【】本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖，特別涉及核黃素提升中國(guó)香港牡蠣人工育苗效率的方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

0、
背景技術(shù)：

1、中國(guó)香港牡蠣屬巨牡蠣屬(crassostrea)，殼色多呈青，主要棲息于中國(guó)南部和越南沿海海域，因其個(gè)大肉肥、生長(zhǎng)快速、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，而被商業(yè)化養(yǎng)殖。當(dāng)前，受氣候和環(huán)境變化影響，中國(guó)香港牡蠣天然苗產(chǎn)量不穩(wěn)定，數(shù)量和質(zhì)量無(wú)法滿足市場(chǎng)需求。在育苗過(guò)程中，季節(jié)和環(huán)境因子如溫度、鹽度和可利用的浮游植物等均影響中國(guó)香港牡蠣的生長(zhǎng)。牡蠣死亡也與溫度、應(yīng)激、性成熟、病原體和污染物等諸多因素有關(guān)。目前，中國(guó)香港牡蠣，主要表現(xiàn)為雌雄配子自然排放障礙、受精率低、孵化率低、畸形率高和孵化d型幼蟲數(shù)劇烈減少，進(jìn)而導(dǎo)致種質(zhì)資源的退化等問題。

2、在人工育苗生產(chǎn)實(shí)踐中，為了解決中國(guó)香港牡蠣雌雄配子自然排放障礙問題，通常是采用解剖采集精卵再進(jìn)行人工授精孵化的方法，該方法雖然解決了排放障礙問題，但是由于解剖所得的精卵，成熟度不一致，依然導(dǎo)致其受精率低、孵化率低、畸形率高以及孵化d型幼蟲數(shù)較少，孵化效率低下。

3、在現(xiàn)有技術(shù)中，我國(guó)北方主要通過(guò)升溫和營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化的方式，來(lái)促熟長(zhǎng)牡蠣性腺，并取得了較好的孵化效果。但是，生長(zhǎng)于兩廣的中國(guó)香港牡蠣本身就長(zhǎng)期生活于較高的水溫中，也就是生物學(xué)零度更高，升溫的幅度有限，升溫促熟效果較差。而營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化也需要在較低的水溫中才能起到更好的效果，在華南水溫較高的情況下并不適合，主要原因一是因?yàn)閮蓮V水溫高，中國(guó)香港牡蠣代謝快，不容易積累營(yíng)養(yǎng)并轉(zhuǎn)化為繁殖性能。二是在水溫高的情況下，如果投放一些如蛋黃、淀粉、酵母菌類、裂殖壺菌等高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)時(shí)，水質(zhì)會(huì)馬上腐敗變差，不但起不到營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化的效果，反而會(huì)造成大量死亡。

4、核黃素(vb2)是一種水溶性b族維生素，是許多以黃素單核苷酸(fmn)和黃素腺嘌呤二核苷酸(fad)為輔酶的黃素蛋白的前體物質(zhì)，這些黃素蛋白、fmn和fad廣泛參與到糖代謝、脂肪酸β氧化、蛋白質(zhì)代謝、呼吸鏈電子傳遞和氧化還原反應(yīng)體系等多個(gè)代謝過(guò)程。現(xiàn)有技術(shù)中報(bào)道核黃素飼喂雞鴨等卵生動(dòng)物后能使母禽將體內(nèi)的核黃素轉(zhuǎn)移到種蛋內(nèi)，降低胚的死亡率，但是，牡蠣做為一種軟體動(dòng)物其生殖過(guò)程與卵生動(dòng)物存在很大區(qū)別，能否將核黃素用于改良牡蠣的人工育苗效率是目前的研究領(lǐng)域中并未研究的問題，因此在牡蠣的生殖過(guò)程中，如何針對(duì)南方水域特點(diǎn)，找到適合中國(guó)香港牡蠣生殖細(xì)胞繁殖的促進(jìn)劑，結(jié)合水域特點(diǎn)提升牡蠣繁殖性能是提高牡蠣苗質(zhì)量的有效解決手段。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

0、
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

1、鑒于上述內(nèi)容，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種使用核黃素短期內(nèi)提升中國(guó)香港牡蠣人工育苗效率的全新方法，該方法針對(duì)南方水域特點(diǎn)，找到了適合中國(guó)香港牡蠣生殖細(xì)胞繁殖的促進(jìn)劑，并結(jié)合水域特點(diǎn)有效提升了牡蠣人工育苗效率，極大提升了孵化效率。

2、為達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

3、核黃素在提升中國(guó)香港牡蠣人工育苗效率的應(yīng)用，所述核黃素濃度為1mg/l-3mg/l。

4、本發(fā)明還包括應(yīng)用所述核黃素提升中國(guó)香港牡蠣人工育苗效率的方法，所述核黃素提升中國(guó)香港牡蠣人工育苗效率的方法，其特征在于，所述方法包括利用核黃素對(duì)中國(guó)香港牡蠣親貝進(jìn)行處理或利用核黃素對(duì)中國(guó)香港牡蠣配子進(jìn)行處理；所述核黃素的濃度為1mg/l-3mg/l；所述中國(guó)香港牡蠣親貝處理時(shí)的海水鹽度為12‰；所述中國(guó)香港牡蠣配子進(jìn)行處理時(shí)采用精子和卵子混合后到1mg/l核黃素海水溶液中。

5、進(jìn)一步的，所述對(duì)中國(guó)香港牡蠣親貝進(jìn)行處理的方法包括如下具體步驟：

6、s1、親貝暫養(yǎng)：將處于繁殖期的中國(guó)香港牡蠣親貝暫養(yǎng)于養(yǎng)殖池內(nèi)；

7、s2、處理前準(zhǔn)備：準(zhǔn)備3個(gè)水泥池，池內(nèi)海水鹽度調(diào)至12‰，提前在第1個(gè)水泥池中加入核黃素，并濃度調(diào)至3mg/l；

8、s3、核黃素處理：將步驟s1的中國(guó)香港牡蠣親貝放入步驟s2的第1個(gè)水泥池中進(jìn)行處理24h；24h后轉(zhuǎn)移至第2個(gè)水泥池中，池內(nèi)核黃素濃度為3mg/l，繼續(xù)處理24h；24h后轉(zhuǎn)移至第3個(gè)水泥池中，池內(nèi)核黃素濃度為3mg/l，繼續(xù)處理24h；總處理時(shí)間為72h；處理時(shí)中國(guó)香港牡蠣親貝投放密度為100-150kg/m3，

9、s4、人工繁育：將處理后的中國(guó)香港牡蠣親貝全部解剖并辨別雌雄后，采取傳統(tǒng)方法進(jìn)行人工授精孵化，孵化時(shí)的海水鹽度為12‰。

10、進(jìn)一步的，所述s2步驟的海水溫度為25℃-28℃。

11、進(jìn)一步的，所述中國(guó)香港牡蠣配子進(jìn)行處理的方法包括如下具體步驟：

12、①獲得中國(guó)香港牡蠣的精子和卵子：經(jīng)過(guò)室內(nèi)暫養(yǎng)3-15天的并處于繁殖期的中國(guó)香港牡蠣親貝，在辨別雌雄后，分別解剖獲得精子和卵子；

13、②核黃素處理：將精卵進(jìn)行分別定量后混合并靜置10分鐘，然后將精卵混合液轉(zhuǎn)移至盛有鹽度為12‰的核黃素處理液的容器中，容器中核黃素終濃度為1mg/l，處理時(shí)間為15分鐘；

14、③洗脫：步驟②處理15分鐘后，迅速用400目篩絹對(duì)步驟②的精卵混合物進(jìn)行洗脫，洗去處理液；

15、④孵化：對(duì)步驟③洗脫后的精卵混合物放入鹽度為12‰的海水中進(jìn)行孵化。

16、進(jìn)一步的，所述步驟②精卵定量的方法為用鹽度為12‰，水溫為28℃的海水分別對(duì)精子和卵進(jìn)行稀釋，最終得到精子母液和卵母液，其中，卵母液的密度為50個(gè)/ml、總體積為10l；精子母液的密度為102-103個(gè)/微升、總體積為10l。

17、進(jìn)一步的，所述步驟②精和卵混合時(shí)的混合比例是精與卵的數(shù)量比例為5-10:1。

18、進(jìn)一步的，所述步驟④的孵化溫度為27℃-30℃。

19、本發(fā)明具有如下有益效果：

20、1、本發(fā)明通過(guò)使用適宜濃度的核黃素，在適宜的海水鹽度下，短期處理中國(guó)香港牡蠣的親貝，以及在適宜的方法下，處理中國(guó)香港牡蠣的配子，兩種方式分別顯著提升了中國(guó)香港牡蠣人工育苗效率，在中國(guó)香港牡蠣人工育苗生產(chǎn)中極大的提高了孵化效率。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，濃度為3mg/l的核黃素，在12‰海水鹽度下，處理中國(guó)香港牡蠣親貝，再進(jìn)行解剖人工授精孵化后，其人工育苗效率達(dá)到最優(yōu)，其中受精率達(dá)到89.18％，比對(duì)照組提升了91.13％，孵化率達(dá)到82.99％，比對(duì)照組提升了4.11倍，且孵化出來(lái)的d型幼蟲畸形率為3.26％，比對(duì)照組降低了93.48％；而在處理中國(guó)香港牡蠣配子的方法中，在精卵混合后再用1mg/l濃度的核黃素處理的處理15分鐘的方法下，中國(guó)香港牡蠣胚胎的受精率為82.04％，比對(duì)照組提升了81.06％，孵化率為76.48％，比對(duì)照組提升了53.64％，且孵化出來(lái)的d型幼蟲畸形率為28.93％，比對(duì)照組降低了48.83％。

技術(shù)特征：

1.核黃素在提升中國(guó)香港牡蠣人工育苗效率的應(yīng)用，其特征在于，所述核黃素濃度為1mg/l-3mg/l。

2.應(yīng)用如權(quán)利要求1所述核黃素提升中國(guó)香港牡蠣人工育苗效率的方法，其特征在于，所述方法包括利用核黃素對(duì)中國(guó)香港牡蠣親貝進(jìn)行處理或配子進(jìn)行處理；所述中國(guó)香港牡蠣親貝處理時(shí)，核黃素的濃度為1mg/l-3mg/l；海水鹽度為12‰；所述配子處理時(shí)，采用精子卵子混合后浸泡在核黃素中。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述對(duì)中國(guó)香港牡蠣親貝進(jìn)行處理的方法包括如下具體步驟：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述s2步驟的海水溫度為25℃-28℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述中國(guó)香港牡蠣配子進(jìn)行處理的方法包括如下具體步驟：

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟②精卵定量的方法為用鹽度為12‰，水溫為28℃的海水分別對(duì)精子和卵進(jìn)行稀釋，最終得到精子母液和卵母液，其中，卵母液的密度為50個(gè)/ml、總體積為10l；精子母液的密度為102-103個(gè)/微升、總體積為10l。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟②精和卵混合時(shí)的混合比例是精與卵的數(shù)量比例為5-10:1。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟④的孵化溫度為27℃-30℃。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及核黃素提升中國(guó)香港牡蠣人工育苗效率的方法和應(yīng)用，本發(fā)明采用核黃素處理中國(guó)香港牡蠣配子或親貝兩種方式，均顯著提升了中國(guó)香港牡蠣人工育苗效率，使得中國(guó)香港牡蠣人工胚胎的孵化效率得到顯著提高；經(jīng)實(shí)驗(yàn)，采用核黃素處理中國(guó)香港牡蠣親貝時(shí)，核黃素的終濃度為3mg/L，海水鹽度為12‰時(shí)，牡蠣的孵化率從對(duì)照組16.25％提升到82.99％，提升了4.11倍；采用核黃素處理中國(guó)香港牡蠣配子時(shí)，處理時(shí)需要將中國(guó)香港牡蠣的精子和卵子混合后浸泡到1mg/L核黃素海水溶液中，海水的鹽度為為12‰時(shí)，牡蠣的孵化率從對(duì)照組的49.78％提升到76.48％，提高了53.64％。

技術(shù)研發(fā)人員：朱鵬,賈真,楊詩(shī)靜,佘智彩,許尤厚,王鵬良,嚴(yán)雪瑜,包磊,于聰彥,邢佳敏,武曉柯
受保護(hù)的技術(shù)使用者：北部灣大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/14