專利名稱：薄殼山核桃組培芽微型嫁接方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以薄殼山核桃組培的不定芽嫁接至薄殼山核桃一年生實(shí)生苗新枝的微型嫁接方法。
背景技術(shù)：
薄殼山核桃[Carya illinoinensis (ffangehn. )K. Koch.]又名美國(guó)山核桃、長(zhǎng)山核桃，為胡桃科山核桃屬落葉喬木，原產(chǎn)美 國(guó)南部和墨西哥北部，是世界上著名的油料干果樹種之一，同時(shí)也是果、木兼用的優(yōu)良經(jīng)濟(jì)樹種，能適應(yīng)較大范圍的土壤酸堿度，在自然環(huán)境下，薄殼山核桃靠種子繁殖。薄殼山核桃干果可加工成各種特色風(fēng)味食品、保健品，其種仁含油率高達(dá)70% 72%，富含不飽和脂肪酸，含粗蛋白7. 8% 9. 6%和含K、Ca、Mg、Na等人體所必須的礦質(zhì)元素。薄殼山核桃木質(zhì)堅(jiān)硬、紋理美、抗腐蝕，在軍工、船舶和建筑業(yè)用途廣泛，是我國(guó)一種十分優(yōu)良的經(jīng)濟(jì)樹種。我國(guó)引種栽培薄殼山核桃已有上百年歷史，浙江省于19世紀(jì)60年代開始引種。薄殼山核桃作為重要的南方特色干果，是經(jīng)濟(jì)效益最好、最受山區(qū)農(nóng)民歡迎的樹種之一，更是適合石灰?guī)r山地栽培的優(yōu)良生態(tài)經(jīng)濟(jì)樹種，已經(jīng)成為浙江、安徽、云南、福建、湖南、江西等我國(guó)南方亞熱帶地區(qū)適宜推廣省份重要的山地經(jīng)濟(jì)樹種。目前，薄殼山核桃已成為我國(guó)南方山區(qū)造林的首選經(jīng)濟(jì)樹種之一。然而，由于早期大都通過種子引進(jìn)，現(xiàn)有投產(chǎn)林大都為實(shí)生樹，且栽培零星分散，品種良莠不齊，隨著南方干果產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和經(jīng)濟(jì)林的蓬勃發(fā)展，目前薄殼山核桃品種退化分離明顯、結(jié)果遲，產(chǎn)量低，品質(zhì)差，加上樹體高大，采摘不方便，作為果品生產(chǎn)，推廣困難。雖然近年來云南、江蘇、浙江、湖南、廣西、四川、江西、甘肅、河南、貴州、河北等地區(qū)較大面積推廣種植，但薄殼山核桃在栽培中由于優(yōu)質(zhì)苗木數(shù)量極少，以致造林成活率低、造林不成林、生長(zhǎng)緩慢、投產(chǎn)周期長(zhǎng)、單位面積產(chǎn)量低、低產(chǎn)低效林面積大、優(yōu)良接穗來源少、苗木繁殖系數(shù)低及優(yōu)質(zhì)壯苗培育技術(shù)缺乏等問題日益突出，嚴(yán)重制約了薄殼山核桃產(chǎn)業(yè)的快速健康發(fā)展。林學(xué)界，眾多學(xué)者對(duì)薄殼山核桃的繁殖作了許多新的探索和嘗試，如李俊南等先生的薄殼山核桃單芽腹接技術(shù)、常君等的薄殼山核桃根段育苗技術(shù)，楊國(guó)榮等的薄殼山核桃以苗繁苗快速擴(kuò)繁技術(shù)等，各對(duì)社會(huì)作出了有益的貢獻(xiàn)。經(jīng)檢索，至今未發(fā)現(xiàn)通過薄殼山核桃優(yōu)株一年生枝條經(jīng)試管培育不定芽經(jīng)微型嫁接，繁殖生根育成植株的方法的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種以薄殼山核桃一年生枝條為外植體，誘導(dǎo)形成不定芽、不定芽伸長(zhǎng)培養(yǎng)，并將伸長(zhǎng)的不定芽嫁接至薄殼山核桃一年生實(shí)生苗新技的微型嫁接方法。本發(fā)明的技術(shù)問題通過如下技術(shù)方案解決本薄殼山核桃組培芽微型嫁接方法按如下步驟進(jìn)行
一、接穗組培芽誘導(dǎo)與增殖(I)外植體采集與消毒選取健壯的薄殼山核桃優(yōu)株I年生健壯新枝，依次進(jìn)行自來水沖洗2h，超凈工作臺(tái)上用75%乙醇滅菌3min，無菌水沖洗3 4次，濃度為0. 525%的NaClO滅菌20min并抽真空，無菌水沖洗5次后，用滅菌濾紙吸干表面水分，切下帶頂芽和腋芽長(zhǎng)度為I 1. 5cm的枝段待用；(2)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制WPM附加蔗糖20 30g/L、瓊脂A 6. 5 8. 5g/L、6-BA即6-氨基腺嘌呤0. 5 2. Omg/L, IBA即吲哚丁酸0.1 0. 5mg/L，pH值5. 7 ;(3)不定芽誘導(dǎo)將初代培養(yǎng)后胚根發(fā)育良好的幼芽接入前述(2)的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，經(jīng)過21d的誘導(dǎo)，獲得不定芽；用微電腦時(shí)控開關(guān)控制培養(yǎng)室每日光照時(shí)間，每日光暗周期為光16h/暗8h，光照強(qiáng)度為40 50iimol hTY1，培養(yǎng)溫度為25±2°C ；
(4)不定芽增殖培養(yǎng)基的配制WPM附加蔗糖20 30g/L、瓊脂A 6. 5 8. 5g/L、6-BA即6-氨基腺嘌呤1. 0 3. Omg/L, IBA即吲哚丁酸0. 05 0. lmg/L, pH值5. 7 ;(5)不定芽增殖培養(yǎng)將獲得的不定芽在前述(4)的不定芽增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，21天繼代I次，共繼代3次，增殖系數(shù)為5 8 ;光照培養(yǎng)，光暗周期為光16h/暗8h，光照強(qiáng)度為40 50iimol m—Y1，培養(yǎng)溫度為25±2°C ；二、薄殼山核桃砧木培育選擇當(dāng)年充分成熟的薄殼山核桃作站木種子，在大棚(6m 30m)中設(shè)置苗床,苗床長(zhǎng)度與寬度分別為Im和10m，苗床底部按每平方米IOOW的標(biāo)準(zhǔn)布地?zé)峋€，溫度由控溫議控制；用1000mg/L濃度的赤霉素浸泡種子2 3天，撈出后直接將種子擺放在苗床上，薄殼山核桃縫合線與土表垂直，一般每平方米擺放700 800粒，于薄殼山核桃上覆沙土 8 10cm，澆透水再覆地膜，控制溫度在25±2°C ；三、組培芽嫁接于大棚中從苗床取出18 20cm高的種子苗做砧木，在子葉著生處以上2 3cm處剪斷砧苗，沿髓心稍偏縱切，深I(lǐng)cm ;剪下3. 0 3. 5cm長(zhǎng)的健壯組培芽，插入砧木的縱切口，用微膜(0. 5cm * 10cm)包扎，并移栽植于育苗容器中，在育苗容器外罩透明塑料袋保溫保濕；一周后，逐漸剪開透明塑料袋的袋角，直至全部剪開并去除套袋；四、管理微型嫁接后，接穗和砧木愈合期大棚溫度控制在25±2°C，濕度控制在85%±2%，避免陽(yáng)光直射，直至接穗和砧木完全愈合，嫁接苗成活。本發(fā)明的有益效果是應(yīng)用薄殼山核桃組培不定芽誘導(dǎo)并進(jìn)行組培芽嫁接，能使新生植株保持母本的優(yōu)良性狀，有效地提高薄殼山核桃優(yōu)株的繁殖系數(shù)，為薄殼山核桃良種快繁打下良好的基礎(chǔ)。與播種繁殖相比，優(yōu)株不定芽誘導(dǎo)能保持母本優(yōu)良的生物學(xué)特性，優(yōu)株不定芽嫁接能有效避免不定芽瓶?jī)?nèi)不易生根的難題，育苗周期短。與扦插繁殖或常規(guī)嫁接繁殖相比，在一個(gè)為期6個(gè)月的生長(zhǎng)周期內(nèi)組織培養(yǎng)法的繁殖系數(shù)為扦插繁殖或常規(guī)嫁接繁殖的50 60倍。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明下面結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步詳述本薄殼山核桃組培芽微型嫁接方法的接穗不定芽誘導(dǎo)與增殖培養(yǎng)基中，選用基本培養(yǎng)基是WPM培養(yǎng)基(其成分是公知公用的)，不細(xì)述，這是經(jīng)過用MS、1/2MS、WPM、DKff四種基本培養(yǎng)基各自均附加蔗糖20 30g/L、瓊脂A
6.5 8. 5g/L、6_BA 即 6-氛基腺嘿呤 0. 5 3. Omg/L, IBA 即H引噪丁酸 0. 05 0. 5mg/L, pH值5. 7，進(jìn)行試驗(yàn)，每組重復(fù)3次，每種基本培養(yǎng)基有20個(gè)外植體的對(duì)比試驗(yàn)得出的、因WPM培養(yǎng)基中處理21天后，不定芽發(fā)育最好，誘導(dǎo)的不定芽數(shù)量最多，質(zhì)量最好。培育站木用1000mg/L濃度的赤霉素浸泡種子2-3天,薄殼山核桃縫合線與土表垂直，一般每平方米擺放700 800粒，于薄殼山核桃上覆沙土 8 10cm，澆透水再覆地膜，控制溫度在25±2°C ;從苗床取出適合種子苗做砧木，在子葉柄以上2 3cm處剪斷砧苗，沿髓心稍偏縱切，深約Icm ;經(jīng)處理的組培芽削成楔形，插入砧木的縱切口，用微膜包扎，栽植于育苗容器，外罩透明塑料袋保濕，適時(shí)剪角去袋，最后做好接穗和砧木愈合期的大棚管理工作?？傊?，本發(fā)明所公開的培養(yǎng)基各原料的配比值也可分別采用本發(fā)明最 佳方案定值的接近值取代。下面給出的是本發(fā)明的最佳實(shí)施例。本薄殼山核桃組培芽微型嫁接方法，包括不同誘導(dǎo)時(shí)期的兩種培養(yǎng)基，兩種培養(yǎng)基的原料及其附加量分別是(I)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基WPM附加蔗糖25g/L、瓊脂A7. 5g/L、6_BA即6_氨基腺嘌呤 2. Omg/L, IBA 即吲哚丁酸 0. 3mg/L，pH 值 5. 7 ;(2)不定芽增殖培養(yǎng)基WPM附加蔗糖25g/L、瓊脂A7. 5g/L，6-BA即6_氨基腺嘌呤1. 0mg/L, IBA 即吲哚丁酸 0. lmg/L, pH 值為 5. 7 ；用上述培養(yǎng)基進(jìn)行薄殼山核桃不定芽誘導(dǎo)及增殖方法經(jīng)過下列步驟首先是外植體采集與消毒選取健壯的薄殼山核桃優(yōu)株I年生健壯新枝，依次進(jìn)行自來水沖洗2h，超凈工作臺(tái)上用75 %乙醇滅菌3min，無菌水沖洗3 4次，濃度為0. 525%的NaClO滅菌20min并抽真空，無菌水沖洗5次后，用滅菌濾紙吸干表面水分，切下帶頂芽和腋芽的枝段(I 1. 5cm)待用；其次是不定芽誘導(dǎo)將步驟(I)無菌條件下取出的幼胚接入前述的初代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)21d,光暗周期為光16h/暗8h的條件下培養(yǎng),光照強(qiáng)度40 50iimol nT2s'培養(yǎng)溫度為25±2°C ;最后是不定芽增殖將獲得的不定芽長(zhǎng)至0. 5cm左右聞時(shí)，從莖基部切下并接種到前述的不定芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，21天繼代I次，共繼代3次，每次增殖系數(shù)為5 8。光照培養(yǎng)，光暗周期為光16h/暗8h，光照強(qiáng)度為40 50iimol hTY1，培養(yǎng)溫度25±2°C。
權(quán)利要求
1.一種薄殼山核桃組培芽微型嫁接方法，其特征是按如下步驟進(jìn)行一、接穗組培芽誘導(dǎo)與增殖；(1)外植體采集與消毒選取健壯的薄殼山核桃優(yōu)株I年生健壯新枝，依次進(jìn)行自來水沖洗2h，超凈工作臺(tái)上用75%乙醇滅菌3min，無菌水沖洗3 4次，濃度為O. 525%的NaClO 滅苗20min并抽真空，無菌水沖洗5次后，用滅菌濾紙吸干表面水分，切下帶頂芽和腋芽長(zhǎng)度為I 1. 5cm的枝段待用；(2)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制WPM附加蔗糖20 30g/L、瓊脂A6. 5 8. 5g/L、6_BA 即6-氨基腺嘌呤O. 5 2. Omg/L, IBA即吲哚丁酸O.1 O. 5mg/L，pH值5. 7 ;(3)不定芽誘導(dǎo)將初代培養(yǎng)后胚根發(fā)育良好的幼芽接入前述(2)的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，經(jīng)過21d的誘導(dǎo)，獲得不定芽；用微電腦時(shí)控開關(guān)控制培養(yǎng)室每日光照時(shí)間，每日光暗周期為光16h/暗8h，光照強(qiáng)度為40 50μπιΟ1 HT2s-1,培養(yǎng)溫度為25±2°C ；(4)不定芽增殖培養(yǎng)基的配制WPM附加蔗糖20 30g/L、瓊脂A6. 5 8. 5g/L、6_BA 即6-氨基腺嘌呤1. O 3. Omg/L, IBA即吲哚丁酸O. 05 O. lmg/L，pH值5. 7 ;(5)不定芽增殖培養(yǎng)將獲得的不定芽在前述(4)的不定芽增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，21天繼代I次，共繼代3次，增殖系數(shù)為5 8 ;光照培養(yǎng)，光暗周期為光16h/暗8h，光照強(qiáng)度為40 50 μ mo I HT2s-1,培養(yǎng)溫度為25±2°C ；二、薄殼山核桃砧木培育選擇當(dāng)年充分成熟的薄殼山核桃作砧木種子，在大棚中設(shè)置苗床，苗床長(zhǎng)度與寬度分別為Im和10m，苗床底部按每平方米100W的標(biāo)準(zhǔn)布地?zé)峋€，溫度由控溫儀控制；用IOOOmg/ L濃度的赤霉素浸泡種子2 3天，撈出后直接將種子擺放在苗床上，薄殼山核桃縫合線與土表垂直，每平方米擺放700 800粒、于薄殼山核桃上覆沙土 8 10cm，澆透水再覆地膜， 控制溫度在25±2°C ;三、組培芽嫁接于大棚中從苗床取出18 20cm高的種子苗做砧木，在子葉著生處以上2 3cm處剪斷砧苗，沿髓心稍偏縱切，深I(lǐng)cm ;剪下3. O 3. 5cm長(zhǎng)的健壯組培芽，插入砧木的縱切口， 用0. 5cm * IOcm的微膜包扎，并移栽植于育苗容器中，在育苗容器外罩透明塑料袋保濕；一周后，逐漸剪開透明塑料袋的袋角，直至全部剪開并去除套袋；四、管理嫁接后，接穗和砧木愈合期大棚溫度控制在25±2°C，濕度控制在85% ± 2 %，避免陽(yáng)光直射，直至接穗和砧木完全愈合，嫁接苗成活。
全文摘要
一種薄殼山核桃組培芽微型嫁接方法，按如下四大步驟進(jìn)行一是接穗組培芽的誘導(dǎo)與增殖，經(jīng)外植體采集與消毒、不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制、不定芽誘導(dǎo)、不定芽增殖培養(yǎng)基的配制和不定芽增殖培養(yǎng)五個(gè)工作環(huán)節(jié)。二是薄殼山核桃砧木的培育，三是組培芽的嫁接，四是嫁接和愈合期的管理。用本方法培育薄殼山核桃，具有保持母本特性、結(jié)果早、抗逆性強(qiáng)、繁殖速率高等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01G1/00GK103004593SQ20121053755
公開日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月11日
發(fā)明者張啟香, 王正加, 劉力, 胡恒康, 施娟娟, 武麗萍 申請(qǐng)人:浙江農(nóng)林大學(xué)