專利名稱：生物轉(zhuǎn)化人參組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及人參組合物及其制備方法，特別涉及通過乳酸菌和腸道細(xì)菌的處理過程增強(qiáng)抗癌成分的生物轉(zhuǎn)化人參組合物及其制備方法。本申請(qǐng)要求基于韓國(guó)特許申請(qǐng)第2002-5369號(hào)(2002.01.30)，“生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法”的優(yōu)先權(quán)。
2)西洋參Panax quinquefolium L.
-在美國(guó)、加拿大野生和栽培。
3)三七Panax notoginseng F.H.Chen-從中國(guó)云南省東南部至廣西省西南部地區(qū)野生或栽培。
4)珠子參Panax japonicus C.A.Meyer-分布在日本、中國(guó)西南部到尼泊爾。
上述人參主要在韓國(guó)、中國(guó)、日本等亞洲國(guó)家以生藥的狀態(tài)用于精神醫(yī)學(xué)的神經(jīng)科疾病以及糖尿病等多種疾病。已經(jīng)證明上述人參的主要成分人參皂苷具有強(qiáng)壯、強(qiáng)精、鎮(zhèn)靜、造血以及抗高血壓等效果。
具體而言，已證明上述人參皂苷的微生物代謝產(chǎn)物IH-901、IH-902、IH-903以及IH-904等不僅具有免疫增強(qiáng)作用，還具有極強(qiáng)的抑制腫瘤血管新生作用以及抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移作用，因此需要開發(fā)利用這些性質(zhì)的抗癌人參組合物。下述表(表1)證明IH-901等對(duì)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移作用的效果，表中顯示在給鼠移植癌細(xì)胞后，從第2天到第5天之間經(jīng)口給予0.5mg的藥物，14天后解剖的肺中癌轉(zhuǎn)移的集落數(shù)的測(cè)定結(jié)果值。[表1]

上述IH-901、IH-902、IH-903和IH-904，作為人參的人參皂苷的內(nèi)原人參二醇(protopanaxadiol)型的人參皂苷-Rb1、Rb2、Rc、Rd等的微生物最終代謝產(chǎn)物，通過IV型膠原酶分泌的阻斷、抗生血管的活性以及抑制血小板聚集而具有強(qiáng)的癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移抑制活性。其中，通過藥理功能試驗(yàn)、一般的藥理試驗(yàn)以及穩(wěn)定性試驗(yàn)等證明上述IH-901沒有毒性和副作用，損害癌細(xì)胞HL-60細(xì)胞的正常分化過程，對(duì)細(xì)胞的增殖具有極強(qiáng)的抑制，IH-901的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)活性達(dá)到與目前作為抗癌治療劑廣泛使用的順鉑的活性可以匹敵的程度。
一方面，韓國(guó)特許申請(qǐng)第1980-4291號(hào)，“乳酸菌人參飲料的制備方法”中公開了‘在有機(jī)氮濃度為0.2～0.8％，生成的葡萄糖含量為適合乳酸菌發(fā)酵的3％或3％以上的條件下，發(fā)酵已將人參中原有的芳香成分分離的人參殘?jiān)糜袡C(jī)酸調(diào)節(jié)pH3.8～4.8之后，在除去不溶性高分子蛋白質(zhì)和纖維素的濾液中培養(yǎng)乳酸菌后，再向其中添加人參固有的芳香成分的方法’。
韓國(guó)特許申請(qǐng)第1988-12502號(hào)，“利用人參的活性乳酸菌飲料的制備方法”中公開了‘將處理人參的鮮汁和提取物或?qū)θ藚⑦M(jìn)行蒸煮處理，在蒸煮處理后的雜質(zhì)中進(jìn)行發(fā)酵作用后的所得作為基質(zhì)培養(yǎng)乳酸菌之后，添加混合脫脂牛奶、脫脂奶粉、碳酸水、維生素類，制備高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的人參乳酸菌的碳酸水性飲料水和水果類的方法’。
韓國(guó)特許申請(qǐng)第1996-23750號(hào)，“含有人參或生人參的發(fā)酵乳組合物及其制備方法”中公開了‘包括添加0.001～2.39％(重量)的磨碎至0.1～0.6cm形成的微粒狀人參或生人參的過程，以及追加添加選自水、維生素、糖類、有機(jī)酸類、果實(shí)類、谷類、野菜類的1種或2種以上的成分的過程的含有人參或生人參的發(fā)酵乳組合物的制備方法’。
綜上所述，以前的含有人參的組合物等是向既存的發(fā)酵乳或乳酸菌飲料等中追加人參的芳香成分或添加人參粉等能夠得到的人參成分加味的組合物。
可是，上述含有人參組合物等只不過是添加人參成分的飲料用組合物，但沒有提到得到如人參皂苷的代謝產(chǎn)物IH-901那樣的抗癌成分的作用。
本發(fā)明的另一目的是提供人參原材料中含有的有效成分的作用得到最大化提高的生物轉(zhuǎn)化人參組合物及其制備方法。
本發(fā)明的再一目的是提供具有抗變應(yīng)性、防止老化以及預(yù)防大腸癌/肝臟損傷等對(duì)人體有益的作用的生物轉(zhuǎn)化人參組合物及其制備方法。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種生物轉(zhuǎn)化人參組合物，其特征在于，在所述人參組合物中，(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人參二醇+人參皂苷F)/(人參皂苷Rc+人參皂苷Rd+人參皂苷Rb1+人參皂苷Rb2)的比為0.1或0.1以上。
另外，本發(fā)明提供生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，所述人參組合物的制備方法包括將人參原材料在水中懸浮后，加入乳酸菌或腸道細(xì)菌，培養(yǎng)48～72小時(shí)左右，得到生物轉(zhuǎn)化人參液的生物轉(zhuǎn)化過程；以及將經(jīng)過上述過程的生物轉(zhuǎn)化人參液離心分離，只過濾上清液，得到生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液的濃縮過程。
本發(fā)明提供人參皂苷的微生物最終代謝產(chǎn)物內(nèi)，抗癌作用及其穩(wěn)定性優(yōu)異的IH-901的含量高的人參組合物及其制備方法。


圖1是顯示按照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例的生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法的流程圖。通過圖1顯示，按照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例的生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法包括生物轉(zhuǎn)化過程(S10)以及濃縮過程(S20)，還可以追加進(jìn)行提取過程(S30)、干燥過程(S40)、攪拌過程(S50)、稀釋過程(S60)。1.生物轉(zhuǎn)化過程上述生物轉(zhuǎn)化過程(S10)是將人參原材料在水中懸浮后，加入乳酸菌或腸道細(xì)菌，培養(yǎng)一定時(shí)間以上，優(yōu)選24～72小時(shí)左右，得到生物轉(zhuǎn)化人參液的過程。(1)人參原材料本發(fā)明的人參原材料可以是人參以及人參加工物中的任一種，優(yōu)選可以使用生人參、紅參、白參、尾參、人參葉、人參提取液以及人參粉末中的任一種或多種。(2)乳酸菌和腸道細(xì)菌乳酸菌和腸道細(xì)菌中的一部分將食物和藥物中含有的化合物等生物轉(zhuǎn)化，此時(shí)生成的生物轉(zhuǎn)化體等一般要比原化合物生理活性高。如圖2所示，在符合本發(fā)明的原材料人參中含有的化合物人參皂苷-Rb1、人參皂苷-Rb2+人參皂苷-Rc的情況下，它們經(jīng)過這些乳酸菌和腸道細(xì)菌代謝的一次中間代謝產(chǎn)物人參皂苷-Rd、化合物-0、人參皂苷-Mc1以及二次中間代謝物人參皂苷-F2、IH-902(化合物-Y)、IH-903(化合物-Mc)變成最終代謝物IH-901(化合物-K)。
上述乳酸菌為可以將人參皂苷成分代謝生成生物轉(zhuǎn)化體IH-901的任一種乳酸菌，優(yōu)選使用雙歧桿菌K-103、雙歧桿菌K-506、雙岐桿菌KK-1、雙岐桿菌KK-2中的任一種或多種。而且，上述雙岐桿菌KK-1的保藏號(hào)為KCCM-10364(2002.03.22)，上述雙岐桿菌KK-2的保藏號(hào)為KCCM-10365(2002.03.22)，各自保藏在韓國(guó)微生物保藏中心(Korean Culture Center of Microorganisms)，韓國(guó)，漢城。
上述腸道細(xì)菌還可以是能夠?qū)⑷藚⒃碥粘煞执x生成生物轉(zhuǎn)化體IH-901的任一種，優(yōu)選使用口部普雷沃菌(Prevotella oris)、梭桿菌K-60(Fusobacterium K-6)中的任一種或多種。2.濃縮過程上述濃縮過程(S20)是將生物轉(zhuǎn)化人參液原樣濃縮或冷凍/干燥，或者將上述生物轉(zhuǎn)化人參液離心分離，只過濾上清液，得到生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液的過程。通過上述濃縮過程(S20)，可以除去生物轉(zhuǎn)化人參液中含有的不純物以及沉淀物。3.提取過程上述提取過程(S30)是向生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液中加入預(yù)定的溶劑，得到生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液的過程。
上述溶劑完成將生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液中含有的有效成分溶解并提取的任務(wù)，作為上述溶劑，可以使用水、甲醇和乙醇等低級(jí)醇、超臨界液體或它們的混合液。4.干燥過程上述干燥過程(S40)是將生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液冷凍干燥得到生物轉(zhuǎn)化人參粉末的過程。5.攪拌過程和稀釋過程上述攪拌過程和稀釋過程是為了利用根據(jù)本發(fā)明的特征制備的生物轉(zhuǎn)化人參提取液或生物轉(zhuǎn)化人參粉末等制備加工飲料進(jìn)行的過程。
上述攪拌過程(S50)是向在甜味劑中加蒸餾水混合的飲料原液中加入生物轉(zhuǎn)化人參提取液或生物轉(zhuǎn)化人參粉末并攪拌，得到生物轉(zhuǎn)化人參混合液的過程。也可以向上述飲料原液中添加檸檬酸、檸檬酸鈉、生藥提取物、氨基乙磺酸中的任一種或多種，根據(jù)應(yīng)用例，可以添加生藥提取物五味子、棗、桂皮、枸杞、黃精、黃耆等。
上述稀釋過程(S60)是向生物轉(zhuǎn)化人參混合液中加入預(yù)定量的蒸餾水，得到生物轉(zhuǎn)化人參飲料液的過程。
根據(jù)上述過程制備的本發(fā)明的生物轉(zhuǎn)化人參組合物使(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人參二醇+人參皂苷F)/(人參皂苷Rc+人參皂苷Rd+人參皂苷Rb1+人參皂苷Rb2)的比維持在0.1或0.1以上的范圍。此時(shí)，上述20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人參二醇指IH-901。<實(shí)施例1>
將用水提取尾參并干燥得到的人參粉末100mg在水中懸浮以后，加入乳酸菌雙歧桿菌K-103和雙歧桿菌K-506菌株，培養(yǎng)72小時(shí)，然后將其離心分離，將過濾后的上清液濃縮，得到生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液。<實(shí)施例2>
將用甲醇冷浸白參1kg得到的提取液再用丁醇提取得到的皂苷部分在水中懸浮后，加入乳酸菌雙歧桿菌K-103和雙歧桿菌K-506菌株，培養(yǎng)72小時(shí)，將其離心分離，只過濾上清液后濃縮，得到生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液。<實(shí)施例3>
將生人參細(xì)切并滅菌，在水中懸浮之后，加入雙歧桿菌K-103和雙歧桿菌K-506菌株，培養(yǎng)48小時(shí)，將其離心分離，只過濾上清液后濃縮，將其冷凍干燥，得到生物轉(zhuǎn)化人參粉末。<實(shí)施例4>
將用水提取尾參并干燥后得到的人參粉末100mg在水中懸浮之后，加入乳酸菌雙歧桿菌KK-1和雙歧桿菌KK-2菌株，培養(yǎng)72小時(shí)，將其離心分離，只過濾上清液后濃縮，得到生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液。<實(shí)施例5>
將用甲醇冷浸白參1kg得到的提取液再用丁醇提取得到的皂苷部分在水中懸浮后，加入乳酸菌雙歧桿菌KK-1和雙歧桿菌KK-2菌株，培養(yǎng)72小時(shí)，將其離心分離，只過濾上清液后濃縮，得到生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液。<實(shí)施例6>
將生人參細(xì)切并滅菌，在水中懸浮之后，加入乳酸菌雙歧桿菌KK-1和雙歧桿菌KK-2菌株，培養(yǎng)48小時(shí)，將其離心分離，只過濾上清液后濃縮，將其冷凍干燥，得到生物轉(zhuǎn)化人參粉末。<實(shí)施例7>
向果糖、葡萄糖和白糖中加入蒸餾水，加熱至95℃溶解后，緩慢冷卻至70℃后冷卻，向其中加入檸檬酸、檸檬酸鈉和苯甲酸鈉，攪拌使之溶解。
接著，加入五加皮提取液和氨基乙磺酸攪拌使之溶解。向由此生成的溶液中加入生物轉(zhuǎn)化人參粉末劇烈攪拌后，加入補(bǔ)足量的蒸餾水使總體積為100ml，制備含有250mg生物轉(zhuǎn)化人參提取物的100ml飲料組合物。<試驗(yàn)例1含量分析1>
向2g白參粉末中加入500ml水后，加入乳酸菌雙歧桿菌KK-1和雙歧桿菌KK-2菌株各1g，在37℃培養(yǎng)72小時(shí)，將其減壓濃縮，得到生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液。接著將上述生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液和市售的普通白參2g分別用100ml甲醇分三次提取濃縮后懸浮于水中，用100ml乙醚分三次提取。接著用100ml丁醇分三次提取后，濃縮丁醇部分，將獲得的濃縮物在甲醇中溶解，進(jìn)行TLC分析，得到下述<表2>中的結(jié)果。[表2]

(1)溶劑CHCl3∶MeOH∶H2O＝65∶35∶10的下層(2)顯色試劑5％硫酸MeOH溶液(3)島津TLC檢測(cè)器CS-9301PC描儀<試驗(yàn)例2含量分析2>
向1g白參皂苷部分中加入100ml水，加入雙歧桿菌KK-1和雙歧桿菌KK-2菌株各1g，在37℃培養(yǎng)48小時(shí)，將其減壓濃縮，得到生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液。接著將上述生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液和1g白參皂苷分別在甲醇中溶解，進(jìn)行TLC分析，得到下述<表3>中的結(jié)果。[表3]

(1)溶劑CHCl3∶MeOH∶H2O＝65∶35∶10的下層(2)顯色試劑5％硫酸MeOH溶液(3)島津TLC檢測(cè)器CS-9301PC掃描儀<試驗(yàn)例3抗癌活性分析>
將HepG2(人肝癌細(xì)胞系)、A-549(人肺癌細(xì)胞系)、P-388(小鼠淋巴瘤細(xì)胞系)、L-1210(小鼠淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞系)和10％FBS、1％抗生素-抗真菌素和2.2g/L碳酸氫鈉用增強(qiáng)RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。
用0.25％胰蛋白酶處理上述HepG2、A-549，將細(xì)胞從燒瓶中取出，將180μl以3×104細(xì)胞/孔的細(xì)胞數(shù)均勻地鋪在96孔中，在37℃的用5％CO2飽和的CO2培養(yǎng)箱中附著24小時(shí)，將180μl P-388和L-1210以4×104細(xì)胞/孔的細(xì)胞數(shù)均勻地鋪上，在用5％CO2飽和的CO2培養(yǎng)箱中穩(wěn)定2小時(shí)。
再分別將濃度為10mg/ml的人參提取物和生物轉(zhuǎn)化人參提取物用高壓蒸汽滅菌后，每孔加入20μl使試樣的最終濃度為1mg/ml，然后在37℃的用5％CO2飽和的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。48小時(shí)后，將20mg/ml的MTT試劑以每孔50μl加入，在CO2培養(yǎng)箱中反應(yīng)4小時(shí)后，除去培養(yǎng)基，向沉淀中加入100μl DMSO，在580nm處用ELISA讀數(shù)器測(cè)定吸光度，從而測(cè)定細(xì)胞的毒性。測(cè)定結(jié)果通過下述<表4>表示。[表4]

<試驗(yàn)例4抗變應(yīng)性效果分析1>
將RBL-2H3細(xì)胞(大鼠肥大細(xì)胞系)用含有10％胎牛血清和L-谷氨酰胺的Dulbeccos’s Modified Eagle’s培養(yǎng)基(DMEN)在37℃，濕潤(rùn)的5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，用胰蛋白酶-EDTA溶液浮游具有固著性的細(xì)胞，分離它們，回收供試驗(yàn)使用。
將RBL-2H3細(xì)胞在24孔中分別以5×105細(xì)胞/孔平均分株后，加入小鼠單克隆IgE 0.5μg/ml，保溫致敏12小時(shí)。將上述細(xì)胞用0.5ml的siraganian緩沖液(119mM NaCl、5mM KCl、0.4mM MgCl2、25mM PIPES、40mM NaOH、pH7.2)洗凈后，加入0.16ml的siraganian緩沖液(添加5.6mM葡萄糖、1mM CaCl2、0.1％BSA)后，在37℃保溫10分鐘。
接著，分別加入0.04ml人參提取物和生物轉(zhuǎn)化人參提取物試樣，20分鐘后，用0.02ml的抗原(DPN-BSA 1μg/ml)在37℃下使細(xì)胞活化10分鐘，在2000 rpm下離心分離10分鐘，將0.025ml的上清液移至96孔中。在此，加入0.025ml的基質(zhì)液1mM p-NAG(在0.1M檸檬酸緩沖液中的對(duì)硝基苯基-N-乙?；?β-D-葡糖胺，pH4.5)后，在37℃下培養(yǎng)60分鐘，加入0.2ml的0.1M Na2CO3/NaHCO3使反應(yīng)停止，在405nm處用ELISA讀數(shù)器測(cè)定吸光度。測(cè)定結(jié)果通過下述<表5>表示。[表5]

<試驗(yàn)例5抗變應(yīng)性效果分析2-組胺游離抑制>
為了測(cè)定抗組胺效果，利用取自二十日鼠腹腔內(nèi)部的化合物K48/80，將雌性Wistar大鼠(200+20g)處死后，將20ml生理溶液(137mM NaCl、2.7mM CaCl2、1mM MgCl2·6H2O、5.6mM葡萄糖、肝素1單位/ml、5mM磷酸鹽緩沖液pH7.2)給予腹膜內(nèi)。然后將腹部輕輕按摩2分鐘，再用注射器抽取腹膜排出液。將抽取的腹水300×g在4℃下離心分離5分鐘，用生理溶液數(shù)次洗滌。
接著，將腹膜排出細(xì)胞懸浮液(2.5ml)的各試樣與多種濃度的懸浮生理溶液0.5ml混合后，在37℃預(yù)保溫5分鐘。用同樣的方法處理對(duì)照和空白。然后將此反應(yīng)液(3.0ml)與化合物48/80 0.5ml混合，在37℃下保溫10分鐘。將反應(yīng)液(3.5ml)在2500×g，4℃下離心分離10分鐘后，測(cè)定上清液和沉淀中分泌的組胺的量。組胺的定量是用上述上清液0.6ml、蒸餾水1.4ml、1N NaOH 0.4ml、1％鄰苯二甲醛(在甲醇中)0.1ml在常溫下反應(yīng)4分鐘后，用3N HCl 0.2ml停止反應(yīng)，用熒光光度計(jì)(Jasco FP-750，激發(fā)353nm，發(fā)射438nm)測(cè)定。測(cè)定結(jié)果通過下述<表6>表示。
下表表示了普通人參和生物轉(zhuǎn)化人參兩者的化合物48/80誘導(dǎo)的白鼠肥大細(xì)胞的組胺游離抑制效果的測(cè)定結(jié)果，結(jié)果表明存在組胺游離抑制效果，特別是生物轉(zhuǎn)化人參提取物在更低濃度表現(xiàn)出效果。因此，表明在被人體吸收時(shí)，本發(fā)明的生物轉(zhuǎn)化人參組合物可以用作抑制組胺的游離的抗變應(yīng)性物質(zhì)。[表6]

<試驗(yàn)例6抗變應(yīng)性-效果分析3>
本抗變應(yīng)性-效果分析3采用下述的Inagaki等的方法(Int.Arch.Allergy Appl.Immunol.，87，254-259，1988)進(jìn)行。
將針對(duì)二硝基-牛血清白蛋白(DNP-BSA)的IgE血清用生理鹽水稀釋，向用乙醚麻醉的二十日鼠背部注射10μg，手工敏化48小時(shí)后，將含DNP-BSA 0.2mg和伊文思藍(lán)1.6mg的整理食鹽水0.2ml從尾靜脈注射入，30分鐘后頸部脫骨處死，測(cè)定從背部漏出的伊文思藍(lán)的色素量。將二十日鼠的背的一定部位切開，插入試驗(yàn)管抽取，加入1N-KOH 0.7ml在37℃下培養(yǎng)一夜。
在此試驗(yàn)管中加入0.6N磷酸∶丙酮混合液(5∶13)4ml后，振蕩過濾，對(duì)提取的色素在620nm處進(jìn)行比色定量。
接著，將人參提取物和生物轉(zhuǎn)化人參提取物分別在整理食鹽水中溶解或懸浮，經(jīng)口或腹腔在抗原給藥1小時(shí)前給藥。測(cè)定結(jié)果通過下述<表7>表示。[表7]

<試驗(yàn)例7抗氧化效果-隨著自由基的清楚而防止老化>
為了測(cè)定DPPH(1，1-二苯基-2-苦基偕腙肼)自由基的清除效果，反應(yīng)液60μmDPPH(在乙醇中)500μl中加入試樣500μl，在常溫下反應(yīng)30分鐘后，在520nm處測(cè)定吸光度?？瞻字杏靡掖即鍰PPH，作為對(duì)照組，用水代替試樣時(shí)作為100％，求出DPPH自由基去除程度％。使用咖啡酸作為對(duì)照藥物。
而且，為了測(cè)定超氧化物陰離子自由基清除效果，反應(yīng)液0.05MNa2CO3(pH10.2)900μl中分別各自添加3mM黃嘌呤(Sigma公司)、3mM EDTA(Sigma公司)、1.5μg/ml BSA(Sigma公司)、0.75mM NBT(Sigma公司)50μl。此時(shí)，加入試樣50μl和0.1μg/ml黃嘌呤氧化酶50μl反應(yīng)30分鐘后，加入6mM CuCl2停止反應(yīng)，在560nm處測(cè)定吸光度。使用咖啡酸作為對(duì)照藥物。
人參皂苷部分的抗氧化效果不強(qiáng)?？墒?，與普通人參相比，生物轉(zhuǎn)化人參效果更好，這樣可以期望抗氧化效果帶來防止老化的效果。上述測(cè)定結(jié)果通過下述<表8>表示。表明在被人體吸收時(shí)，本發(fā)明的生物轉(zhuǎn)化人參組合物可以用作起清除自由基的抗氧化作用從而防止老化的物質(zhì)。[表8]

<試驗(yàn)例8大腸癌/肝臟損傷誘發(fā)β-葡糖醛酸糖苷酶的抑制效果>
已知大腸癌和肝臟損傷引起人的腸道細(xì)菌產(chǎn)生β-葡糖醛酸糖苷酶，抑制這種酶的物質(zhì)具有預(yù)防大腸癌和肝臟損傷的效果(D.H.Kim，I.S.Jang，J.B.Park，S.W.Lee，Protective roles of mushrooms inexperimental colon rcinogenesis.Arch.Pharm.Res.18，79-83，1995；D.H.Kim，S.B.Shim，N.J.Kim，I.S.Jang，β-glucuronidase-inhibitoryactivity and hepatoprotective effects of Ganoderma lucidum.Biol.Pharm.Bull.22，162-164，1999)。
然后，采用Kim等的方法(D.H.Kim，S.B.Shim，N.J.Kim，I.S.Jang，β-glucuronidase-inhibitory activity and hepatoprotective effects ofGanoderma lucidum.Biol.Pharm.Bull.22，162-164，1999)確定人參和生物轉(zhuǎn)化人參是否抑制β-葡糖醛酸糖苷酶。
首先，用Kim等的方法培養(yǎng)從人的腸內(nèi)分離的大腸桿菌HGU-3菌株，精制β-葡糖醛酸糖苷酶。加入50mM人參緩沖液0.38ml，20mM對(duì)硝基苯基-β-D-葡糖苷酸(Sigma公司，美國(guó))0.02ml、水或人參提取液0.05ml和酶液0.05ml反應(yīng)30分鐘后，加入0.2N NaOH0.5ml停止反應(yīng)，在405nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算抑制活性。
測(cè)定結(jié)果通過下述<表9>表示。測(cè)定結(jié)果表明本發(fā)明的生物轉(zhuǎn)化人參抑制大腸癌和肝臟損傷誘發(fā)的β-葡糖醛酸糖苷酶，可以用作大腸癌和肝臟損傷的預(yù)防物質(zhì)。[表9]
通過上述，本發(fā)明的實(shí)施例中的生物轉(zhuǎn)化人參組合物及其制備方法通過保持(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人參二醇+人參皂苷F)/(人參皂苷Rc+人參皂苷Rd+人參皂苷Rb1+人參皂苷Rb2)的比在0.1或0.1以上而提供抗癌成分被大幅度增強(qiáng)的生物轉(zhuǎn)化人參組合物。
而且，本發(fā)明的實(shí)施例中的生物轉(zhuǎn)化人參組合物及其制備方法通過對(duì)人參原材料中含有的皂苷成分進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，生成生理活性高的代謝物，能使皂苷等有效成分含量低的不適合用作人參加工物原料的人參葉等原材料也靈活使用。
而且，本發(fā)明的實(shí)施例的生物轉(zhuǎn)化人參組合物及其制備方法具有在被人體吸收時(shí)，抑制組胺游離的抗變應(yīng)性作用、自由基清除的抗氧化作用從而抑制老化、抑制腸道細(xì)菌產(chǎn)生β-葡糖醛酸糖苷酶從而預(yù)防大腸癌和肝臟損傷的效果。
權(quán)利要求
1.一種生物轉(zhuǎn)化人參組合物，其特征在于，在所述人參組合物中，(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人參二醇+人參皂苷F)/(人參皂苷Rc+人參皂苷Rd+人參皂苷Rb1+人參皂苷Rb2)的比為0.1或0.1以上。
2.一種生物轉(zhuǎn)化人參組合物，其特征在于，在所述人參組合物中，(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人參二醇+人參皂苷F)/(人參皂苷Rc+人參皂苷Rd+人參皂苷Rb1+人參皂苷Rb2)的比為0.1或0.1以上，在被人體吸收時(shí)，其抑制組胺的游離而用作抗變應(yīng)性物質(zhì)。
3.一種生物轉(zhuǎn)化人參組合物，其特征在于，在所述人參組合物中，(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人參二醇+人參皂苷F)/(人參皂苷Rc+人參皂苷Rd+人參皂苷Rb1+人參皂苷Rb2)的比為0.1或0.1以上，在被人體吸收時(shí)，其抗癌，并通過清除自由基而起抗氧化作用，用作防止老化的物質(zhì)。
4.一種生物轉(zhuǎn)化人參組合物，其特征在于，在所述人參組合物中，(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人參二醇+人參皂苷F)/(人參皂苷Rc+人參皂苷Rd+人參皂苷Rb1+人參皂苷Rb2)的比為0.1或0.1以上，在被人體吸收時(shí)，其抑制腸道細(xì)菌產(chǎn)生的β-葡糖醛酸糖苷酶的生成，用作預(yù)防大腸癌和肝臟損傷的物質(zhì)。
5.一種生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，所述人參組合物的制備方法包括將人參原材料在水中懸浮后，加入乳酸菌或腸道細(xì)菌，培養(yǎng)24～72小時(shí)左右，得到生物轉(zhuǎn)化人參液的生物轉(zhuǎn)化過程；以及將經(jīng)過上述過程的生物轉(zhuǎn)化人參液原樣濃縮或冷凍/干燥，或者將上述生物轉(zhuǎn)化人參液離心分離，只過濾上清液，得到生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液的濃縮過程。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，使用生人參、紅參、白參、尾參、人參葉、人參提取液和人參粉末中的任一種或多種作為所述人參原材料。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，使用的上述乳酸菌為雙岐桿菌KK-1、雙岐桿菌KK-2中的任一種或多種。
8.根據(jù)權(quán)利要求5的生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，使用雙歧桿菌K-103、雙歧桿菌K-506中的任一種或多種作為上述乳酸菌。
9.根據(jù)權(quán)利要求5的生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，使用的上述乳酸菌為雙岐桿菌KK-1、雙岐桿菌KK-2、雙歧桿菌K-103、雙歧桿菌K-506中的任一種或多種。
10.根據(jù)權(quán)利要求5的生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，使用口部普雷沃菌、梭桿菌K-60中的任一種或多種作為上述腸道細(xì)菌。
11.根據(jù)權(quán)利要求5的生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，在上述濃縮過程以后，追加進(jìn)行向生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液中加入預(yù)定的溶劑，得到生物轉(zhuǎn)化人參提取液的提取過程。
12.根據(jù)權(quán)利要求7的生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，在上述提取過程以后，追加進(jìn)行向在甜味劑中加蒸餾水并混合得到的飲料原液中加入上述生物轉(zhuǎn)化人參提取液并攪拌，得到生物轉(zhuǎn)化人參混合液的攪拌過程；以及向上述生物轉(zhuǎn)化人參混合液中加入預(yù)定量的蒸餾水，得到生物轉(zhuǎn)化人參飲料液的稀釋過程。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，向上述攪拌過程的飲料原液中添加檸檬酸、檸檬酸鈉、生藥提取物、氨基乙磺酸中的任一種或多種。
14.根據(jù)權(quán)利要求11的生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，在上述提取過程以后，追加進(jìn)行冷凍干燥生物轉(zhuǎn)化人參提取液，得到生物轉(zhuǎn)化人參粉末的干燥過程。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，在上述干燥過程以后，追加進(jìn)行向在甜味劑中加蒸餾水并混合的飲料原液中加入上述生物轉(zhuǎn)化人參粉末并攪拌，得到生物轉(zhuǎn)化人參混合液的攪拌過程；以及向上述生物轉(zhuǎn)化人參混合液中加入預(yù)定量的蒸餾水，得到生物轉(zhuǎn)化人參飲料液的稀釋過程。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，向上述攪拌過程的飲料原液中添加檸檬酸、檸檬酸鈉、生藥提取物、氨基乙磺酸中的任一種或多種。
全文摘要
本發(fā)明提供一種生物轉(zhuǎn)化人參組合物，其特征在于，在所述人參組合物中，(20－O－β－D－吡喃葡糖基－20(S)－原人參二醇+人參皂苷F)/(人參皂苷Rc+人參皂苷Rd+人參皂苷Rb1+人參皂苷Rb2)的比為0.1或0.1以上。又，本發(fā)明提供一種生物轉(zhuǎn)化人參組合物，其特征在于，在所述人參組合物中，(20－O－β－D－吡喃葡糖基－20(S)－原人參二醇+人參皂苷F)/(人參皂苷Rc+人參皂苷Rd+人參皂苷Rb1+人參皂苷Rb2)的比為0.1或0.1以上，在被人體吸收時(shí)，其抑制組胺的游離，用作抗變應(yīng)性、抗癌物質(zhì)。又，本發(fā)明提供一種生物轉(zhuǎn)化人參組合物的制備方法，其特征在于，所述人參組合物的制備方法包括將人參原材料在水中懸浮后，加入乳酸菌或腸道細(xì)菌，培養(yǎng)24～72小時(shí)左右，得到生物轉(zhuǎn)化人參液的生物轉(zhuǎn)化過程；以及將經(jīng)過上述方法的生物轉(zhuǎn)化人參液原樣濃縮或冷凍/干燥，將上述生物轉(zhuǎn)化人參液離心分離，只過濾上清液，得到生物轉(zhuǎn)化人參濃縮液的濃縮過程。
文檔編號(hào)A61P17/00GK1435179SQ03101549
公開日2003年8月13日 申請(qǐng)日期2003年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2002年1月30日
發(fā)明者李東億, 成鐘煥, 金東鉉, 裴銀珴, 韓明珠, 秋旼京, 樸恩鏡 申請(qǐng)人:株式會(huì)社一和