一種玉米轉(zhuǎn)基因組培苗的移栽方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種玉米轉(zhuǎn)基因組培苗的移栽方法。該方法是：（1）將組培苗加無菌水于培養(yǎng)室中煉苗1-2天；（2）取出洗凈后，將根及根莖連接處往上1-1.5cm的部位放入含有甲基硫菌靈和硫酸銅鈣的溶液中浸1分鐘；（3）將組培苗種植于營養(yǎng)土中，營養(yǎng)土的組分為腐殖質(zhì)土、草木灰和蛭石，添加甲基硫菌靈和硫酸銅鈣；再加入生物有機(jī)肥，覆蓋薄膜靜置2-3天；（4）移栽后的第5-7天和第10-12天，各噴霧1次喹啉銅溶液。利用本發(fā)明提供的玉米組培苗的移栽方法，玉米組培苗的移栽成活率提高到97%以上，移栽后玉米植株生產(chǎn)旺盛，能夠正常的開花結(jié)實，平均每株結(jié)實25-40粒；改進(jìn)了營養(yǎng)土的配置和滅菌方法，節(jié)省經(jīng)濟(jì)及人工成本。
【專利說明】一種玉米轉(zhuǎn)基因組培苗的移栽方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種玉米轉(zhuǎn)基因組培苗的移栽方法，屬于玉米轉(zhuǎn)基因組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]玉米是我國重要的糧食作物和經(jīng)濟(jì)作物，2012年我國玉米種植面積在5.24億畝，平均畝產(chǎn)1400斤左右，2012年總產(chǎn)在4000億斤左右。我國玉米在育種、栽培、植保、加工等領(lǐng)域的研究均處于國際領(lǐng)先水平。現(xiàn)代轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展對提高玉米抗性、改良玉米品質(zhì)等發(fā)揮重要的作用，玉米的轉(zhuǎn)基因育種也逐漸在育種領(lǐng)域占有一席之地。由于玉米轉(zhuǎn)基因育種所選擇的自交系為易受侵染的自交系，抗逆性差，易感多種病蟲害，且在恒溫組培室里的遺傳轉(zhuǎn)化前期周期較長，導(dǎo)致玉米轉(zhuǎn)基因組培苗適應(yīng)性差，移栽成活率較低。通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)得到的具有優(yōu)良性狀的玉米再生苗，不能保證以高成活率移栽，限制了玉米組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展。因此，提高陽性苗的成活率至關(guān)重要。
[0003]現(xiàn)有玉米轉(zhuǎn)基因組培苗的移栽方法包括煉苗、滅菌水洗凈培養(yǎng)基、移栽至經(jīng)過高壓蒸汽滅菌的成品營養(yǎng)土中等步驟，此移栽方法有兩個弊端:1、除短時間煉苗外沒有提高組培苗抗逆性和適應(yīng)性的措施，轉(zhuǎn)基因玉米苗移栽成活率稍低，成活率約為60%-80%，平均每株結(jié)實20-30粒；2、對營養(yǎng)土的處理為高壓蒸汽滅菌，不僅需要購買滅菌儀器，還需人工對營養(yǎng)土進(jìn)行分裝、滅菌、晾曬，增加經(jīng)濟(jì)和人工成本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明克服了上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種玉米轉(zhuǎn)基因組培苗的移栽方法。采用該方法，玉 米組培苗的移栽成活率提高到97%以上，移栽后玉米植株生產(chǎn)旺盛，能夠正常的開花結(jié)實。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種玉米轉(zhuǎn)基因組培苗的移栽方法，其特征是，依次包括以下步驟:
[0006](I)將生長在1/2MS生根培養(yǎng)基中的玉米轉(zhuǎn)基因組培苗去掉培養(yǎng)瓶封口，在培養(yǎng)基上加2-3mm高度的無菌水，每天更換一次無菌水，培養(yǎng)室中煉苗1_2天；
[0007](2)用鑷子將組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，滅菌水洗凈培養(yǎng)基；然后將根及根莖連接處往上1-1.5cm的部位放入浸根液中浸50-80秒,吸水紙上晾干；所述浸根液具體為:每Ikg水加入4.5-5.5g甲基硫菌靈(有效成分含量為70%)和4.5-5.5g硫酸銅鈣(有效成分含量為 77%)；
[0008](3)將組培苗種植于營養(yǎng)土中(營養(yǎng)土需覆蓋過根莖連接處Icm);培養(yǎng)室內(nèi)的濕度為65-75%，光照強(qiáng)度為4500-5500LX，溫度為27_29°C ；
[0009]所述的營養(yǎng)土為:將腐殖質(zhì)土、草木灰、蛭石按1:1:1的質(zhì)量比混合均勻，按照每20升營養(yǎng)土 (非壓縮體積)添加甲基硫菌靈(有效成分含量為70%)和硫酸銅鈣(有效成分含量為77%)各I克的比例添加并混合均勻，加水至手捏成團(tuán)、松手即散，室溫覆蓋塑料薄膜靜置，第2天加入20g生物有機(jī)肥(加水溶解)，混合均勻，室溫覆蓋塑料薄膜靜置2-3天后裝入15cmX 15cm-20cmX20cm帶吸水孔的塑料營養(yǎng)缽中；所述生物有機(jī)肥的Ν+Ρ205+Κ20≥5%，有機(jī)質(zhì)≥ 45%，有益微生物≥ 10億/克；
[0010](4)移栽后的第5-7天和第10-12天，各噴霧I次0.03%的喹啉銅溶液，每次用量為100棵苗用8-12ml0.03%的喹啉酮溶液；
[0011](5)移栽7天之內(nèi)不澆水，防止污染及爛根，之后一周澆水一次；
[0012](6)移栽三周之后，待轉(zhuǎn)基因玉米苗芯葉長出、長勢良好，即可移至大田或植物生長室，此后同普通玉米管理方法一致。
[0013]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點和顯著的進(jìn)步:
[0014]1、利用本發(fā)明提供的玉米組培苗的移栽方法，玉米組培苗的移栽成活率提高到97%以上，移栽后玉米植株生產(chǎn)旺盛，能夠正常的開花結(jié)實，平均每株結(jié)實25-40粒。
[0015]2.改進(jìn)了營養(yǎng)土的配置和滅菌方法，節(jié)省經(jīng)濟(jì)及人工成本。
【具體實施方式】
[0016]實施例1玉米組培苗的移栽
[0017](1)配制營養(yǎng)土
[0018]在玉米組培苗移栽前，將腐殖質(zhì)土、草木灰、蛭石按1:1:1的質(zhì)量比混合均勻，按照每20升土 (非壓縮體積)添加70%甲基硫菌靈可濕性粉劑和77%硫酸銅鈣可濕性粉劑各I克的比例添加并混合均勻，加水至手捏成團(tuán)、松手即散，室溫覆蓋塑料薄膜靜置，第2天加入IOg生物有機(jī)肥(Ν+Ρ205+Κ20≥5%，有機(jī)質(zhì)≥45%，有益微生物≥10億/克，使用時加水溶解)，混合均勻，室溫覆蓋塑料薄膜靜置2-3天后裝入15cmX 15cm的帶吸水孔的塑料營養(yǎng)缽中。
[0019](2)煉苗
[0020]將生長在1/2MS生根培養(yǎng)基培養(yǎng)瓶中的玉米轉(zhuǎn)基因組培苗去掉培養(yǎng)瓶封口，在培養(yǎng)基上加2-3mm高度的無菌水,每天更換一次無菌水,煉苗2天；
[0021](3)取出組織苗
[0022]移栽時首先將組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，取時要用鑷子小心地操作，切勿把根系損壞，然后把根部粘附的瓊脂用無菌水全部漂洗掉，在浸根液中浸根及根莖連接處往上1-1.5cm的部位I分鐘，吸水紙上晾干；所述浸根液具體為:每Ikg水加入5g70%甲基硫菌靈可濕性粉劑和和5g77%硫酸銅鈣可濕性粉劑；
[0023](4)移栽
[0024]移栽時將營養(yǎng)土挖一個深10cm，寬IOcm的小孔，然后再將植株種植下去，讓根舒展開，并防止弄傷幼苗。輕輕覆蓋營養(yǎng)土，以覆蓋過根莖連接處Icm為宜，以防損傷試管苗的細(xì)弱根系和根毛。共移栽35株綜31玉米轉(zhuǎn)基因組培苗。在移栽苗周圍打圈輕澆少量水，保證室內(nèi)空前濕度保持在70%，培養(yǎng)室內(nèi)光照強(qiáng)度為5000Lx，溫度為28°C。
[0025](5)移栽后的第5天和第11天，噴霧I次0.03%的喹啉酮溶液，每次用量為每100棵苗IOml0.03%的喹啉酮溶液。移栽后一周內(nèi)不澆水，一周后每周澆一次水，水量以24小時內(nèi)底盤的水可被吸收為宜。移栽18天后移栽至日光大棚培養(yǎng)，34株轉(zhuǎn)基因苗在日光大棚生長正常，移栽成活率為97.1%。收獲后，平均每株結(jié)實25-30粒。[0026]實施例2玉米組培苗的移栽
[0027](I)配制營養(yǎng)土
[0028]在玉米組培苗移栽前，將腐殖質(zhì)土、草木灰、蛭石按1:1:1的質(zhì)量比混合均勻，按照每20升土 (非壓縮體積)添加70%甲基硫菌靈可濕性粉劑和77%硫酸銅鈣可濕性粉劑各I克的比例添加并混合均勻，加水至手捏成團(tuán)、松手即散，室溫覆蓋塑料薄膜靜置，第2天加入IOg生物有機(jī)肥(Ν+Ρ205+Κ20≥5%，有機(jī)質(zhì)≥45%，有益微生物≥10億/克，使用時加水溶解)，混合均勻，室溫覆蓋塑料薄膜靜置2-3天后裝入15cmX 20cm的帶吸水孔的塑料營養(yǎng)缽中。[0029](2)煉苗
[0030]將生長在1/2MS生根培養(yǎng)基培養(yǎng)瓶中的玉米轉(zhuǎn)基因組培苗去掉培養(yǎng)瓶封口，在培養(yǎng)基上加2-3mm高度的無菌水,每天更換一次無菌水,煉苗2天；
[0031](3)取出組織苗
[0032]移栽時首先將組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，取時要用鑷子小心地操作，切勿把根系損壞，然后把根部粘附的瓊脂用無菌水全部漂洗掉，在浸根液中浸根及根莖連接處往上1-1.5cm的部位I分鐘，吸水紙上晾干。所述浸根液具體為:每Ikg水加入5g70%甲基硫菌靈可濕性粉劑和5g77%硫酸銅鈣可濕性粉劑；
[0033](4)移栽
[0034]移栽時將營養(yǎng)土挖一個深12cm，寬IOcm的小孔，然后再將植株種植下去，讓根舒展開，并防止弄傷幼苗。輕輕覆蓋營養(yǎng)土，以覆蓋過根莖連接處Icm為宜，以防損傷試管苗的細(xì)弱根系和根毛。共移栽41株綜31轉(zhuǎn)基因玉米組培苗。在移栽苗周圍打圈輕澆少量水，保證室內(nèi)空間濕度保持在70%。光照強(qiáng)度為5000Lx，溫度為28°C。
[0035](5)移栽后的第5天和第10天，噴霧I次0.03%的喹啉酮溶液，每次用量為100棵苗IOml0.03%的喹啉酮溶液。移栽后一周內(nèi)不澆水，一周后每周澆一次水，水量以24小時內(nèi)底盤的水可被吸收為宜。移栽24天后移栽至大田培養(yǎng)，40株轉(zhuǎn)基因苗在大田生長正常，移栽成活率達(dá)到97.5%。秋天收獲后，平均每株結(jié)果30-40粒。
[0036]對比例:玉米組培苗的移栽(常規(guī)方法)
[0037](I)配制營養(yǎng)土
[0038]在玉米組培苗移栽前，將市售營養(yǎng)土、珍珠巖按2:1的質(zhì)量比混合均勻，高壓蒸汽滅菌，加水至手捏成團(tuán)、松手即散，裝入15cmX15cm的帶吸水孔的塑料營養(yǎng)缽中。
[0039](2)煉苗
[0040]將生長在1/2MS生根培養(yǎng)基培養(yǎng)瓶中的玉米轉(zhuǎn)基因組培苗去掉培養(yǎng)瓶封口，在培養(yǎng)基上加2-3mm高度的無菌水,每天更換一次無菌水,煉苗2天；
[0041](3)取出組織苗
[0042]移栽時首先將組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，取時要用鑷子小心地操作，切勿把根系損壞，然后把根部粘附的瓊脂用無菌水全部漂洗掉；
[0043](4)移栽
[0044]移栽時將營養(yǎng)土挖一個深12cm，寬IOcm的小孔，然后再將植株種植下去，讓根舒展開，并防止弄傷幼苗。輕輕覆蓋營養(yǎng)土，以防損傷試管苗的細(xì)弱根系和根毛。共移栽30株綜31轉(zhuǎn)基因玉米組培苗。輕澆透水，保證室內(nèi)空間濕度保持在70%。光照強(qiáng)度為5000Lx，溫度為28 °C。
[0045](5)移栽后一周內(nèi)不燒水,一周后每周燒一次水，水量以24小時內(nèi)底盤的水可被吸收為宜。移栽23天后 移栽至大田培養(yǎng)，22株轉(zhuǎn)基因苗在大田生長正常，移栽成活率達(dá)到73.3%。秋天收獲后，平均每株結(jié)果20粒左右。
【權(quán)利要求】
1.一種玉米轉(zhuǎn)基因組培苗的移栽方法，其特征是，依次包括以下步驟: (1)將生長在1/2MS生根培養(yǎng)基中的玉米轉(zhuǎn)基因組培苗去掉培養(yǎng)瓶封口，在培養(yǎng)基上加2-3mm高度的無菌水，每天更換一次無菌水，培養(yǎng)室中煉苗1_2天； (2)用鑷子將玉米轉(zhuǎn)基因組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，滅菌水洗凈培養(yǎng)基；然后將根及根莖連接處往上1-1.5cm的部位放入浸根液中浸50-80秒，吸水紙上晾干；所述浸根液具體為:每Ikg水加入4.5-5.5g有效成分含量為70%的甲基硫菌靈和4.5-5.5g有效成分含量為77%的硫酸銅鈣； (3)將組培苗種植于營養(yǎng)土中；所述的營養(yǎng)土為:將腐殖質(zhì)土、草木灰、蛭石按1:1:1的質(zhì)量比混合均勻，按照每20升營養(yǎng)土添加有效成分含量為70%的甲基硫菌靈和有效成分含量為77%的硫酸銅鈣各I克的比例添加并混合均勻，加水至手捏成團(tuán)、松手即散，室溫覆蓋塑料薄膜靜置；第2天按照每20升營養(yǎng)土加入20g加水溶解的生物有機(jī)肥的比例添加生物有機(jī)肥，混合均勻，室溫覆蓋塑料薄膜靜置2-3天后裝入帶吸水孔的塑料營養(yǎng)缽中； (4)移栽后的第5-7天和第10-12天，各噴霧I次0.03%的喹啉銅溶液，每次用量為每100棵苗使用8-12ml ； (5)移栽7天之內(nèi)不燒水,之后一周燒水一次； (6)移栽三周之后，待轉(zhuǎn)基因玉米苗芯葉長出、長勢良好，移至大田或植物生長室。
2.如權(quán)利要求1所述的一種玉米轉(zhuǎn)基因組培苗的移栽方法，其特征是，所述步驟(3)營養(yǎng)土覆蓋過根莖連接處1cm。
3.如權(quán)利要求1所述的一種玉米轉(zhuǎn)基因組培苗的移栽方法，其特征是，所述步驟(3)培養(yǎng)室內(nèi)的濕度為65-75%，光照強(qiáng)度為4500-5500LX，溫度為27_29°C。
4.如權(quán)利要求1所述的一種玉米轉(zhuǎn)基因組培苗的移栽方法，其特征是，所述步驟(3)的生物有機(jī)肥的Ν+Ρ205+Κ20≤5%，有機(jī)質(zhì)≤45%，有益微生物≤10億/克。
5.如權(quán)利要求1-4中任意一項所述的一種玉米轉(zhuǎn)基因組培苗的移栽方法，其特征是，所述步驟(3)塑料營養(yǎng)缽的規(guī)格為15cmX15cm-20cmX20cm。
【文檔編號】A01H4/00GK103858771SQ201410131337
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年4月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月2日
【發(fā)明者】宣寧, 姚方印, 畢玉平, 彭振英, 柳絮, 劉國霞, 邊斐, 陳高 申請人:山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究中心