專利名稱：聯(lián)合療法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用1型鈉/氫交換(NHE-1)抑制劑和選自(a)補體調(diào)節(jié)劑、(b)代謝調(diào)節(jié)劑、(c)抗細胞凋亡劑、(d)氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和(e)酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物的聯(lián)合形式或所述聯(lián)合形式的藥物組合物來減輕由于局部缺血引起的組織損傷的方法。本發(fā)明還提供了涉及所述聯(lián)合形式的藥盒。
背景技術(shù)：
局部缺血性損傷、特別是心肌的局部缺血性損傷在門診病人和手術(shù)過程中均可能發(fā)生，并且可以引發(fā)猝死、心肌梗塞或充血性心衰。目前在醫(yī)學(xué)上仍需要預(yù)防或盡可能地減輕心肌缺血性損傷、特別是手術(shù)期間的心肌梗塞的方法。預(yù)期這樣的療法可以挽救生命并且減少高?；颊咦≡旱男枰?、改善其生活質(zhì)量并降低總的衛(wèi)生保健費用。
藥物的心臟保護可以降低在手術(shù)過程中出現(xiàn)的心肌梗塞和功能障礙的發(fā)病率并延緩其進程。除了在患有局部缺血性心臟病的患者中減輕心肌損傷和改善缺血后的心肌功能外，心臟保護還可以在不需要進行心臟手術(shù)的“危險”患者(即年齡大于65歲、不能耐受運動、患有冠心病、糖尿病或高血壓等的患者)中降低心臟病和由于心肌梗塞和功能障礙引起的死亡的發(fā)生率。
為此，已開發(fā)出多種治療方案，例如，使用可以抑制1型鈉/氫交換(NHE-1)轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的化合物。NHE-1抑制劑對局部缺血(特別是影響心肌的局部缺血)產(chǎn)生保護作用的機制在于降低由于細胞內(nèi)酸化和隨后的鈉/氫交換轉(zhuǎn)運系統(tǒng)激活所引起的再灌注/低灌注組織內(nèi)鈉離子內(nèi)流的增加。這導(dǎo)致組織鈉超載的延遲。由于鈉和鈣離子轉(zhuǎn)運在心臟組織中是偶聯(lián)的，這也防止了威脅生命的心肌細胞的鈣超載。
將NHE-1抑制劑和某些其它治療劑聯(lián)用是公知的。例如，EPO 0918515公開了將NHE-1抑制劑與降壓劑、ACE-抑制劑、血管緊張素受體拮抗劑、降脂劑和HMG-CoA還原酶抑制劑聯(lián)用；CA2,227,112公開了將NHE-1抑制劑與鈉依賴型碳酸氫根/氯離子交換器(NCBE)抑制劑聯(lián)用；CA2,245,776公開了將NHE-1抑制劑與β-受體阻滯劑、鈣拮抗劑、袢利尿劑、噻嗪類利尿劑、保鉀利尿劑、醛固酮拮抗劑、強心甙、抗心律失常藥、KATP通道開放劑、KATP通道阻滯劑和可被藜蘆定激活的鈉通道抑制劑聯(lián)用；共同轉(zhuǎn)讓的PCT國際申請公開號WO99/43663中公開了將NHE-1抑制劑于腺苷、腺苷拮抗劑、硝酸酯、血小板抑制劑、阿司匹林、雙嘧達莫、氯化鉀、可樂定、哌唑嗪和腺苷A3受體激動劑聯(lián)用。
根據(jù)本發(fā)明的藥盒、方法和藥物組合物的實踐，確信施用NHE-1抑制劑和選自(a)補體調(diào)節(jié)劑、(b)代謝調(diào)節(jié)劑、(c)抗細胞凋亡劑、(d)氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和(e)選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物的聯(lián)合形式可以比單獨給藥聯(lián)合成分中的任何一種產(chǎn)生更大的治療益處。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了減輕由于局部缺血引起的組織損傷的方法，該方法包括，向需要這種減輕的哺乳動物施用有效量的NHE-1抑制劑和選自(a)補體調(diào)節(jié)劑、(b)代謝調(diào)節(jié)劑、(c)抗細胞凋亡劑、(d)氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和(e)酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物的聯(lián)合形式或含有所述聯(lián)合形式的藥物組合物。
本發(fā)明還提供了含有一定量的NHE-1抑制劑；一定量的選自(a)補體調(diào)節(jié)劑、(b)代謝調(diào)節(jié)劑、(c)抗細胞凋亡劑、(d)氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和(e)選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物；以及可藥用載體、賦形劑或稀釋劑的藥物組合物。
本發(fā)明還提供了一種藥盒，其含有在第一單位劑量形式中的一定量的1型鈉-氫交換器抑制劑和可藥用載體、賦形劑或稀釋劑；在第二單位劑量形式中的一定量的選自(a)補體調(diào)節(jié)劑、(b)代謝調(diào)節(jié)劑、(c)抗細胞凋亡劑、(d)氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和(e)選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物和可藥用載體、賦形劑或稀釋；以及容器。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了減輕由于局部缺血引起的組織損傷(例如，基本上防止組織所述和/或產(chǎn)生組織保護作用)的方法，該方法包括，向需要這種減輕的哺乳動物(例如人類，男性或女性)施用治療有效量的1型鈉-氫交換器(NHE-1)抑制劑和選自(a)補體調(diào)節(jié)劑、(b)代謝調(diào)節(jié)劑、(c)抗細胞凋亡劑、(d)氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和(e)選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物的聯(lián)合形式或含有該聯(lián)合形式的藥物組合物。
優(yōu)選的可以按照本發(fā)明的方法進行治療的局部缺血的組織選自腦、心臟、肝、腎、肺、腸、骨骼肌、脾、胰、神經(jīng)、脊髓、視網(wǎng)膜組織、脈管系統(tǒng)和腸組織。特別優(yōu)選的組織包括心臟組織。
雖然任何NHE-1抑制劑均可用于本發(fā)明的方法和藥物組合物，但通常優(yōu)選該抑制劑選自(a)式(I)化合物 其前藥或該化合物或其前藥的可藥用鹽；其中Z是碳連接的含有兩個相鄰的氮的5元二氮雜二不飽和環(huán)，所述的環(huán)選擇性地被最多3個彼此獨立地選自R1、R2和R3的取代基單取代、二取代或三取代；或者Z是碳連接的5元三氮雜二不飽和環(huán)，所述的環(huán)選擇性地被最多2個彼此獨立地選自R4和R5的取代基單取代或二取代；其中R1、R2、R3、R4和R5彼此獨立地是氫、羥基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷硫基、(C3-C4)環(huán)烷基、(C3-C7)環(huán)烷基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基甲?；或M(C1-C4)烷基，前述的任意(C1-C4)烷基部分均選擇性地帶有1至9個氟；所述的(C1-C4)烷基或(C3-C4)環(huán)烷基選擇性地被羥基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷硫基、(C1-C4)烷基亞磺?；?、(C1-C4)烷基磺酰基、(C1-C4)烷基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基甲?；騿?N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基磺?；鶈稳〈蚨〈?；并且所述的(C3-C4)環(huán)烷基選擇性地帶有1至7個氟；其中M是選擇性地含有1至3個彼此獨立地選自氧、硫和氮的雜原子的部分飽和的、完全飽和的或完全不飽和的5至8元環(huán)，或是由兩個稠合的部分飽和的、完全飽和的或完全不飽和的3至6元環(huán)組成的二環(huán)，兩個環(huán)合在一起選擇性地含有1至4個彼此獨立地選自氮、硫和氧的雜原子；所述的M選擇性地在碳或氮上被最多3個彼此獨立地選自R6、R7和R8的取代基所取代，其中，如果該部分是單環(huán)，則在一個環(huán)上被取代，如果該部分是二環(huán)，則在一個或同時在兩個環(huán)上被取代，其中R6、R7和R8之一選擇性地是部分飽和的、完全飽和的或完全不飽和的3至7元環(huán)，其選擇性地含有1至3個彼此獨立地選自選擇性地被(C1-C4)烷基取代的氧、硫和氮的雜原子，其余的R6、R7和R8擇性地是羥基、硝基、鹵素、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷氧羰基、(C1-C4)烷基、甲?；?、(C1-C4)鏈烷?；?C1-C4)鏈烷酰氧基、(C1-C4)鏈烷酰氨基、(C1-C4)烷氧羰基氨基、磺酰氨基、(C1-C4)烷基磺酰氨基、氨基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基、氨基甲?；?N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基甲酰基、氰基、巰基、(C1-C4)烷硫基、(C1-C4)烷基亞磺?；?C1-C4)烷基磺?；?N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基磺?；?C2-C4)鏈烯基、(C2-C4)鏈炔基或(C5-C7)環(huán)烯基，其中所述的(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷基、(C1-C7)鏈烷?；?C1-C4)烷硫基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基或(C3-C7)環(huán)烷基R6、R7和R8取代基選擇性地被羥基、(C1-C4)烷氧羰基、(C3-C7)環(huán)烷基、(C1-C4)鏈烷?；?C1-C4)鏈烷?；被?、(C1-C4)鏈烷酰氧基、(C1-C4)烷氧羰基氨基、磺酰氨基、(C1-C4)烷基磺酰氨基、氨基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基、氨基甲?；?、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基甲?；?、氰基、巰基、硝基、(C1-C4)烷硫基、(C1-C4)烷基亞磺?；?、(C1-C4)烷基磺?；騿?N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基磺?；鶈稳〈蛘哌x擇性地被1至9個氟取代；(b)cariporide或其可藥用鹽；(c)eniporide或其可藥用鹽；(d)BIIB 513或其可藥用鹽；(e)TY-12533或其可藥用鹽；和(f)SM-15681或其可藥用鹽。
特別優(yōu)選的式(I)化合物是選自下列的化合物[1-(2-氯苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-甲基-1-(2-三氟甲基苯基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-乙基-1-苯基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(2-三氟甲基苯基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-苯基-1H-吡唑-4-羰基]胍；胍；[5-甲基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-甲基-1-(萘-1-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(喹啉-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(喹啉-8-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[3-甲基-1-(萘-1-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[3-甲基-1-(異喹啉-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[2-甲基-5-苯基-2H-吡唑-3-羰基]胍；[2-甲基-5-(萘-1-基)-2H-吡唑-3-羰基]胍；[5-甲基-2-苯基-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[5-甲基-2-(3-甲氧基苯基)-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[2-(3-溴苯基)-5-甲基-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[2-(萘-1-基)-5-甲基-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[2-(異喹啉-5-基)-5-甲基-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[5-甲基-2-(喹啉-5-基)-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[1-(萘-1-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-4-甲基磺?；交?-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-三氟甲基-4-氟苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-溴苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氟苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-甲氧基苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-4-甲基氨基磺酰基苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2，5-二氯苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2，3-二氯苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-氨基羰基苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-氨基磺?；交?-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；胍；[1-(2-氯-5-甲基磺?；交?-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-二甲基氨基磺?；交?-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-三氟甲基-4-氯苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(8-溴喹啉-5-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(6-氯喹啉-5-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(吲唑-7-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(苯并咪唑-5-基)-5-環(huán)丙基-IH-吡唑-4-羰基]胍；[1-(1-異喹啉基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(4-喹啉基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(吲唑-6-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(吲唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(苯并咪唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(1-甲基苯并咪唑-6-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(5-喹啉基)-5-正丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(5-喹啉基)-5-異丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-乙基-1-(6-喹啉基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-甲基苯并咪唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(1，4-苯并二噁烷-6-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(苯并三唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(3-氯吲唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(5-喹啉基)-5-丁基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-丙基-1-(6-喹啉基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-異丙基-1-(6-喹啉基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(吲唑-7-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2，1，3-苯并噻二唑-4-基)-3-甲基-1-吡唑-4-羰基]胍；和[3-甲基-1-(喹啉-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；其前藥以及該化合物和前藥的可藥用鹽。
式(I)化合物、其前藥以及該化合物和前藥的可藥用鹽可以按照上述共同轉(zhuǎn)讓的PCT國際申請公開號WO99/43663中公開的內(nèi)容進行制備，其公開的內(nèi)容引入本文作為參考。
優(yōu)選的NHE-1抑制劑cariporide，即N-(氨基亞氨基甲基)-4-(1-甲基乙基)-3-(甲基磺?；?-苯甲酰胺，可以按照美國專利號5,591,754中公開的內(nèi)容進行制備，其公開的內(nèi)容引入本文作為參考。優(yōu)選的NHE-1抑制劑eniporide，即N-(氨基亞氨基甲基)-2-甲基-5-(甲基磺酰基)-4-(1H-吡咯-1-基)-苯甲酰胺，可以按照美國專利號5,753,680中公開的內(nèi)容進行制備，其公開的內(nèi)容引入本文作為參考。優(yōu)選的NHE-1抑制劑BIIB-513，即N-(氨基亞氨基甲基)-4-(4-(2-呋喃基羰基)-1-哌嗪基-3-(甲基磺酰基)-苯甲酰胺，可以按照美國專利號6,114,335中公開的內(nèi)容進行制備，其公開的內(nèi)容引入本文作為參考。優(yōu)選的NHE-1抑制劑TY-12533，即6，7，8，9-四氫-2-甲基-5H-環(huán)庚三烯并[b]吡啶-3-羰基胍，可以按照PCT國際申請公開號WO98/39300中公開的內(nèi)容進行制備，其公開的內(nèi)容引入本文作為參考。優(yōu)選的NHE-1抑制劑M-15681，即N-(氨基亞氨基甲基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酰胺，可以按照EPO0708091中公開的內(nèi)容進行制備，其公開的內(nèi)容引入本文作為參考。
化合物作為NHE-1抑制劑的能力可以按照下文詳細描述的方法進行測定。
補體調(diào)節(jié)劑是指一種可以調(diào)節(jié)(即控制或抑制)正常存在于血清中的某些不耐熱的物質(zhì)的試劑，這些物質(zhì)對某些細菌和其它通過稱為抗體C的補體結(jié)合性抗體致敏的細胞是破壞性的?？贵wC含有至少20種不同的血清蛋白，其活性受一系列引起酶裂解的相互作用的影響，所述相互作用可以分成至少兩種不同的途徑。補體途徑可以通過多種機制的組合引起體內(nèi)的心肌缺血-再灌注損傷，這些機制包括但不僅限于，刺激從各種細胞類型中釋放細胞因子、粘著分子的表達和嗜中性白細胞浸潤，所有這些機制均可以直接引起細胞死亡。因此，我們確信，將NHE-1抑制劑和補體調(diào)節(jié)劑聯(lián)合給藥可以比單獨給藥任何一種物質(zhì)產(chǎn)生更大的對由于局部缺血引起的組織損傷的保護作用。
雖然任何補體調(diào)節(jié)劑均可用于本發(fā)明的方法和藥物組合物，但通常優(yōu)選所述的補體調(diào)節(jié)劑選自C5a抑制劑、優(yōu)選L-747981，或其可藥用鹽，1型可溶性補體受體(sCR1)抑制劑或其類似物、優(yōu)選脒基苯基丙酮酸(APPA)和C1酯酶抑制劑。
優(yōu)選的C5a抑制劑L-747981(其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示)及其可藥 L-747981選擇性地與C5a受體結(jié)合的能力公開于Flanagan，K.L.等，ACS，210th ChicagoMEDI 085(1995)。優(yōu)選的1型可溶性補體受體(sCR1)抑制劑脒基苯基丙酮酸(APPA)可以購買到。
化合物抑制C5a的能力可以按照Vakeva，A.P.等，Circulation，97(22)，225-7(1998)中描述的方法測定?；衔镆种圃趕CR1受體的補體激活的能力可以按照Rittershaus，C.W.，J.Biol.Chem.，274(16)，11237-44(1999)中描述的方法測定?；衔镆种艭1酯酶的能力可以按照Benny，A.G.等，Haematologia，22(3)，189-93(1989)中描述的方法測定。
通常，術(shù)語代謝調(diào)節(jié)劑是指任何可以調(diào)節(jié)(即，控制、刺激或抑制)一種或多種代謝途徑的物質(zhì)。就本發(fā)明的方法和藥物組合物而言，代謝調(diào)節(jié)劑例如丙酮酸脫氫酶激酶抑制劑如二氯乙酸(DCA)可以激活心肌脫氫酶(PDC)復(fù)合物，從而在局部缺血的心肌中增加葡萄糖的氧化和減少脂肪酸的氧化。因此，用NHE-1抑制劑和代謝調(diào)節(jié)劑的聯(lián)合形式來減輕局部缺血性組織損傷應(yīng)當(dāng)能夠產(chǎn)生額外的心臟保護益處。
雖然任何代謝調(diào)節(jié)劑均可用于本發(fā)明的方法和藥物組合物，但通常優(yōu)選所述調(diào)節(jié)劑選自丙酮酸脫氫酶復(fù)合物向上調(diào)節(jié)劑/激活劑、優(yōu)選二氯乙酸(DCA)，丙酮酸脫氫酶激酶抑制劑、優(yōu)選DCA，丙二酸單酰輔酶A脫羧酶抑制劑，乙酰輔酶A羧化酶激活劑，部分脂肪酸氧化(pFOX)抑制劑、優(yōu)選雷諾嗪或曲美他嗪，5’AMP-激活的蛋白激酶(AMPK)抑制劑，卡尼汀棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑、優(yōu)選乙莫克舍，以及脂肪酸輔酶A合酶抑制劑、優(yōu)選triascin C。優(yōu)選的pFOX抑制劑雷諾嗪或曲美他嗪可以分別按照美國專利號4,567,264和4,663,325中公開的內(nèi)容進行制備，這些專利引入本文作為參考。優(yōu)選的卡尼汀棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑乙莫克舍可以按照美國專利號4,337,267中的描述進行制備，其公開的內(nèi)容引入本文作為參考。優(yōu)選的脂肪酸輔酶A合酶抑制劑triascin C、即(2E，4E，7E)-十一碳三烯-亞硝基腙可以按照美國專利號4,297,096中的描述進行制備，其公開的內(nèi)容引入本文作為參考。
化合物作為丙酮酸脫氫酶復(fù)合物向上調(diào)節(jié)劑/激活劑、丙酮酸脫氫酶激酶抑制劑或丙二酸單酰輔酶A脫羧酶抑制劑的能力可以按照Stanley，W.C.等，J.Mol.Cell.Cardiol.，28，905-914(1996)中描述的方法測定?；衔镒鳛橐阴］o酶A羧化酶激活劑的能力可以按照Belke，D.D.等，Biochem.Biophys.Acta，1391(1)，25-36(1998)中描述的方法測定?；衔镒鳛椴糠种舅嵫趸?pFOX)抑制劑的能力可以按照McCormack J.G.等，J.Appl.Physiol.，8112，905-910(1996)或Merrill G.F.，等，Am.J.Physiol.，273，E1107-1112(1997)中描述的方法測定?；衔镒鳛榭嵬∽貦磅＾D(zhuǎn)移酶抑制劑的能力可以按照Kudo等，J.Biol.Chem.，270，17513-17520(1995)中描述的方法測定。化合物作為5’AMP-激活的蛋白激酶(AMPK)抑制劑的能力可以按照Haystead T.A.等，Eur.J.Biochem.，187，199-205(1990)中描述的方法測定。化合物作為脂肪酸輔酶A合酶抑制劑的能力可以按照如下系統(tǒng)測定。
氧化酶/過氧化氫酶偶聯(lián)系統(tǒng)在550nm處吸光度的降低顯示了對脂肪酸輔酶A合酶的抑制作用。焦磷酸酶偶聯(lián)系統(tǒng)孔雀石在620nm處吸光度的降低顯示了對脂肪酸輔酶A合酶的抑制作用。
通常，抗細胞凋亡劑可以抑制細胞凋亡、即，編程性細胞死亡，某些細胞通過該過程碎裂成膜結(jié)合的顆粒而自毀，這些顆粒隨后被其它細胞例如巨噬細胞吞噬。由于已知在心肌缺血-再灌注損傷的過程中會發(fā)生細胞凋亡，因此確信抗細胞凋亡劑對細胞凋亡級聯(lián)的酶抑制作用與用NHE-1抑制劑治療聯(lián)合可以比單獨給藥任何一種物質(zhì)產(chǎn)生更大的對由于局部缺血引起的組織損傷的保護作用。
雖然任何抗細胞凋亡劑均可用于本發(fā)明的方法和藥物組合物，但通常優(yōu)選所述的抗細胞凋亡劑包括caspase抑制劑。術(shù)語caspase抑制劑是指任何能夠抑制caspases活性的物質(zhì)，caspases是在誘導(dǎo)哺乳動物細胞的細胞凋亡、例如再灌注過程中的心肌細胞以及局部缺血過程中的神經(jīng)細胞的過度細胞凋亡中所涉及的一種突出的酶家族。通常優(yōu)選的用于本發(fā)明的方法和藥物組合物的caspase抑制劑選自式(II)化合物 其中R1和R2與它們所連接的氮合在一起形成4至7元環(huán)；R3和R4與它們所連接的氮合在一起形成4至7元環(huán)；R是苯甲酰基或(C1-6)烷基；和式(III)化合物 其中R1是氫或(C1-4)烷基；R2是(C1-10)烷基，其選擇性地被芳基(C1-4)烷基、選擇性取代的雜芳基(C1-4)烷基、選擇性取代的(C3-7)環(huán)烷基取代，或者R1和R2與它們所連接的氮合在一起形成3至10元環(huán)，該環(huán)選擇性地含有另外的選自氧、氮或硫的雜原子；R3和R4是(C1-6)烷基、氫、硝基或鹵素；R5是(C1-6)烷基、氫、芳基烷基或雜芳基烷基。
結(jié)構(gòu)式(II)的優(yōu)選的caspase抑制劑可以按照PCT國際申請公開號WO99/65451中的描述制備。結(jié)構(gòu)式(III)的優(yōu)選的caspase抑制劑可以按照PCT國際申請公開號WO99/06367中的描述制備。
化合物抑制細胞凋亡的能力可以按照Wu，J.C.等，Methods，17(4)，320-8(1999)的方法測定。一種物質(zhì)作為caspase抑制劑的能力可以按照上述PCT國際申請公開號WO99/06367和WO99/65451中描述的方法測定。
本發(fā)明中所用的術(shù)語氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)通常是指任何可以調(diào)節(jié)(即，抑制、促進或增強)氧化氮自由基(NO-)的酶催化形成的物質(zhì)，氧化氮自由基是一種已知的細胞間通訊的介質(zhì)和有效的血管擴張劑，該自由基通過氧化氮合酶催化的L-精氨酸與2O2和1.5NADPH的反應(yīng)生成。由于某些物質(zhì)可以增加誘導(dǎo)型氧化氮合酶(iNOS，即，3型)的表達，因此目前確信由該酶或氧化氮供體產(chǎn)生的氧化氮具有心臟保護作用。此外，確信在局部缺血-再灌注損傷過程中由內(nèi)皮NOS(2型)或神經(jīng)元NOS(1型)迅速產(chǎn)生的NO也具有心臟保護作用。關(guān)于由氧化氮供體產(chǎn)生的NO的心臟保護作用的詳細討論可以參見，例如，Takano，H.，等，Circ.Res.，83，73-84(1998)和Pabla，R.，等，Heart Circ.Physiol 38 H1113-1121(1995)。與此相反的是，還報道了通過NOS抑制劑抑制NO也可以對局部缺血性損傷產(chǎn)生保護作用。參見，例如，Depre，C.等，Circulation，92，1911-1918(1995)和Woolfson，R.G.等，Circulation，91，1545-1551(1995)。因此確信用氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和NHE-1抑制劑聯(lián)合進行治療可以比單獨給藥任何一種物質(zhì)產(chǎn)生更大的對由于局部缺血引起的組織損傷的保護作用。
雖然任何氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)均可用于本發(fā)明的方法和藥物組合物，但通常優(yōu)選該物質(zhì)選自單磷酰基脂質(zhì)A或其類似物、優(yōu)選RC-552(MPL-C)或ONO-4007，氧化氮供體、優(yōu)選nipride，氧化氮合酶激活劑、優(yōu)選氨基胍或N(G)-單甲基-L-精氨酸(L-NMMA)。
優(yōu)選的單磷酰基脂質(zhì)A類似物ONO-4007，即(S)-2-脫氧-2-((1-氧代-3-((1-氧代-9-苯基壬基)氧基}十四烷基)氨基)-，3-苯壬酸酯4-(酸式硫酸酯)-D-葡萄糖，可以按照美國專利號5,294,723和5,733,927中的描述制備，其公開的內(nèi)容引入本文作為參考。優(yōu)選的氧化氮供體nipride，即，亞硝酰五氰基高鐵酸(II)鈉，可以按照Playfair，L.，Proc.Roy.Soc.London 5，846(1849)中的描述制備。優(yōu)選的氧化氮合酶抑制劑氨基胍可以按照Smith，G.B.L.等，J.Am.Chem.Soc.，57，2730(1935)中的描述制備。優(yōu)選的氧化氮抑制劑N(G)-單甲基-L-精氨酸(L-NMMA)可以從商業(yè)途徑獲得。
一種物質(zhì)作為氧化氮供體、氧化氮合酶激活劑或氧化氮合酶抑制劑的能力可以按照Rees，D.D等，British Journal of Pharmacology，101，746-52(1990)和Archer，S.，F(xiàn)ASEB Journal，7，349-60(1999)中描述的方法測定。
在本發(fā)明的方法和藥物組合物的實踐中，還可將NHE-1抑制劑與酶/蛋白調(diào)節(jié)劑聯(lián)合使用，所述酶/蛋白調(diào)節(jié)劑選自蛋白激酶Cε激活劑；內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、優(yōu)選S-17162；組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)；Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑、優(yōu)選KB-R7943；以及聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑，優(yōu)選3-氨基苯甲酰胺或式(IV)的化合物或其可藥用鹽、前藥、活性代謝物或溶劑化物 其中R1是H、鹵素、氰基、選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；或-C(O)-R10，其中R10是氫、選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；或-OR100或NR100R110，其中R100和R110彼此獨立地是氫或選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；R2是H或烷基；R3是H或烷基；R4是H、鹵素或烷基；X是O或S；Y是(CR5R6)(CR7R8)n或N＝C(R5)，其中n是0或1；R5和R6彼此獨立地是H或選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；R7和R8彼此獨立地是H或選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基。
術(shù)語蛋白激酶Cε是指細胞質(zhì)中的鈣激活的激酶家族，據(jù)信該激酶是局部缺血預(yù)適應(yīng)途徑的下游介質(zhì)。由于該酶的激活劑具有心臟保護作用，因此，用NHE-1抑制劑和蛋白激酶Cε激活劑的聯(lián)合形式來減輕局部缺血性組織損傷應(yīng)當(dāng)能夠產(chǎn)生額外的心臟保護益處。已知內(nèi)皮素可以引起心肌缺血-再灌注損傷，因此，通過用內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑阻止內(nèi)皮素的生產(chǎn)，用NHE-1抑制劑和內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的聯(lián)合形式來減輕局部缺血性組織損傷應(yīng)當(dāng)能夠產(chǎn)生額外的心臟保護益處。已知組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑可用于治療深部靜脈血栓形成(DVF)和急性冠脈綜合征(ACS)、一種包括局部缺血性分發(fā)作的綜合征。因此，用NHE-1抑制劑和TAFI抑制劑的聯(lián)合形式來減輕局部缺血性組織損傷應(yīng)當(dāng)能夠產(chǎn)生額外的心臟保護益處。在心臟再灌注過程中，由于NHE-1活性引起細胞內(nèi)鈉水平的增加，Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)可以增加細胞內(nèi)鈣的水平，這會導(dǎo)致攣縮、心律失常和細胞死亡。因此，抑制NCX-1具有心臟保護作用，從而用NHE-1抑制劑和NCX-1抑制劑的聯(lián)合形式來減輕局部缺血性組織損傷應(yīng)當(dāng)能夠產(chǎn)生額外的心臟保護益處。PARS/PARP是一種DNA修復(fù)酶，它在心肌缺血-再灌注損傷過程中由于DNA單鏈的斷裂而被激活。該酶可以消除細胞內(nèi)的NAD+和ATP池，并減緩可以引起或直接造成心臟細胞功能障礙和/或死亡的糖酵解和線粒體呼吸的速率。因此確信PARS/PARP抑制劑具有心臟保護作用，從而用NHE-1抑制劑和PARS/PARP抑制劑的聯(lián)合形式來減輕局部缺血性組織損傷應(yīng)當(dāng)能夠產(chǎn)生額外的心臟保護益處。
優(yōu)選的內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑-17162、即N-(2，3-二羥基丙基膦?；?(S)-Leu-(S)-Trp-OH二鈉鹽，可以按照美國專利號5,481,030、5,591,728和5,608,045中公開的方法制備，其公開的內(nèi)容全文引入本文作為參考。優(yōu)選的Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑KB-R7943、即(2-(2-(4-(4-硝基芐氧基)-苯基-乙基)-異硫脲甲磺酸鹽)，可以按照PCT國際申請公開號WO97/09306中的描述制備。優(yōu)選的聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑3-氨基苯甲酰胺可以購買到。式(IV)的優(yōu)選的聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑可以按照PCT國際申請公開號WO2000/42040中的描述制備。
一種物質(zhì)作為蛋白激酶Cε激活劑的能力可以按照Bowling，N.等，Circulation，99 384-91(1999)中公開的方法測定。一種物質(zhì)作為內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的能力可以按照Fassina，G.等，Peptide Res.，673-78(1993)中描述的方法測定。一種物質(zhì)作為組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)的能力可以按照Bajzar，L.等，J.Biol.Chem.，270，14477-14484(1995)中描述的方法測定。一種物質(zhì)作為Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑的能力可以按照Iwamoto，T.等，Am.J.Physiol.，275，C423-430(1998)描述的方法測定。一種物質(zhì)作為聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的能力可以按照Decker，P.等，Clinical Cancer Research，5，1169-1172(1999)中描述的方法測定。
通常，可將NHE-1抑制劑以約0.001至約100mg/kg體重/天的劑量水平向哺乳動物給藥。對于體重為約70kg的正常成年人，通常優(yōu)選約0.01至約50mg/kg體重的劑量范圍。但是，可能需要根據(jù)所治療的哺乳動物的年齡和體重、準(zhǔn)備采用的給藥途徑、所給藥的具體物質(zhì)等對這些一般范圍進行調(diào)整。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以參照本文所公開的內(nèi)容確定出對于具體哺乳動物的劑量范圍和最佳劑量。
補體調(diào)節(jié)劑、代謝調(diào)節(jié)劑、抗細胞凋亡劑、氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)或酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的劑量通常也取決于多種因素，包括所治療哺乳動物的健康情況、所需的治療程度、并行療法(如果有的話)的性質(zhì)和種類、以及治療的頻率和所需效果的性質(zhì)。通常，補體調(diào)節(jié)劑、代謝調(diào)節(jié)劑、抗細胞凋亡劑、氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)或酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的劑量范圍從約0.001至約250mg/kg體重/天。對于體重為約70kg的正常成年人，通常優(yōu)選約0.1至約25mg/kg體重的劑量范圍。但是，可能需要根據(jù)治療對象的年齡和體重、準(zhǔn)備采用的給藥途徑、所給藥的具體物質(zhì)等對該一般劑量范圍進行一些調(diào)整。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以參照本文所公開的內(nèi)容確定出對于具體哺乳動物的劑量范圍和最佳劑量。
根據(jù)本發(fā)明的方法，將NHE-1抑制劑和選自補體調(diào)節(jié)劑、代謝調(diào)節(jié)劑、抗細胞凋亡劑、氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物的聯(lián)合形式向需要治療的哺乳動物給藥，優(yōu)選以藥物組合物的形式進行給藥。在本發(fā)明的聯(lián)合形式中，NHE-1抑制劑和選自補體調(diào)節(jié)劑、代謝調(diào)節(jié)劑、抗細胞凋亡劑、氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物可以分別或者以同時含有兩種物質(zhì)的藥物組合物給藥。通常優(yōu)選口服給藥。但是，如果治療對象不能吞咽，或者口服給藥有損害或不適用，也可以采用胃腸外或經(jīng)皮給藥。
根據(jù)本發(fā)明的方法，當(dāng)將NHE-1抑制劑和選自補體調(diào)節(jié)劑、代謝調(diào)節(jié)劑、抗細胞凋亡劑、氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物一起給藥時，可以用通常優(yōu)選的相同方法在時間上依次或同時給藥。對于依次給藥，可將NHE-1抑制劑和選自補體調(diào)節(jié)劑、代謝調(diào)節(jié)劑、抗細胞凋亡劑、氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物以任何順序給藥。通常優(yōu)選口服給藥。特別優(yōu)選口服并且同時給藥。當(dāng)將NHE-1抑制劑和選自補體調(diào)節(jié)劑、代謝調(diào)節(jié)劑、抗細胞凋亡劑、氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物依次給藥時，可以將各物質(zhì)通過相同或不同的方法給藥。
根據(jù)本發(fā)明的方法，優(yōu)選將NHE-1抑制劑和選自補體調(diào)節(jié)劑、代謝調(diào)節(jié)劑、抗細胞凋亡劑、氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物的聯(lián)合形式以含有可藥用載體、賦形劑或稀釋劑的藥物組合物的形式給藥。因此，NHE-1抑制劑和選自補體調(diào)節(jié)劑、代謝調(diào)節(jié)劑、抗細胞凋亡劑、氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物的聯(lián)合形式可以以任何常規(guī)的口服、直腸、經(jīng)皮、胃腸外(例如靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、膀胱內(nèi)、局部(例如粉末、軟膏或滴劑)、頰部或鼻劑量形式分別或一起向患者給藥。
適于胃腸外注射的組合物可以包括可藥用的無菌含水或非水溶液、分散液、混懸液或乳液，以及用于重建成無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末。適宜的含水和非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑的例子包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、它們的適宜混合物、植物油(例如橄欖油)和可注射的有機酯例如油酸乙酯。可以通過使用包衣如卵磷脂、在分散液的情況下通過保持所需的粒度、以及通過使用表面活性劑來保持適當(dāng)?shù)牧鲃有浴?br> 這些組合物還可含有輔劑，例如防腐劑、濕潤劑、乳化劑和分散劑。可以用各種抗菌劑和抗真菌劑例如對羥基苯甲酸酯類、氯丁醇、苯酚、山梨酸、等來預(yù)防微生物對組合物的污染。組合物中還可以含有等滲劑，例如糖、氯化鈉等。可以通過使用能夠延緩吸收的物質(zhì)例如單硬脂酸鋁和明膠來延遲可注射組合物的吸收。
用于口服給藥的固體劑型包括膠囊、片劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，活性化合物與至少一種惰性的常規(guī)藥物賦形劑(或載體)例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣或(a)填充劑或增量劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合劑，例如羧基甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(c)濕潤劑，例如甘油；(d)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、土豆或木薯淀粉、藻酸、某些復(fù)合硅酸鹽和碳酸鈉；(e)溶液遲延劑，例如石蠟；(f)吸收促進劑，例如季銨鹽化合物；(g)潤濕劑，例如鯨蠟醇和甘油單硬脂酸酯；(h)吸附劑，例如高齡土和膨潤土；和/或(i)潤滑劑，例如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉或其混合物混合。在膠囊和片劑的情況下，劑型中還可含有緩沖劑。
相同類型的固體組合物還可以在使用乳糖以及高分子量聚乙二醇等賦形劑的填充的軟或硬明膠膠囊中用作填料。
片劑、糖衣丸、膠囊和顆粒劑等固體劑型可以用包衣和外殼、例如腸溶包衣和本領(lǐng)域已知的其它包衣來制備。它們還可以含有不透明劑，并且還可以是能夠以延遲的方式釋放活性化合物的組合物形式?？梢允褂玫陌窠M合物的例子是聚合物和蠟?；钚曰衔镞€可以是微膠囊的形式，如需要，可以含有一種或多種上述的賦形劑。
用于口服給藥的液體劑型包括可藥用的乳液、溶液、混懸液、糖漿和酏劑。除活性化合物外，液體劑型還可含有本領(lǐng)域常用的惰性稀釋劑，例如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油、特別是棉子油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和脫水山梨醇的脂肪酸酯或這些物質(zhì)的混合物等。
除了所述惰性稀釋劑外，組合物中還可含有輔劑，例如潤濕劑、乳化劑和助懸劑、甜味劑、矯味劑和芳香劑。
除活性化合物外，混懸劑中還可含有助懸劑，例如乙氧基化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、氫氧化鋁(aluminum metahydroxide)、膨潤土、瓊脂和西黃蓍膠或這些物質(zhì)的混合物等。
用于直腸給藥的組合物優(yōu)選包括栓劑，其可以通過將本發(fā)明的化合物與適宜的無刺激性的賦形劑或載體例如可可脂、聚乙二醇或栓劑蠟混合來制備，這些賦形劑或載體在常溫下為固體，但在體溫下為液體，從而可以在直腸內(nèi)熔化并釋放出活性成分。
NHE-1抑制劑和選自補體調(diào)節(jié)劑、代謝調(diào)節(jié)劑、抗細胞凋亡劑、氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物的局部給藥劑型可以包括軟膏、粉末、噴霧劑和吸入劑?？蓪⒒钚猿煞衷跓o菌條件下與可藥用載體以及可能需要的各種防腐劑、緩沖劑或拋射劑混合。
含有本發(fā)明的聯(lián)合形式的聯(lián)合形式和藥物組合物可用作治療劑或預(yù)防劑，用于由于(Na+/H+)交換轉(zhuǎn)運系統(tǒng)加速所引起或加重的疾病，例如心血管疾病[例如動脈硬化、高血壓、心律失常(例如缺血性心律失常、由于心肌梗塞引起的心律失常、心肌擊昏、心肌功能障礙、PTCA或溶栓后的心律失常等)、心絞痛、心臟肥大、心肌梗塞、心衰(例如充血性心衰、急性心衰、心臟肥大等)、PTCA、PTCI后的再狹窄、休克(例如出血性休克、內(nèi)毒素休克等)]、腎疾病(例如糖尿病、糖尿病性腎病、缺血性急性腎衰等)、與局部缺血或局部缺血再灌注有關(guān)的器管疾病[例如與心肌缺血再灌注有關(guān)的疾病、急性腎衰或由手術(shù)治療例如冠狀動脈旁路移植(CABG)手術(shù)、血管手術(shù)、器管移植、非心臟的手術(shù)或經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動脈成形術(shù)(PTCA)引起的疾病]、腦血管疾病(例如缺血性中風(fēng)、出血性中風(fēng)等)、腦缺血疾病(例如與腦梗塞有關(guān)的疾病、腦中風(fēng)后引起的后遺癥或腦水腫。本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物還可用作冠狀動脈旁路移植(CABG)手術(shù)、血管手術(shù)、經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動脈成形術(shù)(PTCA)、PTCI、器管移植和非心臟的手術(shù)過程中的心肌保護劑。
優(yōu)選地，可將本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物在冠狀動脈旁路移植(CABG)手術(shù)、血管手術(shù)、經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動脈成形術(shù)(PTCA)、器管移植或非心臟的手術(shù)之前、手術(shù)過程中或手術(shù)之后用于保護心肌。
優(yōu)選地，可將本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物在存在進行性心臟(急性冠脈綜合征，例如心肌梗塞或不穩(wěn)定型心絞痛)或腦局部缺血事件(例如中風(fēng))的患者中用于保護心肌。
優(yōu)選地，可將本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物在確診患有冠心病(例如，以前出現(xiàn)過心肌梗塞或不穩(wěn)定型心絞痛)的患者或心肌梗塞的高?；颊?年齡超過65歲并且有兩項以上冠心病的危險因素)中用于長期的心肌保護。
本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物作為藥物在哺乳動物(例如人)中、例如存在進行性心臟或腦局部缺血事件的患者中治療疾病(例如本文中詳細描述的疾病)，或在確診患有冠心病或有發(fā)生冠心病、心功能障礙或心肌昏厥危險性的患者中長期的心臟保護的用途可以通過本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物在常規(guī)的臨床前心臟保護試驗[參見Klein，H.等，Circulation 92912-917(1995)中的體內(nèi)試驗；Scholz，W.等，Cardiovascular Research 29260-268(1995)中的離體心臟試驗；Yasutake M.等，Am.J.Physiol.，36H2430-H2440(1994)中的抗心律失常試驗；Kolke等，J.Thorac.Cardiovasc.Surg.112765-775(1996)中的NMR試驗]和以下描述的其它體外和體內(nèi)試驗中的活性來證實。這些實驗還提供了將本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物的活性與其它已知化合物的活性進行比較的方法。這些比較的結(jié)果可用于確定在哺乳動物、包括人中治療所述疾病的劑量水平。
由于本發(fā)明涉及用可以分別進行給藥的活性成分的聯(lián)合形式來減輕由于局部缺血引起的組織損傷的方法，因此，本發(fā)明還涉及將獨立的藥物組合物以藥盒的形式合并。本發(fā)明的藥盒含有在第一單位劑量形式中的一定量的1型鈉-氫交換器(NHE-1)抑制劑和可藥用載體、賦形劑或稀釋劑；在第二單位劑量形式中的一定量的選自(a)補體調(diào)節(jié)劑、(b)代謝調(diào)節(jié)劑、(c)抗細胞凋亡劑、(d)氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和(e)選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物和可藥用載體、賦形劑或稀釋；以及容器。容器用來包含各獨立的成分，并且可以含有例如，分開的小瓶或分開的錫箔包裝，但是，各獨立的組合物也可以包含在單個的、未分開的容器中。藥盒中通常還含有將各獨立的成分進行給藥的指導(dǎo)。當(dāng)所述獨立的組分以不同的劑型(例如口服和胃腸外)、以不同的給藥間隔施用或者當(dāng)需要由處方醫(yī)生來確定聯(lián)合形式中各組分的用量時，藥盒的形式是特別有利的。
所述藥盒的一個實例是所謂的凸泡包裝。凸泡包裝是包裝工業(yè)熟知的，并被廣泛用于包裝藥物單位劑量形式(片劑、膠囊等)。凸泡包裝通常由相對較硬材料的薄片組成，其上覆蓋有優(yōu)選是透明塑料材料的箔。在包裝過程中，在塑料箔上形成凹穴(例如凸泡)。所述凹穴與待包裝片劑或膠囊的大小和形狀相同。然后，將片劑或膠囊放在凹穴中，并在與凹穴形成相反的表面，將相對較硬材料的薄片與塑料箔密封。結(jié)果，片劑或膠囊被密封在塑料箔和所述薄片之間的凹穴內(nèi)。優(yōu)選所述薄片的強度是通過用手壓在凹穴的外表面上可以從凸泡包裝中取出片劑或膠囊，由此在薄片上的凹穴處形成開口。然后可以從所形成的開口取出所述片劑或膠囊。
還可在包裝上提供記憶輔助裝置，例如貼近于片劑或膠囊的數(shù)字或類似的標(biāo)記，這些標(biāo)記與應(yīng)當(dāng)服用指定的劑型的給藥方案的天數(shù)相對應(yīng)。所述記憶輔助裝置的另一實例是印在包裝上的日歷，例如“第一周，星期一、星期二…等…，第二周，星期一、星期二…”等。根據(jù)本文公開的內(nèi)容，其它的改變形式對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是顯而易見的?！懊咳談┝俊笨梢允菃蝹€片劑或膠囊或多個片劑或膠囊，或是需要在指定的一天內(nèi)服用的片劑或膠囊。此外，1型鈉-氫交換器(NHE-1)抑制劑的每日劑量可以由單個片劑或膠囊組成，而選自(a)補體調(diào)節(jié)劑、(b)代謝調(diào)節(jié)劑、(c)抗細胞凋亡劑、(d)氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和(e)選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物的每日劑量可以由多個片劑或膠囊組成，反之亦然。記憶輔助裝置應(yīng)說明這些情況。
在本發(fā)明的另一個具體實施方案中，提供了一種可以按照其預(yù)期的使用順序每次分散一個每日劑量的包裝。優(yōu)選在包裝上配有記憶輔助裝置，從而更有利于遵從給藥方案。所述記憶輔助裝置的一個實例是一個機械計數(shù)器，該計數(shù)器顯示已經(jīng)分散的每日劑量數(shù)。所述記憶輔助裝置的另一個實例是一個與液晶讀數(shù)器相連的以電池為能源的微芯片記憶裝置，或是可發(fā)聲的提醒信號裝置，所述裝置可讀出上一次服藥的日期是時間和/或提醒患者下一次需要服藥的時間。
人NHE-1抑制活性的測量測量人NHE-1活性和抑制劑效力的方法是基于Watson等所公開的方法(Am.J.Physiol.，24G229-G238，1991)，在該方法中，測量在細胞內(nèi)酸化后由NHE-介導(dǎo)的細胞內(nèi)pH的恢復(fù)。因此，將穩(wěn)定表達人NHE-1的成纖維細胞(Counillon，L.等，Mol.Pharmacol.，441041-1045(1993))置于涂有膠原的96孔平板上(50,000/孔)然后在生長培養(yǎng)基(DMEM高葡萄糖，10％胎牛血清，50u/ml青霉素和鏈霉素)中生長至融合。將融合的平板在37℃下和pH敏感型熒光探針BCECF(5μM；Molecular Probes，Eugene，OR)一起保溫30分鐘。將負載了BCECF的細胞在含酸培養(yǎng)基(70mM氯化膽堿，50mM NH4Cl，5mM KCl，1mM MgCl2，1.8mM CaCl2，5mM葡萄糖，10mM HEPES，pH 7.5)中于37℃下保溫30分鐘，然后置于熒光成像平板讀數(shù)器(FluorescentImaging Plate Reader)(Molecular Devices，CA)中。用485nM的激發(fā)波長和525nM的發(fā)射波長檢測BCECF熒光。通過迅速將含酸培養(yǎng)基用恢復(fù)培養(yǎng)基(120mM NaCl，5mM KCl，1mM MgCl2，1.8mM CaCl2，5mM葡萄糖，10mM HEPES，pH7.5)±待測試化合物代替來引發(fā)細胞內(nèi)的酸化，并通過隨后的時間依賴性的BCECF熒光的增加來監(jiān)測由NHE介導(dǎo)的細胞內(nèi)pH的恢復(fù)。人NHE-1抑制劑的效力以減少細胞內(nèi)pH的恢復(fù)達50％時的濃度(IC50)來計算。
作為背景資料，應(yīng)當(dāng)注意，在冠狀動脈再灌注后的短時間心肌缺血可以防止心臟發(fā)生隨后的嚴重心肌缺血(Murry等)，Circulation 741124-1136，1986)。
本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物在預(yù)防由于局部缺血發(fā)作所引起的心臟組織損傷中的治療作用可以參照Tracey等的描述(Cardiovasc.Res.，33410-415，1997)，通過本文中具體描述的體外試驗來證實。心臟保護作用(表現(xiàn)為梗塞心肌的減少)可以在藥理學(xué)上用腺苷受體激動劑在用作心肌缺血預(yù)適應(yīng)體外模型的離體的、逆行灌注的兔心臟中引發(fā)(Tracey等，Cardiovasc.Res.，33410-415，1997)。下述的體外試驗證實，當(dāng)向兔子的離體心臟給藥時，本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物也可以在藥理學(xué)上誘導(dǎo)心臟保護作用，即減少心肌梗塞的面積。將本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物的效果與局部缺血預(yù)適應(yīng)和A1腺苷激動劑，PIA(N6-1-(苯基-2R-異丙基)腺苷，已證實其可以在兔離體心臟中在藥理學(xué)上誘導(dǎo)心臟保護作用，Tracey等，Cardiovasc.Res.，33410-415，1997)進行比較。具體的方法如下所述。
這些實驗所用的方法基本按照Tracey等，Cardiovasc.Res.，33410-415，1997的描述進行。將雄性新西蘭白兔(3-4kg)用戊巴比妥鈉麻醉(30mg/kg，i.v.)。在達到深度麻醉后(通過缺乏眼的瞬目反射來確定)，對動物進行插管并用正壓呼吸機用100％O2進行換氣。進行左胸廓切開術(shù)，暴露心臟，在左冠狀動脈的隆凸支上繞一個松的動脈夾(2-0絲)，距離心臟尖端約2/3的距離。從胸內(nèi)取出心臟并迅速(＜30秒)安裝在Langendorff裝置上。將心臟用改良的Krebs溶液(NaCl118.5mM，KCl 4.7mM，MgSO41.2mM，KH2PO41.2mM，NaHCO324.8mM，CaCl22.5mM和葡萄糖10mM)在80mmHg的恒壓下于37℃以非循環(huán)的方式進行逆行灌注。通過通入95％ O2/5％ CO2將灌注液的pH保持在7.4-7.5。通過用加熱的水箱控制生理溶液和灌注管及離體心臟周圍的水夾套的溫度對心臟溫度進行嚴格地控制。通過插入到左心室內(nèi)并且通過不銹鋼管與壓力傳感器相連的乳膠氣囊來測定心率和左心室壓。將心室內(nèi)的氣囊充氣以產(chǎn)生80-100mmHg的心臟收縮壓和≤10mmHg的舒張壓。用內(nèi)聯(lián)的流量探頭連續(xù)監(jiān)測總的冠脈流量并用心臟的重量標(biāo)準(zhǔn)化。
使心臟平衡30分鐘，在這段時間內(nèi)，心臟必需顯示在以上所列參數(shù)范圍內(nèi)的穩(wěn)定的左心室壓。如果在30分鐘的局部缺血期之前的任何時間心率降至了180bpm以下，則在實驗的剩余時間內(nèi)用心臟起博器將心率控制在大約200bpm。通過完全停止心臟灌注(完全缺血)5分鐘然后再灌注10分鐘來誘導(dǎo)局部缺血預(yù)適應(yīng)。通過系緊環(huán)繞冠狀動脈支的動脈夾來產(chǎn)生局部缺血。在30分鐘的局部缺血后，將動脈夾放松并對心臟再灌注120分鐘。
通過以預(yù)定的濃度從30分鐘局部缺血期的30分鐘之前開始輸注聯(lián)合形式或藥物組合物并持續(xù)至120分鐘的再灌注期結(jié)束來誘導(dǎo)藥理學(xué)的心臟保護。接受待測試的聯(lián)合形式或藥物組合物的心臟不經(jīng)歷局部缺血預(yù)適應(yīng)期。將參比化合物PIA(25nM)灌注通過不接受待測試的聯(lián)合形式或藥物組合物的心臟5分鐘的時間，灌注在30分鐘局部缺血期的10分鐘之前結(jié)束。
在120分鐘的再灌注期結(jié)束時，將冠狀動脈動脈夾系緊，將0.5％硫酸鋅鎘熒光顆粒的懸浮液(1-10μM，Duke Scientific Corp.PaloAlto，CA)灌注通過心臟；這可以染色所有的心肌，但梗塞發(fā)展的危險區(qū)域(危險區(qū)域)除外。從Langendorff裝置上取下心臟，蘸干，用鋁箔包裹然后于-20℃保存過夜。第二天，將心臟從心室的一端至另一端切成2mm的橫向切片。將切片用1％氯化三苯基四氮唑(TTC)在磷酸鹽緩沖鹽水中于37℃染色20分鐘。由于TTC可與活的組織(含有NAD-依賴型脫氫酶)反應(yīng)，該染色可以區(qū)分活的組織(紅色染色)和死亡的組織(未染色的梗塞組織)。用預(yù)先校準(zhǔn)的圖象分析儀計算各左心室切片的梗塞面積(未染色)和危險面積(無熒光顆粒)。為了用不同心臟之間危險區(qū)域的差異將局部缺血性損傷標(biāo)準(zhǔn)化，將數(shù)據(jù)以梗塞面積比危險面積的比值(％IA/AAR)來表示。所有數(shù)據(jù)均用平均值±SE來表示，并用Mann-Whitney非參數(shù)試驗進行統(tǒng)計學(xué)比較，用Bonferroni校正進行多重比較。當(dāng)p＜0.05時認為是顯著性的。
本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物在預(yù)防由于局部缺血發(fā)作引起的心臟組織損傷中的治療作用也可以參照Liu等的描述(Circulation，Vol.84350-356，1991)通過本文中詳細描述的方法在體內(nèi)證實。該體內(nèi)試驗測試聯(lián)合形式和藥物組合物相對于接受鹽水載體的對照組的心臟保護作用。心臟保護作用(表現(xiàn)為梗塞心肌的減少)可以在藥理學(xué)上通過靜脈內(nèi)給藥腺苷受體激動劑在作為心肌缺血預(yù)適應(yīng)原位模型進行研究的完整的、麻醉的兔子中引發(fā)(Liu等，Circulation 84350-356，1991)。該體內(nèi)試驗測試在將聯(lián)合形式和藥物組合物向完整的、麻醉的兔子胃腸外給藥時，是否可以在藥理學(xué)上誘導(dǎo)心臟保護作用，即減少心肌梗塞的面積?？蓪⒈景l(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物的效果與使用A1腺苷激動劑N6-1-(苯基-2R-異丙基)腺苷(PIA，已證實其可以在原位研究的完整的麻醉兔子中在藥理學(xué)上誘導(dǎo)心臟保護作用，Liu等，Circulation 84350-356，1991)的局部缺血預(yù)適應(yīng)進行比較。所用方法如下所述。手術(shù)將雄性的新西蘭白兔(3-4kg)用戊巴比妥鈉麻醉(30mg/kg，i.v.)。通過腹側(cè)中線頸部切口術(shù)進行氣管切開術(shù)，然后將兔子用正壓呼吸機用100％氧氣換氣。在左頸靜脈內(nèi)放置導(dǎo)管用于給藥，在左頸動內(nèi)放置導(dǎo)管用于血壓測量。然后通過左胸廓切開術(shù)暴露心臟并在左冠狀動脈的隆凸支上繞一個松的動脈夾(00絲)。通過將動脈夾拉緊并在適當(dāng)?shù)奈恢脢A住引起局部缺血。將動脈夾放松使受影響的區(qū)域再灌注。通過青紫來證實心肌缺血；通過反應(yīng)性充血來證實再灌注。方法當(dāng)動脈壓和心率穩(wěn)定了至少30分鐘后，開始試驗。通過將冠狀動脈閉合5分鐘然后再灌注10分鐘來誘導(dǎo)局部缺血預(yù)適應(yīng)。通過輸注待測試的聯(lián)合形式或藥物組合物例如5分鐘的時間并在10分鐘后進行進一步的處理或者通過輸注腺苷激動劑PIA(0.25mg/kg)來誘導(dǎo)藥理學(xué)上的預(yù)適應(yīng)。在局部缺血預(yù)適應(yīng)、藥理學(xué)預(yù)適應(yīng)或沒有進行適應(yīng)(未適應(yīng)，載體對照)后，將動脈閉合30分鐘然后再灌注2小時以誘導(dǎo)心肌梗塞。將聯(lián)合形式或藥物組合物和PIA溶于鹽水或其它適宜的載體，然后分別以1至5mg/kg進行給藥。染色(Liu等，Circulation 84350-356，1991)在2小時的再灌注期結(jié)束時，迅速取出心臟，懸掛在Langendorff裝置上，用加熱至體溫(38℃)的生理鹽水沖洗1分鐘。用絲制的縫線作為動脈夾然后系緊以閉合動脈，用灌注液輸注0.5％硫酸鋅鎘熒光顆粒(1-10μm，DukeScientific Corp.Palo Alto，CA)的懸浮液以染色除危險區(qū)域(無熒光的心室)之外的所有心肌。然后將心臟迅速冷凍并于-20℃存放過夜。第二天，將心臟切成2mm的切片并用1％氯化三苯基四氮唑(TTC)染色。由于TTC可與活的組織反應(yīng)，該染色可以區(qū)分活的(紅色染色)組織和死亡的組織(未染色的梗塞組織)。用預(yù)先校準(zhǔn)的圖象分析儀計算各左心室切片的梗塞面積(未染色)和危險面積(無熒光顆粒)。為了用不同心臟之間危險區(qū)域的差異將局部缺血性損傷標(biāo)準(zhǔn)化，將數(shù)據(jù)以梗塞面積比危險面積的比值(％IA/AAR)來表示。所有數(shù)據(jù)均用平均值±SEM來表示，并用單因素ANOVA或Mann-Whitney非參數(shù)試驗進行統(tǒng)計學(xué)比較。當(dāng)p＜0.05時認為是顯著性的。
可以用科技文獻中報道的方法來測試本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物在非心臟組織例如腦或肝臟中減輕或預(yù)防局部缺血性損傷的用途。在這些試驗中，可將本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物通過優(yōu)選的途徑和給藥載體在優(yōu)選的給藥時間進行給藥，給藥時間可以在局部缺血事件之前、在局部缺血事件過程中、在局部缺血事件之后(再灌注期間)或在任何下述實驗階段的過程中。
本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物在減輕局部缺血性腦損傷中的有益效果可以采用Park等的方法(Ann.Neurol.1988；24543-551)在哺乳動物中證實。根據(jù)Park等的方法，將成年的雄性SpragueDawley大鼠先用2％氟烷麻醉，然后用含有0.5-1％氟烷的一氧化二氮-氧氣混合物(70％∶30％)進行機械換氣。然后進行氣管切開術(shù)。調(diào)整呼吸機的每次輸出量將動脈二氧化碳張力保持在約35mmHg并保持適當(dāng)?shù)膭用}氧(PaO2＞90mmHg)?？梢酝ㄟ^直腸溫度計監(jiān)測體溫，如需要，可以通過外部的加熱將動物保持在正常體溫。然后在手術(shù)顯微鏡下對動物進行顳下的顱骨切除術(shù)以暴露左大腦中動脈(MCA)的主干，然后將暴露的動脈用微兩極凝結(jié)法閉合以在大腦皮質(zhì)和基底核產(chǎn)生大的局部缺血性損傷。在MCA閉合3小時后，將大鼠用2％氟烷深度麻醉然后進行胸廓切開術(shù)以向左心室輸注肝素化的鹽水。通過右心房的切口收集流出液。在用鹽水沖洗之后，用約200mL 40％甲醛、冰乙酸和無水甲醇溶液(FAM；1∶1∶8，v/v/v)沖洗，然后將動物殺頭并將頭在固定液中放置24小時。然后取出大腦，切開，包埋在石蠟中然后切片(每個大腦約100片0.2mm的切片)。然后將切片用蘇木精-曙紅染色或用甲酚紫和Luxol固藍聯(lián)合進行染色，然后用預(yù)先校準(zhǔn)的圖象分析儀通過光學(xué)顯微鏡識別和定量局部缺血性損傷。將局部缺血的體積和面積用絕對單位(mm3和mm2)和總檢測區(qū)域的百分比來表示。治療組大鼠的腦切片和安慰劑處理的對照組大鼠的腦切片相比，相對或絕對局部缺血性損傷的面積或體積的減少證實了本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物減輕由MCA閉合引起的局部缺血性腦損傷的效果。
可用于證實本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物在減輕局部缺血性腦損傷中的有益效果的其它方法包括如下文獻中公開的方法Nakayama等，Neurology 1988，381667-1673；Memezawa等，Stroke 1992，23552-559；Folbergrova等，Proc.Natl.Acad.Sci.1995，925057-5059；和Gotti等，Brain Res.1990，522290-307。
本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物在減輕局部缺血性肝損傷中的有益效果可以用例如Yokoyama等的方法(Am.J.Physiol.1990；258G564-G570)在哺乳動物中證實。按照Yokoyama等的方法，將禁食的成年雄性Sprague Dawiey大鼠用戊巴比妥鈉(40mg/kg i.p.)麻醉，然后將動物切開氣管并用室內(nèi)的空氣進行機械換氣。切除肝臟然后置于保持恒溫(37℃)的環(huán)境室中，然后以15cm H2O的恒定壓力將改良的、不含血紅蛋白的Krebs-Henseleit緩沖液(單位mM118 NaCl，4.7KCl，27 NaHCO3，2.5 CaCl2，1.2 MgSO4，1.2 KH2PO4，0.05 EDTA和11mM葡萄糖，加300 U肝素)灌注通過門靜脈。通過向緩沖液中通入95％O2-5％CO2將灌注液的pH保持在7.4。將各肝臟以20ml/分鐘的流速以單次通過的方式灌注30分鐘的沖洗和平衡期(缺血前期)，然后是2小時的整體缺血期，然后是在與缺血前期相同的條件下的2小時的再灌注期。在缺血前期、閉合性局部缺血期之后立即以及在2小時的再灌注期的每隔30分鐘收集灌注液的等分試樣(20mL)。分析灌注液樣品中的肝細胞酶、例如天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和乳酸脫氫酶(LDH)的出現(xiàn)，用這些酶定量反應(yīng)在該過程中的局部缺血性肝損傷的程度。灌注液中AST、ALT和LDH活性可以通過多種方法測定，例如Nakano等(Hepatology 1995；22539-545)所報道的使用自動Kodak Ektachem 500分析儀的反射計方法。治療組大鼠的灌注的肝臟和安慰劑處理的對照組大鼠的灌注的肝臟在閉合期之后立即和/或在局部缺血后-再灌注期間肝細胞酶釋放的減少證實了本發(fā)明的聯(lián)合形式和藥物組合物在減輕由閉合引起的局部缺血性肝損傷中的效果。
可用于證實本發(fā)明的組合物和方法在減輕局部缺血性肝損傷中的有益效果的其它方法包括Nakano等所公開的那些(Hepatology 1995；22539-545)。
權(quán)利要求
1.減輕由于局部缺血引起的組織損傷的方法，該方法包括，向需要這種減輕的哺乳動物施用治療有效量的含有1型鈉-氫交換器(NHE-1)抑制劑和有效量的選自(a)補體調(diào)節(jié)劑、(b)代謝調(diào)節(jié)劑、(c)抗細胞凋亡劑、(d)氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和(e)選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物的聯(lián)合形式。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述的組織選自腦、心臟、肝、腎、肺、腸、骨骼肌、脾、胰、神經(jīng)、脊髓、視網(wǎng)膜組織、脈管系統(tǒng)和腸組織。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述的1型鈉/氫交換器(NHE-1)抑制劑選自(a)式(I)化合物 其前藥或該化合物或其前藥的可藥用鹽；其中Z是碳連接的含有兩個相鄰的氮的5元二氮雜二不飽和環(huán)，所述的環(huán)選擇性地被最多3個彼此獨立地選自R1、R2和R3的取代基單取代、二取代或三取代；或者Z是碳連接的5元三氮雜二不飽和環(huán)，所述的環(huán)選擇性地被最多2個彼此獨立地選自R4和R5的取代基單取代或二取代；其中R1、R2、R3、R4和R5彼此獨立地是氫、羥基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷硫基、(C3-C4)環(huán)烷基、(C3-C7)環(huán)烷基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基甲酰基、M或M(C1-C4)烷基，前述的任意(C1-C4)烷基部分均選擇性地帶有1至9個氟；所述的(C1-C4)烷基或(C3-C4)環(huán)烷基選擇性地被羥基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷硫基、(C1-C4)烷基亞磺?；?、(C1-C4)烷基磺?；?、(C1-C4)烷基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基甲?；騿?N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基磺?；鶈稳〈蚨〈?；并且所述的(C3-C4)環(huán)烷基選擇性地帶有1至7個氟；其中M是選擇性地含有1至3個彼此獨立地選自氧、硫和氮的雜原子的部分飽和的、完全飽和的或完全不飽和的5至8元環(huán)，或是由兩個稠合的部分飽和的、完全飽和的或完全不飽和的3至6元環(huán)組成的二環(huán)，兩個環(huán)合在一起選擇性地含有1至4個彼此獨立地選自氮、硫和氧的雜原子；所述的M選擇性地在碳或氮上被最多3個彼此獨立地選自R6、R7和R8的取代基所取代，其中，如果該部分是單環(huán)，則在一個環(huán)上被取代，如果該部分是二環(huán)，則在一個或同時在兩個環(huán)上被取代，其中R6、R7和R8之一選擇性地是部分飽和的、完全飽和的或完全不飽和的3至7元環(huán)，其選擇性地含有1至3個彼此獨立地選自選擇性地被(C1-C4)烷基取代的氧、硫和氮的雜原子，其余的R6、R7和R8擇性地是羥基、硝基、鹵素、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷氧羰基、(C1-C4)烷基、甲?；?、(C1-C4)鏈烷?；?、(C1-C4)鏈烷酰氧基、(C1-C4)鏈烷酰氨基、(C1-C4)烷氧羰基氨基、磺酰氨基、(C1-C4)烷基磺酰氨基、氨基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基、氨基甲?；?N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基甲酰基、氰基、巰基、(C1-C4)烷硫基、(C1-C4)烷基亞磺?；?C1-C4)烷基磺?；?、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基磺?；?、(C2-C4)鏈烯基、(C2-C4)鏈炔基或(C5-C7)環(huán)烯基，其中所述的(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷基、(C1-C7)鏈烷?；?、(C1-C4)烷硫基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基或(C3-C7)環(huán)烷基R6、R7和R8取代基選擇性地被羥基、(C1-C4)烷氧羰基、(C3-C7)環(huán)烷基、(C1-C4)鏈烷?；?C1-C4)鏈烷?；被?C1-C4)鏈烷酰氧基、(C1-C4)烷氧羰基氨基、磺酰氨基、(C1-C4)烷基磺酰氨基、氨基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基、氨基甲酰基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基甲?；?、氰基、巰基、硝基、(C1-C4)烷硫基、(C1-C4)烷基亞磺酰基、(C1-C4)烷基磺?；騿?N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基磺?；鶈稳〈蛘哌x擇性地被1至9個氟取代；(b)cariporide或其可藥用鹽；(c)eniporide或其可藥用鹽；(d)BIIB 513或其可藥用鹽；(e)TY-12533或其可藥用鹽；和(f)SM-15681或其可藥用鹽。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述的式(I)化合物選自[1-(2-氯苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-甲基-1-(2-三氟甲基苯基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-乙基-1-苯基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(2-三氟甲基苯基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-苯基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(2，6-二氯苯基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-甲基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-甲基-1-(萘-1-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(喹啉-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(喹啉-8-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[3-甲基-1-(萘-1-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[3-甲基-1-(異喹啉-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[2-甲基-5-苯基-2H-吡唑-3-羰基]胍；[2-甲基-5-(萘-1-基)-2H-吡唑-3-羰基]胍；[5-甲基-2-苯基-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[5-甲基-2-(3-甲氧基苯基)-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[2-(3-溴苯基)-5-甲基-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[2-(萘-1-基)-5-甲基-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[2-(異喹啉-5-基)-5-甲基-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[5-甲基-2-(喹啉-5-基)-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[1-(萘-1-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-4-甲基磺?；交?-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-三氟甲基-4-氟苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-溴苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氟苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-甲氧基苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-4-甲基氨基磺?；交?-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2，5-二氯苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2，3-二氯苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-氨基羰基苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-氨基磺?；交?-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氟-6-三氟甲基苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-甲基磺酰基苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-二甲基氨基磺?；交?-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-三氟甲基-4-氯苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(8-溴喹啉-5-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(6-氯喹啉-5-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(吲唑-7-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(苯并咪唑-5-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(1-異喹啉基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(4-喹啉基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(吲唑-6-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(吲唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(苯并咪唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(1-甲基苯并咪唑-6-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(5-喹啉基)-5-正丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(5-喹啉基)-5-異丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-乙基-1-(6-喹啉基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-甲基苯并咪唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(1，4-苯并二噁烷-6-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(苯并三唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(3-氯吲唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(5-喹啉基)-5-丁基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-丙基-1-(6-喹啉基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-異丙基-1-(6-喹啉基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(吲唑-7-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2，1，3-苯并噻二唑-4-基)-3-甲基-1-吡唑-4-羰基]胍；和[3-甲基-1-(喹啉-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；其前藥以及該化合物和前藥的可藥用鹽。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述的補體調(diào)節(jié)劑選自C5a抑制劑、1型可溶性補體受體(sCR1)抑制劑或其類似物以及C1酯酶抑制劑；所述的代謝調(diào)節(jié)劑選自丙酮酸脫氫酶復(fù)合物向上調(diào)節(jié)劑/激活劑、丙酮酸脫氫酶激酶抑制劑、丙二酸單酰輔酶A脫羧酶抑制劑、乙酰輔酶A羧化酶激活劑、部分脂肪酸氧化(pFOX)抑制劑、5’AMP-激活的蛋白激酶(AMPK)抑制劑、卡尼汀棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑和脂肪酸輔酶A合酶抑制劑；所述的抗細胞凋亡劑是caspase抑制劑；所述的氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)選自單磷?；|(zhì)A或其類似物、氧化氮供體和氧化氮合酶激活劑；所述的內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑是S-17162，所述的Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑是KB-R7943，所述的聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑是3-氨基苯甲酰胺或式(IV)的化合物或其可藥用鹽、前藥、活性代謝物或溶劑化物 其中R1是H、鹵素、氰基、選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；或-C(O)-R10，其中R10是氫、選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；或-OR100或NR100R110，其中R100和R110彼此獨立地是氫或選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；R2是H或烷基；R3是H或烷基；R4是H、鹵素或烷基；X是O或S；Y是(CR5R6)(CR7R8)n或N＝C(R5)，其中n是0或1；R5和R6彼此獨立地是H或選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；R7和R8彼此獨立地是H或選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述的C5a抑制劑是L-747981或其可藥用鹽；所述的1型可溶性補體受體(sCR1)抑制劑是脒基苯基丙酮酸(APPA)；所述的丙酮酸脫氫酶復(fù)合物向上調(diào)節(jié)劑/激活劑和所述的丙酮酸脫氫酶激酶抑制劑是二氯乙酸(DCA)，所述的部分脂肪酸氧化(pFOX)抑制劑是雷諾嗪或曲美他嗪，所述的卡尼汀棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑是乙莫克舍，所述的脂肪酸輔酶A合酶抑制劑是triascin C；所述的caspase抑制劑選自式(II)化合物 其中R1和R2與它們所連接的氮合在一起形成4至7元環(huán)；R3和R4與它們所連接的氮合在一起形成4至7元環(huán)；R是苯甲?；?C1-6)烷基；和式(III)化合物 其中R1是氫或(C1-4)烷基；R2是(C1-10)烷基，其選擇性地被芳基(C1-4)烷基、選擇性取代的雜芳基(C1-4)烷基、選擇性取代的(C3-7)環(huán)烷基取代，或者R1和R2與它們所連接的氮合在一起形成3至10元環(huán)，該環(huán)選擇性地含有另外的選自氧、氮或硫的雜原子；R3和R4是(C1-6)烷基、氫、硝基或鹵素；R5是(C1-6)烷基、氫、芳基烷基或雜芳基烷基；所述的單磷?；|(zhì)A或其所述的類似物是RC-552(MPL-C)或ONO-4007，所述氧化氮供體是nipride，所述的氧化氮合酶激活劑是氨基胍或N(G)-單甲基-L-精氨酸(L-NMMA)。
7.一種藥物組合物，該組合物含有一定量的1型鈉-氫交換器抑制劑和一定量的選自(a)補體調(diào)節(jié)劑、(b)代謝調(diào)節(jié)劑、(c)抗細胞凋亡劑、(d)氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和(e)選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物。
8.權(quán)利要求7的藥物組合物，其中所述的1型鈉/氫交換器(NHE-1)抑制劑選自(a)式(I)化合物 其前藥或該化合物或其前藥的可藥用鹽；其中Z是碳連接的含有兩個相鄰的氮的5元二氮雜二不飽和環(huán)，所述的環(huán)選擇性地被最多3個彼此獨立地選自R1、R2和R3的取代基單取代、二取代或三取代；或者Z是碳連接的5元三氮雜二不飽和環(huán)，所述的環(huán)選擇性地被最多2個彼此獨立地選自R4和R5的取代基單取代或二取代；其中R1、R2、R3、R4和R5彼此獨立地是氫、羥基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷硫基、(C3-C4)環(huán)烷基、(C3-C7)環(huán)烷基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基甲酰基、M或M(C1-C4)烷基，前述的任意(C1-C4)烷基部分均選擇性地帶有1至9個氟；所述的(C1-C4)烷基或(C3-C4)環(huán)烷基選擇性地被羥基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷硫基、(C1-C4)烷基亞磺?；?、(C1-C4)烷基磺?；?、(C1-C4)烷基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基甲酰基或單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基磺?；鶈稳〈蚨〈徊⑶宜龅?C3-C4)環(huán)烷基選擇性地帶有1至7個氟；其中M是選擇性地含有1至3個彼此獨立地選自氧、硫和氮的雜原子的部分飽和的、完全飽和的或完全不飽和的5至8元環(huán)，或是由兩個稠合的部分飽和的、完全飽和的或完全不飽和的3至6元環(huán)組成的二環(huán)，兩個環(huán)合在一起選擇性地含有1至4個彼此獨立地選自氮、硫和氧的雜原子；所述的M選擇性地在碳或氮上被最多3個彼此獨立地選自R6、R7和R8的取代基所取代，其中，如果該部分是單環(huán)，則在一個環(huán)上被取代，如果該部分是二環(huán)，則在一個或同時在兩個環(huán)上被取代，其中R6、R7和R8之一選擇性地是部分飽和的、完全飽和的或完全不飽和的3至7元環(huán)，其選擇性地含有1至3個彼此獨立地選自選擇性地被(C1-C4)烷基取代的氧、硫和氮的雜原子，其余的R6、R7和R8擇性地是羥基、硝基、鹵素、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷氧羰基、(C1-C4)烷基、甲?；?C1-C4)鏈烷?；?、(C1-C4)鏈烷酰氧基、(C1-C4)鏈烷酰氨基、(C1-C4)烷氧羰基氨基、磺酰氨基、(C1-C4)烷基磺酰氨基、氨基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基、氨基甲?；?N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基甲?；?、氰基、巰基、(C1-C4)烷硫基、(C1-C4)烷基亞磺酰基、(C1-C4)烷基磺?；?、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基磺?；?C2-C4)鏈烯基、(C2-C4)鏈炔基或(C5-C7)環(huán)烯基，其中所述的(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷基、(C1-C7)鏈烷?；?、(C1-C4)烷硫基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基或(C3-C7)環(huán)烷基R6、R7和R8取代基選擇性地被羥基、(C1-C4)烷氧羰基、(C3-C7)環(huán)烷基、(C1-C4)鏈烷?；?、(C1-C4)鏈烷?；被?、(C1-C4)鏈烷酰氧基、(C1-C4)烷氧羰基氨基、磺酰氨基、(C1-C4)烷基磺酰氨基、氨基、單-N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基、氨基甲?；?N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基甲?；⑶杌?、巰基、硝基、(C1-C4)烷硫基、(C1-C4)烷基亞磺?；?、(C1-C4)烷基磺?；騿?N-或二-N，N-(C1-C4)烷基氨基磺酰基單取代或者選擇性地被1至9個氟取代；(b)cariporide或其可藥用鹽；(c)eniporide或其可藥用鹽；(d)BIIB 513或其可藥用鹽；(e)TY-12533或其可藥用鹽；和(f)SM-15681或其可藥用鹽。
9.權(quán)利要求8的藥物組合物，其中所述的式(I)化合物選自[1-(2-氯苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-甲基-1-(2-三氟甲基苯基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-乙基-1-苯基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(2-三氟甲基苯基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-苯基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(2，6-二氯苯基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-甲基-1-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-甲基-1-(萘-1-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(喹啉-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(喹啉-8-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[3-甲基-1-(萘-1-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[3-甲基-1-(異喹啉-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[2-甲基-5-苯基-2H-吡唑-3-羰基]胍；[2-甲基-5-(萘-1-基)-2H-吡唑-3-羰基]胍；[5-甲基-2-苯基-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[5-甲基-2-(3-甲氧基苯基)-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[2-(3-溴苯基)-5-甲基-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[2-(萘-1-基)-5-甲基-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[2-(異喹啉-5-基)-5-甲基-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[5-甲基-2-(喹啉-5-基)-2H-1，2，3-三唑-4-羰基]胍；[1-(萘-1-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-4-甲基磺?；交?-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-三氟甲基-4-氟苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-溴苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氟苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-甲氧基苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-4-甲基氨基磺?；交?-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2，5-二氯苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2，3-二氯苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-氨基羰基苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-氨基磺?；交?-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氟-6-三氟甲基苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-甲基磺酰基苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-氯-5-二甲基氨基磺酰基苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-三氟甲基-4-氯苯基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(8-溴喹啉-5-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(6-氯喹啉-5-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(吲唑-7-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(苯并咪唑-5-基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(1-異喹啉基)-5-環(huán)丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-環(huán)丙基-1-(4-喹啉基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(吲唑-6-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(吲唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(苯并咪唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(1-甲基苯并咪唑-6-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(5-喹啉基)-5-正丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(5-喹啉基)-5-異丙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-乙基-1-(6-喹啉基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2-甲基苯并咪唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(1，4-苯并二噁烷-6-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(苯并三唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(3-氯吲唑-5-基)-5-乙基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(5-喹啉基)-5-丁基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-丙基-1-(6-喹啉基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[5-異丙基-1-(6-喹啉基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(吲唑-7-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-羰基]胍；[1-(2，1，3-苯并噻二唑-4-基)-3-甲基-1-吡唑-4-羰基]胍；和[3-甲基-1-(喹啉-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]胍；其前藥以及該化合物和前藥的可藥用鹽。
10.權(quán)利要求7的藥物組合物，其中所述的補體調(diào)節(jié)劑選自C5a抑制劑、1型可溶性補體受體(sCR1)抑制劑或其類似物以及C1酯酶抑制劑；所述的代謝調(diào)節(jié)劑選自丙酮酸脫氫酶復(fù)合物向上調(diào)節(jié)劑/激活劑、丙酮酸脫氫酶激酶抑制劑、丙二酸單酰輔酶A脫羧酶抑制劑、乙酰輔酶A羧化酶激活劑、部分脂肪酸氧化(pFOX)抑制劑、5’AMP-激活的蛋白激酶(AMPK)抑制劑、卡尼汀棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑和脂肪酸輔酶A合酶抑制劑；所述的抗細胞凋亡劑是caspase抑制劑；所述的氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)選自單磷酰基脂質(zhì)A或其類似物、氧化氮供體和氧化氮合酶激活劑；所述的內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑是S-17162，所述的Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑是KB-R7943，所述的聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑是3-氨基苯甲酰胺或式(IV)的化合物或其可藥用鹽、前藥、活性代謝物或溶劑化物 其中R1是H、鹵素、氰基、選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；或-C(O)-R10，其中R10是氫、選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；或-OR100或NR100R110，其中R100和R110彼此獨立地是氫或選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；R2是H或烷基；R3是H或烷基；R4是H、鹵素或烷基；X是O或S；Y是(CR5R6)(CR7R8)n或N＝C(R5)，其中n是0或1；R5和R6彼此獨立地是H或選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；R7和R8彼此獨立地是H或選擇性取代的烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基。
11.權(quán)利要求10的藥物組合物，其中所述的C5a抑制劑是L-747981或其可藥用鹽；所述的1型可溶性補體受體(sCR1)抑制劑是脒基苯基丙酮酸(APPA)；所述的丙酮酸脫氫酶復(fù)合物向上調(diào)節(jié)劑/激活劑和所述的丙酮酸脫氫酶激酶抑制劑是二氯乙酸(DCA)，所述的部分脂肪酸氧化(pFOX)抑制劑是雷諾嗪或曲美他嗪，所述的卡尼汀棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑是乙莫克舍，所述的脂肪酸輔酶A合酶抑制劑是triascinC；所述的caspase抑制劑選自式(II)化合物 其中R1和R2與它們所連接的氮合在一起形成4至7元環(huán)；R3和R4與它們所連接的氮合在一起形成4至7元環(huán)；R是苯甲酰基或(C1-6)烷基；和式(III)化合物 其中R1是氫或(C1-4)烷基；R2是(C1-10)烷基，其選擇性地被芳基(C1-4)烷基、選擇性取代的雜芳基(C1-4)烷基、選擇性取代的(C3-7)環(huán)烷基取代，或者R1和R2與它們所連接的氮合在一起形成3至10元環(huán)，該環(huán)選擇性地含有另外的選自氧、氮或硫的雜原子；R3和R4是(C1-6)烷基、氫、硝基或鹵素；R5是(C1-6)烷基、氫、芳基烷基或雜芳基烷基；所述的單磷?；|(zhì)A或其所述的類似物是RC-552(MPL-C)或ONO-4007，所述氧化氮供體是nipride，所述的氧化氮合酶激活劑是氨基胍或N(G)-單甲基-L-精氨酸(L-NMMA)。
12.減輕由于局部缺血引起的組織損傷的方法，該方法包括，向需要這種治療的哺乳動物施用有效量的權(quán)利要求7的藥物組合物。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述的組織選自腦、心臟、肝、腎、肺、腸、骨骼肌、脾、胰、神經(jīng)、脊髓、視網(wǎng)膜組織、脈管系統(tǒng)和腸組織。
14.一種藥盒，其含有在第一單位劑量形式中的一定量的1型鈉-氫交換器抑制劑和可藥用載體、賦形劑或稀釋劑；在第二單位劑量形式中的一定量的選自(a)補體調(diào)節(jié)劑、(b)代謝調(diào)節(jié)劑、(c)抗細胞凋亡劑、(d)氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和(e)選自蛋白激酶C激活劑、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、組織活化的纖維蛋白溶解抑制劑(TAFI)、Na+/Ca+2交換器同種型-1(NCX-1)抑制劑和聚(ADP核糖)合成酶(PARS/PARP)抑制劑的酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物和可藥用載體、賦形劑或稀釋；以及容器。
全文摘要
本發(fā)明提供了減輕由于局部缺血引起的組織損傷的方法,該方法包括,向需要這種減輕的哺乳動物施用有效量的NHE－1抑制劑和選自(a)補體調(diào)節(jié)劑、(b)代謝調(diào)節(jié)劑、(c)抗細胞凋亡劑、(d)氧化氮合酶相關(guān)物質(zhì)和(e)酶/蛋白調(diào)節(jié)劑的第二種化合物的聯(lián)合形式或含有所述聯(lián)合形式的藥物組合物。本發(fā)明還提供了一種藥盒,其含有在第一單位劑量形式中的一定量的1型鈉－氫交換器抑制劑和可藥用載體、賦形劑或稀釋劑;在第二單位劑量形式中的一定量的第二種化合物和可藥用載體、賦形劑或稀釋;以及容器。
文檔編號A61K31/416GK1370531SQ0210243
公開日2002年9月25日 申請日期2002年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2001年1月25日
發(fā)明者W·R·特拉斯, R·J·赫爾 申請人:輝瑞產(chǎn)品公司