一種犬的細(xì)管冷凍精液制作方法及應(yīng)用
【專利說明】
[0001]技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及犬的細(xì)管冷凍精液制作方法。
[0002]【背景技術(shù)】:
犬人工授精，技術(shù)是一種代替犬自然交配的繁殖技術(shù)，是在人工輔助下，采集種犬精液、經(jīng)過品質(zhì)檢測(cè)和稀釋保存等處理，再將精液輸送到母犬生殖道內(nèi)，使母犬受孕的配種技術(shù)。精液冷凍，技術(shù)是指將采集到的新鮮精液，經(jīng)過特殊處理后，利用液氮(一 196°C)、干冰(一79°C)或其他冷源，以凍結(jié)形式長(zhǎng)期保存精液的技術(shù)。目前在世界許多發(fā)達(dá)國(guó)家，犬的Al與精液冷凍研究已經(jīng)得到廣泛開展，并運(yùn)用于實(shí)際生產(chǎn)中，而在國(guó)內(nèi)也有人進(jìn)行過研究；影響犬凍精人工授精成敗的因素眾多，本文主要從精液采集、評(píng)估、稀釋、保存(包括冷藏保存、冷凍保存，以及解凍)和輸精等方面對(duì)國(guó)內(nèi)外犬的Al與精液冷凍研究進(jìn)行綜述。
[0003]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
犬是人類最早馴養(yǎng)的動(dòng)物之一，與人類生活密切相關(guān)，很早就被作為人類的寵物飼養(yǎng)，通過良好的訓(xùn)練，能為人類提供良好的服務(wù)，替人類完成無法完成的任務(wù)或輔助人類更好地完成工作任務(wù)，尤其在軍警、導(dǎo)盲、生命探測(cè)、輔助邊防檢查和搜救等特殊需要的領(lǐng)域中，其應(yīng)用價(jià)值巨大。犬細(xì)管冷凍精液(以下簡(jiǎn)稱凍精)是指將采集到的犬的新鮮精液，經(jīng)過質(zhì)量檢驗(yàn)，稀釋等處理后，把精液封裝在微型(0.25ml)塑料細(xì)管內(nèi)，利用液氮為冷源，按特定的程序和冷凍速度進(jìn)行冷凍，使精液以凍結(jié)的形式保存于超低溫環(huán)境下，達(dá)到長(zhǎng)期保存犬精液的目的。犬細(xì)管凍精的制作和使用，有利于提高優(yōu)秀種公犬的利用率和異地基因交流，降低運(yùn)輸成本和防止疾病的傳播以及種犬遺傳物質(zhì)的保存。
[0004]【具體實(shí)施方式】:
1.犬細(xì)管凍精制作設(shè)備:相差顯微鏡，分光光度計(jì)，普通離心機(jī)，MRS-3自動(dòng)分裝機(jī)，廣口液氮生物容器，液氮，微型塑料細(xì)管，拇指管，電冰箱，低溫操作柜，細(xì)管冷凍架，玻片，量筒，量杯，刻度集精試管，恒溫水浴鍋，移液器和稀釋液等。
[0005]2.種公犬的選擇和采精，用于制作細(xì)管凍精的公犬必須譜系清楚，血統(tǒng)純正，品種特征明顯，工作表現(xiàn)突出，易于訓(xùn)練、馴服，服從口令，忠于訓(xùn)導(dǎo)者。符合采精要求的公犬用手淫法采精，采精時(shí)一人保定好公犬，防止攻擊采精員，采精員用廣3%。的高錳酸鉀溶液清洗消毒公犬外陰后，一手握住公犬陰莖根部并反復(fù)按摩球狀膨大部，一手持集精試管，待公犬陰莖勃起開始排除第一部分精液時(shí)，準(zhǔn)備及時(shí)用集精試管收集第二部分富含精子的精液，第三部分精液隨后排出，該部分精液和第一部分精液均不收集(含精子數(shù)量極少)，只收即第二部分精液用于制作細(xì)管凍精。
[0006]3.稀釋液的配制:準(zhǔn)確稱取所需試劑后混合、溶解、過濾和消毒待用。
[0007]4.犬精液的處理:對(duì)所采集的精液記錄犬號(hào)或名字，用離心試管測(cè)量采精量，用血球計(jì)數(shù)板或分光光度計(jì)測(cè)定精子密度，用相差顯微鏡測(cè)定原精活力。
[0008]5.犬精液的稀釋和分裝:精子密度2億/ml以上，原精活力60%以上的犬精液用預(yù)先配制的冷凍稀釋液稀釋，使每劑量有效精子數(shù)達(dá)到1200?1500萬個(gè)即可；稀釋后的犬精液用MRS-3自動(dòng)分裝機(jī)在實(shí)驗(yàn)室室溫下分裝在微型塑料細(xì)管內(nèi)，封口和印字。
[0009]6.犬精液的平衡:分裝、封口和印字的犬細(xì)管精液放置于+4°C的溫度下平衡4小時(shí)。
[0010]7.犬精液的冷凍和解凍:平衡后的犬細(xì)管精液在+4°C左右溫度下整齊放在細(xì)管冷凍架上，然后把細(xì)管冷凍架和精液放入-110?-130的液氮蒸汽中冷凍10?15分鐘，冷凍后的犬細(xì)管凍精浸入液氮保存；隨機(jī)抽取I?2支犬細(xì)管凍精立即放入40±2°C的水浴中解凍10秒左右，檢查解凍活力，解凍活力可達(dá)35%以上，頂體完整率40%左右，解凍活力35%以上的犬細(xì)管凍精包裝于液氮中長(zhǎng)期保存。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.犬細(xì)管凍精制作設(shè)備，其特征是相差顯微鏡，分光光度計(jì)，普通離心機(jī)，MRS-3自動(dòng)分裝機(jī)，廣口液氮生物容器，液氮，微型塑料細(xì)管，拇指管，電冰箱，低溫操作柜，細(xì)管冷凍架，玻片，量筒，量杯，刻度集精試管，恒溫水浴鍋，移液器和稀釋液等。
2.種公犬的選擇和采精，其特征是用于制作細(xì)管凍精的公犬必須譜系清楚，血統(tǒng)純正，品種特征明顯，工作表現(xiàn)突出，易于訓(xùn)練、馴服，服從口令，忠于訓(xùn)導(dǎo)者，符合采精要求的公犬用手淫法采精，采精時(shí)一人保定好公犬，防止攻擊采精員，采精員用f 3%。的高錳酸鉀溶液清洗消毒公犬外陰后，一手握住公犬陰莖根部并反復(fù)按摩球狀膨大部，一手持集精試管，待公犬陰莖勃起開始排除第一部分精液時(shí)，準(zhǔn)備及時(shí)用集精試管收集第二部分富含精子的精液，第三部分精液隨后排出，該部分精液和第一部分精液均不收集(含精子數(shù)量極少)，只收即第二部分精液用于制作細(xì)管凍精。
3.稀釋液的配制，其特征是準(zhǔn)確稱取所需試劑后混合、溶解、過濾和消毒待用。
4.犬精液的處理，其特征是對(duì)所采集的精液記錄犬號(hào)或名字，用離心試管測(cè)量采精量，用血球計(jì)數(shù)板或分光光度計(jì)測(cè)定精子密度，用相差顯微鏡測(cè)定原精活力。
5.犬精液的稀釋和分裝，其特征是精子密度2億/ml以上，原精活力60%以上的犬精液用預(yù)先配制的冷凍稀釋液稀釋，使每劑量有效精子數(shù)達(dá)到1200?1500萬個(gè)即可，稀釋后的犬精液用MRS-3自動(dòng)分裝機(jī)在實(shí)驗(yàn)室室溫下分裝在微型塑料細(xì)管內(nèi)，封口和印字。
6.犬精液的平衡，其特征是分裝、封口和印字的犬細(xì)管精液放置于+4°C的溫度下平衡4小時(shí)。
7.犬精液的冷凍和解凍，其特征是平衡后的犬細(xì)管精液在+4°C左右溫度下整齊放在細(xì)管冷凍架上，然后把細(xì)管冷凍架和精液放入-110?-130的液氮蒸汽中冷凍10?15分鐘，冷凍后的犬細(xì)管凍精浸入液氮保存，隨機(jī)抽取I?2支犬細(xì)管凍精立即放入40±2°C的水浴中解凍10秒左右，檢查解凍活力，解凍活力可達(dá)35%以上，頂體完整率40%左右，解凍活力35%以上的犬細(xì)管凍精包裝于液氮中長(zhǎng)期保存。
【專利摘要】犬細(xì)管冷凍精液（以下簡(jiǎn)稱凍精）是指將采集到的犬的新鮮精液，經(jīng)過質(zhì)量檢驗(yàn)，稀釋等處理后，把精液封裝在微型（0.25ml)塑料細(xì)管內(nèi)，利用液氮為冷源，按特定的程序和冷凍速度進(jìn)行冷凍，使精液以凍結(jié)的形式保存于超低溫環(huán)境下，達(dá)到長(zhǎng)期保存犬精液的目的。犬細(xì)管凍精的制作和使用，有利于提高優(yōu)秀種公犬的利用率和異地基因交流，降低運(yùn)輸成本和防止疾病的傳播以及種犬遺傳物質(zhì)的保存。
【IPC分類】A01N1-02
【公開號(hào)】CN104542574
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201310497857
【發(fā)明人】趙家才, 毛翔光, 李雯, 杜曉鵬, 曹景峰, 劉紹貴, 雷衡, 李春平
【申請(qǐng)人】云南省種畜繁育推廣中心, 云南恒翔家畜良種科技有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2013年10月22日