一種優(yōu)化的β-甘露聚糖酶基因MAN及其畢赤酵母表達(dá)載體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及優(yōu)化的β-甘露聚糖酶基因MAN及其畢赤酵母表達(dá)載體。本申請(qǐng)對(duì)核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的β-甘露聚糖酶基因進(jìn)行改造，得到優(yōu)化基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。構(gòu)建了優(yōu)化β-甘露聚糖酶基因的重組畢赤酵母表達(dá)載體并將其轉(zhuǎn)化到畢赤酵母感受態(tài)細(xì)胞X33中篩選得到高效表達(dá)β-甘露聚糖酶的轉(zhuǎn)β-甘露聚糖酶畢赤酵母菌株；酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定表明，優(yōu)化的β-甘露聚糖酶基因能在畢赤酵母中穩(wěn)定、高效的表達(dá)及遺傳，所表達(dá)的β-甘露聚糖酶酶活性以及穩(wěn)定性顯著高于原始β-甘露聚糖酶基因畢赤酵母中所表達(dá)的β-甘露聚糖酶的酶活性及穩(wěn)定性。
【專利說明】—種優(yōu)化的β -甘露聚糖酶基因MAN及其畢赤酵母表達(dá)載體
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地涉及一種優(yōu)化的甘露聚糖酶基因MAN及其畢赤酵母表達(dá)載體。
【背景技術(shù)】
[0002]在豆類、谷類及其副產(chǎn)品中普遍存在著一種抗?fàn)I養(yǎng)因子一β-甘露聚糖，它具有極強(qiáng)的吸水性，在單胃動(dòng)物消化道內(nèi)易形成凝膠狀，影響營養(yǎng)物質(zhì)與消化液的接觸，降低了飼料利用率。而β_甘露聚糖酶是一類能夠特異性降解β_甘露聚糖的水解酶，屬于半纖維素酶類。水解的底物有半乳甘露聚糖、葡萄甘露聚糖、半乳葡萄甘露聚糖和甘露聚糖，產(chǎn)物有少量的單糖和2-10個(gè)單糖分子構(gòu)成的寡糖。能有效降低消化道內(nèi)容物黏度；而且，其分解β -甘露聚糖產(chǎn)生的甘露低聚糖，能作為雙歧桿菌的增殖因子、促進(jìn)腸道內(nèi)有益菌群的增殖，提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能。β -甘露聚糖酶一方面可以提高飼料消化利用率，擴(kuò)大飼料原料來源，緩解飼用原料短缺的局面；另一方面可減少養(yǎng)殖的糞便排出量及替代部分抗生素，從而減少對(duì)環(huán)境的污染及避免藥物殘留。
[0003]β -甘露聚糖酶是一種廣譜誘導(dǎo)型多功能酶，國內(nèi)外現(xiàn)主要用于造紙工業(yè)紙漿的漂白、油井的破膠、降解植物膠生產(chǎn)低聚糖用作雙歧桿菌促生長因子，防病抗衰老的保健食品以及飼料工業(yè)中作為抗?fàn)I養(yǎng)因子。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的之一是提供一種優(yōu)化的β -甘露聚糖酶基因，優(yōu)化后的序列GC含量由原來的0.56減少到0.54 ；CAI值有原來的0.68提高到0.81。
[0005]本發(fā)明的另一目的是提供有優(yōu)化的β_甘露聚糖酶基因的重組畢赤酵母表達(dá)載體。
[0006]本發(fā)明的另一目的是提供有優(yōu)化的β_甘露聚糖酶基因的重組菌株。
[0007]本發(fā)明對(duì)核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示的β -甘露聚糖酶基因進(jìn)行優(yōu)化。
[0008]SEQ ID N0.1:
[0009]I CTGCCGAAAGCATCCCCTGCACCGAGCACCAGCAGCAGTGCTGCCTCCACCTCCTTCGCT
[0010]61 AGCACCTCCGGCCTCCAATTCACCATTGATGGCGAAACTGGCTACTTCGCCGGAACGAAC
[0011]121 AGCTACTGGATCGGTTTCCTCACTGACAACGCGGACGTCGACCTCGTCATGGGCCACCTG
[0012]181 AAGTCGTCCGGCCTCAAGATCCTCCGCGTGTGGGGCTTCAACGATGTCACCTCGCAGCCC
[0013]241 TCCTCCGGCACAGTTTGGTACCAACTGCACCAGGACGGCAAATCGACAATCAACACGGGT
[0014]30I GCCGACGGTCTCCAGCGCCTCGACTACGTCGTCTCGTCTGCCGAACAGCACGACATCAAA
[0015]361 CTCATCATCAACTTCGTCAACTACTGGACCGATTACGGTGGTATGTCTGCGTACGTGAGC
[0016]421 GCGTATGGCGGATCCGGCGAGACGGATTTCTATACCAGTGATACCATGCAGAGTGCCTAT
[0017]481 CAGACATATATCAAGACGGTCGTGGAGCGGTACAGTAACTCCTCGGCGGTGTTTGCGTGG
【權(quán)利要求】
1.一種優(yōu)化的β -甘露聚糖酶基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示。
2.β -甘露聚糖酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。
3.β -甘露聚糖酶，其特征在于，其由如SEQ ID N0.1或SEQ ID N0.3所示的核苷酸序列編碼。
4.包含權(quán)利要求1所述的優(yōu)化的β-甘露聚糖酶基因的重組載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體為pPICZa A- β -MAN。
6.包含權(quán)利要求1所述的β-甘露聚糖酶基因的重組菌株。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的重 組菌株，其特征在于，所述菌株為重組畢赤酵母菌。
【文檔編號(hào)】C12R1/84GK103898133SQ201410147753
【公開日】2014年7月2日 申請(qǐng)日期:2014年4月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月14日
【發(fā)明者】聶金梅, 李陽源, 胡愛紅, 鐘開新, 周銀華 申請(qǐng)人:廣東溢多利生物科技股份有限公司