專利名稱：一種治療腹瀉病的中藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)是涉及一種用于治療腹瀉病的中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
感染性腹瀉又稱腹瀉病，是一組廣泛流行于世界各地的胃腸道傳染病，發(fā)病率高，危害嚴(yán)重。全世界每年發(fā)病數(shù)十億人次，成人與兒童均有較高的發(fā)病率。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)全球五歲以下每年就有幾億小兒患腹瀉，導(dǎo)致五百萬(wàn)小兒死亡。據(jù)國(guó)內(nèi)資料統(tǒng)計(jì)，因腹瀉而導(dǎo)致小兒死亡的原因在小兒常見(jiàn)死亡原因中排第四位，已引起世界衛(wèi)生組織及國(guó)內(nèi)衛(wèi)生界的重視。軍隊(duì)這個(gè)相互密切接觸的大集體，是急性感染性腹瀉的易感體，而且行軍腹瀉也與細(xì)菌、病毒感染有關(guān)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)感染性腹瀉的病因、診斷、感染途徑、檢測(cè)方法研究很多，但治療特別是對(duì)病毒性腹瀉無(wú)特殊有效藥物，而且致瀉病原菌隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，其耐藥性越來(lái)越嚴(yán)重，雖然不斷有新抗生素出現(xiàn)，但價(jià)格昂貴，使用也不普遍。目前，病毒性腹瀉(主要為輪狀病毒所致)在感染性腹瀉中占有重要的比例，國(guó)內(nèi)尚無(wú)特異性治療病毒性腹瀉的中成藥，也沒(méi)有對(duì)細(xì)菌及病毒性腹瀉都產(chǎn)生良好治療效果的西藥。
由于腹瀉病因復(fù)雜，主要靠綜合性防御，各國(guó)正在開(kāi)展疫苗工程，但應(yīng)用于臨床還存在很多問(wèn)題。中藥治療感染性腹瀉副作用小，價(jià)格便宜，配伍得當(dāng)可發(fā)揮廣泛的藥理效應(yīng)。如果同時(shí)具有抗腹瀉、殺菌、抗病毒作用，將對(duì)感染性腹瀉產(chǎn)生很好的療效，而且致瀉病原菌很少對(duì)中藥產(chǎn)生耐藥性。因而中藥在治療感染性腹瀉尤其是病毒感染性腹瀉中將顯現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。葛根黃芩黃連湯、黃芩湯、白頭翁湯、芍藥湯等是治療腹瀉的古方(《傷寒論》)，廣東民間也有使用番石榴葉治療泄瀉的經(jīng)驗(yàn)。

發(fā)明內(nèi)容
(一)要解決的技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明的目的是提供一種既能殺滅致瀉病原菌又能滅活致瀉病毒，治療感染性腹瀉的高效、速效、安全、無(wú)毒的中藥組合物及其制備方法。
(二)技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下的技術(shù)方案本發(fā)明治療腹瀉病的中藥組合物是由有效成分和/或藥學(xué)上可接受的輔料組成，所述的有效成分是由按重量份計(jì)的下列原料制成的黃連27-62、黃芩27-62、白芍27-62、廣藿香15-43、番石榴葉60-120、茯苓27-62。
優(yōu)選的有效成分原料配比為黃連36-54、黃芩36-54、白芍36-54、廣藿香24-38、番石榴葉70-110、茯苓36-54。
最優(yōu)選的有效成分原料配比為黃連45、黃芩45、白芍45、廣藿香30、番石榴葉90、茯苓45。
所述的輔料選自一種或多種在制藥領(lǐng)域中通常使用的填料如稀釋劑、調(diào)味劑、增溶劑、潤(rùn)滑劑、懸浮劑、粘合劑、防腐劑、片劑崩解劑、表面活性劑或成膠囊材料。合適的固體填料包括而不限于碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、糖、乳糖、果膠、糊精、淀粉、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點(diǎn)蠟、可可脂等。
本發(fā)明還提供了該中藥組合物的制備方法，它包括如下步驟(1)取黃連，加入按體積質(zhì)量比為5-15倍的50-85％乙醇溶液，60-100℃加熱回流提取1-4小時(shí)，提取共1-4次，過(guò)濾，合并濾液，濾液減壓回收乙醇，濃縮液噴霧干燥成細(xì)粉A備用；(2)取黃芩、白芍、廣藿香、番石榴葉、茯苓，加入按體積質(zhì)量比為5-15倍的水，60-100℃煎煮1-4小時(shí)，共煎煮1-3次，合并煎液，過(guò)濾，濾液減壓濃縮到相對(duì)密度1.10-1.16，30-80℃烘干，制成B備用；(3)將A與B混勻，和藥學(xué)上常用的輔料按常規(guī)方法制成散劑、膠囊、片劑、口服液、顆粒劑、丸劑、滴丸、軟膠囊、泡騰片、包衣丸劑和醫(yī)藥學(xué)上可接受的其他劑型。
本發(fā)明中藥組合物的鑒別方法如下
(1)分別取本發(fā)明中藥組合物、黃連、鹽酸小檗堿制成測(cè)試溶液，按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三樣品分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.3)為展開(kāi)劑，置氨氣飽和的層析缸內(nèi)展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光下檢視，三樣品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(2)分別取本發(fā)明中藥組合物、黃芩、黃芩甙制成測(cè)試溶液，按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三樣品分別點(diǎn)于同一聚酰胺-6薄膜上，以冰醋酸-水(3.6∶6.4)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，日光下檢視，三樣品色譜的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，噴10％AlCl3乙醇溶液后，置紫外光燈(365nm)下檢視，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
白芍、廣藿香、番石榴葉、茯苓均可用薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)鑒別。
本發(fā)明中藥組合物以黃連為君藥，黃連味苦性寒，苦能燥濕，寒能清熱解毒，為治濕熱泄瀉之主藥；黃連大苦大寒，苦燥濕，寒勝熱，能泄降一切有余之濕火。黃芩、廣藿香為臣藥，黃芩，其性清肅，所以除邪，味苦所以燥濕，陰寒所以勝熱，故主諸熱；諸熱者，邪熱與濕熱也；苦寒能除濕熱，所以小腸利而水自逐，源清而流潔也。廣藿香芳香化濕，醒脾和胃，恢復(fù)脾土運(yùn)化功能，與黃芩合用共為治濕熱泄瀉之輔藥。白芍、番石榴葉為佐藥，白芍緩急止痛，治腹瀉之腹痛；番石榴葉收斂澀腸以治標(biāo)，與黃連、黃芩合用，標(biāo)本同治增強(qiáng)效果。茯苓為使藥，茯苓入脾、小腸經(jīng)，引諸藥入脾與小腸，且能健脾和胃，利水滲濕，分利小便以實(shí)大便。以上諸藥合用，可奏清熱燥濕，解毒止瀉。
(三)有益效果本發(fā)明中藥組合物具有清熱解毒、燥濕止瀉的功效，用于急性濕熱泄瀉，西醫(yī)診斷為大腸桿菌性腸炎、輪狀病毒性腸炎、沙門菌性腸炎。本發(fā)明中藥組合物對(duì)小腸推進(jìn)率有明確抑制作用；能抑制腸管的自發(fā)運(yùn)動(dòng)；對(duì)試驗(yàn)性菌痢有治療作用；能抑制輪狀病毒；并有止瀉、鎮(zhèn)痛、抗炎等作用。本發(fā)明中藥組合物小鼠灌胃給藥最大耐受量大于15g/Kg。大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，連續(xù)灌胃給藥4周，結(jié)果未見(jiàn)明顯毒性反應(yīng)。
用本發(fā)明中藥組合物對(duì)致瀉病原微生物進(jìn)行試驗(yàn)研究。結(jié)果表明所述中藥組合物對(duì)志賀氏菌F2a野生菌株、產(chǎn)腸毒素大腸桿菌、霍亂弧菌均有殺滅作用，殺菌效果隨作用時(shí)間和藥物濃度的增加而升高。對(duì)輪狀病毒(HRV)具有滅活作用。400g/L的藥液30min內(nèi)能使HVR抗原完全滅活，100g/L的藥液能使HVR-RNA降解。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1本發(fā)明膠囊劑的制備取黃連450g，加入10倍量的70％乙醇溶液，加熱回流提取3次，每次1.5小時(shí)。過(guò)濾，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮液噴霧干燥成細(xì)粉A備用。取黃芩450g、白芍450g、廣藿香300g、番石榴葉900g、茯苓450g，加入10倍量的水，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，過(guò)濾，濾液減壓濃縮到相對(duì)密度1.10(溫度60℃時(shí))，烘干，制成B備用。將A、B混勻，整粒，裝入膠囊即得。
實(shí)施例2本發(fā)明散劑的制備取黃連360g，加入5倍量的85％乙醇溶液，加熱回流提取2次，每次3小時(shí)。過(guò)濾，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮液噴霧干燥成細(xì)粉A備用。取黃芩540g、白芍400g、廣藿香240g、番石榴葉1100g、茯苓500g，加入7倍量的水，煎煮1次，4小時(shí)，合并煎液，過(guò)濾，濾液減壓濃縮到相對(duì)密度1.12(溫度60℃時(shí))，烘干，制成B備用。將A、B混勻，干燥，過(guò)篩，分包即得。
實(shí)施例3本發(fā)明顆粒劑的制備取黃連540g，加入15倍量的50％乙醇溶液，加熱回流提取1次，4小時(shí)。過(guò)濾，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮液噴霧干燥成細(xì)粉A備用。取黃芩360g、白芍360g、廣藿香380g、番石榴葉700g、茯苓360g，加入12倍量的水，煎煮3次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，過(guò)濾，濾液減壓濃縮到相對(duì)密度1.16(溫度60℃時(shí))，烘干，制成B備用。將A、B及輔料混勻，制粒后干燥，整粒，分裝即得。
實(shí)施例4本發(fā)明片劑的制備取黃連420g，加入8倍量的75％乙醇溶液，加熱回流提取4次，每次1小時(shí)。過(guò)濾，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮液噴霧干燥成細(xì)粉A備用。取黃芩450g、白芍380g、廣藿香350g、番石榴葉1000g、茯苓400g，加入15倍量的水，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，過(guò)濾，濾液減壓濃縮到相對(duì)密度1.15(溫度60℃時(shí))，烘干，制成B備用。將A、B及輔料混勻，制粒后干燥，整粒，壓成片劑包衣即得。
實(shí)施例5本發(fā)明丸劑的制備取黃連400g，加入6倍量的80％乙醇溶液，加熱回流提取4次，每次1.5小時(shí)。過(guò)濾，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮液噴霧干燥成細(xì)粉A備用。取黃芩400g、白芍400g、廣藿香250g、番石榴葉800g、茯苓400g，加入6倍量的水，煎煮3次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，過(guò)濾，濾液減壓濃縮到相對(duì)密度1.13(溫度60℃時(shí))，烘干，制成B備用。將A、B及輔料混合成塊狀物，干燥，粉碎成細(xì)粉，再泛制成丸即得。
實(shí)施例6本發(fā)明口服液的制備取黃芩450g、白芍450g、廣藿香300g、番石榴葉900g、茯苓450g，加入10倍量的水，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，過(guò)濾制成B備用。取黃連450g，加入10倍量的70％乙醇溶液，加熱回流提取3次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液減壓回收乙醇，加入B后減壓濃縮至浸膏狀，用適量純化水稀釋，冷藏，濾過(guò)，加入矯味劑、矯嗅劑、著色劑及防腐劑等，再加適量的純化水至1000ml，冷藏，濾過(guò)，封裝即得。
實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明中藥組合物對(duì)在體小鼠腸功能的影響試驗(yàn)試驗(yàn)方法1、藥物取本發(fā)明實(shí)施例6所得口服液備用，作為試驗(yàn)組。瀉痢停片(哈爾濱制藥六廠生產(chǎn)，批號(hào)960274)，作為對(duì)照組；同時(shí)設(shè)空白對(duì)照(同體積生理鹽水)。
2、動(dòng)物及操作方法ICR小鼠，雌雄各半，體重22±3.6g，第一軍醫(yī)大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，合格證號(hào)97A026。50只隨機(jī)分為5組，即空白對(duì)照組、對(duì)照組，試驗(yàn)組低、中、高劑量組。
本發(fā)明中藥組合物按成人劑量折算小鼠劑量設(shè)置低劑量組1g/Kg、中劑量組2g/Kg、高劑量組4g/Kg；瀉痢停劑量0.25g/Kg。灌胃給藥。
試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見(jiàn)表1-3。
表1本發(fā)明中藥組合物對(duì)小腸推進(jìn)率的影響(n＝10)

**表示各組與空白對(duì)照組比P＜0.01 △表示與陽(yáng)性空白對(duì)照組相比P＞0.0.5表2本發(fā)明中藥組合物新斯的明所致小腸機(jī)能亢進(jìn)的影響(n＝10)

**表示各組與空白對(duì)照組相比P＜0.01 △表示與對(duì)照組相比P＞0.05 ▲▲表示與對(duì)照組比較P＜0.01表3本發(fā)明中藥組合物對(duì)小鼠小腸吸收功能的影響(n＝10)

**表示各組與空白對(duì)照組相比P＞0.01 △表示與對(duì)照組相比P＞0.0.5 ▲表示與對(duì)照組比較P＜0.05。
本試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明中藥組合物對(duì)小鼠小腸推進(jìn)率有明顯抑制作用，并能拮抗新期的明引起的小腸運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)，促進(jìn)小腸對(duì)水份和Cl-的吸收。
實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明中藥組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性菌痢的治療作用試驗(yàn)方法1、藥物取實(shí)施例1所得膠囊劑用滅菌蒸餾水制成濃度為1g/ml，2g/ml混懸液，每次灌胃前新鮮配制，作為試驗(yàn)組；氟哌酸膠囊(汕頭金石制藥總廠生產(chǎn)，批號(hào)950206)作為對(duì)照組；同時(shí)設(shè)空白對(duì)照(同體積生理鹽水)。
2、動(dòng)物及操作方法新西蘭兔，雌雄各半，體重2.27±0.13Kg，第一軍醫(yī)大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，合格證號(hào)97A52。將30只兔隨機(jī)分為6組，即空白對(duì)照組、菌痢模型組、氟哌酸組，本發(fā)明中藥組合物低、中、高劑量組。各組動(dòng)物觀察一周，無(wú)腹瀉及試驗(yàn)前連續(xù)三天未培養(yǎng)出志賀氏菌或沙門氏菌的動(dòng)物即可做為試驗(yàn)動(dòng)物。
本發(fā)明中藥組合物按成人劑量折算兔劑量設(shè)置低劑量組0.22g/Kg、中劑量組0.44g/Kg、高劑量組0.88g/Kg；氟哌酸劑量0.25g/Kg。灌胃給藥，與臨床用藥途徑一致。
試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見(jiàn)表4-5。
表4兔血漿IL-1活性(U/ml)變化結(jié)果

*P＜0.05a，b，c，d分別表示同組內(nèi)與第0，1，2，3相比較；e表示同一天內(nèi)與空白對(duì)照組相比較。
表5兔血漿TNF活性(U/ml)變化結(jié)果

*P＜0.05a，b，c，d分別表示同組內(nèi)與第0，1，2，3天相比較；e表示同一天內(nèi)與空白對(duì)照組相比較。
本試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明中藥組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性菌痢具有治療作用，能殺滅病原體，保護(hù)腸道細(xì)胞，促進(jìn)受損腸粘膜的修復(fù)。還能降低菌痢時(shí)血漿中IL-1和TNF的濃度，這可能是藥物抑制炎癥，殺死志賀氏菌的機(jī)理之一。
實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明中藥組合物對(duì)輪狀病毒的抑制作用實(shí)驗(yàn)方法
1、藥物取實(shí)施例1所得膠囊劑300g加蒸餾水200ml，浸1小時(shí)后加熱煎沸40min，過(guò)濾，殘?jiān)偌铀?00ml煎30min，過(guò)濾，合并二次濾液，于水浴上濃縮至100ml藥液，pH調(diào)至7.0，過(guò)濾，濾液中加112ml 95％乙醇，邊加邊攪拌，使藥液含醇量達(dá)50％左右。冷藏24小時(shí)。過(guò)濾，去沉淀。再將濾液中加280ml 95％乙醇，邊加邊攪拌使藥液含醇量達(dá)70％左右，冷藏24小時(shí)。過(guò)濾，棄去沉淀。最后以四蒸水加至100ml，以兩個(gè)50ml瓶分裝，滅菌后置冰箱貯存?zhèn)溆?，作為試?yàn)組。病毒唑注射液，0.1g/ml，江蘇無(wú)錫市第七制藥廠提供，批號(hào)960820，作為對(duì)照組。
2、操作方法輪狀病毒抗原ELSA檢測(cè)試劑盒，由第一軍醫(yī)大學(xué)珠江醫(yī)院生物高科技中心提供，批號(hào)970126。
毒株人輪狀病毒W(wǎng)a株(A群、血清I型，長(zhǎng)型)衛(wèi)生部蘭州生物制品研究所提供。
細(xì)胞恒河猴胚腎MA104傳代細(xì)胞，衛(wèi)生部蘭州生物制品研究所提供。正常細(xì)胞對(duì)照。
試驗(yàn)組對(duì)MA104培養(yǎng)細(xì)胞的毒性試驗(yàn)，結(jié)果顯示1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640的參試藥液與0.25/L、0.125g/L、0.0625g/L病毒唑?qū)A104培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)毒副作用，與正常細(xì)胞對(duì)照組一致，無(wú)病變現(xiàn)象出現(xiàn)。而1∶5、1∶10濃度的參試藥液對(duì)MA104細(xì)胞影響明顯，引起細(xì)胞變圓、聚合或融合，拉網(wǎng)，甚至細(xì)胞溶解、脫落，細(xì)胞瓶中培養(yǎng)液變渾濁。1∶20濃度參試藥液對(duì)MA104細(xì)胞稍有影響，有2孔細(xì)胞界面模糊，間隙增大，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)顆粒增多，出現(xiàn)細(xì)胞病變，即CPE現(xiàn)象，故取1∶40、1∶80、1∶160三個(gè)濃度的參試藥液和0.125g/L對(duì)照組作抗病毒試驗(yàn)用。
抗病毒試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明中藥組合物制劑對(duì)輪狀病毒感染的MA104細(xì)胞具有預(yù)防保護(hù)作用和治療作用。能抑制輪狀病毒在細(xì)胞中的復(fù)制和繁殖，使病毒顆粒的外殼或內(nèi)核破壞、受損，并有增強(qiáng)白細(xì)胞介素-2的含量，增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫的作用。
實(shí)驗(yàn)例4本發(fā)明中藥組合物的止瀉作用實(shí)驗(yàn)方法1、藥物取本發(fā)明實(shí)施例6所得口服液備用，作為試驗(yàn)組。瀉痢停片(哈爾濱制藥六廠生產(chǎn)，批號(hào)960274)，作為對(duì)照組。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照(同體積生理鹽水)。
本發(fā)明中藥組合物按成人劑量折算小鼠劑量設(shè)置低劑量組1g/Kg、中劑量組2g/Kg、高劑量組4g/Kg；瀉痢停劑量0.25g/Kg。灌胃給藥。
2、動(dòng)物及分組ICR小鼠，雌雄各半，體重22±3.6g，第一軍醫(yī)大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，合格證號(hào)97A026。小鼠50只隨機(jī)分為5組，即空白對(duì)照組、對(duì)照組，本發(fā)明中藥組合物低、中、高劑量組。
將川大黃飲片烘干，打成粗粉，取100g加蒸餾水200ml浸24小時(shí)，過(guò)濾，制成1∶2濾液備用。各組動(dòng)物禁食12小時(shí)后，灌胃給藥，1小時(shí)后灌服大黃冷浸液，0.5ml/只，隨機(jī)將小鼠單個(gè)置鐵籠內(nèi)，籠下墊濾紙，觀察給大黃后5小時(shí)內(nèi)濾紙上大便的情況，記錄每只鼠排稀便、干便的數(shù)量。制備病理模型。
試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見(jiàn)表6。
表6本發(fā)明中藥組合物對(duì)大黃冷浸液所致腹瀉的影響(n＝10)

**表示各組與對(duì)照組相比P＜0.01 △表示與空白對(duì)照組相比P＞0.05。
本試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明中藥組合物能減少大黃引起的小鼠排便增多，有止瀉作用。
實(shí)驗(yàn)例5本發(fā)明中藥組合物的鎮(zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn)方法1、藥物取本發(fā)明實(shí)施例6所得口服液備用，作為試驗(yàn)組。瀉痢停片(哈爾濱制藥六廠生產(chǎn)，批號(hào)960274)，作為對(duì)照組。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照(同體積生理鹽水)。
2、動(dòng)物及分組ICR小鼠，雌雄各半，體重22±3.6g，第一軍醫(yī)大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，合格證號(hào)97A026。小鼠40只隨機(jī)分為4組，即空白對(duì)照組、對(duì)照組，本發(fā)明中藥組合物低、高劑量組。
本發(fā)明中藥組合物按成人劑量折算小鼠劑量設(shè)置低劑量組1g/Kg、高劑量組4g/Kg；對(duì)照劑量0.25g/Kg。灌胃給藥。
試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見(jiàn)表7-8。
表7本發(fā)明中藥組合物對(duì)乙酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響(n＝10)

**表示各組與對(duì)照組相比P＜0.01 △表示與空白對(duì)照組相比P＞0.05，▲表示與對(duì)照組比較P＜0.05。
表8本發(fā)明中藥組合物對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用(甩尾法)(n＝10)

**表示各組與對(duì)照組相比P＜0.01。
本試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明中藥組合物具有鎮(zhèn)痛作用，能提高痛閾值。
實(shí)驗(yàn)例6本發(fā)明中藥組合物的抗炎作用實(shí)驗(yàn)方法1、藥物取實(shí)施例2所得散劑用滅菌蒸餾水制成濃度為0.5g/ml混懸液作為灌胃用，作為試驗(yàn)組。瀉痢停片(哈爾濱制藥六廠生產(chǎn)，批號(hào)960274)，作為對(duì)照組。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照(同體積生理鹽水)。
2、動(dòng)物及操作方法ICR小鼠，雌雄各半，體重22±3.6g，第一軍醫(yī)大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，合格證號(hào)97A026。小鼠40只隨機(jī)分為4組，即空白對(duì)照組、對(duì)照組，本發(fā)明中藥組合物低、高劑量組。
本發(fā)明中藥組合物按成人劑量折算小鼠劑量設(shè)置低劑量組1g/Kg、中劑量組2g/Kg、高劑量組4g/Kg；瀉痢停劑量0.25g/Kg。灌胃給藥。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見(jiàn)表9-10，本試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明中藥組合物能降低毛細(xì)血管通透性，有明顯的抗炎作用。
表9本發(fā)明中藥組合物小鼠毛細(xì)血管通透性的影響(n＝10)

**表示各組與對(duì)照組相比P＜0.01 △表示與空白對(duì)照組相比P＞0.05。
表10本發(fā)明中藥組合物對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓炎癥的影響(n＝10)

**表示各組與對(duì)照組相比P＜0.01 △表示與空白對(duì)照組相比P＞0.05。
實(shí)驗(yàn)例7本發(fā)明中藥組合物急性毒性試驗(yàn)試驗(yàn)方法藥物經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)測(cè)不出LD50，故按最大耐受量方法測(cè)定小鼠對(duì)本發(fā)明中藥組合物的最大耐受劑量(MTD)。藥物按最大溶解度，最大劑量配制成0.3g/ml，取20只健康昆明種小鼠，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)在室溫下進(jìn)行(溫度18-24℃，濕度為40％)，動(dòng)物喂以普通飼料。動(dòng)物灌胃藥量為15g/kg(0.3g/ml、1ml/只)，連續(xù)二次灌胃，每次0.5ml/只，間隔2小時(shí)。觀察并記錄24小時(shí)及1周內(nèi)動(dòng)物死亡情況及毒性反應(yīng)。
試驗(yàn)結(jié)果健康昆明小鼠20只，連續(xù)二次灌胃，總劑量為15g/kg，(相當(dāng)于體重人的劑量200倍)，24小時(shí)內(nèi)未見(jiàn)動(dòng)物死亡，繼續(xù)觀察一周，小鼠生理狀態(tài)未見(jiàn)異常，活動(dòng)、飲食、精神狀態(tài)、大小便等無(wú)異常，口腔、眼、鼻、無(wú)異常分泌物，心跳、呼吸正常。尸檢未見(jiàn)主要臟器病理學(xué)改變。
試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明中藥組合物臨床劑量0.075g/kg是安全的。
實(shí)驗(yàn)例8本發(fā)明中藥組合物長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)試驗(yàn)方法本發(fā)明中藥組合物臨床劑量0.075g/kg.d，試驗(yàn)設(shè)高劑量組7.5g/kg.d、中劑量組3.75g/kg.d、低劑量組1.5g/kg.d、對(duì)照組給同體積水。藥物均從每天上午8-9時(shí)灌胃給藥，每周給藥7天，并稱重一次，按體重變化調(diào)整給藥量，連續(xù)灌胃四周。
試驗(yàn)結(jié)果在試驗(yàn)期間內(nèi)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育良好，活動(dòng)及精神狀態(tài)無(wú)任何異常。動(dòng)物皮毛光澤，飲食正常，體重隨年齡增長(zhǎng)而增加，試驗(yàn)各組及對(duì)照組動(dòng)物體重增長(zhǎng)數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)顯著性差異。數(shù)據(jù)見(jiàn)表11。
表11連續(xù)給藥二十八天大鼠體重變化(X±SD.g)

按7.5g/kg.d、3.75g/kg.d、1.5g/kg.d、給大鼠灌胃28天后，對(duì)大鼠飲食、體重增長(zhǎng)、血尿常規(guī)及主要臟器系數(shù)無(wú)顯著影響。生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析表明，除高劑量組膽紅素增高外，其它各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較均無(wú)顯著差異。停藥后兩周，高劑量組膽紅素恢復(fù)正常。病理診斷結(jié)果顯示，大鼠給藥28天后，對(duì)心、肝、肺、脾、腎、胃、大腸、甲狀腺、腎上腺、性器官等臟器組織的結(jié)構(gòu)無(wú)明顯病理改變。綜合各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果，連續(xù)灌胃大鼠28天對(duì)動(dòng)物未產(chǎn)生明顯的毒副反應(yīng)，表明本發(fā)明中藥組合物臨床給藥劑量是安全的。
實(shí)驗(yàn)例9臨床療效對(duì)比用本發(fā)明中藥組合物治療感染性腹瀉的臨床觀察，并與瀉痢停(瀉痢停片，哈爾濱制藥六廠生產(chǎn)，批號(hào)960274)對(duì)照，結(jié)果本發(fā)明中藥組合物組，止瀉最短時(shí)間為12小時(shí)，最長(zhǎng)3天，24小時(shí)止瀉率為87.3％，3天所有病人止瀉。瀉痢停組，止瀉時(shí)間最短24小時(shí)，最長(zhǎng)5天，24小時(shí)止瀉率為74.3％，本發(fā)明中藥組合物明顯優(yōu)于瀉痢停組，P＜0.05。
實(shí)驗(yàn)例10本發(fā)明中藥組合物治療急性感染性腹瀉的臨床研究1、試驗(yàn)藥品試驗(yàn)組急瀉康膠囊，每粒0.35g，每次5粒，每日3次，口服。
對(duì)照組葛根芩連膠囊，每粒0.4g，每次4粒，每日3次，口服。選用葛根芩連膠囊(由安徽東南藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)(97)衛(wèi)藥準(zhǔn)字Z-086號(hào))作為陽(yáng)性對(duì)照。葛根芩連膠囊是由傳統(tǒng)的葛根黃芩黃連湯的原方提煉而成。葛根芩連湯是最新規(guī)范普通高等教育《中醫(yī)內(nèi)科學(xué)》教材中治療泄瀉濕熱證的主方，所以在傳統(tǒng)藥物中是金對(duì)照。
兩組療程均為3天。試驗(yàn)期間均不得使用氟哌酸、痢特靈、百炎凈、黃連素、瀉痢停、藿香正氣丸等治療腹瀉的中西藥物。
2、受試者選擇(1)納入標(biāo)準(zhǔn)a、符合上述中醫(yī)辨證及西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)者；b、年齡在18～65歲；c、病程不超過(guò)24小時(shí)者；d、大便常規(guī)檢查發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞或膿細(xì)胞及紅細(xì)胞者，或ELISA法檢測(cè)出患者糞便中有輪狀病毒特異性抗原者；或用PCR法快速檢出ETEC基因片段者；e、受試者或受試者指定代理人簽署知情同意書(shū)后。
(2)病例入組情況表12各中心病例分布情況

注釋①中心一為廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院；中心二為浙江省中醫(yī)院；中心三為江西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院；中心四為湖南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院；中心五為福建中醫(yī)藥研究院。
如表12所示，試驗(yàn)組為396例，對(duì)照組為132例，共528例。其中試驗(yàn)組脫落1例，對(duì)照組脫落1例，共2例。試驗(yàn)組剔除5例，對(duì)照組剔除2例，共7例。脫落率為0.37％、剔除率為1.33％。
(3)統(tǒng)計(jì)病例情況表13統(tǒng)計(jì)病例情況

如表13所示進(jìn)入ITT集的有522例，試驗(yàn)組為392例，對(duì)照組為130例；進(jìn)入PP集的有519例，試驗(yàn)組為390例，對(duì)照組為129例；進(jìn)入安全集的有524例，試驗(yàn)組為393例，對(duì)照組為131例。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)濕熱證兩組臨床療效總有效率的比較表14濕熱證兩組臨床療效總有效率的比較

注不考慮中心效應(yīng)如表14所示，ITT數(shù)據(jù)集治療濕熱證試驗(yàn)組總有效率86.73％，對(duì)照組總有效率82.31％；PP數(shù)據(jù)集試驗(yàn)組總有效率86.67％，對(duì)照組總有效率82.95％，兩組臨床總有效率比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
(2)對(duì)致瀉性大腸桿菌性腸炎臨床總有效率的比較表15對(duì)致瀉性大腸桿菌性腸炎臨床總有效率的比較

注不考慮中心效應(yīng)如表15所示，ITT數(shù)據(jù)集試驗(yàn)組對(duì)致瀉性大腸桿菌性腸炎總有效率91.24％，對(duì)照組總有效率81.25％，比較具有顯著差異(P＜0.05)。PP數(shù)據(jù)集試驗(yàn)組總有效率91.19％，對(duì)照組總有效率82.54％，比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
(3)對(duì)輪狀病毒性腸炎臨床總有效率的比較表16輪狀病毒性腸炎臨床總有效率的比較

注不考慮中心效應(yīng)如表16所示，ITT數(shù)據(jù)集試驗(yàn)組對(duì)輪狀病毒性腸炎總有效率為82.32％，對(duì)照組總有效率83.33％；PP數(shù)據(jù)集試驗(yàn)組總有效率82.23％，對(duì)照組總有效率83.33％，比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。見(jiàn)表16。
(4)兩組治療后生命體征指標(biāo)的比較表17兩組治療后生命體征的比較

如表17所示，兩組間治療后生命體征指標(biāo)的均值比較，兩組組內(nèi)比較，收縮壓和舒張壓無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，心率、脈搏和呼吸有顯著性差異(P＜0.01)，但是無(wú)臨床意義。兩組治療前后差值的比較，呼吸、收縮壓和舒張壓無(wú)顯著差異(P＞0.05)，心率和脈搏有顯著性差異(P＜0.05)，但是無(wú)臨床意義。
(5)治療前、后安全性檢查指標(biāo)正、異?；蜿幮?、陽(yáng)性情況的比較表18兩組治療前血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能及心電圖正常、異常的比較


如表18所示，兩組治療前各項(xiàng)檢查指標(biāo)的正常、異常情況比較，所有指標(biāo)均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
(6)兩組治療后血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能及心電圖正常、異常情況的比較表19兩組治療后血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能及心電圖正常、異常的比較


如表19示，兩組治療后血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能及心電圖正常、異常情況的比較，均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
(7)兩組治療后血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能及心電圖轉(zhuǎn)正常率、轉(zhuǎn)異常率的比較表20兩組治療后血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能及心電圖轉(zhuǎn)正常率、轉(zhuǎn)異常率的比較


注-/-表示治療前正常，療后仍正常；-/+表示治療前正常，療后變異常；+/-表示治療前異常，治療后轉(zhuǎn)正常；+/+表示治療前異常，治療后仍異常如表20所示，兩組治療后血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能及心電圖的治療前正常轉(zhuǎn)異常率、治療前異常轉(zhuǎn)正常率的比較，均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
(8)不良反應(yīng)情況記錄表21不良反應(yīng)情況記錄

(9)不良反應(yīng)的發(fā)生率表22不良反應(yīng)的發(fā)生率比較

如表22所示，兩組不良反應(yīng)的發(fā)生率比較，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
4、研究結(jié)論根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本發(fā)明的中藥組合物治療急性感染性腹瀉(濕熱證)有良好的療效，作用與對(duì)照藥(葛根芩連膠囊)一致；對(duì)輪狀病毒性腸炎的臨床療效(按臨床痊愈、顯效、有效、無(wú)效分級(jí))，試驗(yàn)組優(yōu)于對(duì)照組；對(duì)輪狀病毒轉(zhuǎn)陰率，試驗(yàn)組亦優(yōu)于對(duì)照組。試驗(yàn)藥安全性好，不良反應(yīng)輕微。
權(quán)利要求
1.一種治療腹瀉病的中藥組合物，它是由有效成分和/或藥學(xué)上可接受的輔料組成，其特征在于，所述的有效成分是由按重量份配比的下列原料制成黃連27-62、黃芩27-62、白芍27-62、廣藿香15-43、番石榴葉60-120、茯苓27-62。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，所述的有效成分是由按重量份配比的下列原料制成黃連27-62、黃芩27-62、自芍27-62、廣藿香15-43、番石榴葉60-120、茯苓27-62。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，所述的有效成分是由按重量份配比的下列原料制成黃連45、黃芩45、自芍45、廣藿香30、番石榴葉90、茯苓45。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，它是散劑、膠囊、片劑、口服液、顆粒劑、丸劑、滴丸、軟膠囊、泡騰片或包衣丸劑。
5.一種制備權(quán)利要求4所述的中藥組合物的方法，它包括如下步驟(1)取黃連，按重量計(jì)用量比1∶5-15加入乙醇溶液，加熱回流，過(guò)濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮液噴霧干燥成細(xì)粉A備用；(2)取黃芩、白芍、廣藿香、番石榴葉、茯苓，按重量計(jì)用量比1∶5-15加入水，煎煮，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，烘干，制成B備用；(3)將A與B混勻，直接制成或與藥學(xué)上可接受的輔料制成不同劑型。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，其中步驟(2)中濾液減壓濃縮是在30-80℃溫度下濃縮至濾液相對(duì)密度為1.10-1.16。
7.權(quán)利要求1-4之任一所述的中藥組合物在制備治療腹瀉病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療腹瀉病的中藥組合物，是由黃連、黃芩、白芍、廣藿香、番石榴葉、茯苓為原料制成。它具有清熱解毒、燥濕止瀉的功效，既能殺滅致瀉病原菌又能滅活致瀉病毒，治療急性感染性腹瀉高效、速效、安全、無(wú)毒。
文檔編號(hào)A61K36/076GK1772081SQ20051008680
公開(kāi)日2006年5月17日 申請(qǐng)日期2005年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月7日
發(fā)明者黃輝球 申請(qǐng)人:惠州九惠制藥廠