專利名稱：一種提高彩色馬蹄蓮組織培養(yǎng)叢生芽增殖率的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法，屬植物的人工繁殖技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
彩色馬蹄蓮(Zantedesehia hybrida)屬天南星科(Araceae)馬蹄蓮屬(Zantedeschia Spreng)植物,原產(chǎn)自非洲東南部，其佛焰荀有橘紅、玫紅、紫紅、鮮黃等顏色，與傳統(tǒng)的白色馬蹄蓮相比，具有花色品種多、花色艷麗、觀賞性強等優(yōu)點，既可作為切花，又可作為盆花。多數(shù)彩色馬蹄蓮葉片帶月白色斑點或條紋，是具有較高觀賞價值的配葉材料。由于彩色馬蹄蓮花、葉俱佳，其市場潛力較大，近年來在國內(nèi)外花卉市場占有越來越重要的地位。彩色馬蹄蓮多采用組織培養(yǎng)的方法進行快速繁殖，既可以加快種苗繁育進程，又可以起到提純復(fù)壯的作用，是實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)和栽培的有效途徑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率的方法，以滿足對彩色馬蹄蓮規(guī)?；a(chǎn)以 及育種為基礎(chǔ)的其他方面的研究工作的需要。本發(fā)明的技術(shù)方案如下，該種提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的主要特點是:A外植體消毒:選取直徑約2cm的健康的彩色馬蹄蓮小種球，用2g/L多菌靈水溶液浸泡15min后，淺埋于經(jīng)高壓滅菌處理的濕潤的細沙基質(zhì)中，在光照30001x、12h/d、(25 ± I) °C的條件下進行預(yù)培養(yǎng)，令種球萌發(fā)；7 IOd后，選取芽長約Icm的種球，經(jīng)表面消毒后接種。具體消毒方法為:用軟毛刷將塊莖刷洗干凈，避免損傷頂芽，削去塊莖表皮，在安利洗滌劑溶液中振蕩洗滌20min，再用2g/L多菌靈溶液浸泡lh，自來水沖洗40min，轉(zhuǎn)入超凈臺，切除塊莖表層，保留直徑約1.5cm的帶芽塊莖，75%酒精浸泡15s，無菌水沖洗I次，再用0.2%的升萊進行15 20min的消毒,無菌水沖洗6 8次,無菌吸水紙吸干水分。B芽誘導(dǎo)培養(yǎng):將消毒好的彩色馬蹄蓮種球切成直徑約Icm的帶芽小塊，接種至下列培養(yǎng)基中:MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，生長激素0.1 0.2mg/L,細胞分裂素0.4
0.5mg/L，pH5.8 ;在培養(yǎng)溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為12 16h下進行光照培養(yǎng)20 30天至分化出芽。C 60Co Y射線輻射處理:將分化出芽的組培苗分切繼代后，連瓶于6tlCo Y射線下進行40Gy，0.5h輻射照射，然后接種到以下培養(yǎng)基中:MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，植物生長激素0.1 0.2mg/L，細胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;培養(yǎng)溫度25±1°C，光照強度為1000 30001X，光照時間為12 16h，進行光照培養(yǎng)25 30天。D叢生芽的培養(yǎng):將生長至6 8cm左右的叢生芽分切，在以下培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng):MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，植物生長激素0.1 0.2mg/L,細胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;培養(yǎng)溫度25土 1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為12 16h，進行光照
培養(yǎng)20 30天。
E生根培養(yǎng):選取健壯的試管苗，經(jīng)過修剪后，接種到如下培養(yǎng)基中:MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，植物生長激素1.0 2.0mg/L，細胞分裂素0.15 0.2mg/L，pH5.8 ;培養(yǎng)溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為10 16h，進行光照培養(yǎng)20 30天至成苗。F煉苗移栽:將組培瓶從培養(yǎng)室取出，在緩沖間將瓶蓋打開，進行有菌條件馴化3 5d ;后用鑷子將組培苗從瓶中取出，用500 800倍多菌靈浸泡20m左右，洗凈后移栽到基質(zhì)(泥炭土:珍珠巖:沙=2: 2:1)中進行栽培。所述的提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的延伸技術(shù)方案包括:步驟A中的消毒試劑和時間、步驟B中的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、步驟C中的輻射條件以及步驟B、C、D、E中彩色馬蹄蓮快速繁殖所述的培養(yǎng)基中涉及的植物生長激素和細胞分裂素，包括6-卞基腺嘌呤出-BA)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)其中的一種或幾種。所述的提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的延伸技術(shù)方案包括:步驟A中的種球消毒用2g/L多菌靈水溶液浸泡15min后，淺埋于經(jīng)高壓滅菌處理的濕潤的細沙基質(zhì)中，在光照30001x、12h/d、(25± I) °C的條件下進行預(yù)培養(yǎng)，令種球萌發(fā)，然后采用0.1%的安利洗滌液在搖床上震蕩洗滌20min、2g/L多菌靈溶液浸泡Ih和0.2%升汞滅菌10 20min。所述的提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的延伸技術(shù)方案包括:步驟B中所涉及到的植物生長激素包括萘乙酸(NAA)0.1 0.2mg/L,吲哚丁酸(IBA)0.1 0.2mg/L，6_卞基腺嘌呤(6-BA) 0.4 0.5mg/L。所述的提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的延伸技術(shù)方案包括:步驟C中所涉及到的6°Co y射線下進行40Gy，0.5h輻射照射。所述的提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的延伸技術(shù)方案包括:步驟D中所涉及到的植物生長激素包括萘乙酸(NAA) 1.0 2.0mg/L,吲哚丁酸(IBA) 1.0 2.0mg/L, 6-卞基腺嘌呤(6-BA) 0.15 0 .2mg/L。所述的提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的延伸技術(shù)方案包括:步驟F中所涉及到的進行有菌條件馴化3 5d ;用500 800倍多菌靈浸泡20min左右；基質(zhì)配比(泥炭土:珍珠巖:沙=2:2:1)。采用輻射誘變的方法提高彩色馬蹄蓮叢生芽的增殖率，較之傳統(tǒng)組培的叢生芽誘導(dǎo)率(每籽球5 6個叢生芽，經(jīng)輻射誘變后籽球叢生芽達到10 14個左右)提高了將近1.5倍。組培苗移栽后的觀測結(jié)果表明，40Gy 0.5h60Co y射線輻射幾乎沒有導(dǎo)致彩色馬蹄蓮?fù)獠啃螒B(tài)形狀產(chǎn)生變異，并一定程度上提高了其對高溫高濕的抗性，這一點對于易感染軟腐病的長江中下游地區(qū)來說，非常重要；而且此方法周期短，效率高。這種方法為提高植物組培繁殖系數(shù)提供了全新的思路。


圖1是取材用的健康彩色馬蹄蓮種球圖；圖2是彩色馬蹄蓮不定芽圖；圖3是輻射誘變與正常對比圖(左邊為正常，右邊為輻射誘變)；圖4是輻射誘變后彩色馬蹄蓮的生根情況圖；圖5是完整的植株圖；圖6是經(jīng)煉苗馴化的移栽組培苗圖
具體實施方式
下面結(jié)合提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率的實例說明本發(fā)明的具體實施方式
。實施例1彩色馬蹄蓮初代培養(yǎng)及叢生芽誘導(dǎo)1、選取直徑約2cm的健康的彩色馬蹄蓮小種球，用2g/L多菌靈水溶液浸泡15min后，淺埋于經(jīng)高壓滅菌處理的濕潤的細沙基質(zhì)中，在光照30001x、12h/d、(25±1)°C的條件下進行預(yù)培養(yǎng)，令種球萌發(fā)；7 IOd后，選取芽長約Icm的種球，經(jīng)表面消毒后接種。具體消毒方法為:用軟毛刷將塊莖刷洗干凈，避免損傷頂芽，削去塊莖表皮，在安利洗滌劑溶液中振蕩20min，再用2g/L多菌靈溶液浸泡lh，自來水沖洗40min，轉(zhuǎn)入超凈臺，切除塊莖表層，保留直徑約1.5cm的帶芽塊莖，75%酒精浸泡15s，無菌水沖洗I次，而后以0.2%的升汞進行15 20min的消毒。處理完畢后，無菌水沖洗6 8次，無菌吸水紙吸干水分。2、將消毒好的彩色馬蹄蓮種球切成直徑約Icm的帶芽小塊，接種到無激素MS培養(yǎng)基(含30g/L蔗糖，6.0g/L瓊脂，pH值為5.8)上，每瓶接I個芽塊。在培養(yǎng)溫度為25± 1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為12 16h，進行光照培養(yǎng)15 20天，至長出叢生芽。3、將培養(yǎng)20天左右叢生芽，接種至下列培養(yǎng)基中:MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，植物生長激素0.1 0.2mg/L，細胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;在培養(yǎng)溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為12 16h下進行光照培養(yǎng)20 30天至分化出芽。實施例2叢生芽的輻射誘變及壯苗生根1、將分化出芽的組培苗分切繼代后，連瓶于6tlCo Y射線下進行40Gy，0.5h輻射照射，2、將輻射誘變后的彩色馬蹄蓮接種到以下培養(yǎng)基中:MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，植物生長激素0.1 0.2mg/L，細胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;培養(yǎng)溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照 時間為12 16h，進行光照培養(yǎng)25 30天。3、選取健壯的試管苗，經(jīng)過修剪后，接種到如下培養(yǎng)基中:MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，植物生長激素1.0 2.0mg/L,細胞分裂素0.15 0.2mg/L, pH5.8 ;培養(yǎng)溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為10 16h，進行光照培養(yǎng)20 30天至生根成苗。實施例3煉苗移栽1、將組培瓶從培養(yǎng)室取出，在緩沖間將瓶蓋打開，進行有菌條件馴化3 5d ;2、用鑷子將組培苗從瓶中取出，用500 800倍多菌靈浸泡20m左右，洗凈后移栽到基質(zhì)(泥炭土:珍珠巖:沙=2: 2:1)中進行栽培。以上6tlCo Y射線輻射誘變提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率的實例見附圖。
權(quán)利要求
1.一種提高彩色馬蹄蓮組織培養(yǎng)叢生芽增殖率的方法，其特征在于: A外植體消毒:選取直徑約2cm的健康的彩色馬蹄蓮小種球，用2g/L多菌靈水溶液浸泡15min后，淺埋于經(jīng)高壓滅菌處理的濕潤的細沙基質(zhì)中，在光照30001X、12h/d、(25 ± I) °C的條件下進行預(yù)培養(yǎng)，令種球萌發(fā)；7 IOd后，選取芽長約Icm的種球，經(jīng)表面消毒后接種。具體消毒方法為:用軟毛刷將塊莖刷洗干凈，避免損傷頂芽，削去塊莖表皮，在安利洗滌劑溶液中振蕩20min，再用2g/L多菌靈溶液浸泡lh，自來水沖洗40min，轉(zhuǎn)入超凈臺，切除塊莖表層，保留直徑約1.5cm的帶芽塊莖，75 %酒精浸泡15s，無菌水沖洗I次，而后以0.2%的升汞消毒15 20min。處理完畢后，無菌水沖洗6 8次，無菌吸水紙吸干水分； B芽誘導(dǎo)培養(yǎng):將消毒好的彩色馬蹄蓮種球切成直徑約Icm的帶芽小塊，接種至下列培養(yǎng)基中:MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，生長激素0.1 0.2mg/L,細胞分裂素0.4 0.5mg/L,pH5.8 ;在培養(yǎng)溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為12 16h下進行光照培養(yǎng)20 30天至分化出芽； C 6qCoy射線輻射處理:將繼代生長20d的叢生芽(連瓶)于6ciCoy射線下進行40Gy，0.5h輻射照射，生長恢復(fù)IOd后接種到以下培養(yǎng)基中:MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，植物生長激素0.1 0.2mg/L，細胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;培養(yǎng)溫度25±1°C，光照強度為2000 30001x，光照時間為12 16h，進行光照培養(yǎng)25 30天。30d后繼續(xù)繼代培養(yǎng)，使叢生芽增殖； D生根培養(yǎng):選取健壯的試管苗，經(jīng)過修剪后，接種到如下培養(yǎng)基中:MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，植物生長激素1.0 2.0mg/L，細胞分裂素0.15 0.2mg/L, pH5.8 ;培養(yǎng)溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為10 16h，進行光照培養(yǎng)20 30天至成苗； E煉苗移栽:將組培瓶從培養(yǎng)室取出，在緩沖間將瓶蓋打開，進行有菌條件馴化3 5d ；后用鑷子將組培苗從瓶中取出，用500 800倍多菌靈浸泡20min左右，洗凈后移栽到基質(zhì)(泥炭土:珍珠巖:沙=2: 2:1)中進行栽培。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高彩色馬蹄蓮增殖率的方法，其特征在于步驟C中所涉及到的6°Co y射線下進行40Gy，0.5h輻射照射。
全文摘要
本發(fā)明提供一種提高彩色馬蹄蓮組織培養(yǎng)叢生芽增殖率的方法，對彩色馬蹄蓮的規(guī)?；a(chǎn)和繁殖以滿足市場需要具有一定的技術(shù)指導(dǎo)作用，提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率的培養(yǎng)步驟包括A.外植體消毒；B叢生芽誘導(dǎo)；C.60Co γ射線輻射處理；D.叢生芽培養(yǎng)；E.生根培養(yǎng)；F.煉苗移栽。采用植物組織培養(yǎng)的方法結(jié)合輻射處理繁殖彩色馬蹄蓮，不僅不受外界條件的影響，四季皆可進行，降低生產(chǎn)成本，而且可以在短時間內(nèi)形成大量的優(yōu)良試管苗，進行規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)，為彩色馬蹄蓮產(chǎn)業(yè)提供大量的植物材料。
文檔編號A01G31/00GK103229717SQ20121052807
公開日2013年8月7日 申請日期2012年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月11日
發(fā)明者鄭玉紅, 陸波, 束曉春, 王 忠, 彭峰 申請人:江蘇省中國科學(xué)院植物研究所