成人的髓母細胞瘤細胞系及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種成人的髓母細胞瘤細胞系XQ625，保藏號為CCTCC?No：C2013171；該細胞系是從發(fā)生于成人小腦蚓部的經(jīng)典型髓母細胞瘤手術(shù)切除標本中分離培養(yǎng)獲得，在體外能夠長期傳代培養(yǎng)，在裸鼠體內(nèi)1×104個細胞即能起始腫瘤的發(fā)生；該細胞系既有助于滿足對髓母細胞瘤的深入研究需要，又是研制抗髓母細胞瘤藥物的有力工具，具有潛在良好的應(yīng)用前景。
【專利說明】成人的髓母細胞瘤細胞系及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于細胞生物學(xué)領(lǐng)域，涉及一種腫瘤細胞系。
【背景技術(shù)】
[0002]髓母細胞瘤是兒童最常見的惡性腦腫瘤，發(fā)病高峰年齡為8歲；僅30%的髓母細胞瘤發(fā)生于成人。由于發(fā)病率較低，目前全世界已有的髓母細胞瘤細胞系非常有限，僅有Daoy, D283、D341Med、BO-U MED-FU, 0NS-76 和 0NS-81 幾種，且均來源于兒童。近年來，隨著對髓母細胞瘤研究的深入，大量證據(jù)表明，兒童和成人的髓母細胞瘤在遺傳背景及臨床預(yù)后等方面均有不同。例如，成人的髓母細胞瘤通常發(fā)生于小腦半球，而兒童的髓母細胞瘤多發(fā)生于小腦蚓部；成人的髓母細胞瘤組織學(xué)類型上多以促結(jié)締組織增生型為主，且比兒童的髓母細胞瘤預(yù)后更差。因此，有必要分離并建立一系列具有不同生物學(xué)特性的髓母細胞瘤細胞系，以滿足對髓母細胞瘤及其治療藥物的深入研究需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于分離并建立具有不同生物學(xué)特性的髓母細胞瘤細胞系，以滿足對髓母細胞瘤及其治療藥物的深入研究需要。
[0004]經(jīng)研究，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
[0005]成人的髓母細胞瘤細胞系XQ625，保藏號為CCTCC No:C2013171。
[0006]發(fā)明人收集了 2011-2013年間中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院術(shù)前診斷疑是髓母細胞瘤的13例標本，手術(shù)中取材進行原代細胞的培養(yǎng)。術(shù)后病理診斷為髓母細胞瘤的5例標本(MB1-MB5)均在體外成功分離培養(yǎng)原代髓母細胞瘤細胞，并規(guī)律傳代。在傳代培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)，隨著傳代次數(shù)的增加，細胞的增殖能力逐漸減弱，4例原代髓母細胞瘤細胞在培養(yǎng)十幾代后細胞的分化現(xiàn)象非常明顯，細胞生長停滯，僅I例原代髓母細胞瘤細胞(MB4)可以連續(xù)傳代，由此建立了穩(wěn)定的髓母細胞瘤細胞系XQ625。
[0007]髓母細胞瘤細胞系XQ625來源于成人，發(fā)生于小腦蚓部，其病理診斷依據(jù)2007年WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類屬于經(jīng)典型髓母細胞瘤。
[0008]對XQ625細胞的生物學(xué)特性研究發(fā)現(xiàn):細胞的倍增時間為42小時；細胞周期為G1期占53.93%，G2期占16.07%, S期占30.00% ;在裸鼠體內(nèi)，I X IO4個XQ625細胞即能起始腫瘤的發(fā)生；移植瘤細胞呈彌散分布，細胞小而圓，核漿比大，核分裂相易見，胞漿少，胞漿內(nèi)細胞器少，可見核糖體及線粒體，呈較原始的未分化狀態(tài)；免疫組化標記Vimentin呈陽性，Κ?67 約 95% 細胞呈陽性，其余免疫組化標記 CD99、CgA、GFAP、Pan-CK、Syn、LCA、EMA、Desmin和S-100均為陰性。
[0009]本發(fā)明的成人髓母細胞瘤細胞系XQ625可以用于制備或篩選抗髓母細胞瘤的藥物。例如，通過體外實驗篩選出具有抑制或殺傷XQ625細胞的抗體，可將此抗體作為治療髓母細胞瘤藥物的主要成分，或篩選出特異識別XQ625細胞的抗體作為靶向工具，制備抗髓母細胞瘤的靶向藥物。[0010]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明在對5例髓母細胞瘤原代進行細胞培養(yǎng)的過程中，成功建立了一株發(fā)生于成人的髓母細胞瘤細胞系，并對其細胞生物學(xué)特性進行了研究，該細胞系在體外能夠長期傳代培養(yǎng)，在裸鼠體內(nèi)IXlO4即能起始腫瘤的發(fā)生，既有助于滿足對髓母細胞瘤的深入研究需要，又是研制抗髓母細胞瘤藥物的有力工具，具有潛在良好的應(yīng)用前景。
[0011]生物材料保藏
[0012]成人的髓母細胞瘤細胞系XQ625，于2013年11月5日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC，地址:中國.武漢.武漢大學(xué))，保藏號為CCTCC No:C2013171o
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖進行說明:
[0014]圖1為髓母細胞瘤原代標本的HE染色，其中A-E分別為MB1-MB5腫瘤組織HE染色，放大倍數(shù)X 200 ；F-J分別為MB1-MB5腫瘤組織HE染色，放大倍數(shù)X 400。
[0015]圖2為髓母細胞瘤原代細胞的倒置相差顯微鏡觀察，其中A-E分別為MB1-MB5髓母細胞瘤原代細胞培養(yǎng)的形態(tài)特征，放大倍數(shù)X 100。
[0016]圖3為不同代數(shù)P1、P21和P41的髓母細胞瘤細胞XQ625的倒置相差顯微鏡觀察，其中A-C分別為XQ625細胞P1、P21和P41的形態(tài)特征，放大倍數(shù)X 100 ;D_F分別為XQ625細胞P1、P21和P41的形態(tài)特征，放大倍數(shù)X 200。
[0017]圖4為髓母細胞瘤細胞XQ625的生長曲線和細胞周期檢測，其中A為CCK8檢測XQ625細胞的生長曲線，B為細 胞周期試劑盒流式檢測XQ625細胞的細胞周期。
[0018]圖5為髓母細胞瘤細胞XQ625的核型分析結(jié)果。
[0019]圖6為髓母細胞瘤細胞XQ625的裸鼠皮下成瘤，其中A為不同數(shù)量級XQ625細胞所成瘤的大小，B為不同數(shù)量級XQ625細胞所成瘤的重量。
[0020]圖7為XQ625移植瘤HE染色及免疫組化染色，其中A為HE染色，B-J分別為vimentin、Ki67、CD99、CgA、GFAP, Pan-CK, Syn, LCA, EMA, Desmin、S-100 免疫組化染色，放大倍數(shù)均為X 400。
[0021]圖8為XQ625移植瘤電鏡觀察，其中A顯示瘤細胞較小，大小形態(tài)比較一致，核漿比大，可見一核分裂相出顯示瘤細胞核膜較光滑，可見核仁，胞漿少，胞漿內(nèi)細胞器少，可見核糖體及線粒體。
【具體實施方式】
[0022]下面將結(jié)合附圖，對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行詳細的描述。優(yōu)選實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照試劑制造廠商所建議的條件進行。
[0023]實施例中使用的主要設(shè)備如下:
[0024]
設(shè)備名稱I生產(chǎn)商(產(chǎn)地)
光學(xué)顯微鏡，BX-40型Olympus公司(日本)
【權(quán)利要求】
1.成人的髓母細胞瘤細胞系XQ625，保藏號為CCTCCNo:C2013171。
2.權(quán)利要求1所述成人的髓母細胞瘤細胞系XQ625在制備或篩選抗髓母細胞瘤的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12N5/09GK103695371SQ201310722702
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月24日
【發(fā)明者】任勇, 卞修武, 崔有宏 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院