專利名稱：食用菌液化菌種的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食用菌菌種的培養(yǎng)方法，尤其涉及一種食用菌液化菌種的制備方法。
技術(shù)背景
在食用菌生產(chǎn)中，成功與失敗的關(guān)鍵是菌種生產(chǎn)，生產(chǎn)中投入最大，人們最擔(dān)心的也是菌種。菌種的純度、活力、培育時間和抗雜能力，決定著生產(chǎn)的成敗、效益的高低和質(zhì)量的好壞。食用菌菌種的生產(chǎn)是食用菌栽培種的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，要實現(xiàn)食用菌栽培的優(yōu)質(zhì)、高效， 首先要做到菌種的高質(zhì)量、高效率和低成本。
現(xiàn)有技術(shù)中食用菌菌種的生產(chǎn)，主要有固體菌種和液體菌種兩種生產(chǎn)方法，固體菌種的生產(chǎn)存在菌種的生長周期長、菌齡不一致、操作不方便、成本高等缺點，液體菌種存在不易運輸、貯存、檢測、剔雜及投資成本較高等缺點，成為制約工廠化食用菌發(fā)展的主要因素。要想實現(xiàn)高質(zhì)量、工廠化、標(biāo)準(zhǔn)化、全年候生產(chǎn)，提高栽培效益，就必須解決目前菌種生產(chǎn)的落后方式。菌種的液化栽培是工廠化食用菌發(fā)展必然趨勢和選擇。發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有食用菌菌種生產(chǎn)方法存在的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種食用菌液化菌種的制備方法。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，一種食用菌液化菌種的制備方法，其步驟包括步驟A :—級菌種的純化培養(yǎng)(1)PDA加富培養(yǎng)基的配制將土豆去芽、去皮,切成小條放入鍋中，加入所述土豆質(zhì)量4 5倍的水，煮沸至土豆酥而不爛時用紗布過濾，得到PDA培養(yǎng)基；加入土豆質(zhì)量6. 7 13. 3%的瓊脂融化后，再加入土豆質(zhì)量6. 7 13. 3%的葡萄糖、O. 16 O. 33%的植物性蛋白胨、O. 67 I. 33%的干酵母片，混合攪拌均勻，補(bǔ)水至所述土豆質(zhì)量的4 5倍，得到PDA加富培養(yǎng)基；然后殺菌、冷卻，待用；(2)—級菌種的純化培養(yǎng)在無菌條件下，用組織分離法取種，接入所述PDA加富培養(yǎng)基中，在18 20°C培養(yǎng)室中培養(yǎng)10 15天，得到純化后的一級菌種；所述取種量與PDA加富培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:15 I :30 ;步驟B:制作無菌水；步驟C :二級菌種的制備和液化(1)由以下質(zhì)量份的原料配制得到溶水性培養(yǎng)基白糖150 170份、豆柏17 19份、 硫酸鎂26 30份、磷酸二氫鉀26 30份、消泡劑I 3份、無菌水550 580份，在17 19°C混合攪拌均勻；然后將其殺菌、冷卻；(2)二級菌種的制備將所述溶水性培養(yǎng)基用紫外線照射殺菌，將所述純化后一級菌種分切后接入殺菌后的溶水性培養(yǎng)基中，在20 22°C的搖床中培養(yǎng)8 12天，得到二級菌種；所述純化后一級菌種與溶水性培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:30 1:50 ;(3)二級菌種的液化將所述二級菌種用紫外線照射殺菌，然后粉碎；將粉碎后的二級菌種用所述無菌水稀釋，稀釋后即為液化菌種；粉碎后二級菌種與無菌水的質(zhì)量比 1:100 1:150。
所述食用菌包括金針菇、杏鮑菇、蟹味菇和茶樹菇。
步驟C中所述二級菌種粉碎至細(xì)度為80 100目。
步驟B中所述無菌水的制作，采取高壓蒸汽殺菌的方法或直接用燒開水的方法制備無菌水。
一般情況下，液體菌種的培養(yǎng)液主要成分是白砂糖、豆柏粉和水，是通過形成多而密小的菌絲球后接種到菌瓶中，其菌絲球大部分附著在菌瓶表面，滲透的較緩慢。在接種的過程中，有時噴灑到菌瓶的表面，粘稠的菌液容易受到污染。
采用本發(fā)明提供的食用菌液化菌種的制備方法，利用菌種高速粉碎機(jī)將二級菌種粉碎成菌絲粉末，通過液化水進(jìn)行稀釋后再接種，菌液較清，滲透力強(qiáng)，菌絲粉末能到達(dá)菌瓶的底部，萌發(fā)速度較快。由于菌液清澈且含糖量低，噴散到外面也不容易遭到污染。
本發(fā)明提供的食用菌液化菌種的制備方法，工藝簡單，接種簡便，發(fā)菌快，出菇早， 優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，效率高，污染風(fēng)險小，投資和運行成本低，經(jīng)濟(jì)效益好。使用本方法制備的食用菌液化菌種，食用菌液化菌種的菌液較原先深層發(fā)酵液體菌種的菌液更為細(xì)小，且菌液不含糖分等營養(yǎng)粘稠物質(zhì)，不以菌球存在，食用菌液化菌種接種后，菌種的滲透力強(qiáng)，發(fā)菌快。而且，食用菌液化菌種的栽培出菇時間大大縮短、出菇整齊、生長速度快，產(chǎn)量明顯提高。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
實施例一金針菇液化菌種的制備方法，包括以下步驟步驟I : 一級菌種的純化培養(yǎng)(I)PDA加富培養(yǎng)基的配制將300g 土豆去芽、去皮，切成小條放入鍋中，加入1500ml 水，煮沸至土豆酥而不爛時用6層紗布過濾，得到PDA培養(yǎng)基；加入30g瓊脂融化，再加入 30g葡萄糖、I. Og植物性蛋白胨、3. Og干酵母片,混合攪拌均勻,補(bǔ)水至1500ml得到PDA加富培養(yǎng)基，趁熱分裝于20mmX 200mm的試管中；將試管塞上棉塞，7只一把用牛皮紙包扎，橡皮肋固定備用。
(2) PDA加富培養(yǎng)基的殺菌、冷卻將包扎好的試管放入高壓蒸汽殺菌鍋中，壓力為1.5kg/m3，溫度為121°C，加熱35min進(jìn)行殺菌；殺菌完成后，趁熱取出試管擺斜面，自然冷卻至17°C，待用。
(3) 一級菌種的純化培養(yǎng)接種室內(nèi)采用百級凈化，超凈工作臺及其各種工具用 75 %酒精浸泡擦洗，接種前，打開紫外線燈殺菌15min。在無菌條件下，用組織分離法進(jìn)行取種。用接種針從金針菇新12號的菇帽與菇柄之間的組織挑取一小塊組織接入試管的PDA 加富培養(yǎng)基上，取種量與PDA加富培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:20。瓶口靠近酒精燈火焰處，速度要快，接種完成以后將試管塞上棉花，放到20 C培養(yǎng)室中培養(yǎng)。從48h起開始觀察囷絲明發(fā)、 生長情況。觀察菌絲長勢，包括菌絲萌發(fā)力，菌絲色澤和濃度、菌落形態(tài)等，每隔2d進(jìn)行一次觀察記錄，待全部菌絲長滿時就結(jié)束觀察，并對觀察結(jié)果和測定數(shù)據(jù)進(jìn)行對比分析。10天后待全部菌絲長滿試管瓶時，挑選出菌絲生長旺盛、無污染、活力強(qiáng)的作為純化后的一級菌種。
步驟2:無菌水的制作檢查500升液化罐的氣密性，檢查完畢后給液化罐內(nèi)注入自來水至5001刻度線為止， 蓋緊液化罐的罐蓋，推入殺菌室進(jìn)行殺菌。給液化罐連接好進(jìn)氣管道，設(shè)置壓力1.3kg/m3， 溫度123°C，用高壓蒸汽殺菌lOOmin。液化罐殺菌結(jié)束后，將液化罐移入水淋冷卻室，連接好自來水管道和進(jìn)氣管，對液化罐的罐體進(jìn)行不間斷水淋冷卻3. 5小時，用手觸摸罐底冰涼為止，使液化罐內(nèi)溫度降至17°C。為了防止個別大顆粒未融化菌塊堵塞自動接種機(jī)的接種噴頭，在液化罐的接種口加裝80目的菌絲過濾網(wǎng)袋。
步驟3 :二級菌種的制備和液化(I)溶水性培養(yǎng)基的配制在18°C下用白糖168g、豆柏18. 9g、硫酸鎂28g、磷酸二氫鉀 28g，消泡劑3. Og，無菌水550g，制作成800ml溶水性培養(yǎng)基三角瓶，瓶口用棉球塞緊。
(2)溶水性培養(yǎng)基的殺菌將溶水性培養(yǎng)基三角瓶放入高壓蒸汽殺菌鍋中，壓力為 I. 3kg/m3，溫度為121°C，加熱60min進(jìn)行殺菌；殺菌完成后自然冷卻至16°C待接種。
(3)二級菌種的制備將冷卻后的溶水性培養(yǎng)基三角瓶放入無菌超凈臺，紫外線照射lOmin，用酒精棉擦拭表面后，準(zhǔn)備接種；選菌絲生長旺盛、菌絲活力強(qiáng)、無污染的一級菌種試管數(shù)支，做好人員消毒(尤其是手部消毒)，在無菌超凈臺下，將純化后一級菌種試管的母種分切后的顆粒菌種接入溶水性培養(yǎng)基三角瓶中，純化后一級菌種與溶水性培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:40。用硫酸紙包緊瓶口，在硫酸紙外再包一層報紙，用橡皮繩扎緊。接種完畢的二級菌種三角瓶放入搖床培養(yǎng)8天，溫度22°C，得到三角瓶二級菌種。
(4)粉碎二級菌種將菌種高速粉碎機(jī)、鑷子放入無菌超凈臺，用紫外線照射 lOmin，用酒精棉擦拭表面后備用；挑選菌絲生長旺盛、菌絲活力強(qiáng)、無污染的三角瓶二級菌種5瓶，做好人員消毒(尤其是手部消毒)，在無菌超凈臺下打開三角瓶，把高速攪拌棒放入三角瓶正中位置，啟動菌種高速粉碎機(jī)，由低速到高速逐步增加，直到三角瓶二級菌種的菌絲球完全打碎，大約3分鐘，取出攪拌棒，然后用無菌紙封好三角瓶口。二級菌種粉碎后的細(xì)度為80目。菌絲通過粉碎裝置粉碎打斷，粉碎后的菌絲水溶化效果良好，溶入無菌水中其接種后滲透力強(qiáng)，接種后生長旺盛，菌絲萌發(fā)點多，發(fā)菌快、發(fā)菌整齊。
(5) 二級菌種的液化將冷卻后的無菌水罐推入高效過濾器下，連接好進(jìn)氣管道， 在接種口周圍布滿95%的酒精紗布，左手持粉碎好的二級種，右手點燃酒精紗布，在火焰圈的保護(hù)下，將粉碎后二級菌種倒入無菌水罐的無菌水中進(jìn)行稀釋，稀釋后即成液化菌種。關(guān)閉接種口，熄滅火焰。粉碎后二級菌種與無菌水的比例為1:150。
步驟4 液化菌種的接種在16°C下，連接好生產(chǎn)瓶的進(jìn)氣管道和接種機(jī)，進(jìn)行接種，每半小時抽檢一次。生產(chǎn)瓶的體積為1100ml，生產(chǎn)瓶中有840 g的固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基按照質(zhì)量百分比計，為玉米芯30%，米糠30%，棉籽殼15%，麩皮15%，甜菜渣5%，黃蛋皮4%，碳酸鈣1%。，每個生產(chǎn)瓶的接種量為27g。將接種后的生產(chǎn)瓶移入養(yǎng)菌室培養(yǎng)，養(yǎng)菌室的溫度為15°C，濕度為65%，黑暗培養(yǎng)。每隔7天或不定期拿手電筒進(jìn)行照射檢查，若發(fā)現(xiàn)生長異常及污染，應(yīng)及時將生產(chǎn)瓶撤離出養(yǎng)菌室，以免影響其他菌種的生長。養(yǎng)菌周期為23天，養(yǎng)菌完成后，搔菌，入育菇房培養(yǎng)，出燕，催燕生長，米收。
采用本發(fā)明提供的金針菇液化菌種的制備方法，工藝簡單，接種簡便，發(fā)菌快，出5菇早，優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，效率高，污染風(fēng)險小，投資和運行成本低，經(jīng)濟(jì)效益好。金針菇的菌絲生長速度快，出菇時間大大縮短、出菇整齊、生長速度快，產(chǎn)量明顯提高。達(dá)到了零污染，商品菇一等率可以達(dá)到99%。
實施例二杏鮑菇液化菌種的制備方法，包括以下步驟步驟I : 一級菌種的純化培養(yǎng)(I)PDA加富培養(yǎng)基的配制將300g 土豆去芽、去皮，切成小條放入鍋中，加入1500ml 水，煮沸至土豆酥而不爛時用6層紗布過濾，得到PDA培養(yǎng)基；加入20g瓊脂融化，再加入 40g葡萄糖、1.2g蛋白胨、2. 5g酵母片，混合攪拌均勻，補(bǔ)水至1500ml得到PDA加富培養(yǎng)基， 趁熱分裝于20mmX 200mm的試管中；將試管塞上棉塞，7只一把用牛皮紙包扎，橡皮筋固定備用。
(2) PDA加富培養(yǎng)基的殺菌、冷卻將包扎好的試管放入高壓蒸汽殺菌鍋中，壓力為1.4kg/m3，溫度為122°C，加熱30min進(jìn)行殺菌；殺菌完成后，趁熱取出試管擺斜面，自然冷卻至16°C，待用。
(3) 一級菌種的純化培養(yǎng)接種室內(nèi)采用百級凈化，超凈工作臺及其各種工具用 75%酒精浸泡擦洗，接種前，打開紫外線燈殺菌15min。在無菌條件下，用組織分離法進(jìn)行取種。用接種針從杏鮑菇的菇帽與菇柄之間的組織挑取一小塊組織接入試管的加富培養(yǎng)基上，取種量與PDA加富培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:15。瓶口靠近酒精燈火焰處，速度要快，接種完成以后將試管塞上棉花，放到19°C培養(yǎng)室中培養(yǎng)。從48h起開始觀察菌絲萌發(fā)、生長情況。觀察菌絲長勢，包括菌絲萌發(fā)力，菌絲色澤和濃度、菌落形態(tài)等，每隔2d進(jìn)行一次觀察記錄，待全部菌絲長滿時就結(jié)束觀察，并對觀察結(jié)果和測定數(shù)據(jù)進(jìn)行對比分析。12天后待全部菌絲長滿試管瓶時，挑選出菌絲生長旺盛、無污染、活力強(qiáng)的作為純化后的一級菌種。
步驟2:無菌水的制作檢查500升液化罐的氣密性，檢查完畢后給液化罐內(nèi)注入自來水至5001刻度線為止， 蓋緊液化罐的罐蓋，推入殺菌室進(jìn)行殺菌。給液化罐連接好進(jìn)氣管道，設(shè)置壓力1.4kg/m3， 溫度122°C，用高壓蒸汽殺菌105min。液化罐殺菌結(jié)束后，將液化罐移入水淋冷卻室，連接好自來水管道和進(jìn)氣管，對液化罐的罐體進(jìn)行不間斷水淋冷卻4. O小時，用手觸摸罐底冰涼為止，使液化罐內(nèi)溫度降至18°C。為了防止個別大顆粒未融化菌塊堵塞自動接種機(jī)的接種噴頭，在液化罐的接種口加裝90目的菌絲過濾網(wǎng)袋。
步驟3 :二級菌種的制備和液化(I)溶水性培養(yǎng)基的配制在18°C下用白糖150g、豆柏19g、硫酸鎂26g、磷酸二氫鉀 30g，消泡劑2. 0g，無菌水573g，制作成800ml溶水性培養(yǎng)基三角瓶，瓶口用棉球塞緊。
(2)溶水性培養(yǎng)基的殺菌將溶水性培養(yǎng)基三角瓶放入高壓蒸汽殺菌鍋中，壓力為 I. 4kg/m3，溫度為123°C，加熱55min進(jìn)行殺菌；殺菌完成后自然冷卻至17°C待接種。
(3)二級菌種的制備將冷卻后的溶水性培養(yǎng)基三角瓶放入無菌超凈臺，紫外線照射12min，用酒精棉擦拭表面后，準(zhǔn)備接種；選菌絲生長旺盛、菌絲活力強(qiáng)、無污染的一級菌種試管數(shù)支，做好人員消毒(尤其是手部消毒)，在無菌超凈臺下，將純化后一級菌種試管的母種分切后的顆粒菌種接入溶水性培養(yǎng)基三角瓶中，純化后一級菌種與溶水性培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:30。用硫酸紙包緊瓶口，在硫酸紙外再包一層報紙，用橡皮繩扎緊。接種完畢的二級菌種三角瓶放入搖床培養(yǎng)10天，溫度21°C，得到三角瓶二級菌種。
(4)粉碎二級菌種將菌種高速粉碎機(jī)、鑷子放入無菌超凈臺，用紫外線照射 12min，用酒精棉擦拭表面后備用；挑選菌絲生長旺盛、菌絲活力強(qiáng)、無污染的三角瓶二級菌種5瓶，做好人員消毒(尤其是手部消毒)，在無菌超凈臺下打開三角瓶，把高速攪拌棒放入三角瓶正中位置，啟動菌種高速粉碎機(jī)，由低速到高速逐步增加，直到三角瓶二級菌種的菌絲球完全打碎，大約3分鐘，取出攪拌棒，然后用無菌紙封好三角瓶口。二級菌種粉碎后的細(xì)度為90目。菌絲通過粉碎裝置粉碎打斷，粉碎后的菌絲水溶化效果良好，溶入無菌水中其接種后滲透力強(qiáng)，接種后生長旺盛，菌絲萌發(fā)點多，發(fā)菌快、發(fā)菌整齊。
(5) 二級菌種的液化將冷卻后的無菌水罐推入高效過濾器下，連接好進(jìn)氣管道， 在接種口周圍布滿95%的酒精紗布，左手持粉碎好的二級種，右手點燃酒精紗布，在火焰圈的保護(hù)下，將粉碎后二級菌種倒入無菌水罐的無菌水中進(jìn)行稀釋，稀釋后即成液化菌種。關(guān)閉接種口，熄滅火焰。粉碎后二級菌種與無菌水的比例為1:140。
步驟4 液化菌種的接種在16°C下，連接好生產(chǎn)瓶的進(jìn)氣管道和接種機(jī)，進(jìn)行接種，每半小時抽檢一次。生產(chǎn)瓶的體積為1100ml，生產(chǎn)瓶中有845 g的固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基按照質(zhì)量百分比計，為玉米芯30%，米糠30%，棉籽殼15%，麩皮15%，甜菜渣5%，黃蛋皮4%，碳酸鈣1%。，每個生產(chǎn)瓶的接種量為27g。每個生產(chǎn)瓶的接種量為25g。將接種后的生產(chǎn)瓶移入養(yǎng)菌室培養(yǎng)，養(yǎng)菌室的溫度為16°C，濕度為70%，黑暗培養(yǎng)。每隔7天或不定期拿手電筒進(jìn)行照射檢查，若發(fā)現(xiàn)生長異常及污染，應(yīng)及時將生產(chǎn)瓶撤離出養(yǎng)菌室，以免影響其他菌種的生長。養(yǎng)菌周期為30 天，養(yǎng)菌完成后，搔菌，入育燕房培養(yǎng)，出燕，催燕生長，米收。
采用本發(fā)明提供的杏鮑菇液化菌種的制備方法，工藝簡單，接種簡便，發(fā)菌快，出菇早，優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，效率高，污染風(fēng)險小，投資和運行成本低，經(jīng)濟(jì)效益好。杏鮑菇的菌絲生長速度快，出菇時間大大縮短、出菇整齊、生長速度快，產(chǎn)量明顯提高。達(dá)到了零污染，商品菇一等率可以達(dá)到99%。
實施例三蟹味菇液化菌種的制備方法，包括以下步驟步驟I : 一級菌種的純化培養(yǎng)(I)PDA加富培養(yǎng)基的配制將300g 土豆去芽、去皮，切成小條放入鍋中，加入1200ml 水，煮沸至土豆酥而不爛時用5層紗布過濾，得到PDA培養(yǎng)基；加入25g瓊脂融化，再加入 20g葡萄糖、1.5g蛋白胨、2. Og酵母片，混合攪拌均勻，補(bǔ)水至1200ml得到PDA加富培養(yǎng)基， 趁熱分裝于20mmX 200mm的試管中；將試管塞上棉塞，7只一把用牛皮紙包扎，橡皮筋固定備用。
(2) PDA加富培養(yǎng)基的殺菌、冷卻將包扎好的試管放入高壓蒸汽殺菌鍋中，壓力為1.4kg/m3，溫度為123°C，加熱35min進(jìn)行殺菌；殺菌完成后，趁熱取出試管擺斜面，自然冷卻至18°C，待用。
(3) 一級菌種的純化培養(yǎng)接種室內(nèi)采用百級凈化，超凈工作臺及其各種工具用 75%酒精浸泡擦洗，接種前，打開紫外線燈殺菌15min。在無菌條件下，用組織分離法進(jìn)行取種。用接種針從蟹味菇的菇帽與菇柄之間的組織挑取一小塊組織接入試管的加富培養(yǎng)基上，取種量與PDA加富培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:22。瓶口靠近酒精燈火焰處，速度要快，接種完成以后將試管塞上棉花，放到18°C培養(yǎng)室中培養(yǎng)。從48h起開始觀察菌絲萌發(fā)、生長情況。觀察菌絲長勢，包括菌絲萌發(fā)力，菌絲色澤和濃度、菌落形態(tài)等，每隔2d進(jìn)行一次觀察記錄，待全部菌絲長滿時就結(jié)束觀察，并對觀察結(jié)果和測定數(shù)據(jù)進(jìn)行對比分析。15天后待全部菌絲長滿試管瓶時，挑選出菌絲生長旺盛、無污染、活力強(qiáng)的作為純化后的一級菌種。
步驟2:無菌水的制作檢查500升液化罐的氣密性，檢查完畢后給液化罐內(nèi)注入自來水至5001刻度線為止， 蓋緊液化罐的罐蓋，推入殺菌室進(jìn)行殺菌。給液化罐連接好進(jìn)氣管道，設(shè)置壓力1.4kg/m3， 溫度122°C，用高壓蒸汽殺菌llOmin。液化罐殺菌結(jié)束后，將液化罐移入水淋冷卻室，連接好自來水管道和進(jìn)氣管，對液化罐的罐體進(jìn)行不間斷水淋冷卻4. O小時，用手觸摸罐底冰涼為止，使液化罐內(nèi)溫度降至18°C。為了防止個別大顆粒未融化菌塊堵塞自動接種機(jī)的接種噴頭，在液化罐的接種口加裝95目的菌絲過濾網(wǎng)袋。
步驟3 :二級菌種的制備和液化(I)溶水性培養(yǎng)基的配制在17°C下用白糖160g、豆柏18g、硫酸鎂27g、磷酸二氫鉀 27g，消泡劑2. 5g，無菌水580g，制作成800ml溶水性培養(yǎng)基三角瓶，瓶口用棉球塞緊。
(2)溶水性培養(yǎng)基的殺菌將溶水性培養(yǎng)基三角瓶放入高壓蒸汽殺菌鍋中，壓力為 I. 4kg/m3，溫度為122°C，加熱50min進(jìn)行殺菌；殺菌完成后自然冷卻至17°C待接種。
(3)二級菌種的制備將冷卻后的溶水性培養(yǎng)基三角瓶放入無菌超凈臺，紫外線照射13min，用酒精棉擦拭表面后，準(zhǔn)備接種；選菌絲生長旺盛、菌絲活力強(qiáng)、無污染的一級菌種試管數(shù)支，做好人員消毒(尤其是手部消毒)，在無菌超凈臺下，將純化后一級菌種試管的母種分切后的顆粒菌種接入溶水性培養(yǎng)基三角瓶中，純化后一級菌種與溶水性培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:35。用硫酸紙包緊瓶口，在硫酸紙外再包一層報紙，用橡皮繩扎緊。接種完畢的二級菌種三角瓶放入搖床培養(yǎng)11天，溫度21°C，得到三角瓶二級菌種。
(4)粉碎二級菌種將菌種高速粉碎機(jī)、鑷子放入無菌超凈臺，用紫外線照射 13min，用酒精棉擦拭表面后備用；挑選菌絲生長旺盛、菌絲活力強(qiáng)、無污染的三角瓶二級菌種4瓶，做好人員消毒(尤其是手部消毒)，在無菌超凈臺下打開三角瓶，把高速攪拌棒放入三角瓶正中位置，啟動菌種高速粉碎機(jī)，由低速到高速逐步增加，直到三角瓶二級菌種的菌絲球完全打碎，大約3分鐘，取出攪拌棒，然后用無菌紙封好三角瓶口。二級菌種粉碎后的細(xì)度為95目。菌絲通過粉碎裝置粉碎打斷，粉碎后的菌絲水溶化效果良好，溶入無菌水中其接種后滲透力強(qiáng)，接種后生長旺盛，菌絲萌發(fā)點多，發(fā)菌快、發(fā)菌整齊。
(5) 二級菌種的液化將冷卻后的無菌水罐推入高效過濾器下，連接好進(jìn)氣管道， 在接種口周圍布滿95%的酒精紗布，左手持粉碎好的二級種，右手點燃酒精紗布，在火焰圈的保護(hù)下，將粉碎后二級菌種倒入無菌水罐的無菌水中進(jìn)行稀釋，稀釋后即成液化菌種。關(guān)閉接種口，熄滅火焰。粉碎后二級菌種與無菌水的比例為1:130。
步驟4 液化菌種的接種在16°C下，連接好生產(chǎn)瓶的進(jìn)氣管道和接種機(jī)，進(jìn)行接種，每半小時抽檢一次。生產(chǎn)瓶的體積為1100ml，生產(chǎn)瓶中有845 g的固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基按照質(zhì)量百分比計，為玉米芯30%，米糠30%，棉籽殼15%，麩皮15%，甜菜渣5%，黃蛋皮4%，碳酸鈣1%。，每個生產(chǎn)瓶的接種量為27g。每個生產(chǎn)瓶的接種量為28g。將接種后的生產(chǎn)瓶移入養(yǎng)菌室培養(yǎng)，養(yǎng)菌室的溫度為16°C，濕度為70%，黑暗培養(yǎng)。每隔7天或不定期拿手電筒進(jìn)行照射檢查，若發(fā)現(xiàn)生長異常及污染，應(yīng)及時將生產(chǎn)瓶撤離出養(yǎng)菌室，以免影響其他菌種的生長。養(yǎng)菌周期為85 天，養(yǎng)菌完成后，搔菌，入育燕房培養(yǎng)，出燕，催燕生長，米收。
采用本發(fā)明提供的蟹味菇液化菌種的制備方法，工藝簡單，接種簡便，發(fā)菌快，出菇早，優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，效率高，污染風(fēng)險小，投資和運行成本低，經(jīng)濟(jì)效益好。蟹味菇的菌絲生長速度快，出菇時間大大縮短、出菇整齊、生長速度快，產(chǎn)量明顯提高。達(dá)到了零污染，商品菇一等率可以達(dá)到99%。
實施例四茶樹菇液化菌種的制備方法，包括以下步驟步驟I : 一級菌種的純化培養(yǎng)(I)PDA加富培養(yǎng)基的配制將300g 土豆去芽、去皮，切成小條放入鍋中，加入1200ml 水，煮沸至土豆酥而不爛時用5層紗布過濾，得到PDA培養(yǎng)基；加入40g瓊脂融化，再加入 20g葡萄糖、O. 5g蛋白胨、4. Og酵母片，混合攪拌均勻，補(bǔ)水至1200ml得到PDA加富培養(yǎng)基， 趁熱分裝于20mmX 200mm的試管中；將試管塞上棉塞，7只一把用牛皮紙包扎，橡皮筋固定備用。
(2) PDA加富培養(yǎng)基的殺菌、冷卻將包扎好的試管放入高壓蒸汽殺菌鍋中，壓力為I. 5kg/m3，溫度為120°C，加熱30min進(jìn)行殺菌；殺菌完成后，趁熱取出試管擺斜面，自然冷卻至16°C，待用。
(3) 一級菌種的純化培養(yǎng)接種室內(nèi)采用百級凈化，超凈工作臺及其各種工具用 75%酒精浸泡擦洗，接種前，打開紫外線燈殺菌15min。在無菌條件下，用組織分離法進(jìn)行取種。用接種針從茶樹菇的菇帽與菇柄之間的組織挑取一小塊組織接入試管的加富培養(yǎng)基上，取種量與PDA加富培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:30。瓶口靠近酒精燈火焰處，速度要快，接種完成以后將試管塞上棉花，放到19°C培養(yǎng)室中培養(yǎng)。從48h起開始觀察菌絲萌發(fā)、生長情況。觀察菌絲長勢，包括菌絲萌發(fā)力，菌絲色澤和濃度、菌落形態(tài)等，每隔2d進(jìn)行一次觀察記錄，待全部菌絲長滿時就結(jié)束觀察，并對觀察結(jié)果和測定數(shù)據(jù)進(jìn)行對比分析。14天后待全部菌絲長滿試管瓶時，挑選出菌絲生長旺盛、無污染、活力強(qiáng)的作為純化后的一級菌種。
步驟2:無菌水的制作檢查500升液化罐的氣密性，檢查完畢后給液化罐內(nèi)注入自來水至5001刻度線為止， 蓋緊液化罐的罐蓋，推入殺菌室進(jìn)行殺菌。給液化罐連接好進(jìn)氣管道，設(shè)置壓力1.2kg/m3， 溫度123°C，用高壓蒸汽殺菌120min。液化罐殺菌結(jié)束后，將液化罐移入水淋冷卻室，連接好自來水管道和進(jìn)氣管，對液化罐的罐體進(jìn)行不間斷水淋冷卻4. 5小時，用手觸摸罐底冰涼為止，使液化罐內(nèi)溫度降至19°C。為了防止個別大顆粒未融化菌塊堵塞自動接種機(jī)的接種噴頭，在液化罐的接種口加裝100目的菌絲過濾網(wǎng)袋。
步驟3 :二級菌種的制備和液化(I)溶水性培養(yǎng)基的配制在19°C下用白糖170g、豆柏17g、硫酸鎂30g、磷酸二氫鉀 26g，消泡劑I. 0g，無菌水556g，制作成800ml溶水性培養(yǎng)基三角瓶，瓶口用棉球塞緊。
(2)溶水性培養(yǎng)基的殺菌將溶水性培養(yǎng)基三角瓶放入高壓蒸汽殺菌鍋中，壓力為I.2kg/m3，溫度為123°C，加熱40min進(jìn)行殺菌；殺菌完成后自然冷卻至18°C待接種。
(3)二級菌種的制備將冷卻后的溶水性培養(yǎng)基三角瓶放入無菌超凈臺，紫外線照射15min，用酒精棉擦拭表面后，準(zhǔn)備接種；選菌絲生長旺盛、菌絲活力強(qiáng)、無污染的一級菌種試管數(shù)支，做好人員消毒(尤其是手部消毒)，在無菌超凈臺下，將純化后一級菌種試管的母種分切后的顆粒菌種接入溶水性培養(yǎng)基三角瓶中，純化后一級菌種與溶水性培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:50。用硫酸紙包緊瓶口，在硫酸紙外再包一層報紙，用橡皮繩扎緊。接種完畢的二級菌種三角瓶放入搖床培養(yǎng)12天，溫度20°C，得到三角瓶二級菌種。
(4)粉碎二級菌種將菌種高速粉碎機(jī)、鑷子放入無菌超凈臺，用紫外線照射 15min，用酒精棉擦拭表面后備用；挑選菌絲生長旺盛、菌絲活力強(qiáng)、無污染的三角瓶二級菌種4瓶，做好人員消毒(尤其是手部消毒)，在無菌超凈臺下打開三角瓶，把高速攪拌棒放入三角瓶正中位置，啟動菌種高速粉碎機(jī)，由低速到高速逐步增加，直到三角瓶二級菌種的菌絲球完全打碎，大約3分鐘，取出攪拌棒，然后用無菌紙封好三角瓶口。二級菌種粉碎后的細(xì)度為100目。菌絲通過粉碎裝置粉碎打斷，粉碎后的菌絲水溶化效果良好，溶入無菌水中其接種后滲透力強(qiáng)，接種后生長旺盛，菌絲萌發(fā)點多，發(fā)菌快、發(fā)菌整齊。
(5) 二級菌種的液化將冷卻后的無菌水罐推入高效過濾器下，連接好進(jìn)氣管道， 在接種口周圍布滿95%的酒精紗布，左手持粉碎好的二級種，右手點燃酒精紗布，在火焰圈的保護(hù)下，將粉碎后二級菌種倒入無菌水罐的無菌水中進(jìn)行稀釋，稀釋后即成液化菌種。關(guān)閉接種口，熄滅火焰。粉碎后二級菌種與無菌水的比例為1:100。
步驟4 液化菌種的接種在17°C下，連接好生產(chǎn)瓶的進(jìn)氣管道和接種機(jī)，進(jìn)行接種，每半小時抽檢一次。生產(chǎn)瓶的體積為1100ml，生產(chǎn)瓶中有850g的固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基按照質(zhì)量百分比計，為玉米芯30%，米糠15%，棉籽殼30%，麩皮15%，甜菜渣5%，黃蛋皮4%，碳酸鈣1%。，每個生產(chǎn)瓶的接種量為27g。每個生產(chǎn)瓶的接種量為30g。
將接種后的生產(chǎn)瓶移入養(yǎng)菌室培養(yǎng)，養(yǎng)菌室的溫度為19°C，濕度為75%，黑暗培養(yǎng)。每隔7天或不定期拿手電筒進(jìn)行照射檢查，若發(fā)現(xiàn)生長異常及污染，應(yīng)及時將生產(chǎn)瓶撤離出養(yǎng)菌室，以免影響其他菌種的生長。養(yǎng)菌周期為25天，養(yǎng)菌完成后，搔菌，入育菇房培養(yǎng)，出燕，催燕生長，米收。
采用本發(fā)明提供的茶樹菇液化菌種的制備方法，工藝簡單，接種簡便，發(fā)菌快，出菇早，優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，效率高，污染風(fēng)險小，投資和運行成本低，經(jīng)濟(jì)效益好。茶樹菇的菌絲生長速度快，出菇時間大大縮短、出菇整齊、生長速度快，產(chǎn)量明顯提高。達(dá)到了零污染，商品菇一等率可以達(dá)到99%。
權(quán)利要求
1.一種食用菌液化菌種的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 步驟A :—級菌種的純化培養(yǎng) (1)PDA加富培養(yǎng)基的配制將土豆去芽、去皮,切成小條放入鍋中，加入所述土豆質(zhì)量4 5倍的水，煮沸至土豆酥而不爛時用紗布過濾，得到PDA培養(yǎng)基；加入土豆質(zhì)量6. 7 13. 3%的瓊脂融化后，再加入土豆質(zhì)量6. 7 13. 3%的葡萄糖、O. 16 O. 33%的植物性蛋白胨、O. 67 I. 33%的干酵母片，混合攪拌均勻，補(bǔ)水至所述土豆質(zhì)量的4 5倍，得到PDA加富培養(yǎng)基；然后殺菌、冷卻，待用； (2)—級菌種的純化培養(yǎng)在無菌條件下，用組織分離法取種，接入所述PDA加富培養(yǎng)基中，在18 20°C培養(yǎng)室中培養(yǎng)10 15天，得到純化后的一級菌種；所述取種量與PDA加富培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:15 I :30 ; 步驟B:制作無菌水； 步驟C :二級菌種的制備和液化 (1)由以下質(zhì)量份的原料配制得到溶水性培養(yǎng)基白糖150 170份、豆柏17 19份、硫酸鎂26 30份、磷酸二氫鉀26 30份、消泡劑I 3份、無菌水550 580份，在17 19°C混合攪拌均勻；然后將其殺菌、冷卻； (2)二級菌種的制備將所述溶水性培養(yǎng)基用紫外線照射殺菌，將所述純化后一級菌種分切后接入殺菌后的溶水性培養(yǎng)基中，在20 22°C的搖床中培養(yǎng)8 12天，得到二級菌種；所述純化后一級菌種與溶水性培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:30 1:50 ; (3)二級菌種的液化將所述二級菌種用紫外線照射殺菌，然后粉碎；將粉碎后的二級菌種用所述無菌水稀釋，稀釋后即為液化菌種；粉碎后二級菌種與無菌水的質(zhì)量比1:100 1:150。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種食用菌液化菌種的制備方法，其特征在于，所述食用菌包括金針菇、杏鮑菇、蟹味菇和茶樹菇。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種食用菌液化菌種的制備方法，其特征在于，步驟C中所述二級菌種粉碎至細(xì)度為80 100目。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種食用菌液化菌種的制備方法，其特征在于，步驟B中所述無菌水的制作，采取高壓蒸汽殺菌的方法或直接用燒開水的方法制備無菌水。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種食用菌液化菌種的制備方法，包括一級菌種的純化培養(yǎng)、無菌水的制作、二級菌種的制備和液化三個步驟。首先將一級菌種在PDA加富培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到純化后的一級菌種，然后將純化后的一級菌種切分后接入溶水性培養(yǎng)基中，得到二級菌種，最后將二級菌種用菌種高速粉碎機(jī)打碎菌絲，再加入到無菌水中進(jìn)行稀釋得到液化菌種。該制備方法，工藝簡單，接種簡便，發(fā)菌快，出菇早，優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，效率高，污染風(fēng)險小，投資和運行成本低，經(jīng)濟(jì)效益好。使用該方法制備的食用菌液化菌種接種后，菌種的滲透力強(qiáng)，發(fā)菌快。而且，食用菌液化菌種的栽培出菇時間大大縮短、出菇整齊、生長速度快，產(chǎn)量明顯提高。
文檔編號A01G1/04GK102972208SQ201210533908
公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月12日
發(fā)明者陶軍 申請人:天水眾興菌業(yè)科技股份有限公司