專利名稱：一種制備蜜環(huán)菌硒多糖的培養(yǎng)基及生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵生產(chǎn)領(lǐng)域，具體涉及一種固態(tài)發(fā)酵合成蜜環(huán)菌硒多糖的培養(yǎng)基以 及生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
蜜環(huán)菌(Armillaria鵬llea)是天麻的共生菌，其菌絲中含有胞內(nèi)多糖、萜類化合物 、酯類化合物、氨基酸等多種營養(yǎng)物質(zhì)，具有定驚、熄風(fēng)、健腦、增強(qiáng)人體免疫力、抗腫瘤 等多種藥理活性。蜜環(huán)菌多糖具有抗腫瘤活性，治療機(jī)體免疫系統(tǒng)受傷的癌癥，能使正常小 鼠的糖耐量增強(qiáng)，凋節(jié)小鼠免疫細(xì)胞及免疫分子來增強(qiáng)小鼠的免疫功能。硒是生命必需的微 量元素，是谷胱甘肽過氧化物酶的主要活性成分，硒能構(gòu)成若干氧化酶的活性中心，可增強(qiáng) 機(jī)體的執(zhí)氧化能力和對相關(guān)疾病的抵執(zhí)能力，某些癌癥、腫瘤、心血管疾病、大骨節(jié)病和艾 滋病等都與體內(nèi)缺W有關(guān)。這說明了ffl與人體健康的直接關(guān)系。硒的存在形式有無機(jī)硒和有 機(jī)硒兩種，常見的無機(jī)硒有亞曬酸鈉和硒酸鈉，有機(jī)棲士要是曬蛋白和硒多糖。無機(jī)硒具有 蓄積性毒性和致突變作用，使用時劑量難以控制，而有機(jī)硒的毒性低，副作用小，不但能夠 更好地發(fā)揮硒的作用，而目在激發(fā)免疫反應(yīng)卜.比無機(jī)硒顯著，岡此，利用食藥用菌將無機(jī)硒 和多糖結(jié)合轉(zhuǎn)化為硒多糖，將使食藥用菌的生理和藥理功能得到優(yōu)化，并能提供可行的生產(chǎn) 硒多糖的方法。富硒蜜環(huán)菌的培養(yǎng)及其產(chǎn)品的研究與開發(fā)，可以滿足人們預(yù)防心腦血管及腫 瘤疾病的需要，對于人們預(yù)防心腦血管及腫瘤疾病、維護(hù)健康具有重要作用，將產(chǎn)生重大的 經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。唐巧玉等(唐巧玉,周毅峰,秦恩華，等.硒對蜜環(huán)菌的作用規(guī)律及其 在多糖中的IR累.食品與發(fā)酵工業(yè)，2007， 33 (10) ; 96-98;唐巧玉，秦息華.硒對蜜環(huán)菌 多糖和蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響.湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版
)http://acad. cnki. net./ktis55/oldNavi,/B:ticlge. aspx' LinkType二BaseLink&DBCode二cjfd&TableN ame=cjfdbaseinfo&Fielcl=BaseID&,Value=HBXZ&NaviLink=%e6%bg%96%e5%8c%97%e6%b0%91%e6%97%
),2007， 25 (1) s 94-96;
唐巧玉，毅峰，楊林，等.蜜環(huán)菌對硒的耐受能力及硒對其多糖產(chǎn)率的影響.食用菌，2007， 3: 4-5)采用液體發(fā)酵研究了蜜環(huán)菌對硒的積累，結(jié)果表明，當(dāng)無機(jī)硒濃度為20mg/L.以上時， 蜜環(huán)菌菌絲體生長將受到抑制，也就是說，液體發(fā)酵過程屮.當(dāng)無機(jī)硒濃度超過20mg/L培養(yǎng) 基，菌絲體將受到毒害，并且硒多糖中硒含量至多為90 ug,/g，培養(yǎng)時間在15天以上。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的固態(tài)發(fā)酵合成蜜環(huán)菌硒多糖的培養(yǎng)基，其原料廉價易得 、配制簡單、能提高蜜環(huán)菌硒多糖的產(chǎn)量和硒多糖中硒的富集量。
本發(fā)明的第二個目的是提供一種新的固態(tài)發(fā)酵合成蜜環(huán)菌硒多糖的生產(chǎn)方法，其產(chǎn)量高 、硒多糖中硒的富集量也高，質(zhì)量穩(wěn)定、原料廉價、生產(chǎn)效率高、方法簡單易行。
本發(fā)明的目的是通過以下方案實(shí)現(xiàn)的。
制備蜜環(huán)菌硒多糖的培養(yǎng)基由以下成分組成5-15wt。/。麩皮、50-85wt。/。大米、4-18wt。/。紅 薯、0. 4-2wt。/。大豆，55-65wt。/。水，無機(jī)硒30-45 y g/g培養(yǎng)基。無機(jī)硒為亞硒酸鹽或硒酸 鹽，優(yōu)選亞硒酸鈉。
所述蜜環(huán)菌硒多糖的生產(chǎn)工藝包括以下步驟
1) 制備液體種子
經(jīng)蜜環(huán)菌菌種分離、斜面菌種培養(yǎng)、液體培養(yǎng)，獲得液體種子；
2) 固體培養(yǎng)基的配制
將5-15wt。/。麩皮、50-85wt。/。大米、4-18wt。/。紅薯、0. 4-2wt。/。大豆，分別用水浸潤透，然后 混合，按照30-45 y g/g培養(yǎng)基添加無機(jī)硒(無機(jī)硒為亞硒酸鹽或硒酸鹽，優(yōu)選亞硒酸鈉)， 使混合物含水為55-65wt。/。，用高壓滅菌鍋12rC蒸40分鐘，冷卻；
3) 接種培養(yǎng)
將高壓滅菌鍋蒸熟的培養(yǎng)基冷卻至35-4(TC ，按培養(yǎng)基重量的10-20%接種液體種子， 23-27。C恒溫、培養(yǎng)10-20天，菌索呈灰白色為止。
營養(yǎng)基質(zhì)在液體深層發(fā)酵中從液體基質(zhì)到細(xì)胞內(nèi)部相對容易，但菌體對營養(yǎng)基質(zhì)的耐受 能力不強(qiáng)，而固態(tài)發(fā)酵的形式則提高了菌體對營養(yǎng)基質(zhì)的耐受能力，本發(fā)明中蜜環(huán)菌能夠耐 受的無機(jī)硒濃度為30-45y g/g培養(yǎng)基，大大提高了蜜環(huán)菌對無機(jī)硒的耐受能力和富集效果。 而且現(xiàn)代固態(tài)發(fā)酵容易控制，沒有影響環(huán)境污染的廢物產(chǎn)生，是解決能源危機(jī)、治理環(huán)境污 染的重要手段之一。
蜜環(huán)菌富硒的以往技術(shù)中，大多用液體發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)基成分復(fù)雜，產(chǎn)硒多糖的量不大 ，硒多糖中硒的富集量不高，產(chǎn)量不穩(wěn)定，操作復(fù)雜，而且培養(yǎng)基的成分成本較高。本發(fā)明 將麩皮、大米、紅薯、大豆進(jìn)行優(yōu)化組合作為發(fā)酵培養(yǎng)基的主要原料，利用了取材容易、價 格較低的農(nóng)副產(chǎn)品，原料來源廣，營養(yǎng)豐富，少數(shù)幾種成分即能夠滿足蜜環(huán)菌生長的要求， 可以降低成本，適應(yīng)于大規(guī)模生產(chǎn)。本發(fā)明整個培養(yǎng)過程簡單易行，成本低，硒多糖的產(chǎn)量穩(wěn)定，制備的硒多糖-含量達(dá)到 S-lSmg/g培養(yǎng)物，硒多糖中l(wèi)i含量為lS0-加0yg/g。為固態(tài)發(fā)酵合成蜜環(huán)菌硒多糖提供了一
條新的途徑，應(yīng)用前景十分看好。
唐巧玉等(:唐巧玉,周毅峰,秦恩華j等./r西對蜜環(huán)菌的作用規(guī)律及其在多糖中的積累.食
品與發(fā)酵工業(yè)，2007， 33 (10) : 96-98;唐巧玉，秦恩華.碩對蜜環(huán)菌多糖和蚩白質(zhì)質(zhì)量分
數(shù)的影響.湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版
)http ://acad. cnki. net,/kns55/oldNavi,/Bridge. aspx' LinkType二BaseLink&DB['ode二cjfd&TableN aira =cjfc]baseinfo&Field=Bas3lD&Value=HBXZ&feviLink=%e6%b，6'%e5%8c%97%e6%bffi91%e6%97% 8f%e5%ad%a6%e9%99%a2%e5%ad%a6%e6%8a%a5(%e8%87%aa%e7%84%b6%e7%sJ%91%e5%ad%a6%e7%89%88 ),2007， 25 (1) : 94-96;唐巧玉，周毅峰，楊
林，等.蜜環(huán)菌對硒的耐受能力及硒對其多糖產(chǎn)率的影響.食用菌，2007，3: 4-5)采用液體發(fā) 酵研究了蜜環(huán)菌對硒的積累，結(jié)果表明，3無機(jī)ffi濃度為加mg/L以上時，蜜環(huán)菌菌絲體生長 將受到抑制，并日.硒多糖屮硒含量至多為90 tig/g，培養(yǎng)時間在15天以匕
具體實(shí)施例方式
以K實(shí)施例旨在進(jìn)一歩說明本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。 實(shí)施例h蜜環(huán)菌硒多糖的生產(chǎn)
1) 種子液的制備(見專禾'.ZL200410047034, 2 "蜜環(huán)茼酒生產(chǎn)方法") 1. 1菌種分離
蜜環(huán)菌分離于湖南省懷化市天麻的菌索， 1.2斜面菌種培養(yǎng)
將分離純化的菌株接種于斜面，25-26nc恒fi培養(yǎng)至菌索基本達(dá)到試管底部，菌索灰白色。
1. 3斜面培養(yǎng)基為2%白砂糖，，麩皮汁，(1 2 蛋白胨；0. 1%酵母粉，0. 075% MgSO 4. 7H20， 0.15% KH2P04，加水溶解定,至適量體積，pH自然，瓊脂2%。
1.4液體種于的制作將斜面菌種接^在液體潘養(yǎng)基2%白砂糖，3%麩皮汁，0.2%蛋白胨 ，0. W,酵母粉，O. 075%MgS04.7H20, 0. 15% KH2P04,加水溶解定容至適量體積，pH自然。26°C 、2C0轉(zhuǎn)/分恒溫振蕩培養(yǎng)15天，獲得液體種子。
2) 固體培養(yǎng)基的配制
將5-15wtW麩皮、50-85wtft大米、4-18wtWt薯、0. 4-2wt劣大豆，分別用水浸潤透，然后 混合，按照30-45wg/g培養(yǎng)基添加亞硒酸鈉，使混合物含水為55-65機(jī)％，分裝在廣口玻璃瓶
中，每瓶裝量為1-2 kg (按千重u'算)，封口，用高壓滅菌鍋12rc蒸40分鐘，冷卻。
3) 接種培養(yǎng)
將高壓滅菌鍋蒸熟的培養(yǎng)基冷卻至35-4(TC ，按培養(yǎng)基重量的10-2OK接種液休種子， 23-27'C恒溫、-咅養(yǎng)IO-20天，茼索呈灰白色為止，-般生長至容器底部。4)經(jīng)常規(guī)方法檢測硒多糖含量達(dá)到5-15mg/g培養(yǎng)物，硒多糖中硒含量為150-200 y g/g
權(quán)利要求
1.一種制備蜜環(huán)菌硒多糖的培養(yǎng)基，其特征在于，由以下成分組成5-15wt％麩皮、50-85wt％大米、4-18wt％紅薯、0.4-2wt％大豆，55-65wt％水，無機(jī)硒30-45μg/g培養(yǎng)基。
2 根據(jù)權(quán)利要求l所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的無機(jī)硒是亞硒 酸鹽或硒酸鹽。
3 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的無機(jī)硒是亞硒酸鈉。
4 一種蜜環(huán)菌硒多糖的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括以下步驟1) 制備液體種子經(jīng)蜜環(huán)菌菌種分離、斜面菌種培養(yǎng)、液體培養(yǎng)，獲得液體種子；2) 固體培養(yǎng)基的配制將5-15wt。/。麩皮、50-85wt。/。大米、4-18wt。/。紅薯、0. 4-2wt。/。大豆，分別用水浸潤透，然 后混合，按照30-45yg/g培養(yǎng)基添加無機(jī)硒，最后使混合物含水為55-65wt。/。，用高壓滅菌鍋 121。C蒸40分鐘，冷卻；3) 接種培養(yǎng)將高壓滅菌的培養(yǎng)基冷卻至35-4(TC，按固體培養(yǎng)基重量的10-20%接種液體種子， 23-27。C恒溫、培養(yǎng)10-20天，菌索呈灰白色為止。
5 根據(jù)權(quán)利要求4所述的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述的無機(jī)硒是亞 硒酸鹽或硒酸鹽。
6 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的無機(jī)硒是亞硒酸鈉。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備蜜環(huán)菌硒多糖的培養(yǎng)基及生產(chǎn)方法，包括以下步驟1)制備液體種子；2)固體培養(yǎng)基的配制將5-15wt％麩皮、50-85wt％大米、4-18wt％紅薯、0.4-2wt％大豆，分別用水浸潤透，然后混合，按照30-45μg/g培養(yǎng)基添加無機(jī)硒，使混合物含水為55-65wt％，用高壓滅菌鍋121℃蒸40分鐘，冷卻；3)接種培養(yǎng)將高壓滅菌鍋蒸熟的培養(yǎng)基冷卻至35-40℃，按培養(yǎng)基重量的10-20％接種液體種子，23-27℃恒溫、培養(yǎng)10-20天，菌索呈灰白色為止。本發(fā)明方法生產(chǎn)蜜環(huán)菌硒多糖產(chǎn)量高、硒多糖中硒的富集量高、原料廉價、質(zhì)量穩(wěn)定、生產(chǎn)效率高、方法簡單易行；制備的硒多糖含量達(dá)到5-15mg/g培養(yǎng)物，硒多糖中硒含量為150-200μg/g，為固態(tài)發(fā)酵合成蜜環(huán)菌硒多糖提供了一條新的途徑。
文檔編號C12P19/04GK101671709SQ20091030820
公開日2010年3月17日 申請日期2009年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月12日
發(fā)明者肖和艾, 胡汝曉, 譚周進(jìn) 申請人:譚周進(jìn)