專利名稱：一種毛頭鬼傘多糖的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種真菌藥物的制備方法，特別涉及一種毛頭鬼傘多糖的制備方法。
1977年日本特許公報(bào)(昭52-44638)公開(kāi)了一種從毛頭鬼傘菌絲體中提取抗腫瘤毛頭鬼傘多糖(Polysaccharideof Coprinus comatus簡(jiǎn)稱CCP)的制備方法，用蛋白胨和葡萄糖作培養(yǎng)基，但采用靜止法培養(yǎng)生產(chǎn)菌絲體，培養(yǎng)時(shí)間需要18天，而且多糖的提取采用硫酸銨鹽析法，需經(jīng)透析、脫鹽，工藝復(fù)雜，不利于大規(guī)模生產(chǎn)。
本發(fā)明的目的是提供一種培養(yǎng)時(shí)間短、提取方法簡(jiǎn)單、適用于大規(guī)模生產(chǎn)的毛頭鬼傘多糖制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的先將毛頭鬼傘菌種進(jìn)行斜面培養(yǎng)，然后進(jìn)行一級(jí)搖瓶培養(yǎng)、二級(jí)搖瓶培養(yǎng)，再接入種子罐、繁殖罐、發(fā)酵罐中通氣攪拌培養(yǎng)，將發(fā)酵后的發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾得菌絲體，菌絲體經(jīng)干燥、粉碎得干菌絲體粉，將干菌絲體粉熱水提取和過(guò)濾，再將濾液濃縮，在濃縮液中加入酒精進(jìn)行醇析，醇析后的沉淀物經(jīng)干燥、粉碎后即可獲得毛頭鬼傘多糖。
本發(fā)明的培養(yǎng)基(1)斜面培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，加水至1000ml，PH值6.5。
(2)搖瓶培養(yǎng)基葡萄糖0.5％-5％，蛋白胨0.1％-2％，酵母粉0％-2％，K2HPO40.01％-0.5％，KH2PO40.01％-0.5％，MgSO4.7H2O0.01％-0.25％。
(3)發(fā)酵培養(yǎng)基玉米粉(或大豆餅粉)1％-5％，液體葡萄糖0.5％-5％，白糖0.5％-5％，酵母粉0％-2％，K2HPO40.01％-0.5％，MgSO4.7H2O0.01％-0.25％。
附圖
是本發(fā)明的工藝流程圖，下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說(shuō)明，本發(fā)明的生產(chǎn)工藝步驟如下(一)一級(jí)搖瓶培養(yǎng)在500ml三角瓶中裝入100ml液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌，接種斜面菌種，于24-28℃培養(yǎng)，置搖床上振蕩培養(yǎng)(轉(zhuǎn)速120-160轉(zhuǎn)/分)，培養(yǎng)時(shí)間5-7天。
(二)二級(jí)搖瓶培養(yǎng)在500ml三角瓶中裝入100ml液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌，接種一級(jí)搖瓶培養(yǎng)液，接種量為5％-15％，于24-28℃培養(yǎng)，置搖床上振蕩培養(yǎng)(轉(zhuǎn)速120-160轉(zhuǎn)/分)，培養(yǎng)時(shí)間2-4天。
(三)種子罐培養(yǎng)將搖瓶培養(yǎng)液接入50-100立升種子罐中，培養(yǎng)基采用發(fā)酵培養(yǎng)基，罐內(nèi)裝量70％-80％，接種量5％-15％，罐壓0.5-0.8Kg/cm2，攪拌器轉(zhuǎn)速120-200轉(zhuǎn)/分，通氣培養(yǎng)40-50小時(shí)。
(四)繁殖罐培養(yǎng)將種子罐培養(yǎng)液移入500立升-1000立升繁殖罐中，培養(yǎng)基采用發(fā)酵培養(yǎng)基，罐內(nèi)裝量70％-80％，接種量5％-15％，罐壓0.5-0.8Kg/cm2，攪拌器轉(zhuǎn)速120-200轉(zhuǎn)/分，通氣培養(yǎng)40-50小時(shí)。
(五)發(fā)酵罐培養(yǎng)將繁殖罐培養(yǎng)液移入發(fā)酵罐中，罐內(nèi)裝量70％-80％，接種量5％-15％，罐溫24-28℃，罐壓0.5-0.8Kg/cm2，攪拌器轉(zhuǎn)速120-200轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵時(shí)間為55-65小時(shí)。
(六)毛頭鬼傘多糖的提取將發(fā)酵培養(yǎng)物過(guò)濾，于40-70℃下干燥，粉碎得菌絲體干粉，菌絲體在95-120℃熱水中提取2-3次，提取時(shí)間5-15小時(shí)，提取液經(jīng)過(guò)濾，除去不溶物，濾液經(jīng)低溫真空濃縮，濃縮液體1份加95％食用乙醇2-5份，在1-4℃下醇析8-24小時(shí)，用過(guò)濾或離心法得沉淀物，用95％乙醇洗滌沉淀物2-3遍，將沉淀物進(jìn)行真空干燥，粉碎得毛頭鬼傘多糖。
由于本發(fā)明在種子罐、繁殖罐和發(fā)酵罐中采用通氣攪拌培養(yǎng)，所以在發(fā)酵罐中發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間只需55-65小時(shí)，效率高、周期短，適用于大規(guī)模生產(chǎn)，又由于采用醇析法提取毛頭鬼傘多糖，所以不需脫鹽，工藝簡(jiǎn)單，所得多糖成份也較純。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的生產(chǎn)工藝作進(jìn)一說(shuō)明，實(shí)施例(1)斜面培養(yǎng)取用菌株轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，于25℃培養(yǎng)5-6天，斜面培養(yǎng)基為馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，加水至1000ml，PH值6.5。
(2)一級(jí)搖瓶培養(yǎng)在500ml三角瓶中裝入100ml液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基經(jīng)121℃滅菌30分鐘，接種斜面菌種2環(huán)，于24℃培養(yǎng)，置搖床上振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)5天，搖瓶培養(yǎng)基為葡萄糖3％，蛋白胨0.5％，K2HPO40.03％，KH2PO40.03％，MgSO4.7H2O0.0 3％。
(3)二級(jí)搖瓶培養(yǎng)在500ml三角瓶中裝入100ml液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基經(jīng)121℃滅菌30分鐘，接種一級(jí)搖瓶培養(yǎng)液，接種量為10％，于24℃培養(yǎng)，置搖床上振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)3天，搖瓶培養(yǎng)基同上。
(4)種子罐培養(yǎng)將搖瓶培養(yǎng)液以壓差法接入100立升種子罐中，罐內(nèi)裝量70％，接種量10％，罐壓0.6Kg/cm2，攪拌器轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分，通氣培養(yǎng)40小時(shí)，種子罐培養(yǎng)基為玉米粉1.5％，液體葡萄糖1.5％，蔗糖3％，K2HPO40.01％，MgSO4.7H2O0.05％。
(5)繁殖罐培養(yǎng)將種子罐培養(yǎng)液移入1000立升繁殖罐中，罐內(nèi)裝量70％，接種量10％，罐壓0.6Kg/cm2，攪拌器轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分，通氣培養(yǎng)40小時(shí)，繁殖罐培養(yǎng)基同上。
(6)發(fā)酵罐培養(yǎng)將繁殖罐培養(yǎng)液移入發(fā)酵罐中，罐內(nèi)裝量70％，接種量為10％，罐溫25℃，罐壓0.6Kg/cm2，攪拌器轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵時(shí)間為65小時(shí)，發(fā)酵罐培養(yǎng)基同上。
(7)毛頭鬼傘多糖的提取將發(fā)酵培養(yǎng)物經(jīng)板框壓濾，菌絲體低溫干燥，粉碎得菌絲體干粉，菌絲體粉加水10倍，在95℃熱水回流提取3次，提取液經(jīng)過(guò)濾，除去不溶物，濾液經(jīng)低溫真空薄膜濃縮，濃縮液體1份加95％食用乙醇3份，在4℃下醇析24小時(shí)，將沉淀物進(jìn)行真空干燥，粉碎得毛頭鬼傘多糖。
權(quán)利要求
1.一種毛頭鬼傘多糖的制備方法，其特征是先將毛頭鬼傘菌種進(jìn)行斜面培養(yǎng)，然后進(jìn)行一級(jí)搖瓶培養(yǎng)、二級(jí)搖瓶培養(yǎng)，再接入種子罐、繁殖罐、發(fā)酵罐中通氣攪拌培養(yǎng)，將發(fā)酵后的發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾得菌絲體，菌絲體經(jīng)干燥、粉碎得干菌絲體粉，將干菌絲體粉熱水提取和過(guò)濾，再將濾液濃縮，在濃縮液中加入酒精進(jìn)行醇析，醇析后的沉淀物經(jīng)干燥、粉碎后即可獲得毛頭鬼傘多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種毛頭鬼傘多糖制備方法，其特征是將菌種在斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，然后進(jìn)行a、一級(jí)搖瓶培養(yǎng)在500ml三角瓶中裝入100ml液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌，接種斜面菌種，于24-28℃培養(yǎng)，置搖床上振蕩培養(yǎng)(轉(zhuǎn)速120-160轉(zhuǎn)/分)，培養(yǎng)時(shí)間5-7天。b、二級(jí)搖瓶培養(yǎng)在500ml三角瓶中裝入100ml液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌，接種一級(jí)搖瓶培養(yǎng)液，接種量為5％-15％，于24-28℃培養(yǎng)，置搖床上振蕩培養(yǎng)(轉(zhuǎn)速120-160轉(zhuǎn)/分)，培養(yǎng)時(shí)間2-4天。c、種子罐培養(yǎng)將搖瓶培養(yǎng)液接入50-100立升種子罐中，培養(yǎng)基采用發(fā)酵培養(yǎng)基，罐內(nèi)裝量70％-80％，接種量5％-15％，攪拌器轉(zhuǎn)速120-200轉(zhuǎn)/分，罐壓0.5-0.8Kg/cm2，通氣培養(yǎng)40-50小時(shí)。d、繁殖罐培養(yǎng)將種子罐培養(yǎng)液移入500立升-1000立升繁殖罐中，培養(yǎng)基采用發(fā)酵培養(yǎng)基，罐內(nèi)裝量70％-80％，接種量5％-15％，攪拌器轉(zhuǎn)速120-200轉(zhuǎn)/分，罐壓0.5-0.8Kg/cm2，通氣培養(yǎng)40-50小時(shí)。e、發(fā)酵罐培養(yǎng)將繁殖罐培養(yǎng)液移入發(fā)酵罐中，罐內(nèi)裝量70％-80％，接種量5％-15％，罐溫24-28℃，罐壓0.5-0.8Kg/cm2，攪拌器轉(zhuǎn)速120-200轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵時(shí)間為55-65小時(shí)。f、毛頭鬼傘多糖的提取將發(fā)酵培養(yǎng)物過(guò)濾，于40-70℃下干燥，粉碎得菌絲體干粉，菌絲體在95-120℃熱水中提取2-3次，提取時(shí)間5-15小時(shí)，提取液經(jīng)過(guò)濾，除去不溶物，濾液經(jīng)低溫真空濃縮，濃縮液體1份加95％食用乙醇2-5份，在1-4℃下醇析8-24小時(shí)，用過(guò)濾或離心法得沉淀物，用95％乙醇洗滌沉淀物2-3遍，將沉淀物進(jìn)行真空干燥，粉碎得毛頭鬼傘多糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種真菌藥物的制備方法，特別涉及一種毛頭鬼傘多糖的制備方法，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的先將菌種進(jìn)行斜面培養(yǎng)，然后進(jìn)行一級(jí)搖瓶、二級(jí)搖瓶培養(yǎng)，再接入種子罐、繁殖罐、發(fā)酵罐中通氣培養(yǎng)，將發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾得菌絲體，將干菌絲體粉熱水提取、過(guò)濾和濃縮，在濃縮液中加入酒精進(jìn)行醇析，醇析后的沉淀物經(jīng)干燥、粉碎后即可獲得毛頭鬼傘多糖，本法適用于大規(guī)模生產(chǎn)毛頭鬼傘多糖。
文檔編號(hào)C12N1/14GK1143110SQ9511172
公開(kāi)日1997年2月19日 申請(qǐng)日期1995年8月17日 優(yōu)先權(quán)日1995年8月17日
發(fā)明者閔三弟, 臧珍娣, 宋士良, 勞華均 申請(qǐng)人:上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所