基于20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的法醫(yī)學(xué)復(fù)合檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于法醫(yī)遺傳學(xué)領(lǐng)域，具體涉及基于20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的法醫(yī)學(xué)復(fù)合檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是實(shí)現(xiàn)利用多重插入缺失遺傳標(biāo)記對(duì)人類(lèi)生物學(xué)檢材進(jìn)行法醫(yī)學(xué)親緣關(guān)系鑒定和個(gè)人識(shí)別。本發(fā)明的技術(shù)方案是基于20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的法醫(yī)學(xué)復(fù)合檢測(cè)試劑盒，包括分離包裝的復(fù)合擴(kuò)增引物混合物、等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物混合物；所述復(fù)合擴(kuò)增引物混合物，包含了20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的共計(jì)41條擴(kuò)增引物；所述的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物混合物由20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物構(gòu)成，包括63個(gè)熒光素標(biāo)記DNA片段。本發(fā)明試劑盒為法醫(yī)學(xué)上的親權(quán)鑒定及個(gè)人識(shí)別提供了一種新的技術(shù)手段。
【專利說(shuō)明】基于20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的法醫(yī)學(xué)復(fù)合檢測(cè)試劑
合
Si 【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于法醫(yī)遺傳學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及基于20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的法醫(yī)學(xué)復(fù)合檢測(cè)試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]法醫(yī)遺傳學(xué)通過(guò)對(duì)生物性檢材進(jìn)行DNA遺傳標(biāo)記的檢測(cè)來(lái)實(shí)現(xiàn)親子鑒定和個(gè)人識(shí)別。插入缺失多態(tài)性遺傳標(biāo)記(insertion/delection polymorphism, Indels)是由人類(lèi)基因組單點(diǎn)突變產(chǎn)生，即基因組中特定堿基位置一定數(shù)量的核苷酸插入或缺失，造成DNA片段長(zhǎng)度變化形成的多態(tài)性遺傳標(biāo)記。它在人類(lèi)基因組中分布廣泛，其分布密度僅次于單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNPs)。Indels 和 SNPs 同屬二等位基因多態(tài)性遺傳標(biāo)記，并且同樣具有遺傳穩(wěn)定、突變率低、擴(kuò)增片段小的特點(diǎn)，在幫助解決法醫(yī)學(xué)親子鑒定及個(gè)體識(shí)別中的突變疑難案例及腐敗疑難檢材的檢測(cè)方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。另一方面，插入缺失多態(tài)性遺傳標(biāo)記與短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeats, STRs) 一樣，為DNA長(zhǎng)度多態(tài)性，可采用與其相同的檢測(cè)技術(shù)，因此與目前法醫(yī)實(shí)驗(yàn)室通用的熒光標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)完全共平臺(tái)，易于在法醫(yī)實(shí)驗(yàn)室中推廣應(yīng)用。由于插入缺失多態(tài)性遺傳標(biāo)記在法醫(yī)物證學(xué)中有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，因而成為該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，目前國(guó)外已有二個(gè)商業(yè)化試劑盒DIPplex kit30和38-1ndel multiplex assay得以開(kāi)發(fā)運(yùn)用，它們分別能檢測(cè)30和38個(gè)插入缺失多態(tài)性遺傳標(biāo)記。
[0003]然而，由于Indels和SNPs—樣，是二等位基因，在識(shí)別力上存在局限性。二等位基因遺傳標(biāo)記的信息量與具有多等位基因的STR遺傳標(biāo)記差距較大，至少需要50-60個(gè)單基因座才能達(dá)到13-15個(gè)常用STR的累計(jì)個(gè)人識(shí)別率和非父排除率。而大量二等位基因遺傳標(biāo)記的復(fù)合擴(kuò)增，不僅增加了檢測(cè)成本，且大大增加了復(fù)合檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析的難度。并且二等位基因無(wú)法提示混合樣本中多個(gè)來(lái)源個(gè)體的存在，無(wú)法用于混合樣本的分析。
[0004]人類(lèi)基因組中存在少數(shù)緊密相鄰的Indel標(biāo)記，若能將這些含有兩個(gè)以上緊密相鄰的Indel基因座人為地設(shè)計(jì)為一個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記，這種遺傳標(biāo)記將可能具有兩個(gè)以上的等位基因，從而成為獨(dú)特的多等位基因Indel遺傳標(biāo)記，其個(gè)體識(shí)別力及非父排除率能相應(yīng)得以提高。由于多重插入缺失擴(kuò)增產(chǎn)物中等位基因數(shù)量增加，則可以用相對(duì)少數(shù)的遺傳標(biāo)記獲得較高的效能，達(dá)到效能提高而成本降低的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服單個(gè)Indel 二等位基因遺傳標(biāo)記識(shí)別力不足的缺點(diǎn)，篩選由多個(gè)緊密相鄰的二等位基因Indel多態(tài)性構(gòu)成的具有多個(gè)等位基因的多重插入缺失遺傳標(biāo)記，運(yùn)用這種相對(duì)較少的新遺傳標(biāo)記建立一個(gè)高效能的檢測(cè)體系，為法醫(yī)疑難親緣關(guān)系鑒定和個(gè)人識(shí)別提供一種新工具。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種基于20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的法醫(yī)學(xué)復(fù)合檢測(cè)試劑盒，包括分離包裝的復(fù)合擴(kuò)增引物混合物、等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物混合物；所述復(fù)合擴(kuò)增引物混合物，包含了 20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的共計(jì)41條擴(kuò)增引物；所述的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物混合物由20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物構(gòu)成，包括63個(gè)熒光素標(biāo)記DNA片段，對(duì)應(yīng)20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的所有已知63個(gè)等位基因。
[0007]進(jìn)一步的，所述的41條擴(kuò)增引物的核苷酸序列如表3所示:
[0008]表3 41條擴(kuò)增引物核苷酸序列
[0009]
【權(quán)利要求】
1.基于20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的法醫(yī)學(xué)復(fù)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于:包括分離包裝的復(fù)合擴(kuò)增引物混合物、等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物混合物；所述復(fù)合擴(kuò)增引物混合物，包含了 20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的共計(jì)41條擴(kuò)增引物；所述的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物混合物由20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物構(gòu)成，包括63個(gè)熒光素標(biāo)記DNA片段，對(duì)應(yīng)20個(gè)多重插入缺失遺傳標(biāo)記的所有已知63個(gè)等位基因。
2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于:所述的41條擴(kuò)增引物的核苷酸序列如表I所示: 表1 41條擴(kuò)增引物核苷酸序列
3.如權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于:所述等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物的核苷酸序列如表2所示: 表2等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103468800SQ201310372860
【公開(kāi)日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年8月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月23日
【發(fā)明者】侯一平, 黃健, 顏靜, 羅海玻, 魏蔚, 張, 云利兵, 李英碧 申請(qǐng)人:四川大學(xué)