專利名稱：用于促進(jìn)哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)的組合物以及利用該組合物促進(jìn)哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于促進(jìn)哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)的組合物，以及一種利用該組合物促進(jìn)哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)的方法。更具體地說，本發(fā)明涉及一種用于促進(jìn)家畜生長(zhǎng)的組合物，以及一種通過對(duì)哺乳動(dòng)物施用該促進(jìn)生長(zhǎng)的組合物來增強(qiáng)哺乳動(dòng)物的免疫力的方法，所述組合物包括一種含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)。
一種含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)即乳酪蛋白磷酸肽(下文縮寫成CPP)是一種具有高含量磷酸絲氨酸的短肽，其通過乳酪蛋白與酶反應(yīng)來得到。據(jù)鑒定以乳作為原料的發(fā)酵食品中也含有CPP，其作用是避免無機(jī)物的不溶性。因此，CPP在作為促進(jìn)鈣等吸收的物質(zhì)方面引起了人們的很大興趣。
并且，已知CPP在細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中具有免疫學(xué)活性，但目前還不知道當(dāng)添加到家畜飼料等中的CPP被攝食時(shí)，使抗體的產(chǎn)生增加以及使增肥效果提高。
而且，佐劑能夠刺激免疫系統(tǒng)以增強(qiáng)對(duì)抗原的免疫反應(yīng)，并主要作為助劑被添加到疫苗中。作為典型的佐劑，已知有鋁化合物、多核苷酸、細(xì)菌的細(xì)胞成分等。然而，多數(shù)這些佐劑幾乎不能用于人類。特別是，佐劑對(duì)抗原性物質(zhì)普遍有效。因此，如果將這些佐劑用于人體疫苗，會(huì)出現(xiàn)以下問題具有增強(qiáng)含在抗原中的雜質(zhì)的抗原性刺激作用或引發(fā)有害過敏反應(yīng)的危險(xiǎn)從而需要特別關(guān)注所用抗原的純度等。因此，需要研制出安全性高的佐劑。
家畜傳染病如肺炎、細(xì)菌性腹瀉等不僅對(duì)家畜的生長(zhǎng)非常不利，而且其它健康的家畜也有可能感染上這些傳染病。特別是，傳染病會(huì)感染幼畜，這是由于幼畜的自身免疫力弱，并且傳染病往往能導(dǎo)致幼畜的死亡。
此外，傳染病對(duì)生長(zhǎng)延遲產(chǎn)生很大的影響。對(duì)于家畜來說，經(jīng)濟(jì)損失是巨大的。當(dāng)家畜感染上肺炎或細(xì)菌性腹瀉時(shí)，盡管會(huì)導(dǎo)致生產(chǎn)成本的增加，但還是通過抗生素給藥進(jìn)行治療。因此，需要一種在安全性、療效、可操作性、成本等方面不存在問題的增強(qiáng)家畜免疫力的方法。
基于這些情況，本發(fā)明的目的在于建立一種增強(qiáng)哺乳動(dòng)物如家畜等的免疫力從而促進(jìn)生長(zhǎng)的技術(shù)。
權(quán)利要求1中所述的發(fā)明是一種用于促進(jìn)哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)的組合物，該組合物的特征在于包括一種含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)。
權(quán)利要求2中所述的發(fā)明是權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)是乳酪蛋白磷酸肽。
權(quán)利要求3中所述的發(fā)明是一種促進(jìn)哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)的方法，該方法的特征在于給哺乳動(dòng)物施用權(quán)利要求1或2中所述的組合物。
權(quán)利要求4中所述的發(fā)明是一種免疫球蛋白激活佐劑，該佐劑的特征在于包括一種含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)。
權(quán)利要求5中所述的發(fā)明是權(quán)利要求4所述的佐劑，其中所述的含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)是乳酪蛋白磷酸肽。
權(quán)利要求6中所述的發(fā)明是權(quán)利要求4所述的佐劑，其中所述的免疫球蛋白是抗乳球蛋白、產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌或大腸彎曲桿菌的。
圖2是表示腸內(nèi)含物(糞便)中的IgA總含量的圖表。
圖3是表示幼豬血清中的IgG含量的圖表。
實(shí)施本發(fā)明的最好方式本發(fā)明的目的在于使得哺乳動(dòng)物攝取含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)如CPP等，由此增強(qiáng)免疫力，增強(qiáng)對(duì)傳染病的抵抗力并消除抑制哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)的因素從而促進(jìn)生長(zhǎng)。
本發(fā)明中所述的傳染病的類型不受限制，并且包括所有由于作為病原體的微生物侵入哺乳動(dòng)物的表面或內(nèi)部后并定居其中進(jìn)行繁殖而引起的疾病。
而且，由含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)帶來的本發(fā)明的效果，如下所述，主要體現(xiàn)在豬的身上。然而，本發(fā)明所涉及的哺乳動(dòng)物并不只限于豬，而且還包括人和其它與豬具有相同免疫系統(tǒng)的家畜如牛、馬、羊等。而且，寵物動(dòng)物如狗、貓等也包括在本發(fā)明中。
本發(fā)明中使用的含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)是指一種含有與磷酸結(jié)合的氨基酸，并且普遍存在于體內(nèi)。這種蛋白質(zhì)的具體實(shí)例包括卵黃高磷蛋白、酪蛋白、CPP等。
其中，上文描述的CPP可能是一種短肽(乳酪蛋白磷酸肽)，該短肽中具有高含量的通過乳酪蛋白與酶的反應(yīng)得到的磷酸絲氨酸。例如，可以使用以下商品名的CPP“Meiji CPP-I”、“Meiji CPP-II”和“Meiji CPP-III”(全部由Meiji Seika Kaisha，Ltd.制造)。
對(duì)哺乳動(dòng)物施用蛋白質(zhì)如CPP等的方法通常為以下方法將飼料等與一種蛋白質(zhì)混合并通過口攝取。還可以使用將一種蛋白質(zhì)添加到飲料如水等中并攝取的方法。
對(duì)與一種蛋白質(zhì)如CPP等混合的飼料等沒有特別的限制，可以使用商品化的產(chǎn)品?？梢愿鶕?jù)哺乳動(dòng)物的類型、它們生長(zhǎng)的程度等來選擇合適的產(chǎn)品。
摻入飼料等中的含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)的量將根據(jù)哺乳動(dòng)物的類型等來確定。例如，以商品名“Meiji CPP-I”(由MeijiSeika Kaisha，Ltd.制造)作為CPP時(shí)，基于飼料等的合適量是0.1-1％(重量)，優(yōu)選地是0.5％(重量)。
此外，對(duì)家畜等施用CPP的時(shí)間等沒有特別限制。為了得到滿意的效果，在一定的時(shí)間段內(nèi)連續(xù)地對(duì)家畜等施用含CPP飼料是可取的。例如，對(duì)于幼豬，通過口服施用3個(gè)多星期，優(yōu)選地5個(gè)星期就能顯示出效果。
施用含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)可以增加IgA的量，并對(duì)局部免疫有效。而且，當(dāng)將細(xì)菌等作為抗原使用時(shí)，可以使在抗原-抗體反應(yīng)中起主要作用的IgG增加。綜上所述，當(dāng)給人施用這種蛋白質(zhì)時(shí)，通過將它添加到食物或食物成分中并不斷攝食能夠預(yù)防傳染病。同樣，通過在寵物的食物中摻入適量的該物質(zhì)，也能防止狗、貓等中的傳染病。
下面通過參照闡明本發(fā)明效果的實(shí)施例來更加具體地說明本發(fā)明。然而，本發(fā)明的范圍不受這些實(shí)施例的限制。
表1 幼豬生長(zhǎng)飼料

以下實(shí)驗(yàn)是以16頭(全部是3周齡)長(zhǎng)白豬(Landrace)和大白豬(Large White)和杜洛豬(Duroc)的F1雜交幼豬(LWD)為一組進(jìn)行的。
前面表中列出的飼料被隨意地?cái)z取5星期。而且，作為對(duì)照，以同樣的方式攝取一種其中添加了0.5％(重量)的用來調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)含量的卵清蛋白且不含CPP的飼料。并且，在β-乳球蛋白處理組中，β-乳球蛋白以乳液的形式與弗氏不完全佐劑一起以2個(gè)星期的間隔肌內(nèi)注射三次。
飼養(yǎng)后，各類免疫球蛋白的總含量和抗β-乳球蛋白的特異性抗體的含量通過酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)進(jìn)行測(cè)定。即，

圖1顯示了通過ELISA測(cè)定腸內(nèi)容物(糞便)中抗β-乳球蛋白的免疫球蛋白(IgG、IgM和IgA)的含量，圖2顯示了腸內(nèi)容物中IgA的總含量。
結(jié)果，通過施用CPP，幾乎沒有觀察到腸內(nèi)容物中抗β-乳球蛋白的特異性IgG和IgM的含量變化，而IgA的總含量有了顯著的增加。而且，腸內(nèi)容物中的IgA的總含量同樣也有所增加。
順便提一下，已知IgA在局部免疫中起著重要的作用。IgA通過局部粘膜淋巴組織來產(chǎn)生，然后作為分泌型IgA分泌到粘膜表面，并在粘膜表面作為抗原的特異性免疫抗體發(fā)揮作用。據(jù)說分泌型IgA對(duì)細(xì)菌或病毒的凝集能力很高并且對(duì)粘液的親和性也很強(qiáng)，而且進(jìn)一步對(duì)消化酶具有抗性因而能有效抑制微生物粘附、侵入、在腸等的粘膜表面上形成菌落等(buta byorigaku-seiri.shikkan.shiyo-<第3版>，由K.K.Kindai Shuppan出版，第78-91頁)。結(jié)果表明通過施用CPP使免疫力得到增強(qiáng)。
另外，在對(duì)幼豬開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)(在斷乳時(shí))和實(shí)驗(yàn)完成時(shí)分別稱量每一頭幼豬的體重，由增加的體重評(píng)估促進(jìn)生長(zhǎng)的效果。結(jié)果見表2。
表2 對(duì)幼豬金開始實(shí)驗(yàn)前和結(jié)束實(shí)驗(yàn)后進(jìn)行稱重的結(jié)果

從表2可以清楚地看出，完成實(shí)驗(yàn)時(shí)沒有添加CPP的組的幼豬的平均體重是12.68kg和13.04kg，并且體重分別增加了5.22kg和5.58kg。同時(shí)，完成實(shí)驗(yàn)時(shí)添加CPP的組的幼豬的平均體重是15.86kg和14.94kg，并且體重分別增加了8.38kg和7.32kg。因此，可以確定無論是否進(jìn)行了β-乳球蛋白的處理，通過施用CPP都促進(jìn)了生長(zhǎng)。
首先，使用總共12頭至少30日齡的SPF幼豬(平均體重9.7kg)作為進(jìn)行試驗(yàn)的豬。使用實(shí)施例1中的相同飼料作為幼豬的飼料。使用一種添加了作為CPP粉的0.5％(重量)的“Meiji CPP-I”(CPP含量15％，由Meiji Seika Kaisha，Ltd.制造)的飼料作為CPP施用組的飼料，同時(shí)使用一種以同樣方式添加了用來調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)含量的白蛋白(由Sigma制造，下文有時(shí)縮寫成ALB)的飼料作為對(duì)照組的飼料。順便提一句，從開始試驗(yàn)前7天到試驗(yàn)結(jié)束的6個(gè)星期內(nèi)，CPP或ALB被連續(xù)添加到飼料中，隨意攝取該飼料。
并且，以產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)無活性菌株(下文有時(shí)縮寫成CL細(xì)胞)和大腸彎曲桿菌標(biāo)準(zhǔn)無活性菌株(下文有時(shí)縮寫成Cam細(xì)胞)作為抗原性物質(zhì)。這些標(biāo)準(zhǔn)無活性菌株是通過以常規(guī)方式使來源于日本農(nóng)業(yè)、林業(yè)和漁業(yè)部，國(guó)家動(dòng)物健康研究所的標(biāo)準(zhǔn)菌株失活而獲得的。有關(guān)施用這些抗原的方法，為了確定抗原性物質(zhì)的安全性通過兩種途徑進(jìn)行施用，即口服和皮下注射。表3列出了試驗(yàn)組。
表3 試驗(yàn)組

根據(jù)以上試驗(yàn)組，對(duì)于CPP/CL+Cam組，也就是CL細(xì)胞和Cam細(xì)胞施用組，以一個(gè)星期的間隔按照先口服后注射的順序口服總量為8.5mg的細(xì)胞(6mg的CL細(xì)胞+2.5mg的Cam細(xì)胞)并且皮下注射總量為6mg的細(xì)胞(4mg的CL細(xì)胞+2mg的Cam細(xì)胞)。因此，所述抗原交替施用兩次，施用抗原的次數(shù)總共是四次。并且，對(duì)于CPP/CL組和ALB/CL組，也就是CL細(xì)胞施用組，以同樣的方式口服總量為6mg的細(xì)胞，和以同樣的方式皮下注射總量為4mg的細(xì)胞。對(duì)于口服，使用了摻有懸浮在一定量蒸餾水中的細(xì)胞的飼料。對(duì)于皮下注射，使用了弗氏不完全佐劑。補(bǔ)充一句，在35天的飼養(yǎng)期內(nèi)，隨意攝取飼料和水，并定期進(jìn)行體重的稱量和采血樣。
飼養(yǎng)后，抗CL細(xì)胞和Cam細(xì)胞的特異性抗體的量通過實(shí)施例1中的ELISA方法進(jìn)行測(cè)定。通過ELISA方法測(cè)定的血清中的IgG(用血清稀釋1000倍)如圖3所示。
結(jié)果表明施用了含CPP飼料的CPP/CL+Cam組和CPP/CL組的血清中的IgG含量比施用了含ALB飼料的ALB/CL組和ALB組的血清中的IgG含量高。而且，隨著使施用抗原的周期延長(zhǎng)，IgG的含量得到了增加。
此外，在開始進(jìn)行幼豬實(shí)驗(yàn)時(shí)和幼豬實(shí)驗(yàn)完成時(shí)分別稱量每一組中的每頭幼豬的體重。結(jié)果，在施用了CPP的CPP/CL+Cam組和CPP/CL組中，體重在飼養(yǎng)期間增加正常。
IgG是普通動(dòng)物體內(nèi)最必需的免疫球蛋白，其占初乳或血清中所含有的免疫球蛋白的80％或更多，在抗原-抗體反應(yīng)中起主要作用。因此，通過施用作為抗原的細(xì)菌如CL細(xì)胞、Cam細(xì)胞等可增加血清中的IgG含量，這證明了通過施用CPP，免疫力得到增強(qiáng)。工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明提供了一種促進(jìn)哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)的組合物和佐劑，該組合物包括含有磷酸化氨基酸如CPP等的蛋白質(zhì)。通過對(duì)哺乳動(dòng)物施用這種組合物，能夠增強(qiáng)哺乳動(dòng)物的免疫力，并由此促進(jìn)生長(zhǎng)。
權(quán)利要求
1.一種用于促進(jìn)哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)的組合物，其特征在于該組合物包括一種含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)是一種乳酪蛋白磷酸肽。
3.一種促進(jìn)哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)的方法，其特征在于對(duì)哺乳動(dòng)物施用如權(quán)利要求1或2所述的組合物。
4.一種免疫球蛋白激活佐劑，其特征在于該佐劑包括一種含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)。
5.如權(quán)利要求4所述的佐劑，其中含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)是一種乳酪蛋白磷酸肽。
6.如權(quán)利要求4所述的佐劑，其中所述免疫球蛋白是一種抗β-乳球蛋白、產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌或大腸彎曲桿菌的免疫球蛋白。
全文摘要
本發(fā)明目的在于提供一種在安全性、可操作性等方面不存在問題的能夠增強(qiáng)哺乳動(dòng)物免疫力并促進(jìn)哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)的方法。在本發(fā)明中,哺乳動(dòng)物對(duì)含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)如CPP等的攝取能夠增強(qiáng)免疫力,增強(qiáng)對(duì)傳染病的抵抗力,消除抑制哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)的因素并促進(jìn)生長(zhǎng)。而且,通過施用含有磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)可增加IgA和IgG的量。因此,通過將這種蛋白質(zhì)添加到適當(dāng)?shù)氖澄锘蚴澄锍煞种幸允谷瞬粩嗟財(cái)z取所述蛋白質(zhì)能夠預(yù)防傳染病。同樣,通過將適量該物質(zhì)摻在寵物食物中能夠預(yù)防狗、貓等的傳染病。
文檔編號(hào)A61K38/17GK1370054SQ00811917
公開日2002年9月18日 申請(qǐng)日期2000年8月23日 優(yōu)先權(quán)日1999年8月24日
發(fā)明者大谷元, 北村博, 澤田一彥, 押田敏雄, 楠原征治 申請(qǐng)人:明治制果株式會(huì)社