專利名稱：大蔥多倍體的誘導方法
技術領域：
本發(fā)明涉及大蔥四倍體的誘導方法，屬于植株組織培養(yǎng)領域。
背景技術：
大蔥(Allium fistulosum L.)為百合科蔥屬二年生草本植物，富含鈣、磷、維生素，不僅味道鮮美，而且具有醫(yī)療保健功效。據(jù)FAO統(tǒng)計，2009年我國栽培大蔥面積達沈560 公頃，居世界第一位。近年來，大蔥病害頻發(fā)，嚴重影響其品質，因此利用細胞工程技術改良大蔥顯得尤為重要。自1937年Blakeslee和Avery發(fā)現(xiàn)秋水仙素具有誘導細胞染色體加倍效果以來，多倍體育種作為一種改良作物的有效方法得到廣泛應用。多倍體植株通常具有根莖粗壯、葉片肥厚、色綠、葉柄變寬、花器、果實、種子變大的形態(tài)特點；其生理活躍、新陳代謝旺盛、適應性強等特點，為植株自身的生長發(fā)育提供了更多的物質基礎。目前，關于大蔥不同組織器官的離體再生方面已有報道，但對于大蔥多倍體誘導方面的報道較少。謝芝馨O004)用秋水仙素處理大蔥愈傷組織的過程中發(fā)現(xiàn)，多數(shù)愈傷由于秋水仙素的毒害作用慢慢褐化死亡，最終得到的變異材料外形畸形，很難生根；宗紅Q007)在用秋水仙素誘導大蔥愈傷組織時發(fā)現(xiàn)同樣的問題，由于秋水仙素的毒害作用， 愈傷組織褐化現(xiàn)象極其嚴重、不定芽分化受阻。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供了一種誘導四倍體大蔥的方法。本發(fā)明一方面涉及一種大蔥多倍體誘導方法，以大蔥種子為材料，秋水仙素為誘導劑，其特征在于秋水仙素的濃度為介于0. 4% -1. 0%之間，處理時間在Μ-4 !之間。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式中，大蔥種子使用秋水仙素濃度0. 8%處理48h。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方式中，采用上述方法處理后的大蔥種子置于超凈工作臺上用消毒酒精漂洗0.5 lmin，轉入有效濃度1-3% (ν/ν)次氯酸鈉消毒，用無菌水沖洗，將滅過菌的種子接種到培養(yǎng)基上，在光照強10-40umOl.m_2. s、光照周期為10_20h. cf1， 室溫下培養(yǎng)。本發(fā)明還涉及上述誘導方法在提高大蔥種子的變異株率中的應用。為減輕秋水仙素的毒害作用，以大蔥種子為材料，研究了秋水仙素處理濃度和時間對大蔥體細胞染色體加倍的效果，并利用細胞染色體計數(shù)及流式細胞儀等方法進行倍性鑒定。結果表明，秋水仙素濃度0. 8%處理4 的誘變效果最佳，染色體壓片表明，四倍體染色體數(shù)為2n = 4X = 32，二倍體植株為2n = 2Χ = 16，并且用流式細胞儀對倍性進行進一步的分析驗證。采用本發(fā)明的方法，可以顯著的提高大蔥種子的變異株率，可廣泛應用于作物改良。在本發(fā)明中，無如其它說明，所述的濃度均指重量百分比濃度。
具體實施方式
1.以章丘大蔥種子為材料，秋水仙素為誘導劑，研究大蔥染色體加倍的最佳處理時間和處理濃度的組合。2.秋水仙素處理濃度分別為0、0. 2%、0. 4%、0. 6%、0. 8%、1.0%，處理時間分別為24h和48h，共12個處理組合，每個處理100粒種子。3.將大蔥種子在秋水仙素中浸泡處理后，置于超凈工作臺上用75% (ν/ν)酒精漂洗0. 5 lmin，轉入有效濃度2% (ν/ν)次氯酸鈉消毒40min，最后用無菌水沖洗3_5遍。 將滅過菌的種子接種到MS培養(yǎng)基上，在光照強30umol. m_2. s—1，光照周期為16h. cf1，溫度為 (25 士 1)°C的條件下培養(yǎng)。4.培養(yǎng)30天后，統(tǒng)計發(fā)芽數(shù)、發(fā)芽率、變異株數(shù)、變異株率、四倍體植株率(表1)。以植株粗壯、葉色濃綠、生長緩慢為形態(tài)變異標準，統(tǒng)計變異株數(shù)及變異株率；以染色體計數(shù)及流式細胞儀的鑒定結果來統(tǒng)計四倍體植株率。表1秋水仙素不同濃度和處理時間的誘導效果
權利要求
1.一種大蔥多倍體誘導方法，以大蔥種子為材料，秋水仙素為誘導劑，其特征在于秋水仙素的濃度為介于0. 4% -1. 0%之間，處理時間在Μ-4 !之間。
2.根據(jù)權利要求1所述的誘導方法，其特征在于秋水仙素濃度0.8%處理48h。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的誘導方法，其特征在于處理后的大蔥種子置于超凈工作臺上用消毒酒精漂洗0.5 lmin，轉入有效濃度(ν/ν)次氯酸鈉消毒，用無菌水沖洗，將滅過菌的種子接種到培養(yǎng)基上，在光照強10-40umOl.m_2. s、光照周期為10_20h. cf1， 室溫下培養(yǎng)。
4.權利要求1-3任意一項所述的誘導方法在提高大蔥種子的變異株率中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及大蔥多倍體的誘導方法，以大蔥種子為材料，秋水仙素為誘導劑，其特征在于秋水仙素的濃度為介于0.4％-1.0％之間，處理時間在24-48h之間。采用本發(fā)明的方法，可以顯著的提高大蔥種子的變異株率，可廣泛應用于作物改良。
文檔編號A01H4/00GK102550402SQ20111033577
公開日2012年7月11日 申請日期2011年10月31日 優(yōu)先權日2011年10月31日
發(fā)明者董飛, 陳運起, 高莉敏 申請人:山東省農(nóng)業(yè)科學院蔬菜研究所