專利名稱：：可用于治療增殖性病癥的2,4－二(苯基氨基)嘧啶類的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及嘧啶衍生物用于治療增殖性病癥、如癌癥的用途，并涉及包含它們的用于治療這類增殖性病癥的藥物組合物。更具體而言，本發(fā)明基于某些嘧啶衍生物具有有價(jià)值的、藥理學(xué)上有用的性質(zhì)這一發(fā)現(xiàn)。具體地，本發(fā)明所用的嘧啶衍生物表現(xiàn)出有藥理學(xué)意義的特定抑制活性。它們尤其是有效的蛋白酪氨酸激酶抑制劑；例如，它們對(duì)間變性淋巴瘤激酶(anaplasticlymphomakinase，ALK)的酪氨酸激酶活性和NPM-ALK的融合蛋白表現(xiàn)出強(qiáng)抑制作用。該蛋白酪氨酸激酶產(chǎn)生自核磷蛋白(NPM)和間變性淋巴瘤激酶(ALK)的基因融合，使得ALK的蛋白酪氨酸激酶活性為非配體依賴性的。在許多造血細(xì)胞和其它導(dǎo)致血液學(xué)和腫瘤性疾病的人細(xì)胞中，NPM-ALK在信號(hào)傳遞中發(fā)揮關(guān)鍵作用，例如在間變性大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)中，特別是在ALK+NHL或ALK淋巴瘤(Alkoma)中，在炎癥性成肌纖維細(xì)胞腫瘤(IMT)和成神經(jīng)細(xì)胞瘤中。除了NPM-ALK之外，在人血液學(xué)和腫瘤性疾病中還已經(jīng)確定了其它基因融合；主要是TPM3-ALK(非肌肉原肌球蛋白與ALK的融合)。所述嘧啶衍生物可用于抑制所有這些含ALK的基因融合?？捎米鰽LK或含ALK的基因融合的抑制劑的化合物尤其是式I的化合物其中X為＝CR0-或＝N-；R0、R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立地為氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基-C1-C8烷基；羥基C1-C8烷基；C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷氧基C1-C8烷基；芳基C1-C8烷基，其可任選地在環(huán)上被羥基、C1-C8烷氧基、羧基或C1-C8烷氧羰基取代；或者R3和R4與它們所連接的氮原子和碳原子一起形成5至10元雜環(huán)，該雜環(huán)可另外包含1、2或3個(gè)選自N、O和S的雜原子；或者R1、R2和R3各自獨(dú)立地為鹵素；鹵代-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基；鹵代-C1-C8烷氧基；羥基C1-C8烷氧基；C1-C8烷氧基C1-C8烷氧基；芳基；芳基C1-C8烷氧基；雜芳基；雜芳基-C1-C4烷基；5至10元雜環(huán)；硝基；羧基；C2-C8烷氧羰基；C2-C8烷基羰基；-N(C1-C8烷基)C(O)C1-C8烷基；-N(R10)R11；-CON(R10)R11；-SO2N(R10)R11；或-C1-C4亞烷基-SO2N(R10)R11；其中R10和R11各自獨(dú)立地為氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷基；(C1-C8烷基)-羰基；芳基C1-C8烷基，其可任選地在環(huán)上被羥基、C1-C8烷氧基、羧基或C2-C8烷氧羰基取代；或5至10元雜環(huán)；或者R1和R2與它們所連接的碳原子一起形成芳基或包含1或2個(gè)選自N、O和S的雜原子的5至10元雜芳基；或者R5和R6各自獨(dú)立地為氫；鹵素；氰基；C1-C8烷基；鹵代-C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C2-C8炔基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基C1-C8烷基；C5-C10芳基C1-C8烷基；R7、R8和R9各自獨(dú)立地為氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；鹵代-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基C1-C8烷基；芳基C1-C8烷基；-Y-R12，其中Y是直連鍵或O，且R12是被取代的或未被取代的包含1、2或3個(gè)選自N、O和S的雜原子的5、6或7元雜環(huán)；羧基；(C1-C8烷氧基)-羰基；-N(C1-8烷基)-CO-NR10R11；-CONR10R11；-N(R10)(R11)；-SO2N(R10)R11；或者R7和R8或R8和R9分別與它們所連接的碳原子一起形成包含1、2或3個(gè)選自N、O和S的雜原子的5或6元雜芳基；或5或6元碳環(huán)，其為游離形式或鹽形式。任何芳基均可以是苯基、萘基或1，2，3，4-四氫萘基，優(yōu)選苯基。雜芳基是芳族雜環(huán)，例如5或6元芳族雜環(huán)，其任選地稠合至1或2個(gè)苯環(huán)和/或其它雜環(huán)上。任何雜環(huán)均可以是飽和的或不飽和的，并且可以任選地稠合至1或2個(gè)苯環(huán)和/或其它雜環(huán)上。雜環(huán)或雜芳基的實(shí)例包括例如嗎啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吡啶基、嘌呤基、嘧啶基、N-甲基-氮雜-環(huán)庚烷-4-基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、1，2，3，4-四氫喹啉基、苯并噻唑基、噻唑基、咪唑基、苯并咪唑基、苯并二唑基、苯并三唑基、茚滿基、二唑基、吡唑基、三唑基和四唑基。優(yōu)選的雜環(huán)或雜芳基為嗎啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吡啶基、N-甲基-氮雜-環(huán)庚烷-4-基、噻唑基、咪唑基和四唑基。當(dāng)R7和R8或R8和R9與它們所連接的碳原子一起形成5或6元碳環(huán)時(shí)，該碳環(huán)可優(yōu)選為環(huán)戊基或環(huán)己基。鹵代-烷基為其中一個(gè)或多個(gè)氫被鹵素取代的烷基，例如CF3。任何烷基或烷基部分均可以是直鏈的或支鏈的。C1-8烷基優(yōu)選為C1-4烷基。C1-8烷氧基優(yōu)選為C1-4烷氧基。除非另有說明，否則任何烷基、烷氧基、鏈烯基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基或雜芳基均可以是未被取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素；OH；C1-C8烷基；C1-C8烷氧基；硝基；氰基；COOH；氨基甲?；?；C(NH2)＝NOH；-N(R10)R11；C3-C6環(huán)烷基；3至7元雜環(huán)；苯基；苯基-C1-4烷基；5或6元雜芳基的取代基取代。當(dāng)烷基、烷氧基或鏈烯基被取代時(shí)，取代基優(yōu)選位于末端碳原子上。當(dāng)雜環(huán)或雜芳基被取代時(shí)，例如，如上文所公開的那樣被取代時(shí)，這種取代可以發(fā)生在一個(gè)或多個(gè)環(huán)碳原子和/或環(huán)氮原子(如果存在環(huán)氮原子的話)上。環(huán)氮原子上的取代基的實(shí)例有例如C1-8烷基、氨基甲酰基、-C(NH2)＝NOH、-N(R10)R11、C3-C6環(huán)烷基或苯基-C1-4烷基，優(yōu)選C1-8烷基、C3-C6環(huán)烷基或苯基-C1-4烷基。作為R7的被取代的烷基或烷氧基優(yōu)選是在末端碳原子上被OH、C1-4烷氧基或雜環(huán)取代的烷基或烷氧基。當(dāng)R10或R11是5至10元雜環(huán)時(shí)，它可以是例如噻唑基。鹵素可以是氟、氯、溴或碘。優(yōu)選地，R1、R2或R3中至多一個(gè)是CONR10R11或SO2NR10R11，更優(yōu)選SO2NR10R11。本發(fā)明的化合物可以以游離形式或鹽形式存在，例如，與例如有機(jī)或無機(jī)酸如三氟乙酸或鹽酸的加成鹽，或當(dāng)它們含有羧基時(shí)可獲得的鹽，例如與堿的鹽，例如堿金屬鹽，如鈉鹽、鉀鹽，或被取代的或未被取代的銨鹽。在式I中，獨(dú)立地、集體地或以任何組合或亞組合優(yōu)選以下含義(a)X為＝CR0；(b)R0為氫；鹵素，例如氯；C1-C4烷基，例如甲基或乙基；C1-4烷氧基，例如甲氧基；優(yōu)選氫；(c)R1為氫；鹵素，例如氯或氟；OH；C1-C8烷基，例如甲基或乙基；被取代的C1-8烷基，例如在末端被OH取代的C1-8烷基；-SO2N(R10)R11；-N(C1-4烷基)C(O)C1-4烷基；任選地在環(huán)氮原子上被取代(如果可能的話)的5或6元雜環(huán)；C1-C8烷氧基，例如甲氧基；芳基，例如苯基；或與R2以及R1和R2所連接的碳原子一起形成5至10元芳基或雜芳基，后者包含1或2個(gè)氮原子；(d)R2為氫；羥基；C1-C8烷基，例如甲基或乙基；被取代的C1-8烷基，例如在末端被OH-或C1-4烷氧基取代的C1-8烷基；C1-8烷氧基；C1-C4烷氧基C1-C8烷氧基；-CON(R10)R11；-SO2N(R10)R11；或與R1以及R1和R2所連接的碳原子一起形成5至10元芳基或雜芳基，后者包含1或2個(gè)氮原子；(e)R3為氫；鹵素，例如氯、溴；羥基；C1-C8烷基，例如甲基或乙基；被取代的C1-8烷基，例如在末端被OH取代的C1-8烷基；羧基；CONR10R11；-SO2N(R10)R11；任選地在環(huán)氮原子上被取代(如果可能的話)的5或6元雜環(huán)；或與R4以及R3和R4所連接的氮原子和碳原子一起形成6元雜環(huán)；(f)R4為氫；或與R3以及R3和R4所連接的氮原子和碳原子一起形成6元雜環(huán)；優(yōu)選氫；(g)R5為氫；鹵素；C1-4烷基；或CF3；(h)R6為氫；(i)R7為氫；羥基；C1-4烷基；被取代的C1-4烷基，例如在末端被OH取代的C1-4烷基；C1-8烷氧基；被取代的C1-8烷氧基，例如在末端被OH、C1-4烷氧基或雜環(huán)取代；NR10R11；-SO2N(R10)R11；-Y-R12；CF3；或者R7與R8以及R7和R8所連接的碳原子一起形成5元雜芳基，例如通過-NH-CH＝CH-、-CH＝CH-NH-、-NH-N＝CH-、-CH＝N-NH-、-NH-N＝N-或-N＝N-NH-進(jìn)行橋接；(k)R8是氫；羥基；C1-4烷氧基；羧基；任選地在環(huán)碳原子或環(huán)氮原子上被取代的5或6元雜環(huán)；N(C1-4烷基)-CO-R10R11；或分別與R7或R9以及R7和R8或R8和R9所連接的碳原子一起形成5元雜芳基，例如通過-NH-CH＝CH-、-CH＝CH-NH-、-NH-N＝CH-、-CH＝N-NH-、-NH-N＝N-或-N＝N-NH-進(jìn)行橋接；(l)R9為氫；C1-4烷氧基；NR10R11；或者與R8以及R8和R9所連接的碳原子一起形成5元雜芳基，例如通過-NH-CH＝CH-、-CH＝CH-NH-、-NH-N＝CH-、-CH＝N-NH-、-NH-N＝N-或-N＝N-NH-進(jìn)行橋接；(m)R10和R11中的一個(gè)獨(dú)立地為氫或C1-4烷基，另一個(gè)為氫；OH；C1-8烷基、被取代的C1-8烷基，例如在末端被OH、C3-6環(huán)烷基或雜環(huán)取代；C2-8鏈烯基；C3-8環(huán)烷基；羥基C1-8烷氧基C1-8烷基；或5元雜環(huán)。R3優(yōu)選為SO2NR10R11。本發(fā)明還提供了式I化合物在制備治療血液學(xué)和腫瘤性疾病的藥物中的用途。本發(fā)明還提供了制備式I化合物的方法，其包括使式II化合物與式III化合物反應(yīng)，并回收所得的游離形式或鹽形式的式I化合物，并且如果需要，將獲得的游離形式的式I化合物轉(zhuǎn)化成所需的鹽形式，或者將獲得的鹽形式的式I化合物轉(zhuǎn)化成游離形式，其中所述的式II化合物是其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和X如上文所定義，Y為離去基團(tuán)，優(yōu)選鹵素，如溴、碘或特別是氯；所述的式III化合物是其中R7、R8和R9如上文所定義。該方法可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行，例如，如實(shí)施例1至4中所述的那樣進(jìn)行。用作起始原料的式II化合物可以通過使式IX化合物與式X化合物反應(yīng)而獲得，其中所述的式IX化合物是所述的式V化合物是其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、Y和X如上文所定義。式IV和式V的化合物是已知的或者可以根據(jù)已知方法制備。以下實(shí)施例用于闡明本發(fā)明，但不限制本發(fā)明。使用了以下縮略語APC＝別藻藍(lán)蛋白，BINAP＝2，2’-雙(二苯膦基)-1，1’-聯(lián)萘，cDNA＝互補(bǔ)DNA，DCM＝二氯甲烷，DIAD＝偶氮二甲酸二異丙酯，DMAP＝4-二甲基氨基吡啶，DMF＝二甲基甲酰胺，DMSO＝二甲亞砜，DMF＝二甲基甲酰胺，Pmc＝2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃；tBu＝叔丁基；DIPCDI＝N，N’-二異丙基碳二亞胺；DTT＝1，4-二硫-D，L-蘇糖醇(treitol)，DNA＝脫氧核糖核酸，EDTA＝乙二胺四乙酸，Lck＝淋巴T-細(xì)胞蛋白酪氨酸激酶，LAT-11＝T細(xì)胞活化接頭，RT＝室溫；RT-PCR＝反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，MS＝通過電噴霧質(zhì)譜學(xué)測(cè)定的分子離子(例如M+H1+)；Eu＝銪。實(shí)施例12-[2-(1H-吲唑-6-基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯磺酰胺(α)2-(2-氯-嘧啶-4-基氨基)-苯磺酰胺向8.52g(49.47mmol)2-氨基苯磺酰胺在200ml異丙醇中的混懸液中加入22.1g(148.42mmol，3當(dāng)量)2，4-二氯嘧啶和20ml10M的鹽酸(200mmol，4當(dāng)量)。將該混懸液在60℃下攪拌2小時(shí)15分鐘。將反應(yīng)混合物用2l乙酸乙酯稀釋并加入500ml水。通過加入碳酸氫鈉將pH調(diào)至8-9。分離各層，用500ml乙酸乙酯反萃取水層。將有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)至體積為300ml。形成結(jié)晶性沉淀，將其通過過濾取出(副產(chǎn)物)。將濾液蒸發(fā)至100ml，由此產(chǎn)物析出結(jié)晶，得到2-(2-氯-嘧啶-4-基氨基)-苯磺酰胺(用HPLC法測(cè)定，純度為97％)。將結(jié)晶母液用柱色譜法進(jìn)行進(jìn)一步純化并結(jié)晶，得到另外的2-(2-氯-嘧啶-4-基氨基)-苯磺酰胺。(b)2-[2-(1H-吲唑-6-基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯磺酰胺向7.25g(25.46mmol)2-(2-氯-嘧啶-4-基氨基)-苯磺酰胺和4.07g(30.55mmol，1.2當(dāng)量)6-氨基吲唑在400ml異丙醇中的混懸液中加入13ml濃HCl*(130mmol，5當(dāng)量)。將該混懸液回流4小時(shí)30分鐘。將反應(yīng)混合物用1.5l乙酸乙酯稀釋并加入1l水。通過加入碳酸氫鈉將pH調(diào)至8-9。分離各層，用500ml乙酸乙酯反萃取水層，將有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)至體積為300ml。形成結(jié)晶性沉淀(1.01g)，將其通過過濾取出(副產(chǎn)物)。將濾液在200g硅膠上通過色譜法純化，用乙酸乙酯/甲醇95/5v/v洗脫。經(jīng)蒸發(fā)形成結(jié)晶，將其過濾，得到標(biāo)題化合物。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.42(s，1H)，8.34(d，1h)，8.28(d，1H)，8.27(s，1H)，7.93(s，1H)，7.88(d，1H)，7.62(m，2H)，7.32(d，1H)，7.24(t，1H)，6.40(d，1H)。MSm/z(％)382(M+H，100)。實(shí)施例22-[2-(3，4，5-三甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯磺酰胺標(biāo)題化合物是如實(shí)施例1中所述由2-(2-氯-嘧啶-4-基氨基)-苯磺酰胺制備的，在步驟(b)中用3，4，5-三甲氧基-苯胺代替6-氨基吲唑。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.18(s，1H)，8.22(d，1H)，8.17(d，1H)，7.89(d，1H)，7.55(t，1H)，7.25(t，1H)，7.14(s，2H)，6.40(d，1H)，3.69(s，6H)，3.62(s，3H)。MSm/z(％)432(M+H，100)。實(shí)施例32-甲基-6-[2-(3，4，5-三甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯磺酰胺標(biāo)題化合物是如實(shí)施例1中所述進(jìn)行制備的，不同之處是在步驟(a)中，用2-氨基-6-甲基-苯磺酰胺代替2-氨基苯磺酰胺。2-氨基-6-甲基-苯磺酰胺可以如Girard，Y等人，J.J.Chem.Soc.PerkinTrans.I1979，4，1043-1047中所述進(jìn)行制備在氮?dú)夥障拢瑢㈤g-甲苯胺(32.1g，32.5ml，0.30mmol)逐滴加入到在-55-49℃下的異氰酸氯磺酰基酯(51.3ml，83.6g，0.59mmol)在硝基乙烷(400ml)中的溶液中。除去冷卻浴，使混合物升溫至-8℃，這時(shí)，加入氯化鋁(51g，0.38mmol)。將混合物加熱至100℃達(dá)20分鐘，形成澄清的棕色溶液，將其冷卻至室溫，傾倒至冰上。過濾后，用冰水和乙醚進(jìn)行洗滌，收集沉淀，將其溶于二烷(300ml)中。加入水(1000ml)和濃HCl(1500ml)以形成混懸液，將該混懸液加熱至120℃達(dá)18小時(shí)。冷卻至室溫后，將澄清的棕色溶液用乙醚/己烷(1400ml，1/1v/v)洗滌，通過加入碳酸鈉將調(diào)至pH＝8。用乙酸乙酯萃取(2×1000ml)，將有機(jī)相用水(500ml)和鹽水(500ml)進(jìn)行洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮，得到棕色固體，將其在硅膠上通過色譜法進(jìn)行純化，用二氯甲烷/乙醇(100/1v/v)洗脫，得到白色固體形式的所需產(chǎn)物。熔點(diǎn)72-75℃(丙-2-醇)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ2.64(s，3H，Me)，3.63(s，3H，OMe)，3.68(s，6H，OMe)，6.31(d，J＝5Hz，1H，嘧啶CH)，7.07(d，J＝8Hz，1H，芳族CH)，7.15(s，2H，芳族CH)，7.40(t，J＝8Hz，1H，芳族CH)，7.65(s，2H，SO2NH2)，8.04(d，J＝8Hz，1H，芳族CH)，8.12(d，J＝5Hz，1H，嘧啶CH)，9.14(s，1H，NH)，9.40(s，1H，NH)。MS(ES+)m/z446(MH+)，468(MNa+)MS(ES-)444(M-H)-實(shí)施例42-甲氧基-6-[2-(3，4，5-三甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯磺酰胺標(biāo)題化合物是如實(shí)施例1中所述進(jìn)行制備的，不同之處是在步驟(a)中，用2-氨基-6-甲氧基-苯磺酰胺代替2-氨基-6-甲基-苯磺酰胺。2-氨基-6-甲氧基-苯磺酰胺可以按照與實(shí)施例1a中所述方法類似的方法由12.3g間-甲氧基苯胺制備。NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.62(s，3H，OMe)，3.69(s，6H，OMe)，3.91(s，3H，OMe)，6.31(d，J＝5Hz，1H，嘧啶CH)，6.86(d，J＝8Hz，1H，芳族CH)，7.12(s，2H，芳族CH)，7.43(t，J＝8Hz，1H，芳族CH)，8.01(d，J＝8Hz，1H，芳族CH)，8.11(d，J＝5Hz，1H，嘧啶CH)，9.18(s，1H，NH)，9.79(br，1H，NH)。MS(ES+)462.2(MH+)，484.2(MNa+)MS(ES-)460.3(M-H)-其中R3、R7和R8如表1中所定義的式X1的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。表1其中R3和R8如表2中所定義的式X2的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。表2其中R1、R7、R8和R9如表3中所定義的式X3的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。表3<tablesid="table4"num="004"><tablewidth="878">實(shí)施例R1R7R8R9MS數(shù)據(jù)*ES+*ES-61-SO2NH-CH2CH2-O-CH2CH2-OH-H-N(CH3)-C(O)CH3-H62-SO2NH2-OCH3-OCH3-OCH363-SO2NH2-O-CH2CH2-1-咪唑基-OCH3-H64-SO2NH-CH2CH2-O-CH2CH2-OH-OCH3-OCH3-OCH352051865-N(CH3)C(O)CH3-OCH3-OCH3-OCH342442266-CH2CH2-OH-SO2NH-CH2CH2CH2CH3-H-H67-SO2NH2-OCH3-H-OCH368-SO2NH2-O-CH2CH2-1-咪唑基-H-H69-CH2CH2-OH-O-CH2CH2-1-咪唑基-H-H70-CH2CH2-OH-OCH3-H-OCH371-SO2NH2-OH-H-H72-O-CH2CH2-OH-O-CH2CH2-1-咪唑基-H-H73-SO2NH-2-噻唑基-OCH3-OCH3-OCH3515513</table></tables>其中R2、R5、R7、R8和R9如表4中所定義的式X4的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。表4<tablesid="table6"num="006"><tablewidth="871">96-OH-H-O-CH2CH2CH2-1-咪唑基-OCH3-H433.4431.497-SO2NH2-H-OCH3-H-OCH398-OH-H-OCH3-OCH3-H33933799-SO2NHCH2-CH2CH2CH3-H-OCH3-OCH3-OCH3488486100-SO2NH-CH3-CH3-O-CH2CH2-1-咪唑基-OCH3-H510508101-SO2NHCH2-CH2CH2CH3-H-O-CH2CH2-1-咪唑基-H-H08506102-OH-H-O-CH2CH2-4-嗎啉代-H-H408103-OH-H-NH-N＝CH--H319317104-OH-H-CHN-NH--H319317105-OH-H-O-CH2CH2-1-咪唑基-H-H106-SO2NH-CH3-CH2-CH3-OCH3-OCH3-OCH3474.3472.3107-SO2NH2-H-OCH3-OCH3-OCH3</table></tables>其中R0、R1、R2、R3和R4如表5中所定義的式X5的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。表5<tablesid="table7"num="007"><tablewidth="816">實(shí)施例R0R1R2R3R4MS數(shù)據(jù)*ES+*ES-108-H-OCH3-OH-H-H109-H硝基-H-OH-H414412110-H-N＝CH-CH＝CH--H-H111-H-CH＝N-NH--H-H393391112-H-NH-N＝CH--H-H393113-H-H-OH-CH2CH2CH2-409407114-CH3-H-CH3-OH-H397115-H苯基-H-SO2NH2-H508506116-CH3-H-H-SO2NH2-H446444</table></tables>其中R5、R7、R8和R9如表6中所定義的式X6的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。表6<tablesid="table8"num="008"><tablewidth="880">實(shí)施例R5R7R8R9*ES+*ES-117-CH3-O-CH2CH2-1-咪唑基-H-H466118-CH2CH3-OCH3-OCH3-OCH3460458119-Br-NH-N＝CH--H461120-CH3-O-CH2CH2-1-咪唑基-OCH3-H496121-CH3-OCH3-OCH3-OCH3446122-CH3-N＝N-NH--H397.2395.2123-CH3-O-CH2CH2-1-甲基-咪唑-1-基-H-H480124-Br-CH＝N-NH--H461.3458.1/460125-CH3-NH-N＝CH--H396126-Br-OCH2CH2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-H-H562/564560/562</table></tables>其中R1、R2、R3、R7和R8如表7中所定義的式X7的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。表7<tablesid="table9"num="009"><tablewidth="838">實(shí)施例R1R2R3R7R8*ES+*ES-127-OCH3-OH-H-OH-OCH3128-H-CH3-SO2NH2-O-CH2CH2-1-咪唑基-H466464129-OCH3-OH-H-O-CH2CH2-1-咪唑基-OCH3130-OCH3-OH-H-O-CH2CH2-OH-OCH3399397131-OCH3-OH-H-O-(1-甲基-氮雜環(huán)庚-4-基)-H436132-CH3-H-SO2NH2-O-CH2CH2-1-咪唑基-H466464133-OCH3-OH-H-O-CH2CH2-(1-甲基)-氮雜環(huán)戊-2-基-H436434134-OCH3-OH-H-CF3-H135-N＝CH-CH＝CH--H-O-CH2CH2-1-咪唑基-OCH3136-OCH3-OH-H-O-CH2CH2CH2-1-咪唑基-OCH3463461137-OCH3-OH-H-O-CH2CH2-1-哌啶基-OCH3466.4464.4138-CH＝N-NH--H-NH-N＝CH-139-CH＝N-NH--H-CH-N＝NH-140-OCH3-OH-H-O-CH2CH2-1-哌啶基-H436434141-H-OCH3-SO2NH2-O-CH2CH2-1-吡咯烷基-H485.3483.3142-H-OCH3-SO2NH2-O-CH2CH2-1-吡咯烷基-CH3499.2497.3143-H-OCH3-SO2NH2-O-CH2CH2CH2-嗎啉代-OCH3545.2545.3144-H-OCH(CH3)2-SO2NH2-O-CH2CH2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-OCH3572.2570.3145-H-OCH3-SO2NH2-O-CH2CH2-1-哌啶基-H499.2497.3146-CH3-OCH3-SO2NH2-O-CH2CH2CH2-1-吡咯烷基-OCH3543.2147-CH3-OCH3-SO2NH2-O-CH2CH2CH2-1-吡咯烷基-H513.2511.2148-H-OCH(CH3)2-SO2NH2-O-CH2CH2-1-哌啶基-H527.2525.3149-H-CH3-SO2NH2-N(CH3)2-OCH3429.3427.3</table></tables>其中R1、R2、R3和R8如表8中所定義的式X8的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。表8<tablesid="table11"num="011"><tablewidth="762">實(shí)施例R1R2R3R8*ES+*ES-1694-嗎啉代-H-H-H170-CH＝N-NH--H-H36336l171-OCH3-OH-H-H172-CH3-H-SO2NH2-OCH3446</table></tables>其中R7、R8和R9如表9中所定義的式X9的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。表9<tablesid="table12"num="012"><tablewidth="787">實(shí)施例R7R8R9*ES+*ES-173-O-CH2CH2-1-哌啶基-OCH3-H470.3468.3174-O-(1-甲基-氮雜環(huán)庚-4-基)-H-H440175-O-(1-甲基-氮雜環(huán)戊-2-基)-H-H440438176-O-CH2CH2-CH2-1-咪唑基-OCH3-H467465177-OCH3-OCH3-OCH3178-O-CH2CH2-1-(1，2，4-三唑基)-H-H424422179-O-CH2CH2-1-哌啶基-H-H180-O-CH2CH2-OH-OCH3-H181-O-CH2CH2-4-嗎啉代-H-H442440182-O-CH2CH2CH2-1-咪唑基-H-H</table></tables>其中R1、R7和R9如表10中所定義的式X10的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。表10<tablesid="table13"num="013"><tablewidth="818">實(shí)施例R1R7R9*ES+*ES-183-CH2CH2-OH-OCH3-OCH3411409184-SO2NH2-O-CH2CH2-1-咪唑基-H496.3494.3</table></tables>其中R8是-OCH3(實(shí)施例185)或-OH(實(shí)施例186)的式X11的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。其中R0、R1、R7、R8和R9如表12中所定義的式X12的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。表12<tablesid="table14"num="014"><tablewidth="778">實(shí)施例R0R1R7R8R9187-H-H-H-SO2NH2-H188-H-H-H-H-CH3189-H-H-H-CH3-H190-H-F-OCH3-OCH3-OCH3191-H-H-H-CH3-CH3192-H-H-CH3-H-CH3193-H-H-OCH3-CH3-H194-H-H-H-H-N(CH3)2195-H-H-OCH(CH3)2-H-H196-H-H-H-OCH(CH3)2-H197-H-H-CH(CH3)2-H-H</table></tables>其中R1、R2、R3和R5如表13中所定義的式X13的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。表13其中R2、R3、R5、R7、R8和R9如表14中所定義的式X14的化合物可以按照實(shí)施例1的方法但是使用適當(dāng)?shù)钠鹗荚线M(jìn)行制備。表14ES+意指電噴霧質(zhì)譜正離子模式；ES-意指電噴霧質(zhì)譜負(fù)離子模式；EL意指電子碰撞質(zhì)譜。在體外測(cè)定中進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，式I化合物和它們的可藥用鹽表現(xiàn)出有價(jià)值的藥理學(xué)性質(zhì)，因此可用作藥物。它們尤其是有效的蛋白酪氨酸激酶抑制劑；例如，它們對(duì)間變性淋巴瘤激酶(ALK)的酪氨酸激酶活性和NPM-ALK的融合蛋白表現(xiàn)出強(qiáng)抑制作用。該蛋白酪氨酸激酶產(chǎn)生自核磷蛋白(NPM)和間變性淋巴瘤激酶(ALK)的基因融合，使得ALK的蛋白酪氨酸激酶活性為非配體依賴性的。在許多造血細(xì)胞和其它導(dǎo)致血液學(xué)和腫瘤性疾病的人細(xì)胞中，NPM-ALK在信號(hào)傳遞中發(fā)揮關(guān)鍵作用，例如在間變性大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)中，特別是在ALK+NHL或ALK淋巴瘤中，在炎癥性成肌纖維細(xì)胞腫瘤(IMT)和成神經(jīng)細(xì)胞瘤中(DuysterJ等人，2001Oncogene20，5623-5637)。除了NPM-ALK之外，在人血液學(xué)和腫瘤性疾病中還已經(jīng)確定了其它基因融合；主要是TPM3-ALK(非肌肉原肌球蛋白與ALK的融合)。本文所述化合物的ALK抑制活性和針對(duì)含ALK的基因融合的抑制活性使得它們成為治療增殖性病癥的有用藥物。增殖性病癥主要是腫瘤疾病(或癌癥)(和/或任何轉(zhuǎn)移)。本發(fā)明的化合物特別可用于治療以下腫瘤乳腺癌、泌尿生殖系統(tǒng)癌癥、肺癌、胃腸癌、表皮樣癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、頭和/或頸癌或膀胱癌，或在更廣的意義上，腎癌、腦癌或胃癌，特別是(i)乳腺腫瘤；表皮樣腫瘤，如頭和/或頸表皮樣腫瘤或口腔腫瘤；肺腫瘤，例如小細(xì)胞或非小細(xì)胞肺腫瘤；胃腸腫瘤，例如結(jié)腸直腸腫瘤；或泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤，例如前列腺腫瘤(尤其是激素-難治性前列腺腫瘤)；或(ii)用其它化療藥難治的增殖性病癥；或(iii)由于多藥耐藥性導(dǎo)致用其它化療藥難治的腫瘤。在本發(fā)明更廣的意義上，增殖性疾病還可以是增殖過度性病癥，如白血病、增生、纖維化(尤其是肺纖維化，還有其它類型的纖維化，如腎纖維化)、血管生成、銀屑病、動(dòng)脈粥樣硬化、血管平滑肌增生如狹窄或血管成形術(shù)后再狹窄。根據(jù)本方法治療的增殖性疾病包括血液和淋巴系統(tǒng)的腫瘤(例如霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、與AIDS有關(guān)的淋巴瘤、惡性免疫增生性疾病、多發(fā)性骨髓瘤和惡性血漿細(xì)胞瘤、淋巴性白血病(lymphoidleukemia)、急性或慢性髓性白血病、急性或慢性淋巴細(xì)胞白血病、單核細(xì)胞白血病、其它特定細(xì)胞類型的白血病、非特定細(xì)胞類型的白血病、淋巴樣組織、造血組織和相關(guān)組織的其它和非特定惡性瘤，例如，彌漫型大細(xì)胞性淋巴瘤、T細(xì)胞淋巴瘤或皮膚T細(xì)胞淋巴瘤。骨髓癌包括例如急性或慢性髓性白血病。在提及腫瘤、腫瘤病癥、癌或癌癥時(shí)，也或者意指或除此之外還意指在原器官或組織中和/或在任何其它部位的轉(zhuǎn)移，無論該腫瘤和/或轉(zhuǎn)移位于何處。與正常細(xì)胞相比，所述化合物對(duì)迅速增殖的細(xì)胞具有選擇性毒性或者具有更大毒性，特別是在人的癌細(xì)胞、例如癌性腫瘤中，所述化合物具有顯著的抗增殖作用，并促進(jìn)分化，例如，細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡。本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)施用或與其它抗癌藥組合施用，如抑制腫瘤血管生成的化合物，例如蛋白酶抑制劑、表皮生長(zhǎng)因子受體激酶抑制劑、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體激酶抑制劑等；細(xì)胞毒類藥物，如抗代謝藥，例如嘌呤和嘧啶類似物抗代謝藥；抗有絲分裂劑，如微管穩(wěn)定藥物和抗有絲分裂生物堿類；鉑配位復(fù)合物；抗腫瘤抗生素、烷化劑，如氮芥類和亞硝基脲類；內(nèi)分泌藥，如腎上腺皮質(zhì)類固醇類、雄激素類、抗雄激素類、雌激素類、抗雌激素類、芳香酶抑制劑、促性腺激素釋放素激動(dòng)劑和促生長(zhǎng)素抑制素類似物以及以被過表達(dá)和/或參與在腫瘤細(xì)胞中被上調(diào)的特定代謝通路的酶或受體為靶標(biāo)的化合物，例如ATP和GTP磷酸二酯酶抑制劑、蛋白激酶抑制劑如絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸激酶抑制劑，例如Abelson蛋白酪氨酸激酶和各種生長(zhǎng)因子、它們的受體和激酶的抑制劑，因此，例如表皮生長(zhǎng)因子受體激酶抑制劑、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體激酶抑制劑、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抑制劑、胰島素樣生長(zhǎng)因子受體抑制劑和血小板源生長(zhǎng)因子受體激酶抑制劑等；甲硫氨酸氨肽酶抑制劑、蛋白酶體抑制劑和環(huán)加氧酶抑制劑，例如環(huán)加氧酶-1或-2抑制劑。這類抗增殖劑還包括芳香酶抑制劑、抗雌激素類、拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑、微管活性劑、烷化劑、組蛋白脫乙酰酶抑制劑、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、COX-2抑制劑、MMP抑制劑、mTOR抑制劑、抗腫瘤抗代謝藥、鉑化合物、降低蛋白激酶活性的化合物和其它抗血管生成化合物、促性腺激素釋放素激動(dòng)劑、抗雄激素類、bengamides、雙膦酸鹽類、抗增殖抗體和替莫唑胺(TEMODAL)。本文所用的“芳香酶抑制劑”涉及抑制雌激素生成、即抑制底物雄甾烯二酮和睪酮分別轉(zhuǎn)化成雌酮和雌二醇的化合物。該術(shù)語包括但不限于甾族化合物，尤其是依西美坦和福美司坦，以及特別是非甾族化合物，尤其是氨魯米特、伏羅唑、法曲唑、阿那曲唑和非常特別的是來曲唑。本發(fā)明的包含為芳香酶抑制劑的抗腫瘤藥的組合對(duì)治療激素受體陽性的乳腺癌可能特別有用。本文所用的“抗雌激素類”涉及在雌激素受體水平拮抗雌激素類的作用的化合物。該術(shù)語包括但不限于他莫西芬、氟維司群、雷洛昔芬和鹽酸雷洛昔芬。本文所用的“拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑”包括但不限于拓?fù)涮婵怠⒁亮⑻婵怠?-硝基喜樹堿以及大分子喜樹堿共軛物PNU-166148(WO99/17804中的化合物A1)。本文所用的“拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑”包括但不限于蒽環(huán)類的阿霉素(包括脂質(zhì)體制劑，如CAELYXTM)、表阿霉素、伊達(dá)比星和奈莫柔比星、蒽醌類的米托蒽醌和洛索蒽醌以及鬼臼毒素類的依托泊苷和替尼泊苷。術(shù)語“微管活性劑”涉及微管穩(wěn)定劑和微管去穩(wěn)定劑，包括但不限于紫杉烷類的紫杉醇和多西他賽；長(zhǎng)春花生物堿，如長(zhǎng)春堿，尤其是硫酸長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿，尤其是硫酸長(zhǎng)春新堿和長(zhǎng)春烯堿；discodermolide；和埃坡霉素(epothilone)，如埃坡霉素B和D。本文所用的術(shù)語“烷化劑”包括但不限于環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺和苯丙氨酸氮芥。術(shù)語“組蛋白脫乙酰酶抑制劑”涉及抑制組蛋白脫乙酰酶并具有抗增殖活性的化合物。術(shù)語“法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑”涉及抑制法尼基轉(zhuǎn)移酶并具有抗增殖活性的化合物。術(shù)語“COX-2抑制劑”涉及抑制2型環(huán)加氧酶(COX-2)并具有抗增殖活性的化合物，如塞來考昔(Celebrex)、羅非考昔(Vioxx)和魯米考昔(Iumiracoxib)(COX189)。術(shù)語“MMP抑制劑”涉及抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)并具有抗增殖活性的化合物。術(shù)語“抗腫瘤抗代謝藥”包括但不限于5-氟尿嘧啶、喃氟啶、卡培他濱、克拉屈濱、阿糖胞苷、磷酸氟達(dá)拉濱、氟尿苷、吉西他濱、6-巰基嘌呤、羥基脲、甲氨蝶呤、依達(dá)曲沙以及這些化合物的鹽，還有ZD1694(RALTITREXEDTM)、LY231514(ALIMTATM)、LY264618(LOMOTREXOLTM)和OGT719。本文所用的術(shù)語“鉑化合物”包括但不限于卡鉑、順鉑和奧沙利鉑。本文所用的術(shù)語“降低蛋白激酶活性的化合物和其它抗血管生成化合物”包括但不限于降低例如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、c-Src、蛋白激酶C、血小板源生長(zhǎng)因子(PDGF)、Bcr-Abl酪氨酸激酶、c-kit、Flt-3和胰島素樣生長(zhǎng)因子I受體(IGF-IR)和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)的活性的化合物以及具有降低蛋白激酶活性以外的其它作用機(jī)理的抗血管生成化合物。降低VEGF活性的化合物尤其是抑制VEGF受體、尤其是VEGF受體酪氨酸激酶活性的化合物和與VEGF結(jié)合的化合物，并且特別是在WO98/35958(描述式I的化合物)、WO00/09495、WO00/27820、WO00/59509、WO98/11223、WO00/27819、WO01/55114、WO01/58899和EP0769947中一般性地和具體地公開的那些化合物、蛋白質(zhì)和單克隆抗體；M.Prewett等人在CancerResearch59(1999)5209-5218中、F.Yuan等人在Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第93卷，第14765-14770頁，1996年12月中、Z.Zhu等人在CancerRes.58，1998，3209-3214中和J.Mordenti等人在ToxicologicPathology，第27卷，第1期，第14-21頁，1999中所公開的那些；在WO00/37502和WO94/10202中所公開的那些；AngiostatinTM，如M.S.O’Reilly等人，Cell79，1994，315-328所述；EndostatinTM，如M.S.O’Reilly等人，Cell88，1997，277-285所述；降低EGF活性的化合物尤其是抑制EGF受體、尤其是EGF受體酪氨酸激酶活性的化合物和與EGF結(jié)合的化合物，并且特別是在WO97/02266(描述式IV的化合物)、EP0564409、WO99/03854、EP0520722、EP0566226、EP0787722、EP0837063、WO98/10767、WO97/30034、WO97/49688、WO97/38983和尤其是WO96/33980中一般性地和具體地公開的那些化合物；降低c-Src活性的化合物包括但不限于下文所定義的抑制c-Src蛋白酪氨酸激酶活性的化合物和SH2相互作用抑制劑，如在WO97/07131和WO97/08193中公開的那些；抑制c-Src蛋白酪氨酸激酶活性的化合物包括但不限于屬于以下結(jié)構(gòu)類型的化合物吡咯并嘧啶，尤其是吡咯并[2，3-d]嘧啶；嘌呤；吡唑并嘧啶，尤其是吡唑并[3，4-d]嘧啶；吡唑并嘧啶，尤其是吡唑并[3，4-d]嘧啶；和吡啶并嘧啶，尤其是吡啶并[2，3-d]嘧啶。優(yōu)選地，該術(shù)語涉及在WO96/10028、WO97/28161、WO97/32879和WO97/49706中公開的那些化合物；降低蛋白激酶C活性的化合物尤其是在EP0296110(WO00/48571中所述的藥物制劑)中公開的星孢素衍生物，這些化合物是蛋白激酶C抑制劑；其它降低蛋白激酶活性并且也可以與本發(fā)明的化合物組合使用的特定化合物有伊馬替尼(Gleevec/Glivec)、PKC412、IressaTM(ZD1839)、PKI166、PTK787、ZD6474、GW2016、CHIR-200131、CEP-7055/CEP-5214、CP-547632和KRN-633；具有降低蛋白激酶活性以外的其它作用機(jī)理的抗血管生成化合物包括但不限于例如沙立度胺(THALOMID)、塞來考昔(Celebrex)、SU5416和ZD6126。本文所用的術(shù)語“促性腺激素釋放素激動(dòng)劑”包括但不限于阿巴瑞克、性瑞林和醋酸性瑞林。性瑞林公開在US4,100,274中。本文所用的術(shù)語“抗雄激素類”包括但不限于比卡魯胺(CASODEXTM)，它可以例如如US4,636,505中所公開的那樣進(jìn)行配制。術(shù)語“bengamides”涉及bengamides以及它們的具有抗增殖性質(zhì)的衍生物。本文所用的術(shù)語“雙膦酸鹽”包括但不限于etridonicacid、氯膦酸、替魯膦酸、帕米膦酸、阿侖膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑來膦酸。本文所用的術(shù)語“抗增殖抗體”包括但不限于曲妥單抗(HerceptinTM)、Trastuzumab-DM1、埃羅替尼(erlotinib)(TarcevaTM)、貝伐單抗(AvastinTM)、利妥昔單抗(Rituxan)、PRO64553(抗-CD40)和2C4抗體。通過代碼號(hào)、通用名或商標(biāo)名進(jìn)行識(shí)別的活性劑的結(jié)構(gòu)可以從現(xiàn)行版的標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)“默克索引(TheMerckIndex)”或從數(shù)據(jù)庫例如PatentsInternational(例如IMSWorldPublications)中獲得。本發(fā)明的組合物可以通過任何常規(guī)途徑施用，特別是胃腸外施用，例如以可注射的溶液或混懸液形式胃腸外施用，腸內(nèi)施用，例如口服施用，例如以片劑或膠囊劑形式口服施用，局部施用，例如以洗劑、凝膠劑、軟膏劑或乳膏劑的形式局部施用，或以鼻用形式或栓劑形式施用。包含本發(fā)明的物質(zhì)以及至少一種可藥用的載體或稀釋劑的藥物組合物可以以常規(guī)方法通過與可藥用的載體或稀釋劑相混合來制備。用于口服施用的單位劑型含有例如從約0.1mg至約500mg的活性物質(zhì)。局部施用是例如局部施用于皮膚。局部施用的其它形式還有局部施用于眼。式I的化合物可以以游離形式或以可藥用鹽形式施用，例如如上文所述的那樣進(jìn)行施用。這類鹽可以以常規(guī)方法制備，并且表現(xiàn)出與游離化合物相同等級(jí)的活性。ALK酪氨酸激酶活性的抑制用已知方法進(jìn)行測(cè)定，例如采用與J.Wood等人.CancerRes.60，2178-2189(2000)中所述的VEGF-R激酶測(cè)定法相類似的方法、使用ALK重組激酶結(jié)構(gòu)域進(jìn)行測(cè)定。下表報(bào)告了本發(fā)明數(shù)個(gè)化合物的IC50值。每個(gè)化合物測(cè)定兩次，每次測(cè)定用兩種不同的ALK制品進(jìn)行一次。式I化合物強(qiáng)烈地抑制過表達(dá)人NPM-ALK的鼠BaF3細(xì)胞的生長(zhǎng)。NPM-ALK的表達(dá)是通過用編碼NPM-ALK的表達(dá)載體pCIneoTM(PromegaCorp.，MadisonWI，USA)轉(zhuǎn)染BaF3細(xì)胞并隨后選育G418抗性細(xì)胞來實(shí)現(xiàn)的。非轉(zhuǎn)染的BaF3細(xì)胞依賴IL-3存活。不同的是，表達(dá)NPM-ALK的BaF3細(xì)胞(稱為BaF3-NPM-ALK)能在不存在IL-3的條件下增殖，因?yàn)樗鼈儷@得了經(jīng)由NPM-ALK激酶的增殖信號(hào)。因此，假定的NPM-ALK激酶抑制劑應(yīng)消除該生長(zhǎng)信號(hào)并產(chǎn)生抗增殖活性。但是，假定的NPM-ALK激酶抑制劑的抗增殖活性能夠通過加入經(jīng)由非NPM-ALK依賴性機(jī)理提供生長(zhǎng)信號(hào)的IL-3來消除。[關(guān)于使用FLT3激酶的類似細(xì)胞系統(tǒng)，參閱EWeisberg等人.CancerCell；1，433-443(2002)]。簡(jiǎn)言之，式I化合物的抑制抑制活性如下測(cè)定將BaF3-NPM-ALK細(xì)胞(15000/個(gè)微量滴定板孔)轉(zhuǎn)移至96-孔微量滴定板中。以DMSO的終濃度不大于1％(v/v)的方式加入一系列濃度(系列稀釋液)的供試化合物[溶于二甲亞砜(DMSO)中]。加入后，將板培養(yǎng)2天，在此期間，不含供試化合物的對(duì)照培養(yǎng)基經(jīng)歷了2個(gè)細(xì)胞分裂周期。BaF3-NPM-ALK細(xì)胞的生長(zhǎng)通過YoproTM染色法(TIdziorek等人J.Immunol.Methods；185249-58)進(jìn)行測(cè)定向每個(gè)孔中加入25μl溶胞緩沖液，該緩沖液由20mM檸檬酸鈉，pH4.0、26.8mM氯化鈉、0.4％NP40、20mMEDTA和20mM組成。溶胞在室溫下于60分鐘內(nèi)完成，與DNA結(jié)合的Yopro總量通過使用CytofluorII96孔閱讀器(PerSeptiveBiosystems)的測(cè)定進(jìn)行，參數(shù)設(shè)定如下激發(fā)波長(zhǎng)(nm)485/20，發(fā)射波長(zhǎng)(nm)530/25。IC50值是通過計(jì)算機(jī)輔助系統(tǒng)用以下公式確定的IC50＝[(ABS試驗(yàn)-ABS開始)/(ABS對(duì)照-ABS開始)]×100。這些實(shí)驗(yàn)中的IC50值以所試驗(yàn)的供試化合物的濃度給出，該濃度導(dǎo)致細(xì)胞計(jì)數(shù)比使用無抑制劑的對(duì)照所獲得的細(xì)胞計(jì)數(shù)低50％。式I化合物表現(xiàn)出IC50為約0.01-1μM的抑制活性。如上所述，在BaF3細(xì)胞系和KARPAS-299細(xì)胞系的細(xì)胞測(cè)定中對(duì)下列化合物進(jìn)行了試驗(yàn)權(quán)利要求1.治療或預(yù)防可用ALK抑制劑治療的病癥的方法，其包括用游離形式或鹽形式的式I化合物抑制ALK或其基因融合，其中X為＝CR0-或＝N-；R0、R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立地為氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基-C1-C8烷基；羥基C1-C8烷基；C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷氧基C1-C8烷基；芳基C1-C8烷基，其可任選地在環(huán)上被羥基、C1-C8烷氧基、羧基或C1-C8烷氧羰基取代；或者R3和R4與它們所連接的氮原子和碳原子一起形成5至10元雜環(huán)，該雜環(huán)可另外包含1、2或3個(gè)選自N、O和S的雜原子；或者R1、R2和R3各自獨(dú)立地為鹵素；鹵代-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基；鹵代-C1-C8烷氧基；羥基C1-C8烷氧基；C1-C8烷氧基C1-C8烷氧基；芳基；芳基C1-C8烷氧基；雜芳基；雜芳基-C1-C4烷基；5至10元雜環(huán)；硝基；羧基；C2-C8烷氧羰基；C2-C8烷基羰基；-N(C1-C8烷基)C(O)C1-C8烷基；-N(R10)R11；-CON(R10)R11；-SO2N(R10)R11；或-C1-C4亞烷基-SO2N(R10)R11；其中R10和R11各自獨(dú)立地為氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷基；(C1-C8烷基)-羰基；芳基C1-C8烷基，其可任選地在環(huán)上被羥基、C1-C8烷氧基、羧基或C2-C8烷氧羰基取代；或5至10元雜環(huán)；或者R1和R2與它們所連接的碳原子一起形成芳基或包含1或2個(gè)選自N、O和S的雜原子的5至10元雜芳基；或者R5和R6各自獨(dú)立地為氫；鹵素；氰基；C1-C8烷基；鹵代-C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C2-C8炔基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基C1-C8烷基；C5-C10芳基C1-C8烷基；R7、R8和R9各自獨(dú)立地為氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；鹵代-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基C1-C8烷基；芳基C1-C8烷基；-Y-R12，其中Y是直連鍵或O，且R12是被取代的或未被取代的包含1、2或3個(gè)選自N、O和S的雜原子的5、6或7元雜環(huán)；羧基；(C1-C8烷氧基)-羰基；-N(C1-8烷基)-CO-NR10R11；-CONR10R11；-N(R10)(R11)；-SO2N(R10)R11；R7和R8或R8和R9分別與它們所連接的碳原子一起形成包含1、2或3個(gè)選自N、O和S的雜原子的5或6元雜芳基；或5或6元碳環(huán)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中R1、R2或R3中至多一個(gè)為-CON(R10)R11；或-SO2N(R10)R11。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的病癥是增殖性疾病。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中含ALK的基因融合被抑制。5.游離形式或鹽形式的式I化合物在制備治療血液學(xué)和腫瘤性疾病的藥物中的用途，其中X為＝CR0-或＝N-；R0、R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立地為氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基-C1-C8烷基；羥基C1-C8烷基；C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷氧基C1-C8烷基；芳基C1-C8烷基，其可任選地在環(huán)上被羥基、C1-C8烷氧基、羧基或C1-C8烷氧羰基取代；或者R3和R4與它們所連接的氮原子和碳原子一起形成5至10元雜環(huán)，該雜環(huán)可另外包含1、2或3個(gè)選自N、O和S的雜原子；或者R1、R2和R3各自獨(dú)立地為鹵素；鹵代-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基；鹵代-C1-C8烷氧基；羥基C1-C8烷氧基；C1-C8烷氧基C1-C8烷氧基；芳基；芳基C1-C8烷氧基；雜芳基；雜芳基-C1-C4烷基；5至10元雜環(huán)；硝基；羧基；C2-C8烷氧羰基；C2-C8烷基羰基；-N(C1-C8烷基)C(O)C1-C8烷基；-N(R10)R11；-CON(R10)R11；-SO2N(R10)R11；或-C1-C4亞烷基-SO2N(R10)R11；其中R10和R11各自獨(dú)立地為氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷氧基C1-C8烷基；羥基C1-C8烷基；(C1-C8烷基)-羰基；芳基C1-C8烷基，其可任選地在環(huán)上被羥基、C1-C8烷氧基、羧基或C2-C8烷氧羰基取代；或5至10元雜環(huán)；或者R1和R2與它們所連接的碳原子一起形成芳基或包含1或2個(gè)選自N、O和S的雜原子的5至10元雜芳基；或者R5和R6各自獨(dú)立地為氫；鹵素；氰基；C1-C8烷基；鹵代-C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；C2-C8炔基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基C1-C8烷基；C5-C10芳基C1-C8烷基；R7、R8和R9各自獨(dú)立地為氫；羥基；C1-C8烷基；C2-C8鏈烯基；鹵代-C1-C8烷基；C1-C8烷氧基；C3-C8環(huán)烷基；C3-C8環(huán)烷基C1-C8烷基；芳基C1-C8烷基；-Y-R12，其中Y是直連鍵或O，且R12是被取代的或未被取代的包含1、2或3個(gè)選自N、O和S的雜原子的5、6或7元雜環(huán)；羧基；(C1-C8烷氧基)-羰基；-N(C1-8烷基)-CO-NR10R11；-CONR10R11；-N(R10)(R11)；-SO2N(R10)R11；R7和R8或R8和R9分別與它們所連接的碳原子一起形成包含1、2或3個(gè)選自N、O和S的雜原子的5或6元雜芳基；或5或6元碳環(huán)。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中R1、R2或R3中至多一個(gè)為-CON(R10)R11；或-SO2N(R10)R11。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中所述的病癥是增殖性疾病。8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中含ALK的基因融合被抑制。全文摘要本發(fā)明提供了通過用式(I)化合物抑制ALK活性來預(yù)防或治療增殖性病癥如腫瘤疾病的方法，其中X、R文檔編號(hào)A61K35/00GK1852900SQ200480026942公開日2006年10月25日申請(qǐng)日期2004年9月17日優(yōu)先權(quán)日2003年9月18日發(fā)明者P·因巴赫,J·勒澤爾申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司