一種藏羊血中抗氧化多肽的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種藏羊血中抗氧化多肽的制備方法，該方法包括以下步驟：⑴在藏羊檢疫合格后屠宰得到的血液中加入檸檬酸鈉或三聚磷酸鈉，混合均勻后過(guò)濾，得到澄清液，該澄清液經(jīng)真空冷凍干燥后得到藏羊血清粉；⑵將藏羊血清粉配成底物濃度為5%~8%的藏羊血清液，經(jīng)消化處理、過(guò)濾，得到藏羊血水溶液，該水溶液升溫至80~85℃時(shí)恒溫10~15min，即得預(yù)處理后的藏羊血水溶液；⑶預(yù)處理后的藏羊血水溶液加氫氧化鈉溶液調(diào)pH值后加復(fù)合酶水解，得到酶解液；⑷酶解液經(jīng)滅酶處理后離心，得到上清液A；⑸上清液A中加活性炭脫色后離心，得到上清液B；⑹上清液B經(jīng)干燥，即得水分小于5%的粉末狀藏羊抗氧化血肽。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，所得產(chǎn)品水解度和抗氧化活性顯著提高。
【專利說(shuō)明】一種藏羊血中抗氧化多肽的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種藏羊血中抗氧化多肽的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 現(xiàn)代科學(xué)研究表明，生物體的衰老過(guò)程是機(jī)體的組織細(xì)胞不斷產(chǎn)生的自由基積累 結(jié)果，自由基可以引起DNA損傷從而導(dǎo)致突變，誘發(fā)腫瘤形成。自由基是正常代謝的中間產(chǎn) 物，其反應(yīng)能力很強(qiáng)，可使細(xì)胞中的多種物質(zhì)發(fā)生氧化，損害生物膜，能夠使蛋白質(zhì)、核酸等 大分子交聯(lián)，影響其正常功能；破壞蛋白質(zhì)，破壞體內(nèi)的酶，導(dǎo)致炎癥和衰老；破壞脂肪，使 脂質(zhì)過(guò)氧化，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化，發(fā)生心腦血管疾病；破壞碳水化合物，使透明質(zhì)酸降解，導(dǎo) 致關(guān)節(jié)炎等。要降低自由基對(duì)人體的危害，除了依靠體內(nèi)自由基清除系統(tǒng)外，還要尋找和發(fā) 掘具有抗氧化作用的物質(zhì)，其途徑一種是利用化學(xué)合成抗氧化劑(如BHA、BHT等)，但在體內(nèi) 有一定的蓄積性而引起安全問(wèn)題，應(yīng)用受到限制；另一個(gè)途徑天然抗氧化劑，如VE能有效 保持食品中油脂的穩(wěn)定性，但不利于食品的保存。為此，從動(dòng)植物資源中開(kāi)發(fā)天然、安全的 抗氧化劑成為當(dāng)今社會(huì)的研究熱點(diǎn)。
[0003] 人體的免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵御外來(lái)細(xì)菌、病毒、化學(xué)毒物侵犯的一個(gè)重要防御系統(tǒng)。 它由兩部分組成：細(xì)胞免疫與體液免疫。蛋白肽對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)最敏感、最直接的表現(xiàn)是： 蛋白肽是維持免疫細(xì)胞功能的核心物質(zhì)，以細(xì)胞免疫中最重要的淋巴細(xì)胞為例，當(dāng)受抗原 細(xì)胞的活化后，能迅速增殖并合成大量的抗體，對(duì)蛋白肽的需求能迅速增加，但是體內(nèi)儲(chǔ)存 的蛋白肽是有限的，不能滿足需求。而在這時(shí)補(bǔ)充外源性蛋白肽能及時(shí)提供細(xì)胞活化后所 需的能量和原料物質(zhì)，從而產(chǎn)生大量的免疫細(xì)胞和抗體，使機(jī)體的免疫力迅速得到提高。外 源性蛋白肽可促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增生，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬活性和殺傷能力。在年老體弱及 營(yíng)養(yǎng)不良致使機(jī)體免疫功能受到抑制時(shí)，補(bǔ)充蛋白肽可恢復(fù)正常的免疫功能。人體在特定 的生理?xiàng)l件下（如外科手術(shù)、敗血癥、燒傷等）補(bǔ)充外源性蛋白肽，不僅可增強(qiáng)機(jī)體的免疫 功能，更有助于維持細(xì)胞和體液的免疫應(yīng)答，還能解除免疫抑制。
[0004] 藏羊是青藏高原的優(yōu)勢(shì)動(dòng)物，藏羊血中含有豐富的蛋白質(zhì)，是一種理想的蛋白質(zhì) 資源，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，素有"液態(tài)肉"之稱。從藏羊血液中制備生物活性肽，可用于制 造適合特定人群的保健食品以及各種藥用產(chǎn)品。
[0005] 目前利用豬血為原料進(jìn)行抗氧化多肽提取、加工的專利報(bào)道較多，其方法多用酸、 堿法水解，此類方法制備的產(chǎn)品存在參入化學(xué)反應(yīng)的化學(xué)試劑殘余是否有害、改性蛋白在 人體中能否被吸收、水解產(chǎn)物是否安全等問(wèn)題，而這些在短期內(nèi)很難診斷，同時(shí)生產(chǎn)費(fèi)用較 高、產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較低。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種工藝簡(jiǎn)單、產(chǎn)品水解度和抗氧化活性顯著 提高的藏羊血中抗氧化多肽的制備方法。
[0007] 為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明所述的一種藏羊血中抗氧化多肽的制備方法，包括以下 步驟： ⑴在藏羊檢疫合格后屠宰得到的血液中加入其體積0. 3°/Γ〇. 7%的檸檬酸鈉或 三聚磷酸鈉，混合均勻后過(guò)濾，得到澄清液，該澄清液先在-45 °C預(yù)冷，然后在溫度 為-40°C?+25°C、真空度為110千帕?15帕的條件下干燥34?36小時(shí)，即得藏羊血清粉； ⑵將所述藏羊血清粉加入蒸餾水震蕩、溶解后定容至l〇〇mL，配成底物濃度為59Γ8%的 藏羊血清液；然后取2mL的所述藏羊血清液于水解瓶中，加 l(Tl5mL 6M的鹽酸放入恒溫干 燥箱中，在溫度為9(Γ100?的條件下消化處理20~28h ;取出，冷卻至室溫后過(guò)濾，得到藏羊 血水溶液，該水溶液升溫至8(T85°C時(shí)恒溫l(Tl5min，即得預(yù)處理后的藏羊血水溶液； ⑶所述預(yù)處理后的藏羊血水溶液中加質(zhì)量濃度為40%的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值至 6. 8(Γ8. 00 ;然后按所述預(yù)處理后的藏羊血水溶液體積的0. 809Γ1. 30%加入復(fù)合酶，在溫度 為58~70°C的條件下恒溫水解2. 8~3. 5h，得到酶解液； ⑷所述酶解液升溫至95~100°C后保持15~20min進(jìn)行滅酶處理；然后冷卻至室溫，再以 7500?8000r/min的速率離心15?20min，得到上清液A ; (5) 所述上清液A中加入其體積89Γ10%的活性炭在80?85°C攪拌25?30min進(jìn)行脫色，然 后以750(T8000r/min的速率離心5min，過(guò)濾除去活性炭，得到上清液B ; (6) 所述上清液B在溫度為-45°C ~+25°C、真空度為7. 5~10. 6帕的條件下進(jìn)行真空冷凍 干燥，即得水分小于5%的粉末狀藏羊抗氧化血肽。
[0008] 所述步驟⑶中復(fù)合酶是指風(fēng)味蛋白酶與木瓜蛋白酶按0. 75g~l. 00g : 0. 90g?1. 30g的比例混合而成。
[0009] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)： 1、本發(fā)明所得藏羊血抗氧化血肽為白色粉末狀物質(zhì)，是平均肽鏈長(zhǎng)度為2~10的短 肽（以2~3的低分子肽為主）及含有少量的游離氨基酸、糖類和無(wú)機(jī)鹽成分、相對(duì)分子質(zhì) 量以低于1000的為主體，主要溶出峰位置在相對(duì)分子質(zhì)量33(Γ820范圍內(nèi)。其蛋白質(zhì)含 量為85%左右，通常是由:Γ6個(gè)氨基酸組成；在濃度為1. 00g/50mL時(shí)起泡性最好，濃度為 0. 75g/50mL時(shí)起泡穩(wěn)定性最好；pH=5時(shí)起泡性最差但起泡穩(wěn)定性最好；起泡性及起泡穩(wěn)定 性受到CaCl2濃度的影響均不顯著；蛋白質(zhì)濃度為0. 05g/50mL時(shí)乳化性最好，乳化穩(wěn)定性 受蛋白質(zhì)濃度影響不顯著；pH=5時(shí)乳化性及乳化穩(wěn)定性表現(xiàn)出最低值；CaCl 2濃度的升高 使乳化性上升而乳化穩(wěn)定性下降(參見(jiàn)表廣6,其中FA為起泡性，F(xiàn)S為泡沫穩(wěn)定性，EAI為 乳化活力指數(shù)，ESI為乳化穩(wěn)定指數(shù))。
[0010] 表1蛋白質(zhì)濃度對(duì)起泡特性的影響

【權(quán)利要求】
1. 一種藏羊血中抗氧化多肽的制備方法，包括以下步驟： ⑴在藏羊檢疫合格后屠宰得到的血液中加入其體積0. 39ΓΟ. 7%的檸檬酸鈉或 三聚磷酸鈉，混合均勻后過(guò)濾，得到澄清液，該澄清液先在-45 °C預(yù)冷，然后在溫度 為-40°C?+25°C、真空度為110千帕?15帕的條件下干燥34?36小時(shí)，即得藏羊血清粉； ⑵將所述藏羊血清粉加入蒸餾水震蕩、溶解后定容至l〇〇mL，配成底物濃度為59Γ8%的 藏羊血清液；然后取2mL的所述藏羊血清液于水解瓶中，加 l(Tl5mL 6M的鹽酸放入恒溫干 燥箱中，在溫度為9(Γ100?的條件下消化處理20~28h ;取出，冷卻至室溫后過(guò)濾，得到藏羊 血水溶液，該水溶液升溫至8(T85°C時(shí)恒溫l(Tl5min，即得預(yù)處理后的藏羊血水溶液； ⑶所述預(yù)處理后的藏羊血水溶液中加質(zhì)量濃度為40%的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值至 6. 8(Γ8. 00 ;然后按所述預(yù)處理后的藏羊血水溶液體積的0. 809Γ1. 30%加入復(fù)合酶，在溫度 為58~70°C的條件下恒溫水解2. 8~3. 5h，得到酶解液； ⑷所述酶解液升溫至95~100°C后保持15~20min進(jìn)行滅酶處理；然后冷卻至室溫，再以 7500?8000r/min的速率離心15?20min，得到上清液A ; (5) 所述上清液A中加入其體積89Γ10%的活性炭在80?85°C攪拌25?30min進(jìn)行脫色，然 后以750(T8000r/min的速率離心5min，過(guò)濾除去活性炭，得到上清液B ; (6) 所述上清液B在溫度為-45°C ~+25°C、真空度為7. 5~10. 6帕的條件下進(jìn)行真空冷凍 干燥，即得水分小于5%的粉末狀藏羊抗氧化血肽。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種藏羊血中抗氧化多肽的制備方法，其特征在于：所述步驟 ⑶中復(fù)合酶是指風(fēng)味蛋白酶與木瓜蛋白酶按〇. 75g~l. 00g :0. 90g~l. 30g的比例混合而成。
【文檔編號(hào)】C12P21/06GK104059956SQ201410267302
【公開(kāi)日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2014年6月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月16日
【發(fā)明者】曹竑, 王愛(ài)國(guó), 武海晶, 時(shí)國(guó)明, 高丹丹, 葉永麗, 蒲瑩 申請(qǐng)人:西北民族大學(xué), 青海湖源牧業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司