專利名稱：一種可供注射給藥的精制蒺藜皂苷，其制備方法及注射劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開一種可供注射給藥的精制蒺藜皂苷及其制備方法，同時(shí)還提供了應(yīng)用可供注射給藥的精制蒺藜皂苷制成凍干粉針劑，用于防治缺血性心、腦血管疾病，屬于中藥有效部位成分的提取及應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
本發(fā)明所涉及的蒺藜是指蒺藜科植物蒺藜Tribulus terrestris L.的成熟地上部分(以下簡(jiǎn)稱蒺藜草)，蒺藜植物的果實(shí)為常用傳統(tǒng)中藥“蒺藜”?；谳疝疾菖c中藥材蒺藜(果實(shí))含有極其相似的甾體皂苷類有效成分，本發(fā)明者此前自蒺藜草提取甾體皂苷組分制成“心腦舒通”膠囊和片劑，由原洮南市第一制藥廠生產(chǎn)，應(yīng)用于防治胸痹和中風(fēng)等缺血性心、腦血管疾病。
至今，國(guó)內(nèi)外尚未見有關(guān)蒺藜皂苷注射給藥制劑的研究報(bào)道或產(chǎn)品。
口服蒺藜總皂苷組合物的制造方法，國(guó)外報(bào)道均系采用有機(jī)溶劑提取分離。此前，本發(fā)明者曾研制了水提取樹脂分離工藝，已納入發(fā)明專利(洮南市第一制藥廠，專利公開號(hào)CN 1039595A)并應(yīng)用至今。但蒺藜總皂苷具有顯著血溶性，不能直接制備靜脈滴注制劑。因此，本發(fā)明進(jìn)行了注射用蒺藜皂苷制劑的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種可供注射給藥的精制蒺藜皂苷及其制劑(注射用蒺藜皂苷凍干粉針)，消除了蒺藜總皂苷的溶血作用，使之可供靜脈點(diǎn)滴給藥，以豐富該類藥物的給藥途徑，更好地滿足臨床需要，用于防治缺血性心、腦血管疾病。
本發(fā)明還公開了一種可供注射給藥的精制蒺藜皂苷的制備方法，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明還提供了一種由精制蒺藜皂苷制備的注射劑。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案包括以下制備步驟1、自蒺藜草提取蒺藜總皂苷取蒺藜草切斷，加水行外循環(huán)動(dòng)態(tài)浸煮，濾過，減壓濃縮，加乙醇沉淀，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，通過吸附樹脂(D-101或NK)柱凈化，凈化液減壓回收乙醇，濃縮，噴霧干燥，即得。
2、由蒺藜總皂苷制備可供注射用的精制蒺藜皂苷取步驟1制得的蒺藜總皂苷，加30～50倍乙醇回流提取30～60分鐘，放冷，濾過，加入2～6％甾醇(甾醇選自混合植物甾醇、β-谷甾醇、豆甾醇、膽固醇等甾醇)的乙醇溶液，回流反應(yīng)30～60分鐘，減壓回收乙醇，加水至投料量的10～20倍，攪勻，冷藏過夜，濾過，濾液加0.3％活性炭，攪拌，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.00～1.10(60℃)，再進(jìn)一步濃縮至相對(duì)密度1.18～1.20(60℃)。攪拌下加入2～5倍量丙酮，密閉靜置，傾除溶液，殘留物在80℃減壓干燥，粉碎，即得精制蒺藜皂苷?？傇碥蘸坎簧凫?0％，其中呋甾皂苷約占90％，按照部頒《中藥注射劑安全試驗(yàn)法》的溶血試驗(yàn)方法檢驗(yàn)，溶血檢查符合規(guī)定。
3、注射用蒺藜皂苷粉針劑的制備取上述精制蒺藜皂苷50g，加0.8～1.5倍右旋糖苷-20或右旋糖苷-40或甘露醇等適宜成型劑，加水至2000ml使溶解，用除菌濾膜濾過，分裝，冷凍干燥，密塞，壓蓋，制成每支含藥物50mg的凍干粉針劑。
本發(fā)明的積極效果在于利用蒺藜皂苷組合物制成具有良好穩(wěn)定性的注射給藥劑型，消除了蒺藜總皂苷的溶血作用，可供靜脈滴注給藥，提高蒺藜總皂苷含量達(dá)80％以上，降低有害雜質(zhì)限量，具有劑型新穎，起效快，生物利用度高等特點(diǎn)，進(jìn)一步豐富了該類藥物的給藥途徑，更好地適用臨床需要。
有關(guān)防治缺血性心、腦血管疾病的藥效藥理試驗(yàn)研究一，注射用蒺藜皂苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞犬的影響1、目的通過結(jié)扎犬LAD，觀察注射用蒺藜皂苷對(duì)∑-ST、N-ST、MIS和心肌三酶的影響。為證明注射用蒺藜皂苷的抗心肌缺血作用，提供藥理研究的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
2、實(shí)驗(yàn)材料(1)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康成年雜種犬，體重12-21kg，雌雄兼用，由白求恩醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。
(2)、實(shí)驗(yàn)藥品 注射用蒺藜皂苷由吉林敖東洮南藥業(yè)股份有限公司提供，批號(hào)990901；血塞通注射液，由云南植物藥液有限公司生產(chǎn)，批號(hào)990803-12。
3、實(shí)驗(yàn)方法雜種犬30只，隨機(jī)分為5組，每組6只，以戊巴比妥30mg/kg iv麻醉。造成心肌梗塞，用多點(diǎn)濕布式吸附法標(biāo)測(cè)EECG，標(biāo)測(cè)點(diǎn)24個(gè)，分正常區(qū)(對(duì)照點(diǎn))，梗塞邊緣區(qū)和梗塞中心區(qū)，股靜脈插管以備給藥。記錄各點(diǎn)EECG，同時(shí)自股靜脈取血，測(cè)AST，CPK和LDH值，作為給藥前值，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈15分鐘后，經(jīng)股靜脈給藥，對(duì)照組給予等容量生理鹽水，陽性藥物對(duì)照組給予血塞通注射液12.52ml/kg，注射用蒺藜皂苷6.26mg/kg，12.52mg/kg，25mg/kg三個(gè)劑量組，記錄給藥前、結(jié)扎成功后、給藥后EECG，以ST段升高總mV數(shù)表示∑-ST，以ST段升高＞2mV的導(dǎo)聯(lián)數(shù)為N-ST。記錄360分后，第二次取血測(cè)心肌三酶。最后，取下心臟，稱全心重，沿冠狀溝剪去大血管根部和心房，稱左心室重。將左心室均勻地橫斷切成5片，置于硝基四氮唑蘭(N-BT)染液中，在37℃恒溫水浴箱中染色15分鐘。用落點(diǎn)求積法(36點(diǎn)/cm2)測(cè)量每片心肌雙側(cè)梗塞區(qū)(N-BT非染色區(qū))與非梗塞區(qū)(N-BT染色區(qū))，每片心肌稱重，計(jì)算每片心肌面積，心室總面積和梗塞區(qū)的總面積，計(jì)算梗塞區(qū)與心室及心臟重量百分比。
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)、對(duì)EECG的影響對(duì)缺血程度的影響(∑-ST)血塞通注射液對(duì)照組對(duì)缺血程度(∑-ST)，在20-180分鐘作用明顯(P＜0.05)，變化百分率在20-210分鐘作用明顯(P＜0.01)；注射用蒺藜皂苷6.26mg/kg在45-180分鐘作用明顯(P＜0.05)，變化百分率在45分鐘作用明顯(P＜0.05)；12.52mg/kg實(shí)測(cè)值在30-180分鐘作用明顯(P＜0.05)；25mg/Kg在20-210分鐘作用明顯(P＜0.01)，變化百分率在20-210分鐘作用明顯(P＜0.05)。見表1。
對(duì)缺血范圍(N-ST)的影響血塞通注射液對(duì)照組對(duì)缺血范圍(N-ST)，變化百分率在20-180分鐘作用明顯(P＜0.05)；注射用蒺藜皂苷6.26mg/kg變化百分率在30-180分鐘作用明顯(P＜0.05)；12.52mg/kg實(shí)測(cè)值在30-180分鐘作用明顯(P＜0.05)；25mg/Kg實(shí)測(cè)值在30-60分鐘作用明顯(P＜0.05)，變化百分率在20-180分鐘作用明顯(P＜0.05)。見表2。
(2)、對(duì)MIS的影響陽性藥組，小劑量組，中劑量組，大劑量組均可明顯減少梗塞/全心及梗塞/左心面積(P＜0.05)。見表3。
(3)、對(duì)心肌三酶(AST，CPK，LDH)的影響血塞通注射液對(duì)照組，注射用蒺藜皂苷12.52mg/kg，25mg/Kg可明顯降低血清AST的含量(P＜0.01)，變化百分率降低明顯(P＜0.05)。見表4。
血塞通注射液對(duì)照組，注射用蒺藜皂苷25mg/Kg變化百分率可明顯降低血清CPK的含量(P＜0.05)。見表5。
各個(gè)劑量組對(duì)血清中的LDH的含量，與鹽水對(duì)照組比較無顯著性差異。見表6。
5、結(jié)論本試驗(yàn)采用結(jié)扎犬冠狀動(dòng)脈前降支(LAD)造成急性心肌梗塞模型。用心外膜電圖(EECG)標(biāo)測(cè)心肌缺血程度(∑-ST)和心肌缺血范圍(N-ST)；以定量組織學(xué)法(N-BT染色法)測(cè)定心肌梗塞范圍(MIS)；股靜脈取血測(cè)心肌三酶谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、肌酸磷酸激酶(CPK)和乳酸脫氫酶(LDH)的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，注射用蒺藜皂苷各劑量組，經(jīng)靜脈給藥，均可降低∑-ST，減少N-ST，縮小MIS，各組還可降低血清LDH、AST和CPK的含量，與鹽水對(duì)照組比較有顯著性差異。
二、注射用蒺藜皂苷對(duì)麻醉開胸犬血流動(dòng)力學(xué)及心肌缺血的影響1、目的 通過觀察注射用蒺藜皂苷對(duì)麻醉開胸犬血流動(dòng)力學(xué)及心肌耗氧量的影響，探討其對(duì)心血管系統(tǒng)的藥理效應(yīng)，為臨床治療心血管疾病提供理論依據(jù)。
2、實(shí)驗(yàn)材料(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康成年雜種犬，體重12-20kg，雌雄兼用，由白求恩醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。
(2)實(shí)驗(yàn)藥品 注射用蒺藜皂苷由吉林敖東洮南藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)990901；血塞通注射液，由云南植物藥液有限公司生產(chǎn)，批號(hào)990803-12。
3、實(shí)驗(yàn)方法雜種犬30只，分為5組，每組6只。對(duì)照組給予等容量生理鹽水，陽性藥組給予血塞通注射液12.52mg/kg，實(shí)驗(yàn)組分為注射用蒺藜皂苷6.26mg/kg、12.52mg/kg、25mg/kg三個(gè)劑量組，均采用靜脈滴注。記錄給藥前及藥后1、3、5、10、20、30、45、60、90、120分鐘諸指標(biāo)。于給藥前及藥后5、20、30、60、120分鐘取動(dòng)脈、靜脈血，以血氧儀測(cè)定血氧含量。并根據(jù)公式，計(jì)算二級(jí)指標(biāo)平均動(dòng)脈壓、心臟指數(shù)、心搏指數(shù)、左室作功指數(shù)、總外周阻力、冠脈阻力、心肌耗氧量、心肌耗氧指數(shù)、心肌氧攝取率、心肌血流量等。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)實(shí)測(cè)值和變化百分率值與對(duì)照組比較，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)分析。
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)對(duì)心率、血壓的影響注射用蒺藜皂苷12.52mg/kg給藥后逐漸減慢心率，變化百分率在20-90分鐘作用顯著(P＜0.05)；其他各組對(duì)心率影響不明顯，見表7。
注射用蒺藜皂苷12.52mg/kg給藥后逐漸降低血壓，變化百分率在10-45分鐘作用明顯(P＜0.01)，大劑量組25mg/kg變化百分率在30-45分鐘作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，其它各組藥物對(duì)血壓無明顯改變。見表8。
(2)對(duì)左室內(nèi)壓、左室舒末壓及左室作功的影響注射用蒺藜皂苷12.52mg/kg對(duì)左心室內(nèi)壓變化百分率在10-60作用明顯(P＜0.05)，給藥25mg/Kg組，變化百分率在60分鐘時(shí)作用明顯(P＜0.05)，其他各組無明顯作用。見表9。
各劑量組對(duì)左室舒末壓無明顯作用。見表10。
注射用蒺藜皂苷12.52mg/kg對(duì)左室作功變化百分率在30-45作用明顯(P＜0.05)。其它各組藥物均無明顯作用。見表11。
(3)對(duì)左室內(nèi)壓最大變化速率和總外周阻力的影響各劑量組對(duì)左室內(nèi)壓最大變化速率均無明顯作用。見表12、表13。血塞通注射液對(duì)照組變化百分率對(duì)總外周阻力在20-60分鐘作用明顯(P＜0.05)；注射用蒺藜皂苷12.52mg/kg對(duì)總外周阻力變化百分率在10-45分鐘作用明顯(P＜0.05)25mg/Kg變化百分率在3-10分鐘時(shí)作用明顯(P＜0.05)，實(shí)測(cè)值在5-45分鐘作用明顯(P＜0.05)，其他各組無明顯作用。見表14。
(4)對(duì)心輸出量、心肌血流量和冠脈阻力的影響血塞通注射液對(duì)照組對(duì)心輸出量變化百分率在10-45分鐘作用明顯(P＜0.05)。注射用蒺藜皂苷12.52mg/kg變化百分率在5-20分鐘作用明顯(P＜0.05)；其他各組無明顯作用。見表15。
血塞通注射液對(duì)照組對(duì)心肌血流量變化百分率在5-45分鐘作用明顯(P＜0.05)，注射用蒺藜皂苷12.52mg/kg變化百分率在5-20分鐘作用明顯(P＜0.01)；25mg/Kg變化百分率在10-45分鐘作用明顯(P＜0.01)；其他各組無明顯作用。見表16。
血塞通注射液對(duì)照組對(duì)冠脈阻力變化百分率在5-45分鐘作用明顯(P＜0.05)，實(shí)測(cè)值對(duì)冠脈阻力在20-45分鐘作用明顯(P＜0.05)；注射用蒺藜皂苷12.52mg/kg變化百分率在5-30分鐘作用明顯(P＜0.01)；25mg/Kg變化百分率在3-45分鐘作用明顯(P＜0.01)；其他各組無明顯作用。見表17。
(5)對(duì)心臟指數(shù)、心搏指數(shù)和心搏出量的影響血塞通注射液對(duì)照組對(duì)心臟指數(shù)在10-45分鐘作用明顯(P＜0.05)；注射用蒺藜皂苷12.52mg/kg變化百分率在5-20分鐘作用明顯(P＜0.05)；其他各組無明顯作用。見表18。
血塞通注射液對(duì)照組對(duì)心搏指數(shù)變化百分率在5-60分鐘作用明顯(P＜0.05)；注射用蒺藜皂苷6.26mg/kg變化百分率在5-20分鐘作用明顯(P＜0.01)；12.52mg/kg變化百分率在5-30分鐘作用明顯(P＜0.01)；25mg/Kg變化百分率在5-10分鐘作用明顯(P＜0.05)；實(shí)測(cè)值在5-30分鐘作用明顯(P＜0.05)其他各組無明顯作用。見表19。
血塞通注射液對(duì)照組對(duì)心搏出量變化百分率在5-60分鐘作用明顯(P＜0.05陽性藥組實(shí)測(cè)值對(duì)心搏出量，在10-90分鐘作用明顯(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)；注射用蒺藜皂苷6.26mg/kg變化百分率在5-20分鐘作用明顯(P＜0.01)；12.52mg/kg變化百分率在5-30分鐘作用明顯(P＜0.01)；25mg/Kg變化百分率在5-10分鐘作用明顯(P＜0.05)其他各組無明顯作用。見表20。
(6)對(duì)心肌耗氧量、心肌耗氧指數(shù)及心肌氧攝取率的影響對(duì)心肌耗氧量的作用血塞通注射液對(duì)照組對(duì)心肌耗氧量在20-60分鐘作用明顯(P＜0.01)；注射用蒺藜皂苷6.26mg/kg變化百分率在5-30分鐘作用明顯(P＜0.01)；實(shí)測(cè)值在30分鐘作用明顯(P＜0.05)，12.52mg/kg變化百分率在20-30分鐘作用明顯(P＜0.01)；實(shí)測(cè)值在30-60分鐘作用明顯(P＜0.05)，25mg/Kg變化百分率在5-60分鐘作用明顯(P＜0.01)，實(shí)測(cè)值在60分鐘作用明顯(P＜0.05)，其他各組無明顯作用。見表21。
對(duì)心肌耗氧指數(shù)的作用血塞通注射液對(duì)照組對(duì)心肌耗氧指數(shù)變化百分率在60分鐘作用明顯(P＜0.05)；注射用蒺藜皂苷6.26mg/kg變化百分率在30分鐘作用明顯(P＜0.01)；實(shí)測(cè)值在30分鐘作用明顯(P＜0.05)，12.52mg/kg變化百分率在20-30分鐘作用明顯(P＜0.01)；25mg/Kg變化百分率在20-30分鐘作用明顯(P＜0.05)，其他各組無明顯作用。見表22。
對(duì)心肌氧攝取率的作用血塞通注射液對(duì)照組對(duì)心肌氧攝取率變化百分率在5-60分鐘作用明顯(P＜0.01)；實(shí)測(cè)值在60分鐘作用明顯(P＜0.05)；注射用蒺藜皂苷6.26mg/kg變化百分率在5-30分鐘作用明顯(P＜0.01)；12.52mg/kg變化百分率在5-30分鐘作用明顯(P＜0.001)；25mg/Kg變化百分率在5-60分鐘作用明顯(P＜0.001)，實(shí)測(cè)值在20-60分鐘作用明顯(P＜0.05)，其他各組無明顯作用。見表23。
5、結(jié)論本實(shí)驗(yàn)觀察了注射用蒺藜皂苷對(duì)正常麻醉開胸犬血流動(dòng)力學(xué)及心肌耗氧量等作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，注射用蒺藜皂苷可明顯增加冠脈血流量、心肌血流量、心臟指數(shù)、心搏指數(shù)、心輸出量和心搏出量。降低血壓、冠脈阻力、總外周阻力、減慢心率、減少心肌耗氧量、耗氧指數(shù)和氧攝取率。注射用蒺藜皂苷這些作用，與直接擴(kuò)張冠脈有關(guān)、使之冠脈血流量、心肌血流量增加。左室作功降低，可減少心肌能量和氧消耗，使氧攝取率降低。心輸出量、心搏指數(shù)增多、直接反映心臟泵血功能的提高，可能與外周阻力降低，外周血管擴(kuò)張有關(guān)。提示注射用蒺藜皂苷可改善心血管系統(tǒng)功能，調(diào)節(jié)心臟供血供氧平衡，對(duì)防治心血管疾病，如冠心病、心肌缺血等常見病有重要意義。
三、注射用蒺藜皂苷防治缺血性心、腦血管疾病的其他藥效學(xué)試驗(yàn)1、目的 通過動(dòng)物試驗(yàn)，觀察注射用蒺藜皂苷對(duì)心、腦缺血的保護(hù)作用，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
2、試驗(yàn)材料(1)動(dòng)物昆明種小鼠，雌雄兼用，體重18-22g；Wistar大鼠雌雄各半，體重195-318g，251-382g。上述動(dòng)物由白求恩醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。質(zhì)量合格證號(hào)分別為醫(yī)動(dòng)字第10-5107號(hào)，醫(yī)動(dòng)字第10-5110號(hào)。
(2)藥物注射用蒺藜皂苷，淺黃色塞狀塊，每一支內(nèi)含藥50mg由吉林敖東洮南藥業(yè)股份有限公司提供，批號(hào)為990901，用時(shí)以生理鹽水溶液配成所需濃度，供腹腔或靜脈注射給藥。試驗(yàn)所用陽性藥血塞通由云南植物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)990201-2；5′-腺苷二磷酸-鈉鹽(ADP-NA)由中國(guó)科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所出品，批號(hào)9507152；鹽酸腎上腺素(Adr)注射液由上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)980801；煙酸由青島鴻雁制藥廠出品，批號(hào)980317；膽固醇由上海新興化工試劑研究所提供，批號(hào)970818；丙基硫氧嘧啶由上海集成藥廠生產(chǎn)，批號(hào)20000101；紅四氮唑(TTC)購(gòu)自上?；瘜W(xué)試劑總廠，批號(hào)970219。
(3)儀器LBY-S5血栓形成儀由北京普利生精密儀器研究中心制造；LBY-NJ2全自動(dòng)四通道血小板凝聚儀由普利生集團(tuán)制造；LBY-N6A自清洗旋轉(zhuǎn)式粘度計(jì)由北京普利生出品；XTT立體顯微鏡由上海勤奮儀器廠產(chǎn)；ES-60J電子分析天平由沈陽龍騰電子稱量?jī)x器有限公司；Celeron 333兼容機(jī)。
3、試驗(yàn)方法與結(jié)果(1)大鼠大腦中動(dòng)脈阻斷模型的影響取40只大鼠，雌雄各半，體重251-382g。隨機(jī)分為五組，每組八只，各組給藥方式均為腹腔注射缺血模型組給予同體積生理鹽水，陽性對(duì)照組給予血塞通20.8mg/kg，給藥組分三個(gè)劑量分別為10.4、20.8、31.2mg/kg。連續(xù)給藥七天，每天一次，末次給藥后腹腔注射水合氯醛(350mg/kg)麻醉后，仰臥位固定，在大鼠右外耳道與眼外眥連線中點(diǎn)處垂直切開皮膚約2cm，然后在體視顯微鏡下沿顳肌中線，依次切斷顳肌和咬肌，暴露出顴弓，用咬骨鉗除去顴弓，暴露顳前窩，然后在顴骨和鱗狀骨前聯(lián)合的前下方約2mm處鉆孔，開一直徑約2mm的小顱窗，此時(shí)可見一條較直且少分支的小血管，即為大腦中動(dòng)脈(MCA)，以細(xì)針挑起，電凝阻斷嗅束內(nèi)1mm至大腦下靜脈之間的一段大腦中動(dòng)脈。然后逐層縫合肌肉和皮膚。單籠飼養(yǎng)。術(shù)后30min給藥一次。術(shù)后24小時(shí)觀察動(dòng)物一般行為狀態(tài)，然后斷頭取腦，分離去除嗅球，小腦和低位腦干后，保留大腦部位，沿冠狀線等分切四刀，切成五片腦組織切片，然后迅速將其置入5ml含有4％TTC及1mol/1K2 HPO40.1ml溶液中，避光條件下，37℃溫孵30min，經(jīng)染色后，正常腦組織呈玫瑰紅色，而已梗塞組織呈白色，用透明玻璃紙包裹后，以掃描儀描記標(biāo)本的肉眼形態(tài)學(xué)變化，根據(jù)圖像分析法，計(jì)算出梗塞區(qū)域面積占大腦半球面積的百分比。
結(jié)果可見，蒺藜皂苷低、中、高三個(gè)劑量組和血塞通陽性對(duì)照組動(dòng)物與缺血模型組相比，腦梗塞面積顯著下降，有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01和P＜0.01)，將TTC染色的腦片置10％福爾馬林中固定7天以上，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察鏡下病理組織學(xué)變化。結(jié)果見病理報(bào)告。
病理結(jié)果表明模型組大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞有較明顯的缺血壞死改變表現(xiàn)為細(xì)胞體積縮小，呈三角形，尼氏體消失，胞漿紅染，胞核濃縮深染，此種改變尤以錐體細(xì)胞層及海馬回神經(jīng)元較顯著。血塞通給藥組大腦皮層、海馬回僅見少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞呈缺血壞死改變。蒺藜皂苷三個(gè)劑量給藥組均不同程度表現(xiàn)出少量神經(jīng)細(xì)胞呈缺血改變，其病變明顯輕于模型組，其中大劑量組最明顯。
(2)對(duì)血淤模型大鼠血液粘度等的影響對(duì)血液流變學(xué)的影響取40只大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為五組，每組八只血淤模型組，血塞通20.8mg/kg陽性對(duì)照藥組，給藥組分為三個(gè)劑量分別為10.4mg/kg，20.8mg/kg，31.2mg/kg，每天腹腔注射給藥一次，連續(xù)七天，末次給藥后，造血淤模型方法是皮下注射0.1％的Adr0.09ml/kg體重，共兩次，間隔四小時(shí)，并在此間將大鼠浸入冰水中5min，繼之禁食不禁水，次晨動(dòng)物腹腔注射水合氯醛350mg/kg麻醉，腹主動(dòng)脈取血，置血液血漿粘度計(jì)上測(cè)定全血比粘度(高切值、中切值、低切值)，血漿比粘度。
可見蒺藜皂苷中、高劑量組和血塞通陽性對(duì)照組可明顯抑制血液流變學(xué)的異常變化，降低全血粘度(P＜0.01、P＜0.01和P＜0.05)，高劑量組也可降低血漿粘度(P＜0.05)。其他各組有降低血漿粘度的趨勢(shì)，但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
對(duì)血淤大鼠血小板聚集率的影響按(1)分組及試驗(yàn)方法，腹主動(dòng)脈采血2.7ml/只，緩慢混勻，離心，分離PRP(富血小板血漿)、PPP(貧血小板血漿)，按文獻(xiàn)方法測(cè)定ADP誘導(dǎo)的血小板最大聚集率。
結(jié)果可見，注射用蒺藜皂苷和血塞通可明顯抑制血小板聚集，其聚集率與血淤模型組比較明顯降低(P＜0.05)。
對(duì)血淤大鼠凝血時(shí)間的影響取40只大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為五組血淤模型組，血塞通20.8mg/kg劑量給藥組，藥物10.4mg/kg，20.8mg/kg，31.2mg/kg三個(gè)劑量給藥組，每天腹腔注射一次，連續(xù)給藥七天，同上述方法造血淤模型，處置后停食，次晨將動(dòng)物麻醉，腹主動(dòng)脈取血，以玻片法觀察動(dòng)物的凝血時(shí)間。
結(jié)果可見，注射用蒺藜皂苷中、高劑量組和血塞通陽性對(duì)照組均可延長(zhǎng)血淤動(dòng)物的凝血時(shí)間，與血淤模型組相比有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
(3)注射用蒺藜皂苷抗血栓作用注射用蒺藜皂苷對(duì)大鼠體內(nèi)抗血栓形成的影響取50只大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為五組，每組十只，各組給藥方式均為腹腔注射。溶媒對(duì)照組，給予等體積藥用生理鹽水；陽性對(duì)照組給予血塞通20.8mg/kg體重；蒺藜皂苷給藥組分三個(gè)劑量，分別為10.4mg/kg、20.8mg/kg、31.2mg/kg，每天給藥一次，連續(xù)七天，末次給藥10min，動(dòng)物腹腔注射水合氯醛(350mg/kg)麻醉，仰臥位固定并分離出右側(cè)頸總動(dòng)脈和左側(cè)頸外靜脈，在聚乙烯管的中段放入一根長(zhǎng)5cm的4號(hào)手術(shù)絲線。將肝素生理鹽水溶液(50u/ml)充滿聚乙烯管腔。當(dāng)管的一端插入左頸外靜脈后，另一端準(zhǔn)確地注入肝素(50u/kg)抗凝，然后再插入右頸總動(dòng)脈。血液從右側(cè)頸總動(dòng)脈流至聚乙烯管內(nèi)，再返流入左頸外靜脈，15min后阻斷血流，迅速取出絲線稱重，總重量減去線重量即得血栓濕重。
結(jié)果可見，血塞通和蒺藜皂苷高、中二個(gè)劑量組均可抑制血栓形成，血栓重量與溶媒對(duì)照組比較明顯降低，(P＜0.01、P＜0.01和P＜0.05)；低劑量組也有降低血栓重量的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
注射用蒺藜皂苷對(duì)體內(nèi)血栓形成時(shí)間的影響取雄性大鼠40只，體重250～300g，隨機(jī)分為五組溶媒對(duì)照組，血塞通20.8mg/kg陽性對(duì)照組，給藥組分為三個(gè)劑量分別為10.4、20.8、31.2mg/kg。每天腹腔注射給藥一次，連續(xù)七天，于末次給藥后30min，測(cè)定體內(nèi)血栓形成時(shí)間，腹腔注射水合氯醛(350mg/kg)麻醉。麻醉后，固定于大鼠固定臺(tái)上，切開頸部皮膚，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈約15mm，將實(shí)驗(yàn)性體內(nèi)血栓形成測(cè)定儀的刺激電極及溫度傳感器探頭置于動(dòng)脈上，用2mA電流刺激血管7min以損傷動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，當(dāng)動(dòng)脈管腔內(nèi)血栓形成阻斷血流，儀器報(bào)鳴，此時(shí)儀器顯示血栓形成時(shí)間(OT值)。
結(jié)果可見，與溶媒對(duì)照組比較，蒺藜皂苷中、高二個(gè)劑量組和血塞通陽性對(duì)照組均能明顯延長(zhǎng)血栓形成時(shí)間(P＜0.05)，對(duì)大鼠體內(nèi)血栓形成有顯著的抑制作用。低劑量組能延長(zhǎng)血栓形成時(shí)間，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
注射用蒺藜皂苷對(duì)體外血栓形成的影響取40只大鼠，同上述方法分組及給藥，末次給藥后30min，腹腔注射水合氯醛(350mg/kg)麻醉，由下腔靜脈取血1.8ml注入硅化膠管中，將膠管兩端口對(duì)齊形成環(huán)狀，用硅膠套管固定，裝到體外血栓儀上，旋轉(zhuǎn)15min停機(jī)，取出血栓，測(cè)量血栓長(zhǎng)度。用濾紙將血栓水分吸凈，稱重，得到血栓濕重。將血栓放入烤箱，64℃烤20min，再稱其重量，即為血栓干重。
可見，蒺藜皂苷中、高劑量組和血塞通陽性對(duì)照均能明顯抑制體外血栓形成，縮短血栓長(zhǎng)度，降低其干重和濕重，與溶媒對(duì)照組比較均有顯著差異(P＜0.05)。
有關(guān)毒性與安全性試驗(yàn)可供注射用蒺藜皂苷組合物的小鼠靜脈注射LD50為402.6mg/kg，腹腔注射給藥的LD50為736.7。應(yīng)用大鼠和犬二種動(dòng)物，依次行腹腔注射和靜脈滴注，連續(xù)給藥八周。結(jié)果示出，相應(yīng)推薦的臨床給藥劑量均未見毒性反應(yīng)。動(dòng)物安全性試驗(yàn)未見過敏反應(yīng)、溶血反應(yīng)及血管刺激性。
附表1-23表1.注射用蒺藜皂苷對(duì)心肌梗塞犬缺血程度的影響(∑-ST，Mv)(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量給藥前 結(jié)扎 1 3 5 10鹽水組----8.00±1.414 156.17±20.024 154.50±18.759 160.17±27.066 156.83±26.8.6 149.33±19.6331909.9±454.70 1869.4±320.19 1934.1±360.74 1897.3±378.22 1812.8±371.36陽性組12.52mg/kg 9.83±2.317 147.00±13.535 147.83±13.527 146.50±11.862 140.50±7.342 133.83±9.621％1457.8±336.68 1465.0±318.94 142.0±389.50 1407.1±419.95 1337.0±414.30小劑量組 6.26mg/kg 9.17±2.994 142.67±13.823 142.67±14.514 137.50±3.450 135.50±14.680 131.33±12.770％1587.1±533.95 1577.4±490.94 1546.2±570.63 1499.3±514.46 1453.3±515.10中劑量組 12.52mg/kg 7.67±2.503 140.50±14.816 139.33±11.978 135.33±10.424 130.00±18.210 128.67±12.356％1912.9±728.37 1899.2±723.22 1826.1±641.01 1763.2±676.14 1742.4±652.54高劑量組 25.00mg/kg 10.50±3.886150.17±9.218 146.67±12.941 141.33±14.679 135.83±16.142 129.00±11.849％1519.2±641.32 1482.5±634.71 1421.4±613.64 1362.6±615.36 1305.7±617.17續(xù)表1.
給藥后(min)203045 6090 120145.50±25.193137.83±28.833142.17±22.605133.00±21.568122.50±25.626125.33±18.8331751.7±349.541654.6±394.181708.8±319.211593.0±292.991445.3±274.671491.7±242.65114.50±13.664*103.50±16.072*99.00±14.353**95.00±14.886**91.50±19.212*92.00±17.989*1128.7±360.67*1025.7±393.27*959.72±282.67**909.62±240.25**868.50±244.55**874.20±241.51**123.83±18.258114.67±12.061111.83±9.517*104.67±7.685*97.83±7.627*101.50±5.050*1359.2±507.461249.8±418.901224.6±411.89*1164.0±485.521083.4±468.501128.7±489.35125.17±10.458104.67±10.013*102.83±5.742**97.50±4.370**98.33±6.346*100.67±4.967*1678.0±576.711370.5±413.901341.9±381.641276.3±401.921276.1±357.011306.7±348.36113.50±11.640*103.83±11.053*98.17±9.704**88.50±7.817***88.00±4.648**89.33±4.320**1131.0±527.57*1023.0±471.62*953.99±421.78**862.24±420.00**835.70±331.97**861.92±375.96**
續(xù)表1.
給藥后(min)150 180 210240 300360124.17±20.054122.67±20.578119.50±18.436 114.50±11.520116.00±14.805116.50±11.6401477.3±256.971468.7±327.851417.4±245.91 1360.2±233.881373.5±211.081392.6±278.5897.50±15.745*94.00±12.853*110.33±9.114 105.17±14.219107.00±9.359 108.50±5.891943.93±283.62**908.43±281.17**1073.1±271.57*1025.6±325.071047.1±328.231070.2±362.42103.00±5.020*103.00±4.147*101.50±9.915 101.67±10.152101.00±12.759102.17±14.1061143.2±492.431129.8±409.841122.3±431.74 1126.5±448.591110.8±425.531135.2±469.52101.83±5.382*99.33±6.377*102.50±5.958 106.50±10.710102.67±8.335 106.67±11.5011323.0±355.071285.1±341.891357.1±466.62 1431.3±559.111373.1±538.731434.8±591.9590.00±3.633**90.67±3.445**95.50±6.348*103.50±8.803 105.17±2.858 106.50±5.788873.39±389.73*875.65±381.02*934.00±417.76*1023.5±465.161032.2±438.081038.9±411.55與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001表2.注射用蒺藜皂苷對(duì)心肌梗塞犬缺血范圍的影響(N-ST，點(diǎn))(X±s，n＝5)給藥后(min)組別劑量 給藥前 結(jié)扎 13 5 10鹽水組 ---- 6.17±0.983 20.33±1.633 19.67±1.033 19.17±1.32918.67±2.06618.00±1.095237.22±64.822 225.00±50.277 216.81±50.554 209.03±61.147 197.50±46.592陽性組 12.52mg/kg7.50±1.378 19.67±1.366 19.67±1.366 19.17±1.47217.83±1.72217.17±1.472％ 170.54±58.816 168.52±44.813 161.44±41.920 147.72±66.722 135.71±50.592小劑量組6.26mg/kg 7.33±1.056 19.17±0.408 18.67±0.816 18.33±1.63317.33±1.21117.50±0.837％ 172.13±63.610 163.94±56.086 158.89±55.557 143.98±45.590 147.87±54.965中劑量組 6.00±1.789 18.83±0.753 18.83±0.753 17.67±1.03318.17±0.98317.00±1.095％ 234.22±87.112 237.58±97.877 213.81±80.151 221.56±80.990 202.88±79.538高劑量組25.00mg/kg8.00±2.098 19.33±1.033 19.00±0.632 18.17±1.16917.50±0.54817.50±1.378％ 159.03±80.361 152.73±70.182 141.85±67.844 133.06±66.202 133.10±66.114給藥后(min)203045 60 90 12017.33±1.211 16.83±2.317 16.50±2.510 15.50±1.871 16.17±2.994 15.50±2.074184.58±29.220176.53±44.160168.47±27.439 153.89±2.401 162.92±37.505155.14±42.72116.17±1.722 15.00±2.000 14.17±2.483 12.83±2.401 13.17±1.602 13.50±2.510123.15±56.701*104.00±36.562*93.29±48.003**74.93±42.941**81.94±44.574**86.41±50.721*17.33±0.816 16.00±1.095 14.67±0.816 14.17±0.408 14.17±0.753 13.50±1.378144.31±46.846125.69±46.129106.85±41.619*100.83±45.811*101.62±52.237*90.65±45.422*15.83±2.137 13.83±1.722*13.50±1.517*12.83±2.041*12.67±1.506*12.00±2.683*189.33±104.25152.71±91.781144.66±81.103 133.45±79.517 129.19±74.469120.70±85.45015.67±1.633 14.00±0.894*12.67±1.211**13.00±1.095*13.83±0.983 13.50±1.517108.98±62.547*86.62±55.019*70.09±55.378**74.12±54.664*83.47±49.002*80.93±59.148*給藥后(min)150 180 210 24030036015.17±1.941 14.83±1.602 14.67±1.862 14.50±2.881 13.67±2.658 14.00±2.191
147.50±21.699145.28±43.467139.31±21.019135.28±32.325126.53±57.688131.25±50.26013.50±2.665 13.67±1.862 15.33±1.033 14.83±0.753 15.33±1.966 15.50±2.58884.26±48.739*86.04±32.679*109.16±32.603102.84±34.631109.39±40.239113.29±53.12514.33±1.211 13.33±1.966 12.83±1.169 12.33±1.633 12.17±2.317 12.33±1.633100.42±29.291*84.58±20.404*84.49±60.082 77.45±59.387 73.33±52.188 74.63±43.55612.33±2.338*12.33±2.160*12.50±1.871 12.50±1.225 12.50±2.258 12.83±2.714126.19±88.906125.36±82.588130.54±94.621126.16±76.902129.72±93.383138.15±103.5513.17±1.941 13.17±1.169 14.00±1.265 14.00±1.095 12.83±0.983 12.83±1.47274.77±51.977*75.51±51.832*87.22±57.636 85.37±48.516 72.13±53.967 71.62±52.301與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01表3.注射用蒺藜皂苷對(duì)心肌梗塞犬心肌梗塞面積的影響(X±s，n＝5)組別劑量 梗塞/全心(％) 梗塞/左心(％)鹽水組 ---- 15.12±0.80122.87±1.895陽性組 12.52ml/kg 12.63±1.332**20.00±1.649*小劑量組6.26mg/kg 13.74±1.163*21.05±0.917中劑量組12.52mg/kg 12.17±1.561**19.47±1.062**高劑量組25.00mg/kg 12.33±1.250***19.95±1.237*與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01表4.注射用蒺藜皂苷對(duì)心肌梗塞犬血清中AST(U/L)的影響(X±s，n＝5)組別 劑量給藥前給藥后(360min)鹽水組 -- 44.67±13.837 236.00±68.293％ 498.38±338.50陽性組 12.52mg/kg 54.33±12.242 134.67±37.580**％ 146.58±35.885*小劑量組 6.26mg/kg 39.67±19.012 183.17±79.055％ 452.30±277.75中劑量組 12.52mg/kg 38.67±13.604 147.00±26.855*％ 353.52±263.30高劑量組 25.00mg/kg 32.50±11.203 108.33±30.533**％ 268.36±147.91與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01表5.注射用蒺藜皂苷對(duì)心肌梗塞犬血清中CK(U/L)的影響(X±s，n＝5)組別 劑量給藥前給藥后(300min)鹽水組 ----143.67±45.4082112.3±481.31％ 1732.1±1432.9陽性組 4.00ml/kg 136.33±30.4211388.3±445.33*％ 991.06±522.41小劑量組 6.26mg/kg 123.33±37.8141934.0±331.00％ 1602.6±570.53中劑量組 12.52mg/kg 136.00±63.3561675.7±386.12％ 1417.5±976.00高劑量組 25.00mg/kg 116.33±36.8491337.7±263.56**％ 1148.6±421.48與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01
表6.注射用蒺藜皂苷對(duì)心肌梗塞犬血清中LDH(U/L)的影響(X±s，n＝5)組別 劑量給藥前 給藥后(300min)鹽水組----61.50±18.447185.17±56.368％ 278.46±332.36陽性組4.00ml/kg 76.67±18.305137.67±20.944％ 85.77±44.921小劑量組 6.26mg/kg 56.83±14.525154.67±33.548％ 185.81±87.094中劑量組 12.52mg/kg 78.50±18.447143.67±23.897％ 84.64±24.932高劑量組 25.00mg/kg 55.50±22.260151.00±51.796％ 186.37±72.117表7注射用蒺藜皂苷對(duì)心率(次/min)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量給藥前 135 10鹽水組 ----166.33±32.940169.17±34.423 170.00±33.639 170.67±32.892170.83±34.5281.65±2.297 2.21±3.571 2.83±5.263 2.58±3.372陽性組 12.52mg/kg 158.00±24.421157.17±25.349 157.67±21.741 153.83±22.257154.83±25.530-0.56±2.342 0.14±5.553 -2.45±4.011 -2.02±4.485小劑量組 6.26mg/kg 141.50±13.278141.33±12.691 138.50±11.692 138.00±17.743137.17±19.073-0.09±1.399 -2.02±3.350 -2.70±4.787 -3.31±7.040中劑量組 12.52mg/kg 161.00±29.503160.00±31.793 160.33±30.612 159.17±29.342159.50±30.507-0.84±2.426 -0.46±3.708 -1.10±3.570 -1.02±2.989高劑量組 25.00mg/kg 150.33±11.961149.67±14.787 150.83±14.063 149.83±14.730149.50±13.126-0.56±2.431 0.26±2.357 -0.43±2.981 -0.60±1.831給藥后(min)20 30 45 60 90 120171.83±33.523 168.33±32.965 168.83±37.435 169.33±35.399 170.50±39.657169.83±39.2763.34±3.652 1.30±3.043 1.14±3.888 1.77±5.204 1.93±4.979 1.61±6.307154.67±23.746 150.33±24.639 150.83±22.746 152.67±20.772 151.83±18.584152.67±18.886-1.94±6.332 -4.80±7.177 -4.41±4.168*-3.04±4.661 -3.29±7.256 -2.81±6.477138.17±17.759 134.50±18.684 138.17±16.642 141.33±17.614 141.50±20.017139.00±17.470-2.54±6.114 -5.16±7.790 -2.40±7.645 -0.15±8.630 -0.13±9.907 -1.92±6.549154.50±30.237 152.33±28.939 152.33±28.870 154.83±30.922 154.17±32.003154.00±30.614-4.17±3.151**-5.43±2.622**-5.43±3.819*-4.06±3.418*-4.55±4.735*-4.48±5.009153.00±14.241 151.67±15.214 152.50±13.809 148.17±12.999 151.33±15.501151.17±15.5871.77±5.247 0.85±5.599 1.46±5.016 -1.47±2.669 0.69±7.057 0.64±8272與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01表8注射用蒺藜皂苷對(duì)血壓(KPa)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量 給藥前 13510鹽水組 ---- 12.00±2.550 12.07±2.592 12.06±2.563 12.09±2.685 12.31±2.856
0.54±2.886 0.49±3.148 0.64±5.347 2.42±7.979陽性組 12.52mg/kg 10.83±0.998 10.62±1.21710.86±1.322 10.46±0.77710.47±10.104-1.80±8.8390.22±7.156 -2.99±7.645-2.99±9.786小劑量組 6.26mg/kg 10.60±1.015 10.83±1.52610.56±1.462 10.80±1.58110.78±1.6891.85±4.838 -0.60±5.680 1.57±5.555 1.37±6.545中劑量組 12.52mg/kg 11.46±2.996 10.56±2.82610.57±2.939 10.35±2.66410.50±2.780-6.81±13.517 -6.85±13.866-8.49±12.714 -8.28±5.231*高劑量組 25.00mg/kg 10.73±1.922 10.65±1.80210.11±2.266 10.27±1.8229.96±1.750-0.55±4.493-6.06±8.676 -4.17±5.531-6.82±8.558給藥后(min)20 30 45 60 90 12012.45±2.95412.50±3.023 12.57±3.03512.42±3.021 12.42±3.02212.50±3.0383.79±12.5473.79±10.783 4.36±9.989 3.10±10.316 3.25±11.5944.02±12.87610.10±1.0989.78±1.32210.28±1.13010.47±0.981 10.87±1.38210.87±1.785-6.17±12.234 -9.04±14.233 -4.60±11.144 -3.13±6.513 0.31±8.334 0.05±11.6449.99±1.975 9.76±2.18710.09±2.19710.05±1.864 10.27±1.84110.14±1.993-6.29±11.107 -8.48±14.221 -5.34±14.292 -5.48±12.070-3.39±12.095 -4.74±12.5009.93±2.979 9.41±3.1489.82±3.107 10.24±3.267 10.27±3.02211.02±2.846-13.90±8.105*-19.15±12.639**-15.11±13.163*-11.19±16.826 -10.59±13.925 -3.68±6.4099.50±1.735 9.15±1.497*9.44±1.743 9.78±2.020 10.05±1.9759.96±1.952-10.82±11.364 -13.46±14.195*-11.45±11.262*-8.74±9.618 -6.38±5.344-6.97±8.176與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01表9注射用蒺藜皂苷對(duì)左心室內(nèi)壓(KPa)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量 給藥前13 510鹽水組 ---- 20.17±2.929 20.57±2.46620.84±2.83020.69±3.182 20.95±3.2342.49±6.900 3.65±6.618 2.75±7.805 4.14±9.244陽性組 12.52mg/kg19.22±2.132 19.86±2.21019.86±2.08818.66±1.862 19.35±2.1453.66±9.544 4.21±14.792-2.11±12.6601.18±10.954小劑量組 6.26mg/kg 19.06±2.185 19.04±2.54818.93±2.56818.53±2.785 18.95±2.745-0.23±4.612-0.73±6.354-2.90±7.979 -0.61±8.213中劑量組 12.52mg/kg20.68±4.376 19.73±3.81919.60±4.19019.29±4.148 19.06±4.209-3.67±10.549 -4.36±12.454 -6.21±9.485 -7.50±8.829*高劑量組 25.00mg/kg19.60±2.850 19.93±3.04919.69±2.35019.29±2.139 18.91±2.3301.68±5.528 0.82±5.875 -1.11±6.124 -3.19±5.791給藥后(min)2030 45 60 90 12020.82±3.354 20.51±3.831 21.08±3.78021.42±3.93420.97±4.568 21.02±3.9173.65±13.300 1.62±12.097 4.47±10.4736.10±11.6473.54±14.267 4.29±13.54417.60±1.544 17.89±1.031 18.13±1.67719.00±2.30220.17±2.603 19.98±2.003-7.10±15.799 -5.73±13.744-4.28±17.139 0.74±23.0316.38±20.814 5.27±17.89117.78±2.469 17.40±3.231 17.24±2.20817.82±2.42818.09±2.778 18.00±2.714-6.31±12.931 -8.28±16.550-9.07±11.898 -6.31±9.446-4.83±13.094-5.62±8.78218.35±5.028 17.62±4.353 17.35±4.14417.73±4.07618.24±3.892 18.86±3.543
-12.11±8.610*-15.11±11.277*-16.25±10.801**-14.29±10.695*-11.65±9.398 -8.32±6.51118.22±3.72117.44±3.517 17.31±3.131 17.46±1.959 18.31±2.842 18.20±2.749-5.65±23.167 -9.52±22.634 -10.96±15.794 -10.31±8.460*-6.50±7.130 -7.03±6.985與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01表10注射用蒺藜皂苷對(duì)左室舒張期末壓(KPa)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量給藥前 1 3 5 10鹽水組-----0.07±0.460 0.00±0.5350.00±0.461-0.02±0.543 -0.11±0.56712.43±20.442 -7.72±26.362 9.41±25.291 3.94±40.722陽性組12.52mg/kg -0.36±0.362 -0.36±0.249 -0.33±0.250 -0.22±0.277 -0.36±40.722-11.41±53.076 -18.72±49.100 -19.62±91.982-4.23±91.913小劑量組 6.26mg/kg -0.18±0.393 -0.20±0.435 -0.16±0.441 -0.16±0.391 -0.20±0.3572.71±6.6344.80±34.424 -8.64±21.168 5.32±21.967中劑量組 12.52mg/kg -0.47±0.323 -0.49±0.355 -0.38±0.307 -0.31±0.363 -0.36±0.2994.44±17.894 -14.04±24.427 -26.16±33.702-8.34±35.389高劑量組 25.00mg/kg 0.31±0.385 0.29±0.4950.22±0.6280.15±0.616 0.24±0.5437.02±34.016 31.46±87.089 22.97±90.110 23.59±65.044給藥后(min)20 3045 60 90 120-0.02±0.514 0.00±0.4460.05±0.4880.07±0.419 -0.05±0.473 -0.07±0.4432.63±42.9.9 -1.01±49.000 -1.46±44.383 -10.80±17.465 -6.87±36.4-18.13±53.269-0.27±0.304 -0.33±0.250 -0.36±0.262 -0.33±0.346-0.44±0.31-0.47±0.289-25.31±98.0865.23±101.18 -4.56±83.342 -26.31±92.896 41.16±145.22 51.56±149.62-0.27±0.378 -0.34±0.420 -0.34±0.474 -0.27±0.492-0.31±0.550 -0.34±0.57747.96±131.26 77.26±166.76 104.66±205.18 87.99±174.38 118.61±246.40 139.27±294.08-0.38±0.330 -0.42±0.271 -0.31±0.181 -0.25±0.213-0.07±0.184 -0.16±0.133-2.32±44.796 1.59±49.262 -13.75±44.236 -24.01±51.923 -55.99±49.816 -48.85±32.8540.22±0.393 0.18±0.4600.20±0.4350.07±0.475 0.13±0.3960.18±0.5307.33±35.519 14.49±67.451 -0.16±50.990 -18.14±75.203 -25.31±60.787 -6.41±79.031表11注射用蒺藜皂苷對(duì)左室作功(kg。m/min/m2)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量 給藥前 1 3 5 10 20鹽水組---- 0.33±0.1110.33±0.119 0.33±0.121 0.33±0.122 0.33±0.1130.33±0.1172.15±5.824 2.16±6.274 0.92±8.332 2.16±7.9212.12±13.208陽性組12.52mg/kg 0.31±0.0510.30±0.053 0.31±0.049 0.30±0.035 0.31±0.0390.30±0.035-1.87±11.3822.62±9.671 -0.14±10.156 1.04±12.473 -0.96±16.979小劑量組 6.26mg/kg0.27±0.0320.27±0.042 0.27±0.038 0.29±0.039 0.28±0.0350.26±0.0242.29±6.950 1.94±7.707 6.84±6.513 5.08±5.494-3.02±10.551中劑量組 12.52mg/kg 0.29±0.0930.27±0.080 0.27±0.081 0.28±0.077 0.28±0.0870.27±0.095-6.12±13.799-5.17±13.054 -3.21±14.759 -2.27±6.641 -9.08±8.531高劑量組 25.00mg/kg 0.30±0.1060.30±0.105 0.29±0.103 0.30±0.087 0.29±0.0880.27±0.0670.66±6.481 -1.76±12.751 3.68±10.965-0.59±13.208 -8.60±12.696給藥后(min)
30 456090 1200.34±0.136 0.34±0.132 0.332±0.132 0.32±0.129 0.32±0.1131.16±16.622 1.68±15.616 -4.11±15.440 -3.96±14.018 -1.97±12.1520.29±0.030 0.30±0.038 0.29±0.044 0.29±0.049 0.29±0.065-4.91±15.601-0.78±10.641 -4.53±6.567 -4.53±9.525 -5.05±14.1400.24±0.025 0.25±0.043 0.23±0.035 0.24±0.042 0.24±0.045-9.16±13.369-6.46±18.354 -13.62±13.936-8.71±15.191 -10.39±13.7510.24±0.098 0.24±0.086 0.25±0.092 0.25±0.079 0.27±0.083-19.51±13.528*-18.67±12.672*-16.68±15.397-14.30±10.434-6.97±5.7610.25±0.051 0.25±0.063 0.24±0.050 0.24±0.048 0.25±0.056-12.13±17.191 -12.61±14.206-18.20±12.322-14.95±13.008-15.13±11.752與鹽水組比較*P＜0.05表12注射用蒺藜皂苷對(duì)+dp/dt(Kpa/S)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量 給藥前 1 3 5 10鹽水組---- 288.82±83.317291.04±69.733291.04±110.70286.60±108.54293.26±101.172.31±12.605 0.00±19.896 -162±17.70 1.50±18.438陽性組12.52mg/kg 317.7±59.861 291.04±60.452295.48±48.735288.82±55.069286.60±60.059-8.36±8.052 -6.14±12.774 -8.68±10.592 -8.07±20.455小劑量組 6.26mg/kg271.04±82.027271.04±64.574275.49±77.574273.27±74.338273.27±80.3132.25±12.750 2.58±9.591 2.40±13.238 1.67±12.241中劑量組 12.52mg/kg 319.92±75.406317.70±84.482324.36±76.652315.48±83.317313.26±69.393-0.72±8.945 1.49±6.349 -1.25±9.675 -1.35±10.397高劑量組 25.00mg/kg 353.25±66.783333.25±55.283333.25±57.798335.47±50.172308.81±45.725-5.14±7.410 -5.38±4.771 -4.06±11.261 -11.99±5.532給藥后(min)2030 456090 120282.15±101.31 271.04±112.69288.82±114.57284.37±94.884286.60±116.13284.37±117.32-2.84±13.910-7.64±16.387 -1.39±18.896 -2.31±13.078 -2.78±17.414 -3.07±23.293262.16±45.139 242.16±33.102271.04±43.536277.71±50.876284.37±37.387291.04±29.707-16.72±10.303 -22.80±9.168 -13.43±12.862-11.51±13.897-8.69±14.531 -5.9±17.961231.05±47.442 222.17±57.592199.95±50.584215.50±43.331242.16±80.607242.16±84.482-11.55±18.464 -13.48±25.633-22.45±24.220-16.71±21.079-8.38±23.146 -8.73±22.361295.48±73.214 277.71±54.907262.16±60.010275.49±57.592286.60±43.604297.70±46.687-7.05±12.853-12.26±8.691 -17.37±11.426-12.19±16.980-7.96±17.109 -4.51±17.473302.15±92.609 295.48±87.377268.82±74.178271.04±36.424277.71±21.356279.93±20.651-11.84±31.556 -13.55±30.248-21.49±24.882-21.13±16.927-19.21±15.080-17.97±17.751表13注射用蒺藜皂苷對(duì)-dp/dt(KPa/S)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量 給藥前 1 3 5 10鹽水組---- 186.62±45.400 184.40±39.015173.29±47.691 166.63±42.781191.06±77.574-0.21±8.168 -5.75±18.663 -9.06±17.219 3.35±33.356陽性組12.52mg/kg 206.62 195.51±35.435215.50±50.876 193.29±53.153186.62±50.584
-3.30±20.063 4.38±16.154 -4.86±25.396 -7.36±27.264小劑量組 6.26mg/kg 171.07±39.916175.51±48.000173.29±59.614164.40±41.871162.18±39.9161.96±4.803 -0.11±15.357 -4.03±10.280 -5.36±7.766中劑量組 12.52mg/kg202.17±36.180193.29±40.121199.95±44.611184.40±57.438182.18±42.712-4.33±9.007 -1.55±7.456 -9.87±13.782 -10.42±6.972高劑量組 25.00mg/kg202.17±50.876195.51±39.242197.73±48.735199.95±45.400182.18±42.712-2.21±7.471 -1.93±7.802 -0.41±7.542 -9.05±9.295給藥后(min)20 30456090 120171.07±65.530173.29±66.383175.51±66.606215.50±75.130199.95±85.145193.29±60.648-7.21±26.357 -7.29±22.883 -4.93±27.813 14.62±22.476 4.90±29.195 3.02±15.661199.95±46.176159.96±41.301173.29±49.876186.62±63.650184.40±62.191179.96±45.984-1.06±26.419 -20.52±22.865-14.31±25.535-9.78±24.876 -10.60±25.195-11.81±20.238142.19±21.768126.64±38.403124.41±33.369151.07±31.167151.07±35.435148.85±49.459-14.49±16.807-22.97±27.299-23.67±26.412-8.63±21.409 -10.56±13.938-12.08±20.636155.52±31.167148.85±22.960151.07±33.369182.18±46.687175.51±47.254175.51±41.658-22.77±8.368 -25.58±9.402 -23.87±17.616-9.27±19.254 -12.39±20.550-12.39±17.690175.51±63.323168.85±57.592166.63±41.086173.29±31.545173.29±20.651175.51±29.707-12.65±24.094-16.12±20.213-15.44±20.246-11.73±18.814-11.79±13.425-11.38±12.000表14注射用蒺藜皂苷對(duì)總外周阻力(Kpa/L。min)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量 給藥前 1 3 5 10鹽水組 ---- 702.01±104.09689.19±103.93685.65±114.10696.05±111.30 720.35±151.74-1.87±2.558 -2.53±3.180 -0.92±5.271 2.03±10.607陽性組 12.52mg/kg651.62±113.90634±19±116.17 633.50±124.33603.84±102.12 595.59±107.52-2.46±8.257 -2.91±5.896 -7.00±6.121 -8.43±7.652小劑量組 6.26mg/kg 645.73±138.29654.74±152.076.24±150.52 633.31±162.30 639.33±190.961.26±4.637 -3.63±4.314 -2.57±6.145 -2.43±8.828中劑量組 12.52mg/kg713.19±162.45642.35±139.85637.57±142.53605.96±123.55 607.92±131.09-8.61±14.522 -9.24±15.312-13.66±13.034 -14.32±7.982*高劑量組 25.00mg/kg614.39±64.668601.84±64.276551.82±102.68542.11±76.502*533.32±69.450*-2.04±2.386 -10.72±8.235*-11.91±6.490**-12.93±9.859*給藥后(min)2030456090120739.32±155±09 743.29±126.80746.86±125.37769.08±101.23773.32±141.83 770.51±165.235.13±15.042 5.89±11.105 6.19±6.280 9.94±7.260 9.93±10.538 9.37±15.408576.42±136±13 556.58±133.74*596.45±163.72636.89±146.51687.17±137.51 685.97±156.77-11.77±10.908*-14.45±13.479*-8.99±14.405*-3.00±8.841*5.42±9.9534.50±10.512598.90±212.64605.43±219.67625.02±185.59665.787±176.68 657.76±163.20 656.19±182.89-9.46±14.522 -8.45±16.961 -4.26±13.218 2.68±12.491 1.79±11.750 1.04±12.603577.74±153.19566.63±160.72628.90±169.95662.95±175.28660.27±181.54 705.10±140.62-18.97±10.412**-20.66±14.006**-11.91±14.007*-6.29±19.879 -6.76±21.928 -0.32±11.390531.37±110.12*518.61±116.82**548.66±101.41*636.90±199.27655.48±207.49 639.49±.182.67-12.73±18.821-14.81±20.061-10.40±15.280*3.76±29.732 6.58±29.994 3.98±26.268
與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01表15注射用蒺藜皂苷對(duì)心輸出量(L/min)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量 給藥前 1 3 5 1020鹽水組---- 1.36±0.139 1.39±0.144 1.40±0.142 1.38±0.146 1.36±0.1241.34±0.1282.47±2.231 3.17±4.074 1.60±3.028 0.64±3.6810.96±4.684陽性組12.52mg/kg 1.35±0.172 1.36±0.171 1.39±0.167 1.41±0.175 1.43±0.1661.44±0.2290.66±2.075 3.17±1.335 4.25±2.372 5.83±2.992*6.41±6.253*小劑量組 6.26mg/kg 1.35±0.208 1.35±0.166 1.39±0.203 1.40±0.224 1.41±0.2711.41±0.2870.62±3.242 3.10±1.696 4.31±2.238 4.13±4.0634.21±6.439中劑量組 12.52mg/kg 1.28±0.143 1.31±0.114 1.32±0.114 1.36±0.121 1.37±0.1301.37±0.1592.19±3.264 2.98±3.465 6.21±2.866*7.41±5.163*6.75±6.354*高劑量組 25.00mg/kg 1.40±0.191 1.42±0.203 1.46±0.153 1.51±0.149 1.49±0.1641.44±0.1781.51±3.189 5.37±6.427 9.13±7.936 7.51±8.7354.34±13.085給藥后(min)30 45 60 901201.34±0.193 1.33±0.150 1.28±0.181 1.27±0.1431.29±0.101-1.69±7.6931.43±0.241 -6.25±6.506-6.17±3.268 -4.69±3.7161.44±0.191 -1.87±4.1541.36±0.242 1.29±0.1401.29±0.1416.36±1.595*5.51±6.682*0.12±4.894 -4.65±5.135 -4.37±2.6471.36±0.244 1.32±0.166 1.23±0.138 1.27±0.1231.26±0.1530.55±5.332 -1.16±6.019-7.90±5.420-5.04±5.766 -5.69±3.7811.31±0.146 1.23±0.119 1.22±0.124 1.24±0.0981.24±0.1202.34±5.459 -3.49±2.771-4.81±4.363-2.57±8.528 -3.00±5.1831.43±0.157 1.38±0.104 1.26±0.175 1.26±0.1621.28±0.1813.75±14.122-0.26±9.474-8.40±15.924 -8.45±16.087 -7.61±14.506與鹽水組比較*P＜0.05表16.注射用蒺藜皂苷對(duì)心肌血流量(ml/100g。min)的影響(X±s.n＝5)給藥后(min)組別 劑量 給藥前 1 3 5 10鹽水組---- 102.83±16.741103.70±21.389106.72±19.086 10035±19.149102.71±20.8400.41±11.8.3 3.66±8.808 -2.50±8.746 0.46±6.390陽性組12.52mg/kg107.03±24.514110.62±24.008114.18±21.636 114.49±27.295 12202±26.2173.86±5.293 7.83±7.891 6.90±3.736*14.78±7.840**小劑量組 6.26mg/kg 17.80190.15±16.438 91.23±11.87591.61±12.66797.73±16.0840.35±5.978 2.47±9.933 3.22±14.397 10.35±20.068中劑量組 12.52mg/kg96.17±22.932 94.31±24.631 95.38±23.061106.54±19.026 115.54±25.395-2.31±6.124 -0.21±11.20412.55±11.261*20.98±12.550**高劑量組 25.00mg/kg98.10±14.388 101.83±14.820107.13±16.942 106.26±20.324 123.59±24.8133.93±4.910 9.38±8.949 7.89±8.580 25.72±18.529**給藥后(min)20 3045 60 90120
101.53±12.705 104.26±153449 100.25±10.98196.99±13.37892.97±10.20090.76±13.230-0.61±6.6811.77±6.515-1.35±11.973 -4.90±10.424-8.29±13.813-11.02±10.529126.03±32.995 132.97±34.997 130.53±31.680114.71±10.424 105.40±23.607 104.11±26.71418.99±19.705*26.04±23 943*23.67±21.133*8.79±21.890 -0.94±9.281 -2.62±11.68498.22±22.166 88.77±24.267 90.26±20.706 92.10±23.88986.48±21.84086.49±20.6138.93±10.928-2.46±9.437 0.17±14.159 2.39±20.996 -4.64±9.054 -3.97±13.023113.38±21.889 102.24±20.229 90.02±18.536 84.60±18.48584.04±13.77389.81±21.26519.23±9.825**7.57±9.416-5.09±11.832 -10.60±13.688 -11.13±9.155-6.44±4.515132.35±30.597*132.57±28.935 125.16±26.11492.64±18.83580.38±11.21784.07±21.60034.40±24.024**34.35±17.670**27.06±18.392**-5.59±13.990-17.51±9.823-14.81±14.091與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01表17注射用蒺藜皂苷對(duì)冠脈阻力(Kpa。min)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量給藥前 1 3 5 10鹽水組----0.12±0.0220.12±0.018 0.11±0.021 0.12±0.033 0.12±0.0361.22±11.105 -2.56±7.706 3.87±10.118 3.63±14.440陽性組12.52mg/kg 0.11±0.0310.10±0.028 0.10±0.027 0.10±0.031 0.09±0.025-5.14±11.167 -6.66±9.467 -9.11±8.561*-14.99±12.218*小劑量組 6.26mg/kg 0.12±0.0290.12±0.031 0.12±0.025 0.12±0.032 0.12±0.0381.71±6.218 -2.51±7.771 0.09±16.031 -4.96±22.859中劑量組 12.52mg/kg 0.12±0.0370.12±0.042 0.12±0.041 0.10±0.031 0.09±0.025-4.34±15.242 -5.51±19.012-18.38±12.058**-23.77±6.212**高劑量組 25.00mg/kg 0.11±0.0130.10±0.011 0.09±0.014 0.10±0.015 0.08±0.018*-4.22±4.441 -13.90±7.991*-10.60±9.674*-24.54±13.592**給藥后(min)20 30 4560 90 1200.12±0.031 0.12±0.0280.13±0.032 0.13±0.028 0.14±0.040 0.14±0.0394.72±13.3762.11±9.4526.69±12.554 9.40±15.21314.88±22.34 18.28±19.9530.09±0.026*0.08±0.024*0.08±0.026*0.10±0.028 0.11±22.534 0.11±0.045-19.47±17.116*-25.74±17.892**-20.96±17.552*-7.77±20.9642.37±16.289 5.16±25.4950.11±0.032 0.12±0.0430.12±0.031 0.12±0.032 0.13±0.039 0.12±0.035-13.06±15.202 -4.96±19.934 -4.78±13.993 -5.01±19.2802.29±16.985 0.99±20.4964.72±13.3760.09±0.0340.11±0.040 0.12±0.037 0.12±0.035 0.13±0.038-27.41±8.404***-24.30±14.162**-9.39±18.667 2.33±32.130 1.84±21.104 3.07±7.2130.07±0.018**0.07±0.018**0.08±0.019*0.11±0.017 0.13±0.026 0.12±0.040-32.53±11.563***-34.58±14.563***-28.85±15.741**-1.88±16.16515.17±17.60212.80±27.191與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001表18 注射用蒺藜皂苷對(duì)心臟指數(shù)(L/min/m2)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量給藥前 1 3510鹽水組----1.96±0.3422.01±0.365 2.01±0.381 1.99±0.363 1.96±0.3192.50±2.137 2.90±3.915 1.46±3.078 0.62±3.602陽性組12.52mg/kg 2.09±0.2732.10±0.243 2.15±0.261 2.17±0.282 2.21±0.245
0.72±2.009 3.23±1.218 4.28±2.420 6.00±2.975*小劑量組6.26mg/kg 1.89±0.281 1.90±0.256 1.95±0.269 1.97±0.283 1.98±0.3460.74±3.366 3.24±1.633 4.34±2.266 4.19±3.952中劑量組12.52mg/kg 1.88±0.208 1.91±0.205 1.93±0.217 1.99±0.215 2.01±0.2382.13±3.270 2.89±3.464 6.11±2.872*7.41±5.085*高劑量組25.00mg/kg 2.02±0.349 2.05±0.371 2.11±0.292 2.18±0.248 2.15±0.2601.54±3.059 5.24±6.205 9.02±7.765 7.49±8.646給藥后(min)20 30 45 60 90 1201.93±0.312 1.93±0.429 1.92±0.373 1.84±0.389 1.84±0.364 1.86±0.278-1.09±4.720-1.78±7.790-1.95±4.119-6.29±6.404-6.31±3.238-4.76±3.5702.23±0.354 2.22±0.319 2.21±0.406 2.09±0.353 1.98±0.211 1.99±0.2456.50±6.433*6.35±1.824*5.57±6.796*0.04±4.940 -4.61±5.178-4.36±2.7361.98±0.357 1.90±0.305 1.86±0.204 1.73±0.180 1.79±0.213 1.78±0.2464.33±6.222 0.54±5.211 -1.07±6.126-7.94±5.580-5.17±5.830-5.55±3.8392.00±0.272 1.92±0.254 1.81±0.203 1.78±0.194 1.81±0.100 1.81±0.1486.71±6.262*2.29±5.455 -3.53±2.737-4.90±4.226-2.61±8.475-3.04±5.0952.08±0.245 2.06±0.234 1.99±0.170 1.81±0.194 1.81±0.189 1.84±0.2464.28±13.0423.71±14.185-0.23±9.571-8.47±15.827 -8.50±16.144 -7.67±14.541與鹽水組比較*P＜0.05表19注射用蒺藜皂苷對(duì)心搏指數(shù)(ml/m2/beat)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量 給藥前 13 510鹽水組---- 11.89±1.356 12.01±1.553 12.01±1.811 11.79±1.806 11.69±1.5830.88±3.819 0.76±5.717 -1.14±5.915 -1.932.759陽性組12.52mg/kg13.51±3.187 13.61±2.738 13.91±3.090 14.44±3.366 14.59±3.2501.37±3.597 3.36±5.304 7.06±3.792*8.37±4.965**小劑量組 6.26mg/kg 13.46±2.379 13.53±2.117 14.19±2.471 14.48±2.832 14.68±3.5120.84±3.901 5.44±3.143 7.48±6.577*8.29±9.753*中劑量組 12.52mg/kg11.86±1.721 12.28±2.201 12.33±2.243 12.78±2.192 12.91±2.1943.08±4.865 3.54±6.393 7.47±6.066*8.67±7.831*高劑量組 25.00mg/kg13.41±1.829 13.71±2.017 14.05±1.814 14.63±1.674*14.42±1.557*2.13±3.744 5.05±7.383 9.65±9.853*8.17±8.882*給藥后(min)2030 45 60 90 12011.39±1.446 11.51±1.413 11.53±1.367 10.97±1.592 10.97±1.531 11.22±1.820-4.32±2.628 -3.02±7.801 -3.09±1.507 -7.78±7.098 -8.02±2.851 -6.04±6.17214.74±3.899 15.31±4.744 15.06±4.380 13.92±3.236 13.23±2.413 13.21±2.4249.12±10.999*12.37±10.102*10.83±10.691*3.41±6.686*-0.91±8.648 -1.12±8.479-4.32±2.629 14.43±3.375 13.69±2.678 12.43±2.314 12.88±2.817 13.02±2.6167.24±7.057**6.48±8.622 1.70±7.856 -7.14±10.529-4.28±10.989-3.39±6.90713.27±2.393 12.88±2.288 12.11±1.766 11.82±2.155 12.21±2.651 12.07±1.94311.42±6.491***8.20±5.682*2.22±6.642 -0.81±4.788 2.38±12.377 1.75±7.72113.59±1.099*13.67±1.786*13.08±1.114 12.24±1.223 11.99±1.302 12.21±1.805
2.35±10.6132.95±14.740-1.51±10.392 -7.06±15.946 -9.02±15.526 -8.00±14.748與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001表20. 注射用蒺藜皂苷對(duì)心搏出量(ml/beat)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量給藥前 1 3 5 10鹽水組----8.36±1.394 8.44±1.495 8.47±1.627 8.29±1.468 8.24±1.6000.86±3.817 1.05±5.842 -1.00±5.873-1.87±2.777陽性組12.52mg/kg 8.69±1.519 8.76±1.239 8.94±1.386 9.28±1.548 9.36±1.4441.31±3.589 3.25±5.245 6.97±3.699*8.16±4.956**小劑量組 6.26mg/kg 9.61±1.987 9.63±1.662 10.10±1.97010.35±2.31010.48±2.7110.70±3.801 5.28±3.206 7.42±6.464*8.21±9.806*中劑量組 12.52mg/kg 8.07±0.882 8.33±1.135 8.36±1.044 8.67±1.024 8.75±1.0173.11±4.911 3.61±6.413 7.53±6.034*8.65±7.891*高劑量組 25.00mg/kg 9.27±0.888 9.48±1.045 9.74±1.015 10.16±1.126*10.00±1.019*2.12±3.957 5.15±7.620 9.77±10.035*8.16±9.022*給藥后(min)20 30 45 60 90 1208.02±1.385 8.06±0.920 8.11±1.308 7.69±1.236 7.73±1478 7.94±1.839-4.19±2.709-2.90±7.686-2.96±1.504-7.76±7.113-7.85±2.768-5.92±6.2129.46±1.852 9.81±2.318 9.65±2.136 8.97±1.566 8.52±0.974 8.50±0.9489.02±10.924*12.36±9.909*10.72±10.603*3.45±6.695*-0.95±8.623-1.16±8.40710.38±2.65910.32±2.7009.75±2.043 8.86±1.682 9.17±1.944 9.26±1.9297.14±7.131**6.50±8.693 1.61±7.773 -7.13±10.318 -4.16±10.935 -3.50±6.7958.99±1.165 8.73±1.095 8.23±0.858 8.04±1.249 8.30±1.633 8.21±1.10111.39±6.604***8.20±5.697*2.20±6.634 -0.75±4.8812.41±12.3541.72±7.8659.43±0.694*9.48±1.032*9.07±0.677 8.53±1.147 8.35±1.123 8.48±1.2822.39±10.6403.01±14.714-1.54±10.304 -7.00±16.042 ±8.96±15.526 -7.96±14.682與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001表21.注射用蒺藜皂苷對(duì)麻醉犬心肌耗氧量(ml/100g/min)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量 給藥前 5 20 30 60 120鹽水組---- 8.52±2.6178.64±3.210 8.71±2.2788.53±2.3237.83±2.2567.88±2.0351.00±11.823 4.63±14.515 3.48±20.261 -4.05±24.543 -4.33±17.894陽性組12.52mg/kg 9.22±2.7178.01±3.371 6.28±2.9576.40±3.1925.42±2.4567.84±2.801％-16.22±20.826-34.21±28.136*-32.13±31.014*-41.80±12.071**-14.31±22.926小劑量組 6.26mg/kg7.54±2.3186.26±1.889 6.27±2.2644.83±1.933*6.01±2.5597.39±2.619％-16.33±14.005*-17.93±10.175*-36.86±8.518**-21.15±20.342 -1.25±16.642中劑量組 12.52mg/kg 8.22±2.4117.50±2.585 6.61±1.9915.83±1.399*5.26±1.318*7.35±1.338％-9.00±12.614 -19.43±7.283**-27.63±12.201**-31.06±27.757 -8.04±13.483
高劑量組 25.00mg/kg 8.20±2.235 6.91±2.445 0.00±0.000 6.25±2.825 4.48±1.311*7.03±2.729％-16.82±11.476*-100.0±0.000*-26.84±20.923**-44.74±10.221**-13.74±27.007與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01表22.注射用蒺藜皂苷對(duì)麻醉犬心肌耗氧指數(shù)(次/min.KPa)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量給藥前520 30 60 120鹽水組----20.37±6.89521.06±7.271 22.01±8.374 21.65±8.295 21.68±8.529 21.95±9.2253.54±8.587 7.18±12.982 5.24±12.582 5.07±13.848 6.12±18.294陽性組12.52mg/kg 16.92±1.37016.05±2.181 15.66±3.011 14.79±3.418 15.88±1.719 16.38±1.886％-5.32±9.226 -7.96±13.407-13.30±15.088-6.27±4.386*-3.17±8.156小劑量組 6.26mg/kg 15.05±2.43015.03±3.439 13.89±3.594 13.23±3.940*14.26±3.577 14.21±3.963％-1.05±8.792 -8.62±12.673-13.34±14.802*-5.96±11.579 -6.62±13.531中劑量組 12.52mg/kg 18.82±7.09917.01±7.282 15.89±7.153 14.92±7.065 16.60±7.878 17.57±7.363％-9.31±14.051 -17.46±8.747**-23.54±11.928**-14.54±17.517-8.09±6.185高劑量組 25.00mg/kg 16.22±3.58015.42±3.360 14.63±3.474 13.95±3.011 14.55±3.718 15.15±3.792％-4.65±5.028 -9.42±11.217*-12.94±14.232*-10.08±10.018-6.60±8.373與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01表23. 注射用蒺藜皂苷對(duì)麻醉犬心肌氧攝取率(％)的影響(X±s，n＝5)給藥后(min)組別 劑量給藥前 5 20 30 60 120鹽水組----43.51±10.586 44.31±10.880 43.98±9.577 43.36±9.003 43.85±9.51846.92±13.0802.010±4.173 2.11±12.165 1.47±14.563 2.88±17.2588.10±15.758陽性組12.52mg/kg 45.34±9.995 38.78±13.031 30.30±13.920 29.18±13.673 27.60±9.281*41.13±10.645％ -16.82±18.161*-37.03±23.423**-39.38±21.613**-39.54±11.846***-6.67±23.790小劑量組 6.26mg/kg 43.17±7.691 36.79±9.181 35.72±8.886 32.37±8.825 36.58±11.246 46.13±8.986％ -15.35±9.205**-18.24±7.638**-25.51±10.231**-17.12±16.350 6.75±7.018中劑量組 12.52mg/kg 44.37±9.687 38.29±10.841 33.47±9.330 33.66±8.627 37.48±12.474 45.57±7.618％ -14.78±6.141***-25.35±5.314***-24.17±10.559**-15.84±22.468 4.11±12.826高劑量組 25.00mg/kg 43.21±7.361 35.53±8.603 27.69±10.442*25.13±9.875**28.66±7.503*44.43±10.773％ -18.57±8.344***-37.86±15.975***-43.63±15.713***-33.67±12.656**3.73±24.701與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.00具體實(shí)施例方式通過以下實(shí)施例進(jìn)一步舉例描述本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明，在不背離本發(fā)明的技術(shù)解決方案的前提下，對(duì)本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實(shí)現(xiàn)的任何改動(dòng)或改變都將落入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
實(shí)施例1取蒺藜總皂苷2.5g，加乙醇90ml，回流提取40分鐘，濾過，濾液加β-谷甾醇飽和乙醇溶液6.25ml，回流反應(yīng)40分鐘，回收乙醇，加水至25ml，攪勻，于約4℃靜置8小時(shí)，濾過，濾液加熱至近沸，加活性炭0.1g，密閉維持25分鐘，濾過，濃縮至約2.5g，攪拌下加丙酮7.5ml，靜置，傾除上清液，殘留物揮去丙酮，80℃減壓干燥2小時(shí)。研勻，得淡黃色粉末1.02g，蒺藜總皂苷含量81.2％，呋甾皂苷含量72.4％，根據(jù)《部頒中藥注射劑安全試驗(yàn)的溶血試驗(yàn)檢驗(yàn)方法》溶血檢查符合規(guī)定。
實(shí)施例2取蒺藜總皂苷2.5g，加乙醇100ml，回流提取30分鐘，濾過，濾液加豆甾醇飽和乙醇溶液10ml，回流反應(yīng)40分鐘，回收乙醇，加水至37.5ml，攪勻，于約4℃靜置10小時(shí)，過濾，濾液加熱至近沸，加活性炭0.1g，密閉維持25分鐘，濾過，濃縮至約2.5g，攪拌下加丙酮7.5ml，靜置，傾除上清液，殘留物揮去丙酮，80℃減壓干燥2小時(shí)。研勻，得淡黃色粉末0.98g，蒺藜總皂苷含量80.8％，呋甾皂苷含量73.2％，溶血檢查符合規(guī)定。
實(shí)施例3取蒺藜總皂苷2.5g，加乙醇120ml，回流提取30分鐘，濾過，濾液加混合植物甾醇飽和乙醇溶液7.5ml，回流反應(yīng)50分鐘，回收乙醇，加水至30ml，攪勻，于約4℃靜置6小時(shí)，濾過，濾液加熱至近沸，加活性炭0.1g，密閉維持25分鐘，濾過，濃縮至約2.5g，攪拌下加丙酮7.5ml，靜置，傾除上清液，殘留物揮去丙酮，80℃減壓干燥2小時(shí)。研勻，得淡黃色粉末0.91g，蒺藜總皂苷含量82.5％，呋甾皂苷含量71.8％，溶血檢查符合規(guī)定。
實(shí)施例4取蒺藜總皂苷2.5g，加乙醇90ml，回流提取45分鐘，濾過，濾液加膽固醇飽和乙醇溶液8ml，回流反應(yīng)60分鐘，回收乙醇，加水至27.5ml，攪勻，于約4℃靜置8小時(shí)，濾過，濾液加熱至近沸，加活性炭0.1g，密閉維持25分鐘，濾過，濃縮至約2.5g，攪拌下加丙酮7.5ml，靜置，傾除上清液，殘留物揮去丙酮，80℃減壓干燥2小時(shí)。研勻，得淡黃色粉末1.08g，蒺藜總皂苷含量82.0％，呋甾皂苷含量71.8％，溶血檢查符合規(guī)定。
實(shí)施例5取精制蒺藜皂苷50g，右旋糖苷-20 60g，加水至2000ml使溶解，用除菌濾膜減壓濾過，濾液無菌分裝，每支灌裝2ml，冷凍干燥，密塞，壓蓋，即得。內(nèi)容物為淺黃色塞形片狀，質(zhì)地均勻，成型良好。
其它項(xiàng)目符合中華人民共和國(guó)藥典2000版凍干粉針劑項(xiàng)目有關(guān)要求。
實(shí)施例6取精制蒺藜皂苷50g，右旋糖苷-40 50g，加水至2000ml使溶解，用除菌濾膜減壓濾過，濾液無菌分裝，每支灌裝2ml，冷凍干燥，密塞，壓蓋，即得。內(nèi)容物為淺黃色塞形片狀，質(zhì)地均勻，成型良好。
其它項(xiàng)目符合中華人民共和國(guó)藥典2000版凍干粉針劑項(xiàng)目有關(guān)要求。
實(shí)施例7取精制蒺藜皂苷50g，甘露醇65g，加水至2000ml使溶解，用除菌濾膜減壓濾過，濾液無菌分裝，每支灌裝2ml，冷凍干燥，密塞，壓蓋，即得。內(nèi)容物為淺黃色塞形片狀，質(zhì)地均勻，成型良好。
其它項(xiàng)目符合中華人民共和國(guó)藥典2000版凍干粉針劑項(xiàng)目有關(guān)要求。
權(quán)利要求
1.一種可供注射給藥的精制蒺藜皂苷，其特征在于系自蒺藜草提取分離以呋甾皂苷為主的甾體皂苷組合物，蒺藜總皂苷含量＞80％，其中，呋甾皂苷占總皂苷的85％以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述精制蒺藜皂苷的制備方法，包括以下步驟取蒺藜總皂苷，加30～50倍乙醇回流提取30～60分鐘，放冷，濾過，加入2～6％甾醇的乙醇溶液，減壓回收乙醇，加水至投料量的10～20倍，攪勻，冷藏過夜，濾過，濾液加活性炭，攪拌，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.00～1.10(60℃)，再進(jìn)一步濃縮至相對(duì)密度1.18～1.20(60℃)，攪拌下加入2～5倍量丙酮，密閉靜置，傾除溶液，殘留物減壓干燥，粉碎，即得精制蒺藜皂苷；甾醇選自混合植物甾醇、β-谷甾醇、豆甾醇、膽固醇等甾醇。
3.一種注射用蒺藜皂苷針劑。
全文摘要
本發(fā)明公開一種可供注射給藥的精制蒺藜皂苷及其制備方法，取蒺藜總皂苷，加乙醇回流提取，放冷，濾過，加入植物甾醇或膽固醇的乙醇溶液，回流反應(yīng)，減壓回收乙醇，加水，冷藏，濾過，濾液加活性炭，攪拌，熱濾，濾液減壓濃縮，攪拌下加入丙酮，密閉靜置，傾除溶液，殘留物在≤80℃減壓干燥，粉碎，即得精制蒺藜皂苷。本發(fā)明還提供了精制蒺藜皂苷制成凍干粉針劑，消除了蒺藜總皂苷的溶血作用，使之可供靜脈點(diǎn)滴給藥，更好地滿足臨床需要，用于防治缺血性心、腦血管疾病。
文檔編號(hào)A61K9/19GK1631420SQ200410011360
公開日2005年6月29日 申請(qǐng)日期2004年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月17日
發(fā)明者錢本余, 沈麗娟, 趙雪梅, 耿虹, 徐飛, 王國(guó)棟, 劉長(zhǎng)勝 申請(qǐng)人:吉林敖東洮南藥業(yè)股份有限公司