專利名稱：：第22顆返回式衛(wèi)星的太空高效微生物菌種及制備與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及空間誘變優(yōu)良微生物菌種，具體說(shuō)是一種空間誘變優(yōu)良微生物菌種及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：微生物是與人類關(guān)系密切的一類微小生物體，具有種類的多樣性和功能的復(fù)雜性.在藥物的研發(fā)中某些微生物發(fā)揮了十分重要的作用，微生物藥物的研發(fā)主要環(huán)節(jié)包括菌種的選育，發(fā)酵工藝優(yōu)化，提取與精制工藝的研咒等o早在十九世紀(jì)人們就發(fā)現(xiàn)被溶血性鏈球菌感染的癌癥患者腫塊自然消退的現(xiàn)象，人們先后發(fā)現(xiàn)溶血性鏈球菌及其制劑有一定的藥理活性。浩瀚的太空疆域無(wú)垠，有著地面上難以想像的環(huán)境條件，在太空環(huán)境里，生物的變異與進(jìn)化要比地面快成千上萬(wàn)倍。因此，太空為發(fā)展新物種、新醫(yī)藥等提供了理想的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所和生產(chǎn)基地。微生物空間誘變育種是制藥工業(yè)培育新菌種的一種有效方法。一個(gè)優(yōu)良的菌種可以在不增加或很少增加成本情況下大幅度提高產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量。長(zhǎng)期以來(lái)，我國(guó)采取自然選擇和理化因素進(jìn)行微生物育種，得到的育種方法遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足制藥工業(yè)生產(chǎn)的需要，目前與國(guó)際上同類高產(chǎn)菌種相比，其生產(chǎn)效價(jià)有很大的差距。該菌種生產(chǎn)周期及發(fā)酵周期長(zhǎng)，用于工業(yè)化生產(chǎn)的產(chǎn)量低，價(jià)格昂貴，使用范圍小，有效成份含量低。運(yùn)用空間技術(shù)進(jìn)行微生物誘變育種是培育新生物菌種的一種有效方法，其原理是通過(guò)外層空間特殊的物理化學(xué)環(huán)境，即微重力、強(qiáng)輻射、高能粒子、交變磁場(chǎng)及高真空的環(huán)境中，引起菌種DNA分子的變異和重組，菌種遺傳性狀發(fā)生改變，從而獲得生命力旺盛、生長(zhǎng)速度快、代謝產(chǎn)物得率高、品質(zhì)優(yōu)良并可穩(wěn)定遺傳的高產(chǎn)高效菌種。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種空間誘變優(yōu)良微生物菌種及其制備方法與應(yīng)用，它利用太空特殊環(huán)境，通過(guò)搭載第22顆返回式科學(xué)與技術(shù)試驗(yàn)衛(wèi)星，將菌抹送入太空，遨游一定時(shí)間后安全返回，淘汰負(fù)向變異菌抹，選出性質(zhì)優(yōu)良的正向變異菌抹進(jìn)行復(fù)篩，最終得到生命力旺盛、生長(zhǎng)速度快、發(fā)酵單位高、發(fā)酵周期短、多肽含量高、遺傳性質(zhì)穩(wěn)定、生產(chǎn)適應(yīng)性強(qiáng)、具有空間累加效應(yīng)的優(yōu)良微生物菌種。應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)的生產(chǎn)菌種，具有產(chǎn)量高、用途廣、成本低、有效成份含量高等特點(diǎn)。本發(fā)明的技術(shù)方案是設(shè)計(jì)一種空間搭載用于工業(yè)生產(chǎn)的優(yōu)良菌種，其特征是它將cc-溶血鏈球菌菌種搭載第22顆返回式科學(xué)與技術(shù)試驗(yàn)衛(wèi)星，運(yùn)用空間技術(shù)進(jìn)行微生物誘變育種方法，通過(guò)外層空間特殊的物理化學(xué)環(huán)境，即微重力、強(qiáng)輻射、高能粒子、交變磁場(chǎng)及高真空的環(huán)境中，導(dǎo)致oc-溶血鏈球菌菌種遺傳性質(zhì)發(fā)生變異，引起菌種DNA分子的變異和重組，從而獲得生命力旺盛、生長(zhǎng)速度快、品質(zhì)優(yōu)良的菌種，優(yōu)選出其中的正變異、遺傳性質(zhì)穩(wěn)定的菌種作為生產(chǎn)菌種，該菌種已于2006年1月18日由中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，編號(hào)為CGMCCNo.1590。一、ST-22號(hào)菌種的篩選在太空育種中心對(duì)搭載菌種進(jìn)行了反復(fù)的培養(yǎng)和篩選，優(yōu)選出極少量遺傳穩(wěn)定的正變異菌抹，進(jìn)行地面研究1.返地后對(duì)菌抹進(jìn)行培養(yǎng)和篩選菌抹經(jīng)過(guò)分離培養(yǎng)長(zhǎng)出單菌落后逸行存活率的計(jì)算，有目的地將其編號(hào)保存，按照革蘭氏染色、菌落形態(tài)、色素、菌膜及光澤度等進(jìn)行形態(tài)特征上的對(duì)比分析，進(jìn)一步通過(guò)試驗(yàn)，優(yōu)選出發(fā)酵周期縮短24小時(shí)的正向突變高產(chǎn)菌抹。2.培養(yǎng)特征的研究通過(guò)培養(yǎng)，研究了太空菌抹ST-22號(hào)培養(yǎng)基在碳氮比、營(yíng)養(yǎng)成分、pH、溫度、氧需求、發(fā)酵周期等方面的適應(yīng)情況變化，并根據(jù)變化及時(shí)進(jìn)行相關(guān)生長(zhǎng)參數(shù)的調(diào)整。確定太空菌抹培養(yǎng)基成分、運(yùn)行參數(shù)、pH、發(fā)酵周期等。3.生理生化反應(yīng)對(duì)經(jīng)航天搭載、太空誘變、地面篩選出的菌抹進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)特征觀察及其與地面對(duì)照菌抹相關(guān)生理生化指標(biāo)的對(duì)比觀察。生產(chǎn)菌林通過(guò)太空搭載，細(xì)胞的活性物質(zhì)增加，細(xì)胞生長(zhǎng)豐茂飽滿，利用糖產(chǎn)酸現(xiàn)象比地面對(duì)照菌抹有所改變，而地面對(duì)照菌抹在某些糖的發(fā)酵中已失去產(chǎn)酸的能力。4.代謝產(chǎn)物的測(cè)定用化學(xué)法和儀器測(cè)試它的主要化學(xué)組分及結(jié)構(gòu)有無(wú)變化。通過(guò)實(shí)驗(yàn)枱r測(cè)發(fā)現(xiàn)太空菌抹ST-22號(hào)僅發(fā)酵周期大大縮短，而且其發(fā)酵產(chǎn)物比對(duì)照組產(chǎn)物含量平均高出三倍以上。5.遺傳性狀及蛋白表達(dá)的研究DNA是決定遺傳的主要物質(zhì)，基因是遺傳的基本單位。由于基因突變會(huì)致使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)改變，最后導(dǎo)致個(gè)體性狀的差異。因此，我們進(jìn)行了①cx-溶血鏈球菌(地面林標(biāo)號(hào)為D33號(hào)菌抹)和太空搭載后篩選菌抹(ST22菌林)16S-23SrDNA間區(qū)對(duì)比檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)D33和ST22菌株有如下基因位點(diǎn)的差異.<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>②oc-溶血鏈球菌(地面株標(biāo)號(hào)為D33號(hào)菌株)和太空搭載后篩選菌抹(ST22菌林)基因組限制性內(nèi)切酶酶切差異對(duì)比檢測(cè)，結(jié)果通過(guò)上述DNA酶切多態(tài)性分析，各樣品全基因組單酶切差異較大，說(shuō)明各樣品間基因組有多個(gè)位點(diǎn)發(fā)生基因突變。③ct-溶血鏈球菌(地面抹標(biāo)號(hào)為D33號(hào)菌抹)和太空搭載后篩選菌抹(ST22菌抹)全細(xì)胞蛋白SDS-PAGE電泳差異對(duì)比檢測(cè)[其中Linel:D33(24h);Line5:ST22(24h);Line6:D33(48h);LinelO:ST22(48h);Linell:D33(72h);Linel5:ST22(72h)]，結(jié)果存在明顯差異與同時(shí)間D33菌種全細(xì)胞電泳比較，ST-22菌4朱的Line5和LinelO在28KD左右有一條明顯的條帶；而在22KD左右條帶缺失。表明經(jīng)過(guò)太空搭載后ST22號(hào)菌林與地面抹D33號(hào)相比，在蛋白表達(dá)水平存在較大差異。6.對(duì)選出的高產(chǎn)高效突變菌抹ST-22號(hào)進(jìn)行穩(wěn)定性分析連續(xù)傳代試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該菌抹發(fā)酵周期縮短及發(fā)酵產(chǎn)物含量提高兩項(xiàng)指標(biāo)穩(wěn)定，是可穩(wěn)定遺傳的變異。7.在培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行小試和中試在統(tǒng)計(jì)的十批實(shí)驗(yàn)測(cè)定中，實(shí)驗(yàn)組ST-22號(hào)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期大都提前至24小時(shí)左右，而對(duì)照菌的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期則仍在48小時(shí)左右。發(fā)酵產(chǎn)物含量比對(duì)照組高出3-5倍(表l)。表lST-22號(hào)菌抹發(fā)酵周期及糖肽肽含量情況<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>篩選出的太空菌ST-22號(hào)與地面菌的對(duì)比特征是:(一)形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、生理生化特征的對(duì)比(l)形態(tài)特征差異ST-22菌株細(xì)胞呈圓球形或卵圓形，細(xì)胞大小為0.7-2.Opm。在液體培養(yǎng)基中以成對(duì)或鏈狀出現(xiàn)，無(wú)鞭毛，不生芽孢，無(wú)莢膜。細(xì)胞壁清晰，易著色，細(xì)胞生長(zhǎng)飽滿豐茂，細(xì)胞質(zhì)充足飽滿。D33菌抹細(xì)胞呈球形或卵圓形，細(xì)胞大小為0.6-0.7nmxl.6-1.8拜,細(xì)胞生長(zhǎng)中度，有的細(xì)胞不太飽滿。(2)培養(yǎng)特征的差異ST-22菌林在血平板或有機(jī)物平板上生長(zhǎng)飽滿豐茂，菌落圓形，較大，有明顯突起，表面光滑，杏仁黃色，有光澤,略有粘性,半透明。菌膜生長(zhǎng)有厚度,無(wú)色素產(chǎn)生。D33菌抹在血平板或有機(jī)物平板上菌落圓形，呈現(xiàn)小顆粒狀，有突起，光澤略暗，有粘性，半透明，生長(zhǎng)中度，菌膜較薄，乳脂色，無(wú)色素產(chǎn)生。(3)生理生化特征差異(差異較大)菌株ITS長(zhǎng)度(bp)相異位點(diǎn)520D33553GST22553A阿拉伯糖+-核糖+-菊糖pH7.5pH6.7結(jié)果表明通過(guò)返回式科學(xué)與技術(shù)試驗(yàn)衛(wèi)星搭載的菌株ST-22號(hào)與地面對(duì)照菌林的形態(tài)特征、生理生化特征等均有明顯差異。搭載的菌抹細(xì)胞的活力增強(qiáng)，細(xì)胞的活性物質(zhì)提高，細(xì)胞生長(zhǎng)豐茂飽滿，生理生化特征的活性比地面對(duì)照菌敏感。利用糖，醇產(chǎn)酸現(xiàn)象比地面對(duì)照菌豐富。(二)進(jìn)行①oc-溶血鏈球菌(地面抹標(biāo)號(hào)為D33號(hào)菌抹)和太空搭栽后篩選菌抹(ST22菌林)16S-23SrDNA間區(qū)對(duì)比檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)D33和ST22菌抹有如下基因位點(diǎn)的差異(Doc-溶血鏈球菌(地面抹標(biāo)號(hào)為D33號(hào)菌株)和太空搭載后篩選菌抹(ST22菌抹)基因組限制性內(nèi)切酶酶切差異對(duì)比檢測(cè)，結(jié)果通過(guò)上述DNA酶切多態(tài)性分析，各樣品全基因組單酶切差異較大，說(shuō)明各樣品間基因組有多個(gè)位點(diǎn)發(fā)生基因突變。③cc-溶血鏈球菌(地面抹標(biāo)號(hào)為D33號(hào)菌抹)和太空搭載后篩選菌抹(ST22菌抹)全細(xì)胞蛋白SDS-PAGE電泳差異對(duì)比檢測(cè)[其中Linel:D33(24h);Line5:ST22(24h);Line6:D33(48h);LinelO:ST22(48h);Linell:D33(72h);Linel5:ST22(72h)],結(jié)果存在明顯差異與同時(shí)間D33菌種全細(xì)胞電泳比較，ST-22菌抹的Line5和LinelO在28KD左右有一條明顯的條帶；而在22KD左右條帶缺失。表明經(jīng)過(guò)太空l(shuí)醇糖糖糖糖糖2露李子二萄朝甘果鼠棉密葡利搭載后ST22號(hào)菌抹與地面抹D33號(hào)相比，在蛋白表達(dá)水平存在較大差異。結(jié)果表明空間誘變及地面篩選出的ST-22號(hào)菌抹其基因有變異。普通a-溶血鏈球菌菌抹經(jīng)太空搭載誘變，地面上的篩選、分離和純化后，選育出發(fā)酵單位更高、產(chǎn)量更高的高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)菌抹ST-22號(hào)。該突變菌抹在遺傳上穩(wěn)定，有較強(qiáng)的生產(chǎn)適應(yīng)性，發(fā)酵含量比對(duì)照組產(chǎn)物含量平均高出三倍以上。二、ST-22號(hào)菌抹的發(fā)酵制備工藝(一)發(fā)酵過(guò)程所述發(fā)酵過(guò)程的發(fā)酵培養(yǎng)基是牛肉膏0.2-0.8%，酵母膏0.2-0.8%，蛋白胨0.3-0.8%，葡萄糖0.1-0.9%，氯化鈉0.2-0.6%;經(jīng)滅菌溫度105-125°C,時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.13Mpa滅菌后備用。1.一級(jí)發(fā)酵罐將優(yōu)良的搖瓶菌種在無(wú)菌條件下按1-10%接種量接入滅菌后的一級(jí)發(fā)酵罐。罐壓不超過(guò)O.02Mpa，通氣量以能翻動(dòng)培養(yǎng)液為宜，連續(xù)充分?jǐn)嚢?，?5-40。C恒溫培養(yǎng)10-50小時(shí)；2.二級(jí)發(fā)酵罐將一級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下按2-20%接種量接入滅菌后的二級(jí)發(fā)酵罐，罐壓不超過(guò)O.02Mpa，通氣量以能翻動(dòng)培養(yǎng)液為宜，連續(xù)充分?jǐn)嚢?；?5-35。C恒溫培養(yǎng)50-100小時(shí)。滅活采用加溫使發(fā)酵液溫度達(dá)到70-120。C,保溫20-60分鐘，冷卻靜置后放罐。(二)提純過(guò)程1.發(fā)酵液濃縮將發(fā)酵后的發(fā)酵液用濃縮器進(jìn)行濃縮，使?jié)饪s液體積與發(fā)酵液體積比控制在1:15-25，控制pH7.0-7.4制成發(fā)酵濃縮液。2.濃縮液的精制提純濃縮液按珍珠巖1-2.0%及活性炭2-4.0%加入進(jìn)行精制提純，攪拌IO-20分鐘，過(guò)濾后再抽濾提純，制成發(fā)酵精制液。3.濃縮液加入80-99%乙醇，體積量比控制在1:1.5-1:5.5或酌情而定。充分?jǐn)嚢桁o置后，離心去除上清液，沉淀用蒸餾水溶解,調(diào)pH5.0,得到溶解液并將溶解液靜置。再將溶解液離心去除雜質(zhì)得到上清液，準(zhǔn)確量取清液體積，按上清液體積計(jì)算出所需乙醇量，調(diào)pH值，將乙醇緩慢加入到上清液中，并充分?jǐn)嚢?，靜置后離心去除上清液得到沉淀物。沉淀物再用蒸餾水溶解，調(diào)pH，離心，上清液再加乙醇沉淀。這樣的工藝反復(fù)操作至中間檢測(cè)合格為止，得到的沉淀物真空干燥3-8小時(shí)，即得到太空菌ST-22號(hào)生產(chǎn)的發(fā)酵物。所述的經(jīng)太空誘變cc-溶血鏈球菌菌種是cc-溶血鏈球菌3(1-22號(hào)菌抹。所述的發(fā)酵液的制備方法是優(yōu)選普通oc-溶血鏈球菌進(jìn)行太空搭載，經(jīng)過(guò)空間誘變精心篩選培育出cc-溶血鏈球菌ST-22號(hào)菌抹作為生產(chǎn)菌種；經(jīng)一級(jí)發(fā)酵和二級(jí)發(fā)酵，將發(fā)酵液提純得到的。所述的發(fā)酵液具有調(diào)節(jié)免疫力功能、抗腫瘤的功能、抗炎功能、刺激骨髓造血干細(xì)胞的功能、降血脂功能、降血糖功能、抗氧化功能、改善記憶功能、緩解視疲勞功能、促進(jìn)排鉛功能、清咽功能、降血壓功能、改善睡眠功能、促進(jìn)泌乳功能、緩解體力疲勞功能、提高缺氧耐受力功能、對(duì)輻射危害有保護(hù)功能、減肥功能、改善生長(zhǎng)發(fā)育功能、增加骨密度功能、改善營(yíng)養(yǎng)性貧血功能、對(duì)化學(xué)性肝損傷有保護(hù)功能、祛痤瘡功能、祛黃褐斑功能、改善皮膚水分功能、改善皮膚油份功能、調(diào)節(jié)腸道菌群功能、促進(jìn)消化功能、通便功能、對(duì)胃粘膜損傷有保護(hù)功能等多方面的作用。本發(fā)明的特點(diǎn)是:將普通oc-溶血鏈球菌菌抹搭載第22顆返回式科學(xué)與技術(shù)試驗(yàn)衛(wèi)星，利用航天器的工藝余量及它在太空中處于微重力、宇宙射線、交變磁場(chǎng)、高真空、高熱深冷、劇烈溫差、超潔凈等太空獨(dú)有的特殊環(huán)境的綜合作用，使菌抹的DNA雙鏈結(jié)構(gòu)斷裂，基因組發(fā)生重排，其變異幅度較大，有益變異增多，并可以獲得在地面誘變中較難得到的有效的微生物培育。返回地面后，對(duì)經(jīng)過(guò)太空搭載的菌株進(jìn)行培養(yǎng)和篩選，通過(guò)研究其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化反應(yīng)、代謝產(chǎn)物、遺傳性狀及蛋白表達(dá)、遺傳穩(wěn)定性、中試生產(chǎn)指標(biāo)等內(nèi)容，優(yōu)選出其中的正變異、遺傳特性穩(wěn)定的菌種，并形成規(guī)?；a(chǎn)。該菌種由中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏；^f呆藏單位西安亨通光華制藥有限公司；保藏日期2006年1月18日，保藏編號(hào)為CGMCCNo.1590;附件材料1:中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏菌種保藏受理通知書原件；附件材料2:a-溶血鏈球菌經(jīng)"第22顆返回式科學(xué)與技術(shù)試驗(yàn)衛(wèi)星"航天搭栽公證書復(fù)印件；附件材料3:a-溶血鏈球菌經(jīng)"第22顆返回式科學(xué)與技術(shù)試驗(yàn)衛(wèi)星，，搭載菌抹與地面對(duì)照菌的檢測(cè)鑒定報(bào)告書復(fù)印件。具體實(shí)施方案空間搭載菌林的準(zhǔn)備及搭載本項(xiàng)目的研究人員采用濾紙條、浸入介質(zhì)、砂土管等方法，將ct-溶血鏈球菌進(jìn)行了封裝，該菌種裝入代號(hào)為DZ25的包裝袋中，包裝袋粘貼有北京市公證處封條，并蓋有證據(jù)保全印章。二OO五年八月二十九日上述菌種被密封裝入第22顆返回式科學(xué)與技術(shù)試驗(yàn)衛(wèi)星的返回艙內(nèi)，二00五年八月二十九日十六時(shí)四十五分在中國(guó)酒泉衛(wèi)星發(fā)射中心由長(zhǎng)征二號(hào)丁運(yùn)載火箭發(fā)射升空，經(jīng)過(guò)十八天的軌道運(yùn)行，第22顆返回式科學(xué)與技術(shù)試驗(yàn)衛(wèi)星返回艙于二00五年九月十六日十一時(shí)二十八分在四川中部地區(qū)回收著陸，返回艙于二oo五年九月十七日二十時(shí)四十分運(yùn)至中國(guó)空間技術(shù)研究院。并于二oo五年九月十七日二十時(shí)四十分在中國(guó)空間技術(shù)研究院開(kāi)艙。為使菌種安全順利、萬(wàn)無(wú)一失的運(yùn)回西安亨通光華制藥有限公司，陜西省公安廳出動(dòng)專門的警車、警員前往北京將搭載菌種直接押運(yùn)回該公司位于楊凌的特殊太空育種中心。在太空育種中心對(duì)搭載菌種進(jìn)行了反復(fù)的培養(yǎng)和篩選，優(yōu)選出極少量的正變異菌抹。為使這種正向變異更加穩(wěn)定的遺傳，并且能夠出現(xiàn)累加優(yōu)化效應(yīng)。我們緊接著連續(xù)搭載神舟系列飛船及返回式科學(xué)與技術(shù)實(shí)驗(yàn)衛(wèi)星。在外層空間飛行的菌抹被置于一個(gè)與地球上生態(tài)環(huán)境完全不同的特殊環(huán)境中(微重力、高真空、高輻射、交變磁場(chǎng)等)，誘發(fā)菌抹發(fā)生變異。變異后產(chǎn)生的新菌林，其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化反應(yīng)、代謝產(chǎn)物、遺傳性狀及蛋白表達(dá)等均發(fā)生明顯的變化。菌種選育在太空育種中心對(duì)搭載菌種進(jìn)行了反復(fù)的培養(yǎng)和篩選，優(yōu)選出極少量遺傳穩(wěn)定的正變異菌抹，進(jìn)行地面研究(1)返地后對(duì)菌抹進(jìn)行培養(yǎng)和篩選菌抹經(jīng)過(guò)分離培養(yǎng)長(zhǎng)出單菌落后進(jìn)行存活率的計(jì)算，有目的地將其編號(hào)保存，4務(wù)照革蘭氏染色、菌落形態(tài)、色素、菌膜及光澤度等進(jìn)行形態(tài)特征上的對(duì)比分析，進(jìn)一步通過(guò)試驗(yàn)，優(yōu)選出發(fā)酵周期縮短24小時(shí)的正向突變高產(chǎn)菌抹ST-22號(hào)。(2)培養(yǎng)特征的研究通過(guò)培養(yǎng)，研究了新菌株ST-22號(hào)對(duì)培養(yǎng)基在碳氮比、營(yíng)養(yǎng)成分、pH、溫度、氧需求、發(fā)酵周期等方面的適應(yīng)情況變化，并根據(jù)變化及時(shí)進(jìn)行相關(guān)生長(zhǎng)參數(shù)的調(diào)整。確定ST-22號(hào)培養(yǎng)基成分、運(yùn)行參數(shù)、pH、發(fā)酵周期等。(3)生理生化反應(yīng)對(duì)經(jīng)航天搭載、太空誘變、地面篩選出的菌抹進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)特征觀察及其與地面對(duì)照菌抹相關(guān)生理生化指標(biāo)的對(duì)比觀察。生產(chǎn)菌抹通過(guò)太空搭載，細(xì)胞的活性物質(zhì)增加，細(xì)胞生長(zhǎng)豐茂飽滿，具有CC-溶血現(xiàn)象，利用糖產(chǎn)酸現(xiàn)象比地面對(duì)照菌抹有所改變，而地面對(duì)照菌抹在某些糖的發(fā)酵中已失去產(chǎn)酸的能力及溶血現(xiàn)象。(4)代謝產(chǎn)物的測(cè)定用化學(xué)法和儀器測(cè)試它的主要化學(xué)組分及結(jié)構(gòu)有無(wú)變化。通過(guò)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)突變菌抹ST-22號(hào)不僅發(fā)酵周期大大縮短，而且其發(fā)酵產(chǎn)物比對(duì)照組產(chǎn)物含量平均高出3.5倍以上。(5)遺傳性狀及蛋白表達(dá)的研究DNA是決定遺傳的主要物質(zhì)，基因是遺傳的基本單位。由于基因突變會(huì)致使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)改變，最后導(dǎo)致個(gè)體性狀的差異。因此，我們進(jìn)行了①oc-溶血鏈球菌(地面抹標(biāo)號(hào)為D33號(hào)菌株)和太空搭載后篩選菌林(ST22菌林)16S-23SrDNA間區(qū)對(duì)比檢觀'J，檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)D33和ST22菌抹有如下基因位點(diǎn)的差異<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>②a-溶血鏈球菌(地面株標(biāo)號(hào)為D33號(hào)菌抹)和太空搭載后篩選菌株(ST22菌林)基因組限制性內(nèi)切酶酶切差異對(duì)比檢測(cè)，結(jié)果通過(guò)上述DNA酶切多態(tài)性分析，各樣品全基因組單酶切差異較大，說(shuō)明各樣品間基因組有多個(gè)位點(diǎn)發(fā)生基因突變。③a-溶血鏈球菌(地面抹標(biāo)號(hào)為D33號(hào)菌抹)和太空搭載后篩選菌抹(ST22菌抹)全細(xì)胞蛋白SDS-PAGE電泳差異對(duì)比檢測(cè)[其中Linel:D33(24h);Line5:ST22(24h);Line6:D33(48h);LinelO:ST22'(48h);Linell:D33(72h);Linel5:ST22(72h)]，結(jié)果存在明顯差異與同時(shí)間D33菌種全細(xì)胞電泳比較，ST-22菌^M々Line5和LinelO在28KD左右有一條明顯的條帶；而在22KD左右條帶缺失。表明經(jīng)過(guò)太空搭載后ST22號(hào)菌抹與地面林D33號(hào)相比，在蛋白表達(dá)水平存在較大差異。(6)對(duì)選出的高產(chǎn)高效突變菌抹ST-22號(hào)進(jìn)行穩(wěn)定性分析連續(xù)傳代試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該菌抹發(fā)酵周期縮短及多肽含量提高兩項(xiàng)指標(biāo)穩(wěn)定，是可穩(wěn)定遺傳的變異。(7)在培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行小試和中試在統(tǒng)計(jì)的十批實(shí)驗(yàn)測(cè)定中，實(shí)驗(yàn)組ST-22號(hào)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期大都提前至24小時(shí)左右，而對(duì)照菌的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期則仍在48小時(shí)左右。發(fā)酵產(chǎn)物含量比對(duì)照組高出3-5倍。具體制備工藝一、太空菌種制備以經(jīng)過(guò)空間誘變育種精心選育的cc-溶血鏈球菌ST-22號(hào)作為生產(chǎn)菌種o1.斜面種子制備按配比配制斜面培養(yǎng)基牛肉膏0.2-0.8%，酵母膏0.2-0.8%，蛋白胨0.3-0.8%,葡萄糖0.1-0.8%，氯化鈉0.2-0.6%，瓊脂1-5%，綿羊血5-10%;pH7.0-7.4;斜面培養(yǎng)基經(jīng)在溫度105-125°C，時(shí)間20-.30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.13Mpa滅菌后待用；啟封菌種冷凍管，在無(wú)菌條件下接入血斜面，接種后置25-40。C恒溫培養(yǎng)24-30小時(shí)。2.搖瓶種子液制備按配比配制搖瓶培養(yǎng)基牛肉膏0.2-0.8%,酵母膏0.2-0.8%,蛋白胨0.3-0.8%,葡萄糖O.1-0.8%，氯化鈉O.2-0.6%;pH7.0-7.4;搖瓶培^基經(jīng)在溫度105-125°C,時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.13Mpa滅菌后待用；將培養(yǎng)好的斜面菌種在無(wú)菌條件下按1-9%接種量接入搖瓶種子培養(yǎng)基內(nèi)，25-40。C恒溫培養(yǎng)10-30小時(shí)。二、發(fā)酵過(guò)程所述發(fā)酵過(guò)程的發(fā)酵培養(yǎng)基是牛肉膏0.2-0.8%,酵母膏0.2-0.8%,蛋白胨0.3-0.8°/。，葡萄糖0.1-0.9%，氯化鈉0.2-0.6%;經(jīng)滅菌溫度105-125。C,時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.13Mpa滅菌后備用。1.一級(jí)發(fā)酵罐將優(yōu)良的搖瓶菌種在無(wú)菌條件下按1-10%接種量接入滅菌后的一級(jí)發(fā)酵罐。罐壓不超過(guò)0.02Mpa，通氣量以能翻動(dòng)培養(yǎng)液為宜，連續(xù)充分?jǐn)嚢?，?5-40。C恒溫培養(yǎng)10-50小時(shí)；2.二級(jí)發(fā)酵罐將一級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下按2-20%接種量接入滅菌4的二級(jí)發(fā)酵罐，罐壓不超過(guò)0.02Mpa，通氣量以能翻動(dòng)培養(yǎng)液為宜，連續(xù)充分?jǐn)嚢?；?5-35。C恒溫培養(yǎng)50-100小時(shí)。滅活采用加溫使發(fā)酵液溫度達(dá)到70-120。C,保溫20-60分鐘，冷卻靜置后放罐。三、提純過(guò)程1.發(fā)酵液濃縮將發(fā)酵后的發(fā)酵液用濃縮器進(jìn)行濃縮，使?jié)饪s液體積與發(fā)酵液體積比控制在1:15-25,控制pH7.0-7.4制成發(fā)酵濃縮液。2.濃縮液的精制提純濃縮液按珍珠巖1-2.0%及活性炭2-4.0%加入進(jìn)行精制提純，攪拌10-2Q分鐘，過(guò)濾后再抽濾提純，制成發(fā)酵精制液。3.濃縮液加入80-99%乙醇，體積量比控制在l:1.5-1:5.5或酌情而定。充分?jǐn)嚢桁o置后，離心去除上清液，諷淀用蒸餾水溶解，調(diào)pH5.0，得到溶解液并將溶解液靜置。再將溶解液離心去除雜質(zhì)得到上清液，準(zhǔn)確量取清液體積，按上清液體積計(jì)算出所需乙醇量,調(diào)pH值，將乙醇緩慢加入到上清液中，并充分?jǐn)嚢?，靜置后離心去除上清液得到沉淀物。沉淀物再用蒸餾水溶解，調(diào)pH，離心，上清液再加乙醇沉淀。這樣的工藝反復(fù)操作至中間檢測(cè)合格為止，得到的沉淀物真空干燥3-8小時(shí)，即得到太空誘變菌種生產(chǎn)的發(fā)酵物。上述方法得到的發(fā)酵物的檢驗(yàn)本品為白色或微黃色無(wú)定形粉末；無(wú)臭、無(wú)味。本品在水中易溶，在乙醇、氯仿及丙酮中不溶。比旋度取本品，精密稱定，加水溶解并稀釋成每lml中約含10mg的溶液，依法測(cè)定(中國(guó)藥典2000年版二部附錄vIE),比旋度為+70。C至十80。C。1、取本品10mg,加水O.5ml使溶解，加a—萘酚乙醇溶液(5-100)lml，搖勻，沿管壁緩緩加硫酸O.5ml，數(shù)分鐘后，界面呈紫紅色。2、取本品，加水制成每lml中含lmg的溶液，取約10ul點(diǎn)于濾紙上，晾干，用無(wú)水乙醇固定，置高硝酸溶液(取高碘酸1.2g,加水30ml溶解后.加0.2mol/L醋酸鈉溶液1.5ml與乙醇100ml，混勻即得。置暗處保存，可使用數(shù)月)中浸泡5分鐘，取出，用70%乙醇溶液沖洗，置還原液(取^輿化鉀5g,碌u代疏酸鈉5g，加水100ml使溶解，再加乙醇150ml、2mol/L鹽酸液2.5ml，隨加隨攪拌，臨用時(shí)配)中浸泡5分鐘，取出，用70%乙醇溶液沖洗，置品紅亞硫酸試液中浸泡約30分鐘，取出，用焦亞硫酸鈉溶液(取焦亞石危酸鈉0.4g,加鹽酸lml,加水溶解使成100ml，即得)，沖洗，晾干，在濾紙片點(diǎn)樣處應(yīng)呈紫紅色。3、取供試品和對(duì)照品適量，分別加氯化鈉注射液制成每lml中含lmg的溶液作為供試品溶液和對(duì)照品溶液，按免疫原性測(cè)定法試驗(yàn)，供試品和對(duì)照品管應(yīng)均無(wú)溶血發(fā)生。1、酸度取本品，加水制成每lml中含IOmg的溶液，依法測(cè)定(中國(guó)藥典2000年版二部附錄VIH)，pH值應(yīng)為3.0-5.0。2、吸收度取本品，加水制成每lml中含0.4mg的溶液，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄VIA)，在260nm的波長(zhǎng)處，其吸收度不得大于O.25，在280nm的波長(zhǎng)處，其吸收度不得大于0.20。3、總氮量取本品，照氮測(cè)定法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄VI1D第二法)測(cè)定.按干燥品計(jì)算，含總氮量應(yīng)為0.8-2.0%。4、免疫原性取供試品和對(duì)照品適量，分別加氯化鈉注射液制成每lml中含10mg的溶液，再分別用t磷酸鹽緩沖液制成1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256的稀釋液作為供試品溶液和對(duì)照品溶液，依法檢查(附免疫原性測(cè)定法)，供試品不溶血管的最低濃度應(yīng)不得高于對(duì)照品相應(yīng)濃度的一倍以上。5、干燥失重取本品，在1G5。C干燥至恒重，減失重量不得過(guò)5.0%(中國(guó)藥典2000年版二部附錄VH1L)。6、重金屬取本品，在1.0g,依法檢查(中國(guó)藥典2000年版VH1H)含重金屬不得過(guò)百萬(wàn)分之二十。7、異常毒性取本品，加氯化鈉注射液制成每lml中含0.5mg的溶液，依法檢查(中國(guó)藥典2000年版附錄XIC).按靜脈注射法給藥，應(yīng)符合規(guī)定(供注射用)。發(fā)酵物中有效成分含量測(cè)定1.對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)105。C干燥至恒重的D—甘露糖對(duì)照品0.lg置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度.搖勻；精密量取5ml，置100ml的量瓶中，加水至刻度，搖勻.每lml中含甘露糖50ug。2.供試品溶液備取本品適量，精密稱定，加水溶解制成每lml中含40ug的溶液。3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取對(duì)照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、l.Oml,分別置具塞試管中，各加水至1.Oml,再加3%苯酚溶液1.Oml,搖勻，沖入碌^酸4.5ml，搖勻，放置于室溫，以O(shè)管為空白.照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄IVA)在490認(rèn)的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。以甘露糖ug數(shù)對(duì)相應(yīng)的吸收度，計(jì)算回歸方程。4.測(cè)定法精密量取供試品溶液l.Oml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下自"再加3°/苯酚溶液l.Oml"起，依法操作，測(cè)定吸收度，由回歸方程計(jì)算甘露糖的含量。免疫原性測(cè)定法(補(bǔ)體結(jié)合法)；'1、試液A.酸鹽緩沖液(pH7.2)取氯化鈉8.5g、磷酸氬二鈉0.565g及磷酸二氬鉀0.135g，加水至1000ml使其溶解，加10%硫酸鎂溶液lml,搖勻。B.1%羊紅細(xì)胞懸液羊血紅細(xì)胞的制備由綿羊頸靜脈無(wú)菌采血于盛有等量阿氏液(取葡萄糖20.5g、枸椽酸鈉8.Og、氯化鈉4.2g，枸椽酸5.5g,加水至1000ml使溶解，IO(TC滅菌30分鐘)的無(wú)菌容器中，4。C保存。1%羊血紅細(xì)胞懸液的制備取上述羊血紅細(xì)胞適量，用氯化鈉注射液洗滌三次，每次離心5分鐘(2000轉(zhuǎn)/分)，取壓積羊血紅細(xì)胞，用氯化鈉注射液制成1%羊血紅細(xì)胞懸液。取懸液，用氯化鈉注射液稀釋20倍制成供試品溶液，另取等量懸液加水稀釋20倍作為空白溶液，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄IVA)，在541nm的波長(zhǎng)處測(cè)定，其吸收度應(yīng)為0.65-0.70，如超出限度應(yīng)調(diào)節(jié)1%羊紅細(xì)胞懸液的濃度。C.溶血素及致敏羊血紅細(xì)胞溶血素的制備取上述壓積羊血紅鈿胞，用氯化鈉注射液制成25%羊血紅細(xì)胞懸液.取家兔1只，靜脈注射上述羊血紅細(xì)胞懸液，每日一次，共七次，前三次3ml，后三次5ml，末次注射后七日采血。分離血清，56°C.30分鐘滅活，分裝，O'C以下保存。溶血素單位的測(cè)定取溶血素適量，加磷酸鹽緩沖液分別制成1:1000、1:2000、1:3000、1:4000、1:5000、1:6000、1:7000、1:8000、1:9000、1:10000的稀釋液，各取0.lml置試管中，力p1%羊血細(xì)胞懸液0.lml，搖勻，加稀釋度為1:30的豚鼠血清(補(bǔ)體)O.2ml及磷酸鹽緩沖液0.2ml，搖勻，37。C保溫30分鐘，完全溶血管的最高稀釋度為1單位溶血素。致敏羊血紅細(xì)胞的制備臨用前，將2%的羊血紅細(xì)胞懸液與2單位溶血索等體積混合，37。C保溫15分鐘即得。補(bǔ)體取三只以上的豚鼠，心臟采血，離心分離血清，(TC以下保存。補(bǔ)體單位的測(cè)定取補(bǔ)體適量，加磷酸鹽緩沖液，分別制成1:40、1:60、1:80、1:100、1:120、1:140、1:160、1:180的稀釋液，各取0.2ml置試管中，加O.2ml磷酸鹽緩沖液，搖勻，37。C保溫30分鐘后，分別加致敏羊血紅細(xì)胞0.2n1,搖勻，37。C再保溫30分鐘.完全溶血管的最高稀釋度為l單位的補(bǔ)體?？贵w取對(duì)照品適量，加氯化鈉注射液制成每lml中含10mg的對(duì)照品溶液免疫家兔，隔日采用耳靜脈注射對(duì)照品溶液一次。第一次注射0.2ml，第二次至第五次各注射0.5ml，第六次至第十次各注射1.Oml,第十一次至第十五次各注射2.0ml,末次注射后三日采血，離心分離血清，56。C下30分鐘滅活，分裝，0。C以下保存(臨用前，需56。C30分鐘再次滅活)?？贵w單位的測(cè)定取抗體適量，加磷酸鹽緩沖液分別制成1:2、1:4、1:8、1:16、1:32.1:64、1:128的稀釋液，各取O.lml置試管中，加對(duì)照品溶液0.lml及2單位補(bǔ)體0.2m]，搖勻，于4-8。C;改置4小時(shí)以上，置37。C保溫30分鐘，不溶血管的最高稀釋度為1單位抗體。同時(shí)設(shè)抗原(不加抗體，以0.lml磷酸鹽緩沖液代替)、抗體(不加抗原，以O(shè).lml磷酸鹽緩沖液代替)、補(bǔ)體(不加抗原，抗體，以0.2ml磷酸鹽緩沖液代替)對(duì)照管，以上三種對(duì)照管應(yīng)全溶血；另設(shè)的致敏羊血紅細(xì)胞(不加抗原、抗體和補(bǔ)體，以0.4ml磷酸鹽緩沖液代替)對(duì)照管應(yīng)不溶血。2、免疫原性測(cè)定法取對(duì)照品與供試品適量，照藥品項(xiàng)下的規(guī)定制成不同濃度的對(duì)照品溶液和供試品溶液，各取0.lml置試管中，加入2單位抗體0.lml及2單位補(bǔ)體0.2ml.搖勾，于4-8。C放置4小時(shí)以上，置37。C保溫30分鐘，加入致敏羊血紅細(xì)胞0.2ml，搖勻，37。C再保溫30分鐘。觀察各管的溶血情況，不溶血管的最低濃度代表對(duì)照品的免疫原性。同時(shí)設(shè)抗原(不加抗體，以0.lml磷酸鹽緩沖液代替)、抗體(不加抗原，以0.lml磷酸鹽緩沖液代替)、補(bǔ)體(不加抗原、抗體、以0.2ml磷酸鹽緩沖液代替)對(duì)照管，以上三種對(duì)照管應(yīng)全溶血另設(shè)的致敏羊血紅細(xì)胞(不加抗原、抗體和補(bǔ)體，以O(shè).4ml磷酸鹽緩沖液代替)對(duì)照管應(yīng)不溶血。權(quán)利要求1、第22顆返回式衛(wèi)星的太空高效微生物菌種，其特征在于將α-溶血鏈球菌菌種搭載第22顆返回式科學(xué)與技術(shù)試驗(yàn)衛(wèi)星，運(yùn)用空間技術(shù)進(jìn)行微生物誘變育種方法，通過(guò)外層空間特殊的物理化學(xué)環(huán)境，即微重力、強(qiáng)輻射、高能粒子、交變磁場(chǎng)及高真空的環(huán)境中，導(dǎo)致α-溶血鏈球菌菌種遺傳性質(zhì)發(fā)生變異，引起菌種DNA分子的變異和重組，從而獲得生命力旺盛、生長(zhǎng)速度快、品質(zhì)優(yōu)良的菌種，優(yōu)選出其中的正變異、遺傳性質(zhì)穩(wěn)定的菌種作為生產(chǎn)菌種，該菌種已于2006年1月18日由中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，編號(hào)為CGMCCNo.1590。2、第22顆返回式衛(wèi)星的太空高效微生物菌種的制備方法，其特征在于其制備方法包括篩選、發(fā)酵工藝一、經(jīng)太空誘變a-溶血鏈球菌菌種是a-溶血鏈球菌ST-22號(hào)菌抹，以下為ST-22號(hào)菌抹的篩選在太空育種中心對(duì)搭載菌種進(jìn)行的培養(yǎng)和篩選，優(yōu)選出極少量遺傳穩(wěn)定的正變異菌株,進(jìn)行地面研究返地后對(duì)菌林進(jìn)行培養(yǎng)和篩選菌抹經(jīng)過(guò)分離培養(yǎng)長(zhǎng)出單菌落后進(jìn)行存活率的計(jì)算，有目的地將其編號(hào)保存，按照革蘭氏染色、菌落形態(tài)、色素、菌膜及光澤度等進(jìn)行形態(tài)特征上的對(duì)比分析，進(jìn)一步通過(guò)試驗(yàn)，優(yōu)選出發(fā)酵周期縮短24小時(shí)的正向突變高產(chǎn)菌抹。篩選出的太空菌ST-22號(hào)與地面菌、菌抹標(biāo)號(hào)為D33號(hào)茵株的對(duì)比特征是(一)形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、生理生化特征的對(duì)比U)形態(tài)特征差異ST-22菌抹細(xì)胞呈圓球形或卵圓形，細(xì)胞大小為0.7-2.0jam。在液體培養(yǎng)基中以成對(duì)或鏈狀出現(xiàn)，無(wú)鞭毛，不生芽孢，無(wú)莢膜。細(xì)胞壁清晰，易著色，細(xì)胞生長(zhǎng)飽滿豐茂，細(xì)胞質(zhì)充足飽滿。D33菌株細(xì)胞呈球形或卵圓形，細(xì)胞大小為0.6-0.7jumx1.6-1.8jam，細(xì)胞生長(zhǎng)中度，有的細(xì)胞不太飽滿。(2)培養(yǎng)特征的差異ST-22菌抹在血平板或有機(jī)物平板上生長(zhǎng)飽滿豐茂，菌落圓形，較大，有明顯突起,表面光滑，杏仁黃色，有光澤,略有粘性，半透明。菌膜生長(zhǎng)有厚度，無(wú)色素產(chǎn)生。D33菌抹在血平板或有機(jī)物平板上菌落圓形，呈現(xiàn)小顆粒狀，有突起，光澤略暗，有粘性，半透明，生長(zhǎng)中度，菌膜較薄，乳脂色，無(wú)色素產(chǎn)生。(3)生理生化特征差異較大結(jié)果表明通過(guò)返回式科學(xué)與技術(shù)試驗(yàn)衛(wèi)星搭載的菌抹ST-22號(hào)與地面對(duì)照菌抹的形態(tài)特征、生理生化特征等均有明顯差異。搭載的菌抹細(xì)胞的活力增強(qiáng)，'細(xì)胞的活性物質(zhì)提高，細(xì)胞生長(zhǎng)豐茂飽滿，生理生化特征的活性比地面對(duì)照菌敏感。利用糖，醇產(chǎn)酸現(xiàn)象比地面對(duì)照菌豐富。二、ST-22號(hào)菌抹的發(fā)酵制備工藝(一)發(fā)酵過(guò)程所述發(fā)酵過(guò)程的發(fā)酵培養(yǎng)基是牛肉膏0.2-0.8%，酵母膏0.2-0.8%，蛋白胨0.3-0.8%，葡萄糖0.1-0.9%,氯化鈉0.2-0.6%;經(jīng)滅菌溫度105-125°C,時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0,11-0.13Mpa滅菌后備用。(1).一級(jí)發(fā)酵罐將優(yōu)良的搖瓶菌種在無(wú)菌條件下按1-10%接種量接入滅菌后的一級(jí)發(fā)酵罐。罐壓不超過(guò)O.02Mpa,通氣量以能翻動(dòng)培養(yǎng)液為宜，連續(xù)充分?jǐn)嚢?，?5-40"C恒溫培養(yǎng)10-50小時(shí)；(2).二級(jí)發(fā)酵罐將一級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下按2-20%接種量接入滅菌后的二級(jí)發(fā)酵罐，罐壓不超過(guò)O.02Mpa，通氣量以能翻動(dòng)培養(yǎng)液為宜，連續(xù)充分?jǐn)嚢?；?5-35。C恒溫培養(yǎng)50-100小時(shí)。滅活采用加溫4吏發(fā)酵液溫度達(dá)到70-12(TC,保溫20-60分鐘，冷卻靜置后放罐。(二)提純過(guò)程(1).發(fā)酵液濃縮將發(fā)酵后的發(fā)酵液用濃縮器進(jìn)行濃縮，使?jié)饪s液體積與發(fā)酵液體積比控制在1:15-25,控制pH7.0-7.4制成發(fā)酵濃縮液。(2).濃縮液的精制提純濃縮液按珍珠巖1-2.0%及活性炭2-4,0%加入進(jìn)行精制提純，攪拌10-20分鐘，過(guò)濾后再抽濾提純，制成發(fā)酵精制液。(3).濃縮液加入80-99%乙醇，體積量比控制在1:1.5-1:5.5或酌情而定。充分?jǐn)嚢桁o置后，離心去除上清液，沉淀用蒸餾水溶解，調(diào)pH5.0,得到溶解液并將溶解液靜置。再將溶解液離心去除雜質(zhì)得到上清液，準(zhǔn)確量取清液體積，按上清液體積計(jì)算出所需乙醇量，調(diào)pH值，將乙醇緩慢加入到上清液中，并充分?jǐn)嚢瑁o置后離心去除上清液得到沉淀物。沉淀物再用蒸餾水溶解，調(diào)pH,離心，上清液再加乙醇沉淀。這樣的工藝反復(fù)操作至中間檢測(cè)合格為止，得到的沉淀物真空干燥3-8小時(shí)，即得到太空菌ST-22號(hào)生產(chǎn)的發(fā)酵物。3、第22顆返回式衛(wèi)星的太空高效微生物菌種的應(yīng)用，其特征在于根據(jù)太空菌ST-22號(hào)生產(chǎn)的發(fā)酵液具有調(diào)節(jié)免疫力功能、抗肺瘤的功能、抗炎功能、刺激骨髓造血干細(xì)胞的功能、降血脂功能、降血糖功能、抗氧化功能、改善記憶功能、緩解視疲勞功能、促進(jìn)排鉛功能、清咽功能、降血壓功能、改善睡眠功能、促進(jìn)泌乳功能、緩解體力疲勞功能、提高缺氧耐受力功能、對(duì)輻射危害有保護(hù)功能、減肥功能、改善生長(zhǎng)發(fā)育功能、增加骨密度功能、改善營(yíng)養(yǎng)性貧血功能、對(duì)化學(xué)性肝損傷有保護(hù)功能、祛痤瘡功能、祛黃褐斑功能、改善皮膚水分功能、改善皮膚油份功能、調(diào)節(jié)腸道菌群功能、促進(jìn)消化功能、通便功能、對(duì)胃粘膜損傷有保護(hù)功能等多方面的作用。全文摘要本發(fā)明涉及空間誘變優(yōu)良微生物菌種，具體說(shuō)是一種空間誘變優(yōu)良微生物菌種及其制備方法與應(yīng)用。早在十九世紀(jì)人們就發(fā)現(xiàn)被溶血性鏈球菌感染的癌癥患者腫塊自然消退的現(xiàn)象，且發(fā)現(xiàn)溶血性鏈球菌及其制劑有一定的藥理活性。本發(fā)明利用太空特殊環(huán)境，通過(guò)搭載第22顆返回式科學(xué)與技術(shù)試驗(yàn)衛(wèi)星，將菌株送入太空，遨游一定時(shí)間后安全返回，淘汰負(fù)向變異菌株，選出性質(zhì)優(yōu)良的正向變異菌株進(jìn)行復(fù)篩，最終得到生命力旺盛、生長(zhǎng)速度快、發(fā)酵單位高、發(fā)酵周期短、多肽含量高、遺傳性質(zhì)穩(wěn)定、生產(chǎn)適應(yīng)性強(qiáng)、具有空間累加效應(yīng)的優(yōu)良微生物菌種。應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)的生產(chǎn)菌種，具有產(chǎn)量高、用途廣、成本低、有效成份含量高等特點(diǎn)。文檔編號(hào)C12N1/21GK101280286SQ20081001741公開(kāi)日2008年10月8日申請(qǐng)日期2008年1月28日優(yōu)先權(quán)日2008年1月28日發(fā)明者衛(wèi)孫申請(qǐng)人:衛(wèi)孫