專利名稱：雙菌共培養(yǎng)制備復(fù)合生物菌劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明具體涉及一種雙菌共培養(yǎng)制備復(fù)合生物菌劑的方法，屬于生物發(fā)酵領(lǐng)域，是采用兩種不同功能性微生物，在同一個發(fā)酵器內(nèi)，共同培養(yǎng)，最終得到一種制劑，含有兩種微生物的產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
復(fù)合微生物制劑，被認(rèn)為是具有微生物復(fù)合功能的產(chǎn)品。雙菌共培養(yǎng)，其意義還在于兩者以彼此的生命活動，產(chǎn)生的物質(zhì)或造成的環(huán)境，相互依存，相互獲益。這類產(chǎn)品以微生態(tài)復(fù)合制劑為代表廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健、農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)等領(lǐng)域。雙菌的組合和共培養(yǎng)的條件，始終是菌劑質(zhì)量的技術(shù)關(guān)鍵。就發(fā)明人所知，目前還沒有相關(guān)技術(shù)產(chǎn)品的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為彌補(bǔ)以上不足，提供一種廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健、農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)等領(lǐng)域，其生理活性具有明顯增強(qiáng)的優(yōu)勢的一種雙菌共培養(yǎng)制備復(fù)合生物菌劑的方法。主要技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的采用兩種不同功能性微生物，在同一個發(fā)酵器內(nèi)，共同培養(yǎng)。依靠兩種微生物彼此的生命活動，產(chǎn)生的物質(zhì)或造成的環(huán)境，相互依存，相互獲益。同時獲得一種制劑，含有兩種微生物的產(chǎn)品。雙菌共培養(yǎng)制備復(fù)合生物菌劑的方法，包括功能菌種的培養(yǎng)、選擇和組合，培養(yǎng)基配方和制備、培養(yǎng)條件的控制和設(shè)計，其特征在于根據(jù)菌種的生理特點(diǎn)分別采取生長速度和周期各異、彼此營養(yǎng)互補(bǔ)、能共寓于同一環(huán)境的兩種微生物，經(jīng)過共培養(yǎng)，獲得含有兩種功能菌及其代謝物的產(chǎn)品。所述的菌種包括芽孢桿菌屬、乳酸菌屬、酵母菌屬、醋酸菌屬、固氮菌屬、根瘤菌屬等多種微生物。具有產(chǎn)多種活性酶、多種有機(jī)酸、維生素及固氮、解磷、解鉀、抗蟲、抗病、刺激生長的功能。應(yīng)用在農(nóng)業(yè)，能有效地改善作物營養(yǎng)，提高抗逆性，改善品質(zhì)，增加產(chǎn)量。所述的共培養(yǎng)，是采用發(fā)酵工業(yè)通用的液體深層培養(yǎng)罐，根據(jù)各菌種的需要選擇適宜生長的培養(yǎng)基，通氣條件培養(yǎng)，菌體達(dá)最大數(shù)量，成熟放罐。所述的共培養(yǎng)，也可以根據(jù)需要，采用液體深層靜置培養(yǎng)，根據(jù)各菌種要求選擇適宜培養(yǎng)基，主要是在厭氧條件下使其發(fā)酵，獲得一定數(shù)量的活菌和發(fā)酵產(chǎn)物。所述菌種制備方法用的斜面培養(yǎng)基具有如下組份及較佳重量配比蛋白胨8 12g牛肉膏4 6g葡萄糖I 3g瓊脂12 20g蒸懼水1L。所述的菌種液體培養(yǎng)用的培養(yǎng)基具有如下組份及較佳重量配比大豆水解物10 30g蛋白胨4 IOg鹿糖16 24g KH2P043 8gMgS04l 6g水IL0所述的菌種液體深層靜置培養(yǎng)用的培養(yǎng)基，具有如下組份及較佳重量配比鹿糖10 30g 蛋白胨 4 IOg 酵母膏 5_10g KH2P045 IOg MgSO4I 6g 水 1L。本發(fā)明的積極效果是在同一培養(yǎng)器內(nèi)，通過雙菌共培養(yǎng)，獲得一種具有兩種功能微生物的產(chǎn)品。提高了生產(chǎn)效率,大大節(jié)約了生產(chǎn)成本。
與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明首先將兩種特定功能的微生物，共培養(yǎng)于同一培養(yǎng)器，同時獲得兩種微生物的活體細(xì)胞及代謝產(chǎn)物。與單獨(dú)分別培養(yǎng)，其生理活性具有明顯增強(qiáng)的優(yōu)勢。本發(fā)明實(shí)施效果復(fù)合生物菌劑與單獨(dú)巨大芽孢桿菌對土壤中水溶性磷含量的影響(接種后10晝夜)
水溶性磷
理(mg/ IOOg 土壤)
項目 -—-
對照6單獨(dú)巨大芽孢桿菌13復(fù)合菌17實(shí)驗結(jié)果表明，復(fù)合菌組接種于土壤后10晝夜，土壤水溶性磷不但遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過對照，而且比單獨(dú)接種巨大芽孢桿菌的土壤水溶性磷增加了 30. 8%。復(fù)合生物菌劑與單獨(dú)固氮菌對土壤固氮能力的影響的比較
項固氮量(利用Ig糖所固定的mg數(shù)) 目對照單獨(dú)復(fù)合復(fù)合菌組比復(fù)合菌組比 固氮菌菌組對照±%單 測定時獨(dú)固氮菌±%
間
5 晝夜4.1 6.0 7.2+75.6+20
10 晝夜3.7 5.6 7.0+89.2+25
15 晝夜3.8 5.3 7.0+84.2+22. I將復(fù)合菌劑與固氮菌分別接種于未經(jīng)滅菌的土壤中，以不接菌為對照。經(jīng)5、10、15、晝夜的培養(yǎng)，取各處理及對照土壤Ig接種到被Dobere i ner無氮培養(yǎng)基浸濕的石英砂上(每皿放石英砂25g)，在第10晝夜測定所固定的氮量。實(shí)驗結(jié)果表明，復(fù)合菌劑接種的土壤，經(jīng)5、10、15、晝夜培養(yǎng)所固定的氮量分別比對照增加75. 6%、89. 2%和、84. 2%，分別比單獨(dú)接種固氮菌時增加20%、25%和22. 1%
具體實(shí)施例方式實(shí)例I.斜面菌種巨大芽孢桿菌①，固氮菌②試管斜面，于25-32 °C恒溫培養(yǎng)，24_72h。菌種懸液將菌種①②試管斜面，分別倒入無菌水，刮取菌苔，制備菌懸液。菌種混合將菌種①②的菌懸液，按比例混合。液體培養(yǎng)基菌種液體培養(yǎng)用的培養(yǎng)基具有如下組份及重量配比大豆水解物10 30g蛋白胨4 IOg鹿糖16 24gKH2P043 8g MgSO4I 6g水IL0滅菌0·12-0. 15Mpa，121_125°C，蒸汽滅菌 30 分鐘。 接種將菌種懸液接入滅菌的培養(yǎng)基中。培養(yǎng)25-32°C，罐壓O. 04-0. 05Mpa,培養(yǎng) 36_72h。實(shí)例2.斜面菌種乳酸菌③，芽孢菌④試管斜面于25-38 °C恒溫培養(yǎng)，24_72h。菌種懸液將菌種③④試管斜面，分別倒入無菌水，刮取菌苔，制備菌懸液。菌種混合將菌種③④的菌懸液，按比例混合。液體培養(yǎng)基鹿糖10 30g蛋白胨4 IOg酵母膏5-10g KH2P045 IOg MgSO4I 6g 水 IL滅菌0·12-0. 15Mpa，121_125°C，蒸汽滅菌 30 分鐘。接種將菌種懸液接入滅菌的培養(yǎng)基中。培養(yǎng)25-32°C，培養(yǎng) 2_7d。
權(quán)利要求
1.雙菌共培養(yǎng)制備復(fù)合生物菌劑的方法，包括功能菌種的選擇、組合和培養(yǎng)，培養(yǎng)基配方和制備、培養(yǎng)條件的控制和設(shè)計，其特征在于根據(jù)菌種的生理特點(diǎn)分別采取生長速度和周期各異、彼此營養(yǎng)互補(bǔ)、能共寓于同一環(huán)境的兩種微生物，經(jīng)過共培養(yǎng)，獲得含有兩種功能菌及其代謝物的產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的雙菌共培養(yǎng)制備復(fù)合生物菌劑的方法，其特征在在于功能菌種的選擇，采用包括芽孢桿菌屬、乳酸菌屬、酵母菌屬、醋酸菌屬、固氮菌屬、根瘤菌屬等多種微生物。具有產(chǎn)多種活性酶、多種有機(jī)酸、維生素及固氮、解磷、解鉀、抗蟲、抗病、刺激生長的功能。應(yīng)用在農(nóng)業(yè)，能有效地改善作物營養(yǎng)，提高抗逆性，改善品質(zhì)，增加產(chǎn)量。選擇好氧培養(yǎng)方式，雙菌培養(yǎng)。雙菌培養(yǎng)的接種比例0. 1-2 1-10。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙菌共培養(yǎng)制備復(fù)合生物菌劑的方法，其特征在在于功能菌種的培養(yǎng)基中具有大豆水解物及各組分的比例大豆水解物10 50g蛋白胨4 IOg蔗糖16 24g KH2P043 8g MgSO4I 6g 水 1L。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙菌共培養(yǎng)制備復(fù)合生物菌劑的方法，其特征在在于菌種培養(yǎng)采用菌種在生命活動中，能產(chǎn)生多種活性酶及次生代謝產(chǎn)物，如多種有機(jī)酸、小分子肽、維生素、低聚糖類物質(zhì)的微生物。選擇深層靜置的厭氧培養(yǎng)方式，復(fù)合培養(yǎng)。接種量配比I 5-40。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙菌共培養(yǎng)制備復(fù)合生物菌劑的方法，其特征在在于深層靜置的厭氧培養(yǎng)基電具有以下組分和重量配比蔗糖10 30g蛋白胨4 IOg酵母膏5-10gKH2P045 IOg MgSO4I 6g 水 1L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種雙菌共培養(yǎng)制備復(fù)合生物菌劑的方法，其特點(diǎn)是采用兩種不同功能性微生物，在同一個發(fā)酵器內(nèi)，共同培養(yǎng)。依靠兩種微生物彼此的生命活動，產(chǎn)生的物質(zhì)或造成的環(huán)境，相互依存，相互獲益。同時獲得一種制劑，含有兩種微生物的產(chǎn)品，根據(jù)菌種的生理特點(diǎn)分別采取生長速度和周期各異、彼此營養(yǎng)互補(bǔ)、能共寓于同一環(huán)境的兩種微生物，經(jīng)過共培養(yǎng)，獲得含有兩種功能菌及其代謝物的產(chǎn)品。與單獨(dú)培養(yǎng)相比，具有提高了生產(chǎn)效率，降低了生產(chǎn)成本。并且明顯增強(qiáng)了施用效果的優(yōu)點(diǎn)，適應(yīng)于土壤水溶性磷的增加和對土壤固氮能力的增加。
文檔編號C12N1/20GK102816709SQ20111015014
公開日2012年12月12日 申請日期2011年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月7日
發(fā)明者高淑英, 靳慶生, 郭好禮, 梁紹芬 申請人:山西昌鑫生物農(nóng)業(yè)科技有限公司