，特別優(yōu)選 25°C _30°C，非常特別優(yōu)選27°C _29°C和特別是在28士0. 5°C的溫度。 全部有機(jī)體的生長(zhǎng)和發(fā)育受到礦物、維生素和微量元素以及生長(zhǎng)所必需的實(shí)際營(yíng) 養(yǎng)物的影響。在宏量元素(其是大量需要的)和微量元素(其僅僅是少量需要的)之間也是有區(qū)別的。宏量元素不足會(huì)非?？斓淖兠黠@，而微量元素的不足通常僅僅在更長(zhǎng)的時(shí)間 后變得明顯。長(zhǎng)期的不足導(dǎo)致了缺乏現(xiàn)象。最低定律(以Liebig命名)適用生長(zhǎng)取決于以最小量存在的因素。

在使用不同鹽的試驗(yàn)中，能夠觀察到能夠通過(guò)具體的使用Na-EDTA、Fe-Na-EDTA 和K-EDTA，來(lái)有計(jì)劃的改變產(chǎn)生PUFA的微生物的生長(zhǎng)和脂肪酸組成。在濃度高到0.5mM的適當(dāng)?shù)腅DTA化合物時(shí)，能夠?qū)崿F(xiàn)有利的變化。在這里發(fā)現(xiàn) Fe-Na-EDTA、Na-EDTA 和 K-EDTA 是有利的。因此 Fe-Na-EDTA、Na-EDTA 和 K-EDTA 被稱作本 發(fā)明的EDTA化合物。在本發(fā)明一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，將高到0. 5mM,優(yōu)選0. 05-0. 5mM和特別優(yōu)選 0. 1-0. 4mM的本發(fā)明的EDTA化合物加入到培養(yǎng)基中。非常特別優(yōu)選的是本發(fā)明的EDTA化 合物的含量0. 2 士 0. ImM。該培養(yǎng)基優(yōu)選進(jìn)一步包含一種或多種碳源和一種或多種氮源。能夠用作培養(yǎng)網(wǎng)粘 菌門微生物的碳源物質(zhì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。能夠用于本發(fā)明的碳源的例子是碳水化合物例如葡萄糖、果糖、木糖、蔗糖、麥芽 糖、可溶淀粉、巖藻糖、葡糖胺、葡聚糖、谷氨酸、糖蜜、甘油或者甘露醇或者脂肪和油或者植 物水解產(chǎn)物。玉米漿和麥芽膏也包括在其中。能夠用于本發(fā)明的天然氮源的例子是蛋白胨、酵母提取物、肉提取物、蛋白質(zhì)水解 產(chǎn)物或者大豆，能夠使用的有機(jī)氮源的例子是谷氨酸鹽和尿素，但是無(wú)機(jī)氮源例如諸如醋 酸銨、碳酸氫銨、硫酸銨或者硝酸銨也可以用作氮源。該培養(yǎng)基可以包含全部另外的對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)在培養(yǎng)網(wǎng)粘菌門微生物中 有用的成分，特別是例如Ca、Mg、Na、K、Fe、Ni、Co、Cu、Mn、Mo或者Zn的無(wú)機(jī)鹽。作為舉例， 可以提到的是磷酸鹽例如磷酸二氫鉀或者氯化物例如氯化鎂和硫酸鹽例如硫酸銨、硫酸 鎂、硫酸鐵或者硫酸鈉。另外可用的無(wú)機(jī)鹽的例子是鹵化物例如溴化鉀或者碘化鉀以及其 他碳酸鹽例如諸如碳酸氫鈉。如果需要，該培養(yǎng)基可以包含另外的宏量_或者微量營(yíng)養(yǎng)物例如氨基酸、嘌呤、嘧 啶、玉米漿、蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物、維生素(水可溶的和/或水不溶的)和其他本領(lǐng)域技術(shù)人員 公知的培養(yǎng)基成分。消泡劑在需要時(shí)候可以加入。該培養(yǎng)基可以包含復(fù)雜成分或者是化學(xué) 成分明確的。單個(gè)成分的量可以變化，只要對(duì)微生物的生長(zhǎng)或者生產(chǎn)率沒有不利的影響就行。 本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠容易的確定在具體的情況中對(duì)應(yīng)于微生物所需的組成。通常，碳源的 加入濃度高到300g/l，氮源的加入濃度高到l-30g/l。氮含量?jī)?yōu)選是作為培養(yǎng)基中的碳含 量的函數(shù)。特別優(yōu)選的培養(yǎng)基包含葡萄糖、酵母提取物、玉米漿[CSL]、氯化鎂、碳酸鈣、氯化 鈣、硫酸鈉和磷酸鉀和所述的鐵或者EDTA化合物。在發(fā)酵開始前，加入合適的酸或者堿溶液來(lái)將該培養(yǎng)基的PH調(diào)整為3-10，優(yōu)選 4-8，特別優(yōu)選5-7和非常特別優(yōu)選大約6。接下來(lái)，對(duì)該培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。用于對(duì)培養(yǎng)基滅菌的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知 的，并且作為舉例，可以提到的是高壓鍋滅菌和消毒過(guò)濾。培養(yǎng)可以通過(guò)批次的，補(bǔ)料分批的或者連續(xù)模式來(lái)進(jìn)行，如本領(lǐng)域技術(shù)人員通常已知的那樣。批次的或者補(bǔ)料分批的培養(yǎng)通常進(jìn)行1-12天，優(yōu)選2-10天，特別優(yōu)選是3_9天。 培養(yǎng)基成分可以單獨(dú)的或者混合的加入到該培養(yǎng)基中，并且還可以是預(yù)制的混合 物。所述成分，特別是碳和氮源或者所述的添加劑可以在培養(yǎng)之前或者之中加入。該加入 可以是一次、重復(fù)幾次或者甚至連續(xù)進(jìn)行。所生產(chǎn)的PUFA通常是以中性脂肪的形式存在的，例如作為三酰基甘油酯或者極 性脂質(zhì)例如諸如卵磷脂、磷脂酰乙醇胺或者磷脂酰環(huán)己六醇的形式存在。含有PUFA的油可以在發(fā)酵之后，通過(guò)擠壓，通過(guò)使用溶劑例如己烷、丙酮、乙醇等 或者通過(guò)細(xì)胞破碎和分離來(lái)獲得。因此獲得的油可以進(jìn)行另外的典型的加工步驟例如漂 白、中和、脫礦泥、除臭等等(精煉)。但是，該富含PUFA的生物量也可以直接使用，例如用 于動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)物。在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)PUFA，n3-脂肪酸或者n_3活性物質(zhì)應(yīng)當(dāng)理解為表示全部可能的 化學(xué)形式，在其中可以存在相應(yīng)的脂肪酸，即，作為游離脂肪酸、酯、甘油三酸酯、卵磷脂以 及作為其他衍生物二者。全部這些物質(zhì)在下面一起提出，并且該術(shù)語(yǔ)是同義使用的。在從 培養(yǎng)基中分離之前或者之后，該P(yáng)UFA隨后可以通過(guò)化學(xué)或者生物催化酯交換例如依靠合 適的酶(脂肪酶)進(jìn)行轉(zhuǎn)化和濃縮。PUFA與發(fā)酵的微生物或者培養(yǎng)基的分離和脂肪酸光譜的分析是通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù) 人員已知的和慣常的方法來(lái)進(jìn)行(A0CS方法Cel-62 (American Oil Chemists' Society)； Wanasundara, U. N. , Wanasundara, J. , Shahidi, F. , Omega—3 fatty acid concentrates a review of production technologies, Seafoods-quality, technology and nutraceutical applications, 2002,第 157-174 頁(yè)；Kang 禾口 Wang, A simplifiedmethod for analysis of polyunsaturated fatty acid, BMC Biochemistry 2005,6 5 doi 10.1186/1471-2091-6-5)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的用于有計(jì)劃的改變脂肪酸組成或者提高產(chǎn)率的方法在下面依靠一些實(shí) 施例進(jìn)行描述。但是，發(fā)酵培養(yǎng)基和本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。實(shí)施例1吾肯氏壺菌菌株SAM2179的發(fā)酵，用于通過(guò)加入不同量的Fe-Na-EDTA來(lái)生產(chǎn)PUFA吾肯氏壺菌菌株SAM2179是在50mL的培養(yǎng)基中，在具有擋板的300ml錐形燒瓶中
培養(yǎng)的。培養(yǎng)基組成
權(quán)利要求
1.一種由網(wǎng)粘菌門微生物的細(xì)胞發(fā)酵生產(chǎn)含有具有改變的脂肪酸組成的多不飽和脂 肪酸(PUFA)的油的方法，特征在于將絡(luò)合劑加入到發(fā)酵培養(yǎng)基中。
2.權(quán)利要求1所述的方法，特征在于該絡(luò)合劑是具有一種或多種無(wú)機(jī)抗衡離子的EDTA 化合物。
3.權(quán)利要求2所述的方法，特征在于該EDTA化合物選自Na-EDTA、Fe-Na-EDTA和 K-EDTA。
4.權(quán)利要求1-3中至少一個(gè)所述的方法，特征在于Na-EDTA、Fe-Na-EDTA和/或K-EDTA 的加入濃度最多是0. 5mM。
5.權(quán)利要求1-4中至少一個(gè)所述的方法，特征在于Na-EDTA、Fe-Na-EDTA和/或K-EDTA 的加入濃度是0. I-ImM,優(yōu)選0. 1-0. 4mM和特別優(yōu)選0. 2 士 ImM。
6.權(quán)利要求1-5中至少一個(gè)所述的方法，特征在于該方法包含下面的步驟a).在水性發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)網(wǎng)粘菌門微生物的細(xì)胞；b).任選地將步驟a)的細(xì)胞與該水性發(fā)酵培養(yǎng)基分離，來(lái)獲得生物量；和c).破碎步驟b)的細(xì)胞或者任選地直接破碎步驟a)的細(xì)胞；d).和分離含有PUFA的油。
7.權(quán)利要求1-6中至少一個(gè)所述的方法，特征在于該發(fā)酵是在10°C_40°C的溫度進(jìn)行的。
8.權(quán)利要求1-7中至少一個(gè)所述的方法，特征在于該P(yáng)UFA是二十二碳六烯酸(DHA)、 二十二碳五烯酸(DPA)和/或二十碳五烯酸(EPA)。
9.權(quán)利要求1-8中至少一個(gè)所述的方法，特征在于該微生物屬于破囊壺菌目。
10.權(quán)利要求9所述的方法，特征在于該微生物屬于Japonochytrium、裂殖壺菌屬、破 囊壺菌屬、Althornia、Labyrinthuloides、Aplanochytrium 禾口 / 或吾肯氏壺菌屬。
11.權(quán)利要求10所述的方法，特征在于該微生物是吾肯氏壺菌SAM2180和/或裂殖壺 菌 SR21。
12.權(quán)利要求1-11中至少一個(gè)所述的方法，特征在于該水性發(fā)酵培養(yǎng)基包括一種或多 種碳源和一種或多種氮源。
13.權(quán)利要求12所述的方法，特征在于該碳源是碳水化合物例如葡萄糖、果糖、木糖、 蔗糖、麥芽糖、可溶淀粉、巖藻糖、葡糖胺、葡聚糖、谷氨酸、糖蜜、甘油或者甘露醇、脂肪、油、 玉米漿、麥芽膏和/或植物水解產(chǎn)物。
14.權(quán)利要求12所述的方法，特征在于該氮源是天然氮源例如蛋白胨、酵母提取物、 肉提取物、蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物、大豆，有機(jī)氮源例如谷氨酸鹽和尿素和/或無(wú)機(jī)氮源例如醋酸 銨、碳酸氫銨、硫酸銨或者硝酸銨。
15.權(quán)利要求1-14中至少一個(gè)所述的方法，特征在于該發(fā)酵是在pH3-8進(jìn)行的。
16.含有PUFA的油，其是通過(guò)權(quán)利要求1-15中至少一個(gè)的方法來(lái)獲得的。
17.權(quán)利要求16所述的油，特征在于該DHA濃度提高了大于2%，優(yōu)選大于3%和特別 優(yōu)選大于4%。
18.權(quán)利要求16和/或17所述的油，特征在于棕櫚酸(PA)的濃度降低了大于2%，優(yōu) 選大于3%和特別優(yōu)選大于4%。
19.權(quán)利要求16-18中至少一個(gè)所述的油，特征在于DHA與PA的比值增加了大于4%，優(yōu)選大于6%和特別優(yōu)選大于8%。
20.權(quán)利要求16-19中至少一個(gè)所述的油，特征在于DHA與棕櫚酸的相對(duì)比例是至少 1. 3 比 1。
21.根據(jù)權(quán)利要求1-15中至少一個(gè)所述的方法所獲得的生物量。
22.權(quán)利要求21所述的生物量，特征在于它是干的生物量。
23.權(quán)利要求16-20中至少一個(gè)所述的油的用途，其用作人營(yíng)養(yǎng)的補(bǔ)充物、食品添加 齊U、動(dòng)物飼料和/或藥品。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過(guò)來(lái)自網(wǎng)粘菌門(phylum Labyrinthulomycota)微生物的細(xì)胞發(fā)酵獲得含有多不飽和脂肪酸(PUFA)并且具有改變的脂肪酸組成的油的方法，該方法的特征在于將絡(luò)合劑加入到發(fā)酵培養(yǎng)基中。
文檔編號(hào)A23K1/16GK102037130SQ200980118914
公開日2011年4月27日 申請(qǐng)日期2009年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月25日
發(fā)明者馬蒂亞斯·魯埃辛 申請(qǐng)人:隆薩有限公司