專利名稱：一種鑒別俄羅斯鱘精子活力的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及到俄羅斯鱘精子活力的一種鑒別方法。
背景技術(shù)：
在生產(chǎn)實(shí)踐中，魚類精子活力是精子質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。通常，活力高的精子受 精能力也越強(qiáng)。因此，客觀準(zhǔn)確評(píng)價(jià)魚類精子的活力具有非常重要的理論意義與應(yīng)用價(jià)值。 目前，評(píng)價(jià)魚類精子活力主要有以下幾種方法一、利用顯微鏡觀察記錄精子的活動(dòng)狀況和 運(yùn)動(dòng)時(shí)間，這種方法受人為因素的影響較大，不能客觀反應(yīng)精子的活動(dòng)狀況；二、利用魚類 精子直接開展受精試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)受精率、孵化率、出膜率等，這種方法受外界環(huán)境因子較多，且 隨著不同魚類的早期發(fā)育時(shí)間的長短試驗(yàn)周期會(huì)有較大變化；三、最近又開發(fā)出一套計(jì)算 機(jī)輔助分析系統(tǒng)(CASA)，用于分析精子的運(yùn)動(dòng)速率和運(yùn)動(dòng)距離等，這種方法能客觀反應(yīng)精 子的活動(dòng)情況，但儀器設(shè)備較為昂貴。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的問題是提供一種避免受人為因素、外界環(huán)境因子的影響，能客 觀準(zhǔn)確評(píng)價(jià)、鑒別俄羅斯鱘精子活力的方法。本發(fā)明配備試劑盒、紫外可見光分光光度計(jì)，其特征是在俄羅斯鱘繁殖季 節(jié)，分批采集一定量的精子，用試劑盒測(cè)定不同批次精子中頂體酶、總ATP酶、琥珀 酸脫氫酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶和酸性磷酸酶的活性，如果精子中頂體酶活性高于 36. 18士2. 54μ IU/106, ATP酶的活性高于198. 47士 14. 43U/ml，琥珀酸脫氫酶的活性高 于30. 00 士 2. 65U/ml，乳酸脫氫酶的活性高于6982. 29 士 24. 32U/L，肌酸激酶的活性高 于1. 94 士 0. 05U/ml，酸性磷酸酶活性高于0. 94 士 0. 02U/ml，為精子活力較好；如果精 子中頂體酶的活性介于21. 55士0. 79μ IU/106和36. 18士2. 54μ IU/106之間，ATP酶的 活性介于110. 19 士 2. 32U/ml和198. 47 士 14. 43U/ml之間，琥珀酸脫氫酶的活性介于 16. 33士2. 08U/ml 和 30. 00士2. 65U/ml 之間，乳酸脫氫酶的活性介于 5122. 93士 195. 07U/L 禾口 6982. 29士24. 32U/L 之間，肌酸激酶的活性介于 1. 49士0. 14U/ml 和 1. 94士0. 05U/ml，酸 性磷酸酶活性介于0. 67士0. 07U/ml和0. 94士0. 02U/ml之間，為精子活力一般；如果精子 中頂體酶的活性低于21. 55士0. 79μ IU/106，ATP酶的活性低于110. 19士2. 32U/ml，琥珀酸 脫氫酶的活性低于16. 33士2. 08U/ml，乳酸脫氫酶的活性低于5122. 93士 195. 07U/L,肌酸 激酶活性低于1. 49士0. 14U/ml，酸性磷酸酶活性低于0. 67士0. 07U/ml，則鑒別為精子活力 差。本發(fā)明的突出特點(diǎn)是通過建立不同活力的俄羅斯鱘精子相關(guān)能量代謝酶的活性 數(shù)據(jù)，并提供了鑒別俄羅斯鱘精子中頂體酶、總ATP酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶、肌酸激 酶和酸性磷酸酶的活性的相應(yīng)區(qū)分?jǐn)?shù)據(jù)，通過精子相關(guān)能量代謝酶活性檢測(cè)，根據(jù)酶活性 的高低，應(yīng)用本區(qū)分?jǐn)?shù)據(jù)來鑒別俄羅斯鱘精子的活力。本方法與現(xiàn)有方法相比，更為客觀， 減少了通過人為觀察判斷的主觀因素，具有準(zhǔn)確客觀的顯著效果，不僅可檢測(cè)樣本數(shù)量大，所需時(shí)間短，而且鑒別準(zhǔn)確率達(dá)到98%以上。利用本方法鑒別出的不同活力的精子開展受 精試驗(yàn)，活力好的精子受精率可達(dá)到95%以上，活力一般的精子受精率只有50%左右，活 力差的精子基本無受精能力。本方法所用儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，成本低廉，不需要昂貴的儀器設(shè) 備。
具體實(shí)施例方式
在俄羅斯鱘繁殖季節(jié)，分批采集其精子，每批次取6尾魚精子，用試劑盒(由南 京建成生物工程研究所出品試劑盒)在紫外可見光分光光度計(jì)下分別測(cè)定不同批次精子 中頂體酶、總ATP酶、琥珀酸脫氫酶(SDH)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和酸性磷酸 酶(ACP)的活性，每個(gè)樣重復(fù)三次，結(jié)果取平均值，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析處理。 如果精子中頂體酶活性高于36. 18士2. 54μ IU/106，ATP酶的活性高于198. 47士 14. 43U/ ml, SDH 的活性高于 30. 00士2. 65U/ml, LDH 的活性高于 6982. 29士24. 32U/L, CK 的活性 高于1. 94士0. 05U/ml, ACP活性高于0. 94士0. 02U/ml,判斷為精子活力較好；如果精子 中頂體酶的活性介于21. 55士0. 79 μ IU/106和36. 18士2. 54μ IU/106之間，ATP酶的活性 介于 110. 19 士 2. 32U/ml 和 198. 47 士 14. 43U/ml 之間，SDH 的活性介于 16. 33 士 2. 08U/ml 和 30. 00 士 2. 65U/ml 之間，LDH 的活性介于 5122. 93 士 195. 07U/L 和 6982. 29 士 24. 32U/ L 之間，CK 的活性介于 1. 49士0. 14U/ml 禾口 1. 94士0. 05U/ml, ACP 活性介于 0. 67士0. 07U/ ml和0. 94 士 0. 02U/ml之間，則判斷為精子活力一般；如果精子中頂體酶的活性低 于 21. 55 士 0. 79μ IU/106，ATP 酶的活性低于 110. 19 士 2. 32U/ml，SDH 的活性低于 16. 33 士 2. 08U/ml，LDH 的活性低于 5122. 93 士 195. 07U/L，CK 活性低于 1. 49 士0. 14U/ml，ACP 活性低于0. 67士0. 07U/ml，則判斷為精子活力差。運(yùn)用此方法鑒別俄羅斯鱘精子活力較為準(zhǔn)確和客觀，鑒別率可達(dá)到98%以上。
權(quán)利要求
一種鑒別俄羅斯鱘精子活力的方法，配備試劑盒、紫外可見光分光光度計(jì)，其特征是在俄羅斯鱘繁殖季節(jié)，分批采集一定量的精子，用試劑盒測(cè)定不同批次精子中頂體酶、總ATP酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶和酸性磷酸酶的活性，精子中頂體酶活性高于36.18±2.54μIU/106，ATP酶的活性高于198.47±14.43U/ml，琥珀酸脫氫酶的活性高于30.00±2.65U/ml，乳酸脫氫酶的活性高于6982.29±24.32U/L，肌酸激酶的活性高于1.94±0.05U/ml，酸性磷酸酶活性高于0.94±0.02U/ml，為精子活力較好；精子中頂體酶的活性介于21.55±0.79μIU/106和36.18±2.54μIU/106之間，ATP酶的活性介于110.19±2.32U/ml和198.47±14.43U/ml之間，琥珀酸脫氫酶的活性介于16.33±2.08U/ml和30.00±2.65U/ml之間，乳酸脫氫酶的活性介于5122.93±195.07U/L和6982.29±24.32U/L之間，肌酸激酶的活性介于1.49±0.14U/ml和1.94±0.05U/ml，酸性磷酸酶活性介于0.67±0.07U/ml和0.94±0.02U/ml之間，為精子活力一般；精子中頂體酶的活性低于21.55±0.79μIU/106，ATP酶的活性低于110.19±2.32U/ml，琥珀酸脫氫酶的活性低于16.33±2.08U/ml，乳酸脫氫酶的活性低于5122.93±195.07U/L，肌酸激酶活性低于1.49±0.14U/ml，酸性磷酸酶活性低于0.67±0.07U/ml，則鑒別為精子活力差。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鑒別俄羅斯鱘精子活力的方法，其特征是分批采集一定 量的精子為每批次取6尾魚精子。
全文摘要
一種鑒別俄羅斯鱘精子活力的方法，涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)，需要提供一種鑒別俄羅斯鱘精子活力的方法，本發(fā)明配備試劑盒、紫外可見光分光光度計(jì)，其特征是采集俄羅斯鱘精子，用試劑盒測(cè)定精子中頂體酶、總ATP酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶和酸性磷酸酶的活性來區(qū)分精子活力較好、一般或活力差。本發(fā)明用于鑒別俄羅斯鱘精子活力。
文檔編號(hào)C12Q1/32GK101838679SQ200910047659
公開日2010年9月22日 申請(qǐng)日期2009年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月16日
發(fā)明者劉鑒毅, 姚志峰, 莊平, 江琪, 章龍珍, 黃曉榮 申請(qǐng)人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所