專利名稱：Iap抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可用于哺乳動物療法和/或預(yù)防的有機化合物，特別是可用于治療癌癥的IAP蛋白抑制劑。
背景技術(shù)：
程序性細胞死亡(Apoptosis)或編程性細胞死亡是一種受遺傳和生化調(diào)節(jié)的機理，它在無脊椎動物以及脊椎動物的發(fā)育和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中扮演重要角色。引起過早細胞死亡的程序性細胞死亡異常已經(jīng)與多種發(fā)育障礙有聯(lián)系。導(dǎo)致細胞死亡缺乏的程序性細胞死亡缺陷已經(jīng)與癌癥和慢性病毒感染有聯(lián)系(Thompson et al.，(1995)Science 267，1456-1462)。
程序性細胞死亡中關(guān)鍵的效應(yīng)器分子之一是胱天蛋白酶(caspases)(含有天冬氨酸特異性蛋白酶的半胱氨酸)。胱天蛋白酶是強大的蛋白酶，在天冬氨酸殘基之后裂解，并且一旦被活化，消化細胞內(nèi)的生命細胞蛋白質(zhì)。由于胱天蛋白酶是如此強大的蛋白酶，牢牢控制這種蛋白質(zhì)家族是防止過早細胞死亡所必需的。一般而言，胱天蛋白酶是作為多半無活性的酶原而被合成的，它們需要蛋白酶解加工，目的是成為有活性的。這種蛋白酶解加工是調(diào)節(jié)胱天蛋白酶的唯一方式。第二機理是通過結(jié)合和抑制胱天蛋白酶的蛋白質(zhì)家族。
抑制胱天蛋白酶的分子家族是程序性細胞死亡抑制劑(IAP)(Deverauxet al.，J Clin Immunol(1999)，19388-398)。IAP最初是由于它們?nèi)〈鶳35蛋白的功能能力而在桿狀病毒中被發(fā)現(xiàn)的，P35是一種抗程序性細胞死亡基因(Crook et al.(1993)J Virology 67，2168-2174)。IAP廣泛分布在從果蠅到人類的生物體中。與它們的來源無關(guān)，在結(jié)構(gòu)上，IAP包含一至三個桿狀病毒IAP重復(fù)(BIR)結(jié)構(gòu)域，它們大多數(shù)也具備羧基-末端的RING指針基序。BIR結(jié)構(gòu)域本身是約70個殘基的鋅結(jié)合性結(jié)構(gòu)域，包含4條α-螺旋和3條β鏈，具有配位鋅離子的半胱氨酸和組氨酸殘基(Hinds et al.，(1999)Nat.Struct.Biol.6，648-651)。正是BIR結(jié)構(gòu)域被相信通過抑制胱天蛋白酶、從而抑制程序性細胞死亡而導(dǎo)致抗程序性細胞死亡效應(yīng)。舉例而言，人X-染色體連接的IAP(XIAP)抑制胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶7和Apaf-1-細胞色素C介導(dǎo)的胱天蛋白酶9活化(Deveraux et al.，(1998)EMBO J.17，2215-2223)。胱天蛋白酶3和7受到XIAP的BIR2結(jié)構(gòu)域的抑制，而XIAP的BIR3結(jié)構(gòu)域負責(zé)胱天蛋白酶9活性的抑制。XIAP普遍在大多數(shù)成人和胎兒組織中被表達(Liston et al，Nature，1996，379(6563)349)，在NCI60細胞系組的大量腫瘤細胞系中被過度表達(Fong et al，Genomics，2000，70113；Tamm et al，Clin.Cancer Res.2000，6(5)1796)。XIAP在腫瘤細胞中的過度表達已被證明賦予對抗多種促程序性細胞死亡性刺激的保護作用，促進對化學(xué)療法的抵抗性(LaCasse et al，Oncogene，1998，17(25)3247)。與此相一致，XIAP蛋白水平與存活之間的密切相互關(guān)系已經(jīng)在急性骨髓性白血病患者中得到證明(Tamm et al，supra)。反義寡核苷酸對XIAP表達的減量調(diào)節(jié)已經(jīng)顯示體外和體內(nèi)使腫瘤細胞敏感于由廣泛多種促程序性細胞死亡劑誘導(dǎo)的死亡(Sasakiet al，Cancer Res.，2000，60(20)5659；Lin et al，Biochem J.，2001，353299；Huet al，Clin.Cancer Res.，2003，9(7)2826)。Smac/DIABLO-衍生的肽已被證明使大量不同的腫瘤細胞系敏感于由多種促程序性細胞死亡藥誘導(dǎo)的程序性細胞死亡(Arnt et al，J.Biol.Chem.，2002，277(46)44236；Fulda et al，NatureMed.，2002，8(8)808；Guo et al，Blood，2002，99(9)3419；Vucic et al，J.Biol.Chem.，2002，277(14)12275；Yang et al，Cancer Res.，2003，63(4)831)。
黑素瘤IAP(ML-IAP)是在大多數(shù)正常成人組織中不可檢測的IAP，但是在黑素瘤中被強烈地增量調(diào)節(jié)(Vucic et al.，(2000)Current Bio101359-1366)。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的測定證明了ML-IAP BIR和RING指針結(jié)構(gòu)域(finger domain)與存在于人XIAP、C-IAP1和C-IAP2中的相應(yīng)結(jié)構(gòu)域之間顯著的同源性。ML-IAP的BIR結(jié)構(gòu)域似乎對XIAP的BIR2與BIR3、C-IAP1和C-IAP2具有最多的相似性，并且似乎負責(zé)程序性細胞死亡的抑制，這是根據(jù)缺失分析所測定的。此外，Vucic等證明，ML-IAP可能抑制化學(xué)治療劑誘導(dǎo)的程序性細胞死亡。在過度表達ML-IAP的黑素瘤細胞培養(yǎng)系統(tǒng)中測試了諸如阿霉素和4-叔丁基苯酚(4-TBP)等藥物，在與正常黑素細胞對照相比較時，這些化學(xué)治療劑在殺死細胞上沒有顯著效果。ML-IAP產(chǎn)生抗程序性細胞死亡活性的機理在部分程度上借助胱天蛋白酶3和9的抑制。ML-IAP沒有有效地抑制胱天蛋白酶1、2、6或8。
由于程序性細胞死亡是由多個作用因素的嚴格控制途徑，調(diào)節(jié)IAP本身的發(fā)現(xiàn)并非非比尋常。在果蠅中，收割蛋白(rpr)、頭部退化缺陷性(hid)和GRIM蛋白在物理上作用于和抑制果蠅家族IAP的抗程序性細胞死亡活性。在哺乳動物中，蛋白質(zhì)SMAC/DIABLO起到阻滯IAP和允許程序性細胞死亡進行的作用。在正常的程序性細胞死亡期間，SMAC被加工成活性形式，從線粒體中釋放到細胞質(zhì)中，在那里它在物理上與IAP結(jié)合，并且防止IAP與胱天蛋白酶結(jié)合。IAP的這種抑制作用允許胱天蛋白酶保留活性，從而進行程序性細胞死亡。有趣地，IAP抑制劑之間的序列同源性表明，在經(jīng)過加工的活性蛋白質(zhì)的N-末端中存在四個氨基酸的基序。這種四肽似乎結(jié)合到BIR結(jié)構(gòu)域的疏水性袋中，破壞BIR結(jié)構(gòu)域與胱天蛋白酶結(jié)合(Chai et al.，(2000)Nature 406855-862，Liu et al.，(2000)Nature 4081004-1008，Wu et al.，(2000)Nature 408 1008-1012)。
發(fā)明概述本發(fā)明在一方面提供新穎的具有通式(I)的IAP蛋白抑制劑 其中X1、X2和X3獨立地是O或S；Y是(CHR7)n、O或S；其中n是1或2，R7是H、鹵素、烷基、芳基、芳烷基、氨基、芳基氨基、烷基氨基、芳烷基氨基、烷氧基、芳氧基或芳烷氧基；A是包含1至4個雜原子的5-元雜環(huán)，任選地被氨基、羥基、巰基、鹵素、羧基、脒基、胍基、烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、?；ⅤＱ趸?、酰基氨基、烷氧基羰基氨基、環(huán)烷基、烷硫基、烷基亞磺?；?、烷基磺?；?、氨基磺?；?、烷基氨基磺?；⑼榛酋０被螂s環(huán)取代；其中每個烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、?；?、酰氧基、?；被?、環(huán)烷基和雜環(huán)取代基任選地被羥基、鹵素、巰基、羧基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、氨基、硝基、氰基、環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)取代；R1是H，或者R1和R2一起構(gòu)成5-8元環(huán)；R2是烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；各自任選地被羥基、巰基、鹵素、氨基、羧基、烷基、鹵代烷基、烷氧基或烷硫基取代；R3是H，或者烷基；R4和R4’獨立地是H、羥基、氨基、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜芳基或雜芳基烷基，其中每個烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜芳基和雜芳基烷基任選地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、烷氧基、氨基和硝基取代；R5和R5’各自獨立地是H或烷基；R6和R6’各自獨立地是H、烷基、芳基或芳烷基；及其鹽和溶劑化物。
本發(fā)明在另一方面提供包含式I化合物和載體、稀釋劑或賦形劑的組合物。
本發(fā)明在另一方面提供誘導(dǎo)細胞中的程序性細胞死亡的方法，包含向所述細胞引入式I化合物。
本發(fā)明在另一方面提供使細胞敏感于程序性細胞死亡信號的方法，包含向所述細胞引入式I化合物。
本發(fā)明在另一方面提供抑制IAP蛋白與胱天蛋白酶蛋白結(jié)合的方法，包含使所述IAP蛋白與式I化合物接觸。
本發(fā)明在另一方面提供治療哺乳動物與IAP蛋白過度表達有關(guān)的疾病或病癥的方法，包含對所述哺乳動物給予有效量的式I化合物。
優(yōu)選實施方式的詳細說明“烷基”表示支化或未支化、飽和或不飽和的(即烯基、炔基)脂族烴基團，除非另有指定具有至多12個碳原子。當(dāng)作為另一術(shù)語的一部分使用時，例如“烷基氨基”，該烷基部分優(yōu)選地是飽和的烴鏈，不過也包括不飽和的烴碳鏈，例如“烯基氨基”和“炔基氨基”。優(yōu)選的烷基的實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、2，2-二甲基丙基、正己基、2-甲基戊基、2，2-二甲基丁基、正庚基、3-庚基、2-甲基己基等。術(shù)語“低級烷基”、“C1-C4烷基”和“1至4個碳原子的烷基”是同義的，可互換地用于表示甲基、乙基、1-丙基、異丙基、環(huán)丙基、1-丁基、仲丁基或叔丁基。除非另有指定，取代的烷基可以含有一個(優(yōu)選)、兩個、三個或四個取代基，它們可以是相同或不同的。上述取代的烷基的實例包括但不限于氰基甲基、硝基甲基、羥甲基、三苯甲氧基甲基、丙酰氧基甲基、氨甲基、羧甲基、羧基乙基、羧基丙基、烷氧基羰基甲基、烯丙氧基羰基氨甲基、氨甲酰氧基甲基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、叔丁氧基甲基、乙酰氧基甲基、氯甲基、溴甲基、碘甲基、三氟甲基、6-羥基己基、2，4-二氯(正丁基)、2-氨基(異丙基)、2-氨甲酰氧基乙基等。烷基也可以被碳環(huán)基團取代。實例包括環(huán)丙基甲基、環(huán)丁基甲基、環(huán)戊基甲基和環(huán)己基甲基，以及對應(yīng)的-乙基、-丙基、-丁基、-戊基、-己基等。優(yōu)選的取代的烷基是取代的甲基，例如被與“取代的Cn-Cm烷基”相同的取代基取代的甲基。取代的甲基的實例包括羥甲基、被保護的羥甲基(例如四氫吡喃氧基甲基)、乙酰氧基甲基、氨甲酰氧基甲基、三氟甲基、氯甲基、羧甲基、溴甲基和碘甲基。
“脒”表示基團-C(NH)-NHR，其中R是H，或者烷基或芳烷基。優(yōu)選的脒是基團-NH-C(NH)-NH2。
“氨基”表示伯(即NH2)、仲(即-NRH)和叔(即-NRR)胺。優(yōu)選的仲和叔胺是烷基胺、二烷基胺、芳基胺、二芳基胺、芳烷基胺和二芳烷基胺。特別優(yōu)選的仲和叔胺是甲胺、乙胺、丙胺、異丙胺、苯胺、芐胺、二甲胺、二乙胺、二丙胺和二異丙胺。
本文所用的“氨基-保護基團”表示普遍用于封端或保護氨基的基團衍生物，同時反應(yīng)是在該化合物的其他官能團上進行的。這類保護基團的實例包括氨基甲酸酯、酰胺、烷基與芳基、亞胺以及很多N-雜原子衍生物，它們可以被除去而生成所需的胺基團。優(yōu)選的氨基保護基團是Boc、Fmoc和Cbz。這些基團的進一步實例參見T.W.Greene and P.G.M.Wuts，“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”，2nded.，John Wiley & Sons，Inc.，New York，NY，1991，chapter 7；E.Haslam，“Protective Groups in Organic Chemistry”，J.G.W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，NY，1973，Chapter 5，和T.W.Greene，“Protective Groups in Organic Synthesis”，John Wiley and Sons，New York，NY，1981。術(shù)語“被保護的氨基”表示被上述氨基-保護基團之一取代的氨基。
“芳基”當(dāng)單獨或者作為另一術(shù)語的一部分使用時表示碳環(huán)芳族基團，無論稠合與否都具有所指明的碳原子數(shù)，或者如果沒有指明數(shù)量則具有至多14個碳原子。優(yōu)選的芳基包括苯基、萘基、聯(lián)苯、菲基、并四苯基等(例如參見Lang’s Handbook of Chemistry(Dean，J.A.，ed)13thed.Table 7-2)，最優(yōu)選苯基。取代的苯基或取代的芳基表示被一個、兩個、三個、四個或五個、優(yōu)選1-2、1-3或1-4個所選取代基取代的苯基或芳基，除非另有指定，取代基選自鹵素(F，Cl，Br，I)、羥基、被保護的羥基、氰基、硝基、烷基(優(yōu)選C1-C6烷基)、烷氧基(優(yōu)選C1-C6烷氧基)、芐氧基、羧基、被保護的羧基、羧甲基、被保護的羧甲基、羥甲基、被保護的羥甲基、氨甲基、被保護的氨甲基、三氟甲基、烷基磺酰氨基、芳基磺酰氨基、雜環(huán)基磺酰氨基、雜環(huán)基、芳基或者其他所指定的基團。這些取代基中的一個或多個次甲基(CH)和/或亞甲基(CH2)可以繼而被與上述那些相似的基團取代。術(shù)語“取代的苯基”的實例包括但不限于單或二(鹵代)苯基，例如2-氯苯基、2-溴苯基、4-氯苯基、2，6-二氯苯基、2，5-二氯苯基、3，4-二氯苯基、3-氯苯基、3-溴苯基、4-溴苯基、3，4-二溴苯基、3-氯-4-氟苯基、2-氟苯基等；單或二(羥基)苯基，例如4-羥基苯基、3-羥基苯基、2，4-二羥基苯基、其被保護的羥基衍生物等；硝基苯基，例如3-或4-硝基苯基；氰基苯基，例如4-氰基苯基；單或二(低級烷基)苯基，例如4-甲基苯基、2，4-二甲基苯基、2-甲基苯基、4-(異丙基)苯基、4-乙基苯基、3-(正丙基)苯基等；單或二(烷氧基)苯基，例如3，4-二甲氧基苯基、3-甲氧基-4-芐氧基苯基、3-甲氧基-4-(1-氯甲基)芐氧基-苯基、3-乙氧基苯基、4-(異丙氧基)苯基、4-(叔丁氧基)苯基、3-乙氧基-4-甲氧基苯基等；3-或4-三氟甲基苯基；單或二羧基苯基或者(被保護的羧基)苯基，例如4-羧基苯基；單或二(羥甲基)苯基或者(被保護的羥甲基)苯基，例如3-(被保護的羥甲基)苯基或3，4-二(羥甲基)苯基；單或二(氨甲基)苯基或者(被保護的氨甲基)苯基，例如2-(氨甲基)苯基或2，4-(被保護的氨甲基)苯基；或者單或二(N-(甲基磺酰氨基))苯基，例如3-(N-甲基磺酰氨基)苯基。而且，術(shù)語“取代的苯基”代表二取代的苯基，其中取代基是不同的，例如3-甲基-4-羥基苯基、3-氯-4-羥基苯基、2-甲氧基-4-溴苯基、4-乙基-2-羥基苯基、3-羥基-4-硝基苯基、2-羥基-4-氯苯基等，以及三取代的苯基，其中取代基是不同的，例如3-甲氧基-4-芐氧基-6-甲基磺酰氨基、3-甲氧基-4-芐氧基-6-苯基磺酰氨基，和四取代的苯基，其中取代基是不同的，例如3-甲氧基-4-芐氧基-5-甲基-6-苯基磺酰氨基。優(yōu)選的取代的苯基包括2-氯苯基、2-氨基苯基、2-溴苯基、3-甲氧基苯基、3-乙氧基-苯基、4-芐氧基苯基、4-甲氧基苯基、3-乙氧基-4-芐氧基苯基、3，4-二乙氧基苯基、3-甲氧基-4-芐氧基苯基、3-甲氧基-4-(1-氯甲基)芐氧基-苯基、3-甲氧基-4-(1-氯甲基)芐氧基-6-甲基磺酰氨基苯基。稠合的芳基環(huán)也可以被任意的、優(yōu)選1、2或3個本文以與取代的烷基相同的方式所指定的取代基取代。
“碳環(huán)基”、“碳環(huán)的”、“碳環(huán)”和“碳環(huán)并”單獨和作為復(fù)雜基團中的片段使用時，例如碳環(huán)烷基，表示單、二或三環(huán)的脂族環(huán)，具有3至14個碳原子，優(yōu)選3至7個碳原子，它可以是飽和或不飽和的、芳族或非芳族的。優(yōu)選的飽和碳環(huán)基團包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基，更優(yōu)選的是環(huán)丙基和環(huán)己基，最優(yōu)選的是環(huán)己基。優(yōu)選的不飽和碳環(huán)是芳族的，例如前文所定義的芳基，最優(yōu)選的是苯基。術(shù)語“取代的碳環(huán)基”、“碳環(huán)”和“碳環(huán)并”表示被與“取代的烷基”相同的取代基取代的這些基團。
本文所用的“羧基-保護基團”表示普遍用于封端或保護羧酸基團的羧酸酯衍生物之一，同時反應(yīng)是在該化合物的其他官能團上進行的。這類羧酸保護基團的實例包括4-硝基芐基、4-甲氧基芐基、3，4-二甲氧基芐基、2，4-二甲氧基芐基、2，4，6-三甲氧基芐基、2，4，6-三甲基芐基、五甲基芐基、3，4-亞甲二氧基芐基、二苯甲基、4，4’-二甲氧基二苯甲基、2，2’，4，4’-四甲氧基二苯甲基、烷基(例如叔丁基或叔戊基)、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4，4’-二甲氧基三苯甲基、4，4’，4”-三甲氧基三苯甲基、2-苯基丙-2-基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苯甲酰甲基、2，2，2-三氯乙基、β-(三甲基甲硅烷基)乙基、β-(二(正丁基)甲基甲硅烷基)乙基、對-甲苯磺?；一?、4-硝基芐基磺酰基乙基、烯丙基、肉桂基、1-(三甲基甲硅烷基甲基)丙-1-烯-3-基等片段。所采用的羧基-保護基團的品種不是關(guān)鍵，只要所衍生的羧酸穩(wěn)定于隨后在該分子其他位置上的反應(yīng)的條件，并且能夠在適當(dāng)?shù)臅r間點除去而不破壞分子其余部分。特別重要的是不使羧基-保護的分子受到強親核性堿的作用，例如氫氧化鋰或NaOH，或者采用高度活化的金屬氫化物的還原性條件的作用，例如LiAlH4(在除去氨基-保護基團和羥基-保護基團時，也要避免這類嚴格的除去條件，參見下文討論)。優(yōu)選的羧酸保護基團是烷基(例如甲基、乙基、叔丁基)、烯丙基、芐基和對-硝基芐基。用在頭孢菌素、青霉素和肽領(lǐng)域中的相似羧基-保護基團也可以用于保護羧基取代基。這些基團的進一步實例參見T.W.Greene and P.G.M.Wuts，“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”，2nded.，John Wiley & Sons，Inc.，New York，N.Y.，1991，chapter 5；E.Haslam，“Protective Groups in Organic Chemistry”，J.G.W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，N.Y，1973，Chapter 5，和T.W.Greene，“Protective Groups in Organic Synthesis”，John Wiley and Sons，New York，NY，1981，Chapter 5。術(shù)語“被保護的羧基”表示被上述羧基-保護基團之一取代的羧基。
“胍”表示基團-NH-C(NH)-NHR，其中R是H，或者烷基或芳烷基。優(yōu)選的胍是基團-NH-C(NH)-NH2。
本文所用的“羥基-保護基團”表示普遍用于封端或保護羥基的羥基基團衍生物，同時反應(yīng)是在該化合物的其他官能團上進行的。這類保護基團的實例包括四氫吡喃氧基、苯甲酰基、乙酰氧基、氨甲酰氧基、芐基和甲硅烷基醚(例如TBS、TBDPS)基團。這些基團的進一步實例參見T.W.Greeneand P.G.M.Wuts，“Protective Groups in Organic Synthesis”，2nded.，John Wiley& Sons，Inc.，New York，NY.1991，chapters 2-3；E.Haslam，“Protective Groupsin Organic Chemistry”，J.G.W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，NY，1973，Chapter 5，和T.W.Greene，“Protective Groups in Organic Synthesis”，John Wiley and Sons，New York，NY，1981。術(shù)語“被保護的羥基”表示被上述羥基-保護基團之一取代的羥基。
“雜環(huán)基團”、“雜環(huán)的”、“雜環(huán)”、“雜環(huán)基”或“雜環(huán)并”單獨和當(dāng)作為復(fù)雜基團中的片段使用時，例如雜環(huán)烷基，是可互換使用的，表示任何單、二或三環(huán)的、飽和或不飽和的、芳族(雜芳基)或非芳族環(huán)，具有所指明的原子數(shù)，一般為5至約14個環(huán)原子，其中這些環(huán)原子是碳和至少一個雜原子(氮、硫或氧)，優(yōu)選1至4個雜原子。通常，5-元環(huán)具有0至2條雙鍵，6-或7-元環(huán)具有0至3條雙鍵，氮或硫雜原子可以任選地被氧化(例如SO、SO2)，任何氮雜原子可以任選地被季銨化。優(yōu)選的非芳族雜環(huán)包括嗎啉基(嗎啉代基)、吡咯烷基、環(huán)氧乙烷基、氧雜環(huán)丁烷基、四氫呋喃基、2 ，3-二氫呋喃基、2H-吡喃基、四氫吡喃基、硫雜環(huán)丙烷基、硫雜環(huán)丁烷基(thietanyl)、四氫硫雜環(huán)丁烷基、環(huán)乙亞氨基、氮雜環(huán)丁烷基、1-甲基-2-吡咯基、哌嗪基和哌啶基?！半s環(huán)烷基”是如上所定義的雜環(huán)基，共價鍵合于如上所定義的烷基。優(yōu)選的含有硫或氧原子和一至三個氮原子的5-元雜環(huán)包括噻唑基，特別是噻唑-2-基和噻唑-2-基N-氧化物；噻二唑基，特別是1，3，4-噻二唑-5-基和1，2，4-噻二唑-5-基；唑基，優(yōu)選唑-2-基；和二唑基，例如1，3，4-二唑-5-基和1，2，4-二唑-5-基。優(yōu)選的含有2至4個氮原子的5-元雜環(huán)包括咪唑基，優(yōu)選咪唑-2-基；三唑基，優(yōu)選1，3，4-三唑-5-基、1，2，3-三唑-5-基、1，2，4-三唑-5-基；和四唑基，優(yōu)選1H-四唑-5-基。優(yōu)選的苯并-稠合5-元雜環(huán)是苯并唑-2-基、苯并噻唑-2-基和苯并咪唑-2-基。優(yōu)選的6-元雜環(huán)含有一至三個氮原子和可選的硫或氧原子，例如吡啶基，例如吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4-基；嘧啶基，優(yōu)選嘧啶-2-基和嘧啶-4-基；三嗪基，優(yōu)選1，3，4-三嗪-2-基和1，3，5-三嗪-4-基；噠嗪基，特別是噠嗪-3-基；和吡嗪基。吡啶N-氧化物與噠嗪N-氧化物和吡啶基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、噠嗪基和1，3，4-三嗪-2-基是優(yōu)選的基團?？蛇x被取代的雜環(huán)的取代基和如上所討論的5-與6-元環(huán)系的進一步實例可以參見W.Druckheimer et al.，美國專利No.4,278,793。
“雜芳基”單獨和當(dāng)作為復(fù)雜基團中的片段使用時，例如雜芳烷基，表示任何單、二或三環(huán)的芳族環(huán)系，具有所指明的原子數(shù)，其中至少一個環(huán)是5-、6-或7-元環(huán)，含有一至四個選自氮、氧和硫的雜原子，并且優(yōu)選地至少一個雜原子是氮(Lang’s Handbook of Chemistry，supra)。在該定義中包括任何二環(huán)基團，其中任何上述雜芳基環(huán)與苯環(huán)稠合。其中氮或氧是雜原子的雜芳基是優(yōu)選的。下列環(huán)系是由術(shù)語“雜芳基”所表示的雜芳基的實例(無論取代或未取代)噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、異噻唑基、唑基、異唑基、三唑基、噻二唑基、二唑基、四唑基、噻三唑基、三唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、噻嗪基、嗪基、三嗪基、噻二嗪基、二嗪基、二噻嗪基、二嗪基、噻嗪基、四嗪基、噻三嗪基、三嗪基、二噻二嗪基、咪唑啉基、二氫嘧啶基、四氫嘧啶基、四唑并[1，5-b]噠嗪基和嘌呤基，以及苯并-稠合的衍生物，例如苯并唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、苯并咪唑基和吲哚基。特別優(yōu)選的“雜芳基”包括1，3-噻唑-2-基、4-(羧基甲基)-5-甲基-1，3-噻唑-2-基、4-(羧基甲基)-5-甲基-1，3-噻唑-2-基鈉鹽、1，2，4-噻二唑-5-基、3-甲基-1，2，4-噻二唑-5-基、1，3，4-三唑-5-基、2-甲基-1，3，4-三唑-5-基、2-羥基-1，3，4-三唑-5-基、2-羧基-4-甲基-1，3，4-三唑-5-基鈉鹽、2-羧基-4-甲基-1，3，4-三唑-5-基、1，3-唑-2-基、1，3，4-二唑-5-基、2-甲基-1，3，4-二唑-5-基、2-(羥基甲基)-1，3，4-二唑-5-基、1，2，4-二唑-5-基、1，3，4-噻二唑-5-基、2-硫代-1，3，4-噻二唑-5-基、2-(甲硫基)-1，3，4-噻二唑-5-基、2-氨基-1，3，4-噻二唑-5-基、1H-四唑-5-基、1-甲基-1H-四唑-5-基、1-(1-(二甲氨基)乙-2-基)-1H-四唑-5-基、1-(羧基甲基)-1H-四唑-5-基、1-(羧基甲基)-1H-四唑-5-基鈉鹽、1-(甲基磺酸)-1H-四唑-5-基、1-(甲基磺酸)-1H-四唑-5-基鈉鹽、2-甲基-1H-四唑-5-基、1，2，3-三唑-5-基、1-甲基-1，2，3-三唑-5-基、2-甲基-1，2，3-三唑-5-基、4-甲基-1，2，3-三唑-5-基、吡啶-2-基N-氧化物、6-甲氧基-2-(n-氧化物)-噠嗪-3-基、6-羥基噠嗪-3-基、1-甲基吡啶-2-基、1-甲基吡啶-4-基、2-羥基嘧啶-4-基、1，4，5，6-四氫-5，6-二氧代-4-甲基-as-三嗪-3-基、1，4，5，6-四氫-4-(甲?；谆?-5，6-二氧代-as-三嗪-3-基、2，5-二氫-5-氧代-6-羥基-as-三嗪-3-基、2，5-二氫-5-氧代-6-羥基-as-三嗪-3-基鈉鹽、2，5-二氫-5-氧代-6-羥基-2-甲基-as三嗪-3-基鈉鹽、2，5-二氫-5-氧代-6-羥基-2-甲基-as-三嗪-3-基、2，5-二氫-5-氧代-6-甲氧基-2-甲基-as-三嗪-3-基、2，5-二氫-5-氧代-as-三嗪-3-基、2，5-二氫-5-氧代-2-甲基-as-三嗪-3-基、2，5-二氫-5-氧代-2，6-二甲基-as-三嗪-3-基、四唑并[1，5-b]噠嗪-6-基和8-氨基四唑并[1，5-b]-噠嗪-6-基?！半s芳基”的替代選擇包括4-(羧基甲基)-5-甲基-1，3-噻唑-2-基、4-(羧基甲基)-5-甲基-1，3-噻唑-2-基鈉鹽、1，3，4-三唑-5-基、2-甲基-1，3，4-三唑-5-基、1H-四唑-5-基、1-甲基-1H-四唑-5-基、1-(1-(二甲氨基)乙-2-基)-1H-四唑-5-基、1-(羧基甲基)-1H-四唑-5-基、1-(羧基甲基)-1H-四唑-5-基鈉鹽、1-(甲基磺酸)-1H-四唑-5-基、1-(甲基磺酸)-1H-四唑-5-基鈉鹽、1，2，3-三唑-5-基、1，4，5，6-四氫-5，6-二氧代-4-甲基-as-三嗪-3-基、1，4，5，6-四氫-4-(2-甲酰基甲基)-5，6-二氧代-as-三嗪-3-基、2，5-二氫-5-氧代-6-羥基-2-甲基-as-三嗪-3-基鈉鹽、2，5-二氫-5-氧代-6-羥基-2-甲基-as-三嗪-3-基、四唑并[1，5-b]噠嗪-6-基和8-氨基四唑并[1，5-b]噠嗪-6-基。
“抑制劑”表示減少或防止IAP蛋白與胱天蛋白酶蛋白結(jié)合或者減少或防止程序性細胞死亡被IAP蛋白抑制的化合物。作為替代選擇，“抑制劑”表示防止X-IAP與胱天蛋白酶的結(jié)合性相互作用或者ML-IAP與SMAC的結(jié)合性相互作用的化合物。
“藥學(xué)上可接受的鹽”包括酸和堿加成鹽?！八帉W(xué)上可接受的酸加成鹽”表示這樣的鹽，它們保留游離堿的生物有效性和性質(zhì)，在生物學(xué)上或其他方面不是不可取的，是與如下酸生成的無機酸，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸等；有機酸可以選自脂族、環(huán)脂族、芳族、芳脂族、雜環(huán)、羧酸和磺酸類的有機酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、天冬氨酸、抗壞血酸、谷氨酸、鄰氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、撲酸、苯基乙酸、甲磺酸、乙磺酸、對-甲苯磺酸、水楊酸等。
“藥學(xué)上可接受的堿加成鹽”包括從無機堿衍生的那些，例如鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁鹽等。特別優(yōu)選的是銨、鉀、鈉、鈣和鎂鹽。從藥學(xué)上可接受的有機無毒堿衍生的鹽包括如下堿的鹽伯、仲和叔胺；取代的胺，包括天然存在的取代的胺、環(huán)狀胺和堿性離子交換樹脂，例如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙氨基乙醇、三甲胺、二環(huán)己胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、海巴明(hydrabamine)、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪(piperizine)、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺樹脂等。特別優(yōu)選的有機無毒堿是異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環(huán)己胺、膽堿和咖啡因。
本發(fā)明提供新穎的具有通式I的化合物 其中X、Y、A、R1、R2、R3、R4、R1’、R5、R5’、R6和R6’是如本文所述的。
X1和X2各自獨立地是O或S。在優(yōu)選的實施方式中，X1和X2都是O。在另一優(yōu)選的實施方式中，X1和X2都是S。在另一優(yōu)選的實施方式中，X1是S，而X2是O。在另一優(yōu)選的實施方式中，X1是O，而X2是S。
Y是(CHR7)n、O或S；其中n是1或2，R7是H、鹵素、烷基、芳基、芳烷基、氨基、芳基氨基、烷基氨基、芳烷基氨基、烷氧基、芳氧基或芳烷氧基。在確切的實施方式中，Y是CH2。在確切的實施方式中，n是1。在確切的實施方式中，n是1，Y是CHR7，其中R7是芳烷氧基，例如芐氧基。在確切的實施方式中，n是1，Y是CHR7，其中R7是F。在確切的實施方式中，n是1，Y是CHR7，其中R7是芳烷基氨基，例如芐基氨基。在另一確切的實施方式中，Y是O。在另一確切的實施方式中，Y是S。
環(huán)“A”是包含1至4個雜原子的5-元雜環(huán)，任選地被氨基、羥基、巰基、鹵素、羧基、脒基、胍基、烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、?；ⅤＱ趸?、酰基氨基、烷氧基羰基氨基、環(huán)烷基、烷硫基、烷基亞磺?；⑼榛酋；?、氨基磺?；?、烷基氨基磺?；?、烷基磺酰氨基或雜環(huán)取代；其中每個烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、?；ⅤＱ趸?、?；被h(huán)烷基和雜環(huán)取代基任選地被羥基、鹵素、巰基、羧基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、氨基、硝基、氰基、環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)取代。在一種實施方式中，5-元雜環(huán)A基團任選地被氨基、羥基、巰基、鹵素、羧基、脒基、胍基、烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、酰基、酰氧基、酰基氨基、環(huán)烷基或雜環(huán)取代；其中每個烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、?；?、酰氧基、?；被?、環(huán)烷基和雜環(huán)取代基任選地被羥基、鹵素、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)取代。在確切的實施方式中，環(huán)A是芳族的。在確切的實施方式中，環(huán)A具有式IIa或IIb 其中Q1是NR8、O或S；Q2、Q3、Q4、Q5、Q6、Q7和Q8獨立地是CR9或N，其中R9是H、氨基、羥基、巰基、鹵素、羧基、脒基、胍基、烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、?；ⅤＱ趸?、?；被h(huán)烷基或雜環(huán)；其中每個烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、酰基、酰氧基、?；被h(huán)烷基和雜環(huán)取代基任選地被羥基、鹵素、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)取代；R8是H、烷基、?；⒎蓟?、環(huán)烷基或雜環(huán)；其中每個烷基、芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)任選地被羥基、鹵素、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)取代；Q9是CH或N。在特別的實施方式中，環(huán)A是式II基團。在特別的實施方式中，環(huán)A是式II基團，其中Q4是CR9，其中R9是芳基或雜芳基，任選地如上所述被取代。在特別的實施方式中，環(huán)A是式II基團，其中Q4是CR9，R9是苯基。在特別的實施方式中，環(huán)A是式II基團，其中Q4是CR9，R9是苯基，Q3是CH或CF。在另一種實施方式中，環(huán)A是式II基團，其中Q4是CR9，R9is吡啶-2-基。在另一種實施方式中，環(huán)A是式II基團，其中Q4是CR9，R9是吡啶-2-基，Q3是C-Me。
在另一種實施方式中，根據(jù)IIa或IIb的環(huán)A是吡咯環(huán)，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自 其中R8是H、烷基(例如甲基、乙基或丙基)或?；?例如乙?；?。在特別的實施方式中，R8是H。
在另一種實施方式中，環(huán)A是呋喃，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自 在另一種實施方式中，環(huán)A是噻吩，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自 在另一種實施方式中，環(huán)A是吡唑，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自 其中R8是H、烷基(例如甲基、乙基或丙基)或酰基(例如乙?；?。在特別的實施方式中，R8是H。
在另一種實施方式中，環(huán)A是咪唑，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自 其中R8是H、烷基(例如甲基、乙基或丙基)或?；?例如乙酰基)。在特別的實施方式中，R8是H。
在另一種實施方式中，環(huán)A是唑，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自
在另一種實施方式中，環(huán)A是異唑，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自 在另一種實施方式中，環(huán)A是噻唑，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自 在另一種實施方式中，環(huán)A是異噻唑，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自 在另一種實施方式中，環(huán)A是1，2，3-三唑，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自 其中R8是H、烷基(例如甲基、乙基或丙基)或酰基(例如乙?；?。在特別的實施方式中，R8是H。
在另一種實施方式中，環(huán)A是1，2，4-三唑，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自 在另一種實施方式中，環(huán)A是二唑，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自 在另一種實施方式中，環(huán)A是噻二唑，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自
在另一種實施方式中，環(huán)A是四唑，任選地被烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)或雜環(huán)-烷基取代，它們?nèi)芜x地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、芳基或雜芳基取代。在一種實施方式中，環(huán)A被芳基或雜芳基取代。在特別的實施方式中，環(huán)A選自 在特別的實施方式中，環(huán)A是 在特別的實施方式中，環(huán)A是 R1是H，或者R1和R2一起構(gòu)成5-8元環(huán)。在特別的實施方式中，R1是H。在特別的實施方式中，R1和R2一起構(gòu)成6-元環(huán)。在特別的實施方式中，R1和R2一起構(gòu)成7-元環(huán)。在另一特別的實施方式中，R1和R2一起構(gòu)成8-元環(huán)。在另一特別的實施方式中，R1和R2一起構(gòu)成7-元環(huán)，而Y是S。在另一特別的實施方式中，R1是H，而Y是CH2。在另一特別的實施方式中，R1是H，而Y是S。在另一特別的實施方式中，R1是H，而Y是O。
R2是烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或雜環(huán)基烷基。在優(yōu)選的實施方式中，R2是烷基或環(huán)烷基。在一種實施方式中，每個R2基團各自任選地被羥基、巰基、鹵素、氨基、羧基、烷基、鹵代烷基、烷氧基或烷硫基取代。在一種本發(fā)明實施方式中，R2是叔丁基、異丙基、環(huán)己基、環(huán)戊基或苯基。在特別的實施方式中，R2是環(huán)己基。在另一種實施方式中，R2是四氫吡喃-4-基。在另一特別的實施方式中，R2是異丙基(也就是纈氨酸氨基酸側(cè)鏈)。在另一特別的實施方式中，R2是叔丁基。在特別的實施方式中，R2是如此取向的，以便它包含的氨基酸或氨基酸類似物為L-構(gòu)型。
R3是H，或者烷基。在優(yōu)選的實施方式中，R3是H，或者甲基、乙基、丙基或異丙基。在特別優(yōu)選的實施方式中，R3是H，或者甲基。在最優(yōu)選的實施方式中，R3是甲基。在另一特別的實施方式中，R3是叔丁基。在優(yōu)選的實施方式中，R3是如此取向的，以便它包含的氨基酸或氨基酸類似物為L-構(gòu)型。
R4和R4’獨立地是H、羥基、氨基、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜芳基或雜芳基烷基，其中每個烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜芳基和雜芳基烷基任選地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、烷氧基、氨基和硝基取代。在特別的實施方式中，R4和R4’都是H。在另一特別的實施方式中，R4是甲基，R4’是H。在特別的實施方式中，R4和R4’之一是羥基(OH)，而另一個是H。在另一種實施方式中，R4和R4’之一是氨基、例如NH2、NHMe和NHEt，而另一個是H。在特別的實施方式中，R4’是H，R4是H、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜芳基或雜芳基烷基。在特別的實施方式中，R4是選自如下的基團
R5和R5’各自獨立地是H或烷基。在優(yōu)選的實施方式中，R5和R5’是H或甲基。在特別的實施方式中，R5是H，R5’是甲基。在另一特別的實施方式中，R5是甲基，R5’是H。在另一特別的實施方式中，R5和R5’都是甲基。在另一特別的實施方式中，R5和R5’都是H。
R6和R6’各自獨立地是H、烷基、芳基或芳烷基。在特別的實施方式中，R6是烷基，例如甲基。在另一特別的實施方式中，R6是芳基，例如苯基。在另一特別的實施方式中，R6是芳烷基，例如芐基。在特別的實施方式中，R6和R6’是相同的，例如都是烷基，例如都是甲基。在另一特別的實施方式中，R6是甲基，R6’是H。
本發(fā)明化合物含有一個或多個不對稱的碳原子。因此，這些化合物可以存在非對映體、對映體或其混合物。這些化合物的合成可以采用外消旋物、非對映體或?qū)τ丑w作為原料或者作為中間體。非對映體化合物可以借助色譜或結(jié)晶方法分離。與之相似，對映體混合物可以利用同樣的技術(shù)或者本領(lǐng)域已知的其他技術(shù)加以分離。每個不對稱碳原子可以是R或S構(gòu)型，這些構(gòu)型都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。優(yōu)選地，本發(fā)明化合物具有下列式I’的立體化學(xué)構(gòu)型 其中X、Y、A、R1、R2、R3、R4、R4’、R5、R5’、R6和R6’是如本文所述的。
本發(fā)明也涵蓋上述化合物的前體藥物。酌情適合的前體藥物包括已知的氨基-保護基團和羧基-保護基團，它們在生理條件下被釋放，例如水解，得到母體化合物。優(yōu)選的前體藥物種類是這樣的化合物，其中氨基、脒基、氨基亞烷基氨基、亞氨基亞烷基氨基或胍基中的氮原子被羥基(OH)、烷基羰基(-CO-R)、烷氧基羰基(-CO-OR)、酰氧基烷基-烷氧基羰基(-CO-O-R-O-CO-R)取代，其中R是如上所定義的一價或二價基團，或者具有式-C(O)-O-CP1P2-鹵代烷基的基團，其中P1和P2是相同或不同的，是H、低級烷基、低級烷氧基、氰基、鹵代低級烷基或芳基。優(yōu)選地，該氮原子是本發(fā)明化合物的脒基的氮原子之一。這些前體藥物化合物是如下制備的，使上述本發(fā)明化合物與活化的?；衔锓磻?yīng)，使本發(fā)明化合物中的氮原子鍵合于活化?；衔锏聂驶＿m合的活化羰基化合物含有與羰基碳鍵合的良好離去基團，包括酰基鹵、?；?、?；拎}、?；蓟铮貏e是?；欲}，例如對-硝基苯氧基?；?、二硝基苯氧基?；⒎窖趸；投窖趸；?。反應(yīng)一般是放熱的，在惰性溶劑中、在低溫下進行，例如-78至約50℃。反應(yīng)通常也是在無機堿或有機堿的存在下進行的，前者例如碳酸鉀或碳酸氫鈉，后者例如胺，包括吡啶、三乙胺等。在1997年4月15日提交的USSN 08/843,369(相當(dāng)于PCT公開WO9846576)中描述了一種制備前體藥物的方式，其內(nèi)容完整結(jié)合在此作為參考。
特別的式I化合物包括如下















合成利用標準有機合成技術(shù)，從商業(yè)上可獲得的原料和試劑制備本發(fā)明化合物。將被領(lǐng)會的是，在本發(fā)明化合物的制備中所采用的合成工藝將依賴于存在于化合物中的確切取代基，并且可能需要各種保護和去保護，這是有機合成中的標準做法。在一般合成流程中，本發(fā)明化合物可以如下制備，采用典型的肽化學(xué)技術(shù)，利用典型的酰胺偶聯(lián)工藝偶聯(lián)氨基酸殘基類似物。在流程1中，先后偶聯(lián)和去保護胺-保護的氨基酸殘基類似物，得到最終的化合物。
流程1 將被領(lǐng)會的是，可以以任意順序偶聯(lián)氨基酸類似物，并且可以使用本領(lǐng)域慣用的固相載體制備。
充當(dāng)制備本發(fā)明化合物的中間體的胺取代的環(huán)A是商業(yè)上可獲得的，或者采用標準有機化學(xué)技術(shù)從商業(yè)上可獲得的試劑制備。例如，1-芳基-5-氨基四唑、例如苯基-5-氨基四唑可以如下制備，按照流程2，始于商業(yè)上可獲得的苯基硫脲，與疊氮化鈉和氯化汞反應(yīng)。
流程2 3-芳基-5-氨基-1，2，3-三唑、例如3-苯基-3H-[1，2，3]三唑-4-基胺可以如下制備，按照J.Org.Chem.，1981，46856-9所述工藝，并且如下流程3所述，使苯胺與氨基乙腈反應(yīng)。
流程3
與之相似，5-氨基-1-苯基-1H-[1，2，3]三唑-4-甲腈(carbonitrile)可以如下制備，使苯胺與2-氨基-丙二腈反應(yīng)，如流程4所述。
流程4 4-芳基-5-氨基-1，2，5-二唑、例如4-苯基-呋咱-3-基胺可以如下制備，按照Lakhan et al，(Indian Journal of Chemistry，Section BOrganic ChemistryIncluding Medicinal Chemistry(1987)，26B(7)，690-2)所述工藝，并且如流程5所述，使苯甲酰氰化物與羥胺反應(yīng)。
流程5 4-芳基-3-氨基-1，2，4-三唑、例如4-苯基-4H-[1，2，4]三唑-3-基胺可以如下制備，使苯基異硫氰酸酯與肼基甲酰亞胺(hydrazinecarboximidamide)反應(yīng)，得到5-氨基-4-苯基-4H-[1，2，4]三唑-3-硫醇，其中硫醇基團可以用阮內(nèi)鎳催化劑除去，如流程6所述。
流程6 4-芳基-5-氨基-1，2，3-三唑、例如3，5-二苯基-3H-[1，2，3]三唑-4-基胺可以如下制備，按照J.Org.Chem.，1990，553351-62所述工藝，并且如流程7所述，使苯乙腈與疊氮基苯(或者三甲基甲硅烷基疊氮化物TMS-N3)反應(yīng)。
流程7 4-芳基-3-氨基吡唑、例如4-苯基-2H-吡唑-3-基胺可以如下制備，按照專利EP269,859所述工藝，并且如流程8所述，使苯乙腈與原甲酸三乙酯反應(yīng)，得到3-氧代-2-苯基-丙腈，再與肼反應(yīng)。
流程8 可以使用各種肼和苯乙腈衍生物制備取代的-4-芳基-3-氨基吡唑，如流程9所述。
流程9 1-芳基-5-氨基吡唑、例如2-苯基-2H-吡唑-3-基胺可以如下制備，使苯肼與3-氧代-丙腈反應(yīng)。可以使用各種腈引入吡唑環(huán)3-位的取代，如流程10所述。
流程10
X＝H，Me，Et，CO2Et，CF33-芳基-4-氨基咪唑、例如3-苯基-3H-咪唑-4-基胺可以如下制備，使苯胺與氨基乙腈和原甲酸三乙酯反應(yīng)，如流程11所述。使用原甲酸三乙酯的類似物可以引入咪唑2-位取代如下。
流程11 5-芳基-4-氨基咪唑、例如5-苯基-3H-咪唑-4-基胺可以如下制備，使甲脒與氨基苯基乙腈反應(yīng)，如流程12所述。使用甲脒的類似物可以引入咪唑環(huán)2-位取代。
流程12 4-芳基-[1，2，3]噻二唑-5-基胺、例如4-苯基-[1，2，3]噻二唑-5-基胺可以借助流程13所述工藝制備。使2-溴-1-苯基-乙酮與鄰苯二酰亞氨基鋰反應(yīng)，再使取代產(chǎn)物與肼基羧酸乙酯反應(yīng)。所得肼基羧酸乙酯如下環(huán)化生成噻二唑，與亞硫酰氯反應(yīng)，繼之以用肼除去鄰苯二酰亞氨基。
流程13 其中R4或R4’不是H的本發(fā)明化合物可以按照標準有機化學(xué)技術(shù)制備，例如借助還原性胺化，其中使起始性氨基酸殘基類似物、例如NH2-CH(R3)-C(O)-OH與適合的醛或酮反應(yīng)，得到所需的R4和R4’取代基。參見流程14。利用標準肽偶聯(lián)工藝，所得R4/R4’取代的氨基酸中間體然后可以結(jié)合于下一氨基酸中間體或者該化合物的其余部分。
流程14 在特別的實施方式中，使丙氨酸與1-甲基吲哚-2-甲醛反應(yīng)，再用氰基硼氫化鈉的1％HOAc/DMF溶液還原，得到N-取代的丙氨酸殘基，它可以用于制備本發(fā)明化合物。參見流程15。
流程15 作為替代選擇，引入R4/R4’取代基的還原性胺化工藝是化合物制備中的最后一步。
當(dāng)本發(fā)明化合物結(jié)合有不是H的R4或R4’取代基時，它們也可以如下制備，用所需的胺取代適合的結(jié)合有離去基團的酸中間體。例如，按照流程16，用胺R4-NH2或R4-NH-R4’取代Br-CH(R3)-C(O)-OH。
流程16 作為替代選擇，引入R4或R4’取代基的取代反應(yīng)可以作為化合物制備中的最后一步進行，如流程17所述。
流程17 在特別的實施方式中，使2-溴丙酸與下列胺的DMF溶液反應(yīng)，沸騰直至取代完全，生成N-取代的丙氨酸殘基
其中X1、X2和X3的任意一個或多個是硫的本發(fā)明化合物、也就是結(jié)合有硫代酰胺的化合物可以按照既定的有機化學(xué)技術(shù)制備。例如，其中X2是硫的化合物可以按照流程18制備，始于Fmoc保護的氨基酸殘基類似物NH2-CH(R2)-COOH，將其溶于THF，冷卻至-25℃，加入DIPEA，繼之以加入氟甲酸異丁酯。10分鐘后，加入二胺，4-硝基苯-1，2-二胺，將反應(yīng)混合物在-25℃下連續(xù)攪拌2小時，然后在室溫下攪拌過夜。真空除去THF，混合物然后經(jīng)過快速色譜處理，使用50％EtOAc/己烷洗脫，得到產(chǎn)物。將Fmoc-丙氨酸衍生物、五硫化磷和碳酸鈉混合在THF中，攪拌過夜。濃縮溶液，直接經(jīng)過色譜處理，使用80％EtOAc/己烷洗脫，得到活化的硫代丙氨酸。然后將活化的硫代丙氨酸和亞硝酸鈉混合在乙酸中，用H2O稀釋。過濾所得沉淀，干燥，得到產(chǎn)物。將硫代丙氨酸和OH-保護的脯氨酸氨基酸殘基類似物都溶于DMF，使二者偶聯(lián)。硫代酰胺產(chǎn)物然后可以用20％PIP/DMA去保護15分鐘，用于結(jié)合于R4/R4’-N-CH(R3)-COOH氨基酸殘基類似物，繼之以O(shè)H-去保護和與氨基-取代的A環(huán)中間體偶聯(lián)。作為替代選擇，F(xiàn)moc-保護的硫代酰胺首先與氨基取代的A環(huán)中間體偶聯(lián)，繼之以Fmoc去保護，隨后與R4/R4’-N-CH(R3)-COOH氨基酸殘基類似物偶聯(lián)。
流程18
實用性本發(fā)明化合物抑制IAP蛋白與胱天蛋白酶結(jié)合，特別是X-IAP與胱天蛋白酶3和7的結(jié)合性相互作用。這些化合物也抑制ML-IAP與Smac蛋白結(jié)合。因此，本發(fā)明化合物可用于誘導(dǎo)細胞中的程序性細胞死亡或者使細胞敏感于程序性細胞死亡信號，特別是癌細胞。本發(fā)明化合物可用于誘導(dǎo)過度表達IAP蛋白的細胞中的程序性細胞死亡。作為替代選擇，本發(fā)明化合物可用于誘導(dǎo)其中線粒體程序性細胞死亡途徑被破壞、以致Smac從ML-IAP蛋白中釋放被抑制的細胞中的程序性細胞死亡，例如借助Bcl-2的增量調(diào)節(jié)或者Bax/Bak的減量調(diào)節(jié)。更廣泛地，本發(fā)明化合物能夠用于治療所有不能經(jīng)歷程序性細胞死亡的癌癥類型。這類癌癥類型的實例包括成神經(jīng)母細胞瘤、腸癌(例如直腸癌、結(jié)腸癌、家族性腺瘤息肉癌(familiaryadenomatous polyposis carcinoma)和遺傳性非息肉結(jié)腸直腸癌)、食道癌、唇癌、喉癌、咽下部癌(hypopharynx carcinoma)、舌癌(tong carcinoma)、唾液腺癌、胃癌、腺癌、髓樣甲狀腺癌、乳頭狀甲狀腺癌(papillary thyroideacarcinoma)、腎癌、腎實質(zhì)癌(kidney parenchym carcinoma)、卵巢癌、宮頸癌、子宮體癌、子宮內(nèi)膜癌、絨膜癌、胰腺癌、前列腺癌、睪丸癌、乳腺癌、泌尿系癌(urinary carcinoma)、黑素瘤、腦腫瘤(例如成膠質(zhì)細胞瘤、星形細胞瘤、腦脊膜瘤、成神經(jīng)管細胞瘤和外周神經(jīng)外胚層腫瘤(peripheralneuroectodermal tumors))、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、急性淋巴性白血病(ALL)、慢性淋巴性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、成年T-細胞白血病淋巴瘤(adultT-cell leukemia lymphoma)、肝細胞癌、膽囊癌、支氣管癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、多發(fā)性骨髓瘤、基底細胞癌、畸胎瘤、成視網(wǎng)膜細胞瘤、脈絡(luò)膜黑素瘤(choroidea melanoma)、精原細胞瘤、橫紋肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)、顱咽管瘤(craniopharyngeoma)、骨肉瘤、軟骨肉瘤、肌肉瘤、脂肉瘤、纖維肉瘤、尤因氏肉瘤和漿細胞瘤。
本發(fā)明化合物可用于使細胞敏感于程序性細胞死亡信號。因此，這些化合物可以在給予放射療法或者細胞抑制性或抗腫瘤性化學(xué)療法之前、伴隨或之后給藥。適合的細胞抑制性化學(xué)療法化合物包括但不限于(i)抗代謝產(chǎn)物，例如阿糖胞苷、氟達拉濱、5-氟-2’-脫氧尿苷、吉西他濱、羥基脲或甲氨蝶呤；(ii)DNA-片段化劑，例如博來霉素；(iii)DNA-交聯(lián)劑，例如苯丁酸氮芥、順鉑、環(huán)磷酰胺或氮芥；(iv)插層劑(intercalating agents)，例如阿德里亞霉素(阿霉素)或米托蒽醌；(v)蛋白質(zhì)合成抑制劑，例如L-天門冬酰胺酶、放線菌酮、嘌呤霉素或白喉毒素；(vi)拓撲異構(gòu)體酶I毒素，例如喜樹堿或托泊替堪；(vii)拓撲異構(gòu)體酶II毒素，例如依托泊苷(VP-16)或替尼泊苷；(viii)微管-指引劑，例如秋水仙胺(colcemid)、秋水仙堿、紫杉酚(paclitaxel)、長春花堿或長春新堿；(ix)激酶抑制劑，例如flavopiridol、staurosporin、STI571(CPG 57148B)或UCN-01(7-羥基staurosporine)；(x)各種研究劑，例如硫鉑、PS-341、丁酸苯基酯、ET-18-OCH3或法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(L-739749，L-744832)；多元酚，例如槲皮素、白藜蘆醇(resveratrol)、piceatannol、epigallocatechine gallate、茶黃素(theaflavins)、黃烷醇、原花青素、樺木酸及其衍生物；(xi)激素，例如糖皮質(zhì)激素或芬維A胺(fenretinide)；(xii)激素拮抗劑，例如他莫西芬、芬甾酮(finasteride)或LHRH拮抗劑。在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明化合物是與選自如下的細胞抑制性化合物共同給藥的順鉑、阿霉素、紅豆衫醇(taxol)、索素帝(taxotere)和絲裂霉素C。最優(yōu)選地，細胞抑制性化合物是阿霉素。
另一類能夠用在本發(fā)明中的活性化合物是通過與死亡受體結(jié)合能夠敏感于或者誘導(dǎo)程序性細胞死亡的那些(“死亡受體激動劑”)。這類死亡受體激動劑包括死亡受體配體，例如腫瘤壞死因子α(TNF-α)、腫瘤壞死因子β(TNF-β，淋巴毒素-α)、LT-β(淋巴毒素-β)、TRAIL(Apo2L，DR4配體)、CD95(Fas，APO-1)配體、TRAMP(DR3，Apo-3)配體、DR6配體以及任何所述配體的片段和衍生物。優(yōu)選地，死亡受體配體是TNF-α。更優(yōu)選地，死亡受體配體是Apo2L/TRAIL。此外，死亡受體激動劑包含死亡受體的激動性抗體，例如抗-CD95抗體、抗-TRAIL-R1(DR4)抗體、抗-TRAIL-R2(DR5)抗體、抗-TRAIL-R3抗體、抗-TRAIL-R4抗體、抗-DR6抗體、抗-TNF-R1抗體和抗-TRAMP(DR3)抗體以及任何所述抗體的片段和衍生物。
出于使細胞敏感于程序性細胞死亡的目的，本發(fā)明化合物也能夠與放射療法聯(lián)合使用。措辭“放射療法”表示電磁或粒子放射在腫瘤形成治療中的應(yīng)用。放射療法基于遞送至靶區(qū)域的高劑量放射將導(dǎo)致腫瘤與正常組織中繁殖細胞死亡的原理。放射劑量制度一般按照放射吸收劑量(rad)、時間和分次加以限定，并且必須由腫瘤學(xué)家謹慎地限定?；颊呓邮艿姆派淞繉⒁蕾囉诟鞣N考慮因素，但是兩種最重要的考慮因素是腫瘤相對于機體其他關(guān)鍵結(jié)構(gòu)或器官的位置和腫瘤蔓延的程度。放射治療劑的實例提供在放射療法中但不限于此，并且是本領(lǐng)域已知的(Hellman，Principles of RadiationTherapy，Cancer，in Principles I and Practice of Oncology，24875(Devita et al.，4th ed.，vol1，1993)。最近在放射療法上的進展包括三維保形外束放射、強度可調(diào)的放射療法(IMRT)、趨實體性放射外科和近程治療(組織內(nèi)放射療法)，后者將放射源直接置于腫瘤內(nèi)作為所植入的“種子”。這些新近的治療形態(tài)遞送較大劑量的放射至腫瘤，這就解釋了它們與標準外束放射療法相比增加有效性的原因。
具有β-發(fā)射性放射性核素的離子化放射被認為對于放射治療應(yīng)用是最有用的，因為離子化粒子(電子)的線性能量轉(zhuǎn)移(LET)適中及其范圍居間(在組織中通常為若干毫米)。γ射線遞送劑量的水平較低，不過距離大得多。α粒子代表另一種極端，它們遞送非常高的LET劑量，但是具有極為有限的范圍，因此必須與所要治療的組織細胞緊密接觸。另外，α發(fā)射體一般是重金屬，這限制了可能的化學(xué)過程，呈現(xiàn)過度的危害，放射性核素從所要治療的區(qū)域泄漏。依賴于所要治療的腫瘤，所有種類的發(fā)射體在本發(fā)明的范圍內(nèi)都是可想象的。
此外，本發(fā)明涵蓋非離子化放射類型，例如紫外(UV)放射、高能可見光、微波放射(高溫療法)、紅外(IR)放射和激光。在本發(fā)明的確切實施方式中，應(yīng)用UV放射。
本發(fā)明也包括含有本發(fā)明化合物和治療惰性載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物或藥品，以及使用本發(fā)明化合物制備這類組合物和藥品的方法。通常，如下將用在本發(fā)明方法中的式I化合物配制成蓋侖給藥形式(galenicaladministration form)，在環(huán)境溫度和適當(dāng)?shù)膒H下，在所需的純度下，與生理學(xué)上可接受的載體混合，也就是在所采用的劑量和濃度下對接受者無毒的載體。制劑的pH主要依賴于化合物的特定用途和濃度，但是優(yōu)選地從約3至約8。在pH5的乙酸鹽緩沖液中的制劑是適合的實施方式。
用于本文的抑制性化合物優(yōu)選地是無菌的?；衔镆话銓⒈蛔鳛楣腆w組合物貯存，不過凍干制劑或水溶液是可接受的。
本發(fā)明組合物將以符合良好醫(yī)藥實踐的方式被配制、服用和給藥。在這種上下文中的考慮因素包括所治療的特定病癥、所治療的特定哺乳動物、個體患者的臨床條件、病癥的原因、藥物的遞送部位、給藥的方法、給藥的安排和醫(yī)務(wù)人員已知的其他因素。所要給予的化合物的“有效量”將受這類考慮因素支配，是抑制IAP與胱天蛋白酶相互作用、誘導(dǎo)程序性細胞死亡或者使惡性細胞敏感于程序性細胞死亡信號所必需的最小量。這類量優(yōu)選地低于對正常細胞或哺乳動物整體有毒的量。
一般而言，每劑腸胃外給予本發(fā)明化合物的初始藥學(xué)有效量將在約0.01-100mg/kg的范圍內(nèi)，優(yōu)選約0.1至20mg/kg患者體重每天，所用化合物的典型初始范圍為0.3至15mg/kg/天。口服單元劑型、例如片劑和膠囊優(yōu)選地含有約25至約1000mg本發(fā)明化合物。
本發(fā)明化合物可以借助任意適合的手段給藥，包括口服、外用(local)、透皮、腸胃外、皮下、腹膜內(nèi)、肺內(nèi)和鼻內(nèi)，如果需要局部治療的話還有傷口內(nèi)給藥(intralesional administration)。腸胃外輸注包括肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下給藥。適合的口服劑型的實例是片劑，含有約25mg、50mg、100mg、250mg或500mg本發(fā)明化合物，復(fù)合有約90-30mg無水乳糖、約5-40mg交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、約5-30mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30和約1-10mg硬脂酸鎂。先將粉碎的成分混合在一起，然后與PVP溶液混合?？梢詫⑺媒M合物干燥，造粒，與硬脂酸鎂混合，利用常規(guī)設(shè)備壓制成片。氣霧劑可以如下制備，將例如5-400mg的本發(fā)明化合物溶于適合的緩沖溶液，例如磷酸鹽緩沖液，如果需要的話加入張性劑(tonicifier)，例如鹽，例如氯化鈉。通常過濾該溶液，例如利用0.2微米濾器，以除去雜質(zhì)和污染物。
實施例參照下列實施例將更加充分地理解發(fā)明。不過，它們不應(yīng)被解釋為限制發(fā)明的范圍。本文所用的縮寫如下ACN 乙腈；Chg 環(huán)己基甘氨酸；DCM 二氯甲烷；DIPEA二異丙基乙胺；DMAP 4-二甲氨基吡啶；DME 1，2-二甲氧基乙烷；DMF 二甲基甲酰胺；DMSO 二甲基亞砜；EDC 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺；EEDQ 2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氫喹啉LCMS 液相色譜-質(zhì)譜；HATU O-(7-偶氮苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽；HOBt N-羥基苯并三唑；HBTU 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基-脲鎓六氟磷酸鹽；HPLC 高效液相色譜；NBS N-溴琥珀酰胺；TASF 三(二甲氨基)锍二氟三甲基硅酸鹽；TEA 三乙胺；TFA 三氟乙酸鹽；THF 四氫呋喃。
實施例1 6-(1，3-二氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-5-氧代-八氫-噻唑并[3，2-a]氮雜卓-3-羧酸乙基酯 向攪拌著的N-(二苯基亞甲基)甘氨酸叔丁基酯1(3.0g，10.1mmol)與手性催化劑O-烯丙基-N-(9-蒽基甲基)-辛可尼丁溴(O-Allyl-N-(9-anthracenylmethyl)-cinchonidium bromide)(613mg，1.0mmol)的無水DCM(30mL)溶液加入氫氧化銫(17g，101mmol)。將反應(yīng)在干冰丙酮浴中冷卻至-78℃，滴加4-溴-1-丁烯。加入后，將反應(yīng)在-48℃ N2下劇烈攪拌48小時。加入乙醚，繼之以H2O。分離有機層，用H2O(2x)和鹽水(1x)洗滌，用MgSO4干燥，濃縮。產(chǎn)物經(jīng)過SiO2色譜純化，用0-10％EtOAc的己烷溶液梯度洗脫，得到2，收率65％。
向攪拌著的2(1.52g，4.3mmol)的無水MeOH(50mL)溶液加入NaOAc(720mg，8.6mmol)和NH2OH·HCl(540mg，7.6mmol)。在室溫N2下攪拌2小時。加入DCM和0.1N NaOH。分離水層，用DCM萃取3次，用Na2SO4干燥，合并DCM級分，濃縮。產(chǎn)物經(jīng)過SiO2色譜純化，用含有0.05％TEA的0-10％MeOH的DCM溶液洗脫，得到3，收率70％。
向3(610mg，3.3mmol)的無水DCM(20mL)溶液加入三乙胺(550μL，3.9mmol)和氯甲酸芐基酯(550μL，3.9mmol)。將反應(yīng)在室溫下攪拌2小時。濃縮溶液，經(jīng)過SiO2色譜純化，用0-30％EtOAc的己烷溶液梯度洗脫，得到4，收率66％。
在N2下，向攪拌著的4(577mg，1.8mmol)的THF(20mL)溶液加入BH3·THF。1小時后加入3N NaOH(300μL，0.9mmol)和H2O2(306μL，2.7mmol)。將反應(yīng)攪拌過夜，隨后用H2O稀釋，用乙醚萃取兩次，用MgSO4干燥，濃縮。產(chǎn)物經(jīng)過SiO2色譜純化，用10-45％EtOAc的己烷溶液梯度洗脫，得到5，收率50％。
在1atm H2下，向攪拌著的5(71mg，0.21mmol)的MeOH(2mL)溶液加入10％碳上的氫氧化鈀(30mg)。反應(yīng)在30分鐘后完成。經(jīng)過C鹽過濾反應(yīng)物，濃縮，以定量收率得到6。
向6(42mg，0.21mmol)的ACN(2mL)溶液加入乙酯基鄰苯二酰亞胺(50mg，0.23mmol)和DIPEA(40μL，0.23mmol)，在室溫下攪拌2小時。加入H2O(1mL)，攪拌另外10分鐘。蒸發(fā)除去ACN和DCM，加入10％檸檬酸。分離水層，用DCM萃取3次，合并DCM部分，用Na2SO4干燥，濃縮，得到7，收率95％。
將草酰氯(561μL，6.60mmol)溶于DCM(35mL)，冷卻至-78℃，攪拌5分鐘，繼之以加入二甲基亞砜(870μL，12.3mmol)的DCM(2.5mL)溶液。攪拌5分鐘后加入7(1.05g，3.15mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液，繼之以三乙胺(2.37mL，17.0mmol)。使反應(yīng)緩慢升溫至室溫。加入DCM和H2O，分離水層，用DCM萃取2次。合并DCM部分，通過Na2SO4過濾，濃縮，得到8，收率95％。
將L-半胱氨酸乙基酯鹽酸鹽(643mg，3.5mmol)和乙酸鉀(343mg，3.5mmol)溶于攪拌著的EtOH(13mL)，在冰水浴中冷卻至0℃。將化合物8溶于EtOH(13mL)，加入。將反應(yīng)在0℃下攪拌4小時，LCMS確認8轉(zhuǎn)化為兩種非對映體產(chǎn)物。將反應(yīng)物過濾，蒸發(fā)EtOH，重新溶于DCM，用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，濃縮，以定量收率得到非對映體9的1∶1混合物。
將非對映體重新溶于1∶1 TFA∶DCM(10mL)，在室溫下攪拌1小時。LCMS顯示完全轉(zhuǎn)化為10。濃縮反應(yīng)物，得到10，兩種非對映體的收率95％。
向攪拌著的10(675mg，1.67mmol)的THF(20mL)溶液加入EEDQ(619mg，2.50mmol)。在室溫下攪拌2天。在減壓下除去THF，將產(chǎn)物重新溶于EtOAc。有機層用0.5N HCl、0.5％NaHCO3、H2O、鹽水洗滌。將EtOAc溶液用MgSO4干燥，濃縮。產(chǎn)物經(jīng)由反相HPLC純化，用10-70％ACN的H2O溶液洗脫，得到兩種非對映體11，非對映體1的收率20％，非對映體2的收率18％。
實施例2 1-[2-環(huán)己基-2-(2-甲基氨基-丙酰氨基)-乙?；鵠-吡咯烷-2-羧酸(2-苯基-2H-吡唑-3-基)-酰胺 將Boc-MeAla-Chg-Pro-OH(47.0mg，0.107mmol)與吡啶(26μl，0.32mmol)的無水二氯甲烷(300μl)溶液冷卻至0℃，歷經(jīng)10分鐘滴加草酰氯的二氯甲烷溶液(54μl，2.0M，0.11mmol)。將混合物在0℃下攪拌15分鐘，然后在環(huán)境溫度下攪拌45分鐘，加入5-氨基-1-苯基吡唑(15.9mg，0.100mmol；TCIAmerica catalog # A0174)與吡啶(15.5μl，0.191mmol)的二氯甲烷(0.5mL)溶液。將所得混合物在環(huán)境溫度下攪拌16小時，用二氯甲烷稀釋至20mL，用0.2N氫氧化鈉水溶液(20mL)洗滌。將有機相干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色譜純化(硅膠，60％乙酸乙酯的己烷溶液，然后100％乙酸乙酯)，得到黃色的油m/z581(M+H+)。將該油用5％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(2mL)處理，18小時后在真空中除去溶劑。所得油(29.3mg，2步收率57％)進一步經(jīng)過反相HPLC純化，得到產(chǎn)物(TFA鹽，9.6mg，15％收率)m/z481(M+H+)，503(M+Na+).
實施例3 4-苯基-[1，2，3]噻二唑-5-基胺 將2-溴苯乙酮溶于DMF(3vol)，加入鄰苯二酰亞氨基鉀(1.1eq.)。反應(yīng)最初是溫和放熱的，在室溫下攪拌過夜。在真空中除去DMF，將反應(yīng)用DCM(～3vol)稀釋，繼之以0.1N NaOH(～3vol；1∶1aq/org)，劇烈攪拌，然后萃取。有機層含有一些固體產(chǎn)物，在真空中濃縮，將所得固體懸浮在二乙醚中，抽吸過濾收集，得到(a)，為白色結(jié)晶性固體，收率～95％。
將化合物(a)、肼基甲酸乙酯(1.5eq)和TsOH-H，O(0，1eq)合并在甲苯(5vol)中，利用Dean-Stark捕集器加熱至回流以除去水。溶液變?yōu)榘导t色，根據(jù)TLC在～2hr內(nèi)完成。蒸餾除去大約一半甲苯，將溶液冷卻至r.t.，在真空中濃縮。將所得固體懸浮在EtOH中(攪拌必需的最小體積)，加熱至回流達30min，然后在冰上冷卻，以有利于兩種異構(gòu)體的沉淀。抽吸過濾收集固體，用冷EtOH洗滌，在真空下干燥，得到化合物(b)的兩種異構(gòu)體，為灰白色固體，收率～90％。
向冰-冷卻的亞硫酰氯(4eq，～0.85vol)分批加入(為了控制放熱)(b)的異構(gòu)體混合物。除去冰浴，使反應(yīng)升溫至r.t.，攪拌過夜。在真空中除去亞硫酰氯，加入DCM(1vol)，攪拌反應(yīng)物與0.1M NaOH(1vol；1∶1aq/org)。萃取懸液，在真空中濃縮有機相，懸浮在回流著的EtOAc中(容易攪拌必需的最小體積)達30min，冷卻至r.t.，抽吸過濾收集，用少量冷EtOAc洗滌，得到(c)，為灰白色結(jié)晶性固體，收率～80％。

將水合肼(2.4eq)的EtOH(1vol)溶液滴加到回流著的(c)的EtOH溶液(8vol)中。幾乎立即生成沉淀，根據(jù)TLC反應(yīng)在～3hr內(nèi)完成。將溶液冷卻至r.t.，過濾出鄰苯二酰胺裂解副產(chǎn)物，用DCM洗滌。在真空中濃縮EtOH/DCM濾液，直至觀察到晶體生成。將該懸液攪拌過夜，抽吸過濾收集晶體/固體混合物，用冷EtOH洗滌直至除去有色雜質(zhì)，得到噻二唑胺(d)，收率～75％，為灰白色結(jié)晶性固體。
實施例4 1-[2-環(huán)己基-2-(2-甲基氨基-丙酰氨基)-乙酰基]-吡咯烷-2-羧酸(4-苯基-[1，2，3]噻二唑-5-基)-酰胺 將Boc-L-Pro(2eq)、HOBt(1.9eq)、EDC-HCl(1.9eq)和DIPEA(5eq)溶于DMF(10-15vol)。然后向其中加入噻二唑胺(d)。反應(yīng)最初是溫和放熱的，加熱至75℃，攪拌過夜，冷卻至室溫，在真空中部分除去DMF。用EtOAc(10-15vol)稀釋，繼之以用1M HCl(2x)、NaHCO3(1x)和鹽水(1x)洗滌(1∶1aq/org)。在真空中濃縮有機層，將所得固體懸浮在回流著的MeCN中(容易攪拌必需的最小體積)達30min，然后冷卻至r.t.。抽吸過濾得到Boc-保護的結(jié)合產(chǎn)物，為灰白色結(jié)晶性固體，收率～77％。將Boc-保護的產(chǎn)物懸浮在4M HCl/二烷(4-5eq酸)和MeCN溶液(1vol，相當(dāng)于二烷溶液)中，在r.t.下攪拌直至LCMS表明完全去保護，～1hr。在真空中濃縮反應(yīng)混合物，將所得固體在回流中的MeCN中(容易攪拌必需的最小體積)劇烈攪拌，冷卻至r.t.，抽吸過濾收集固體，用冷MeCN洗滌直至除去濾餅殘留的顏色，以大約定量的收率得到HCl鹽(e)，為灰白色固體。
將HCl鹽(e)溶于DMF(10-15vol)和DIPEA(5eq)。向其中加入Boc-L-Chg(1.5eq)、HOBt(1.4eq)和EDC-HCl(1.4eq)。根據(jù)LCMS偶聯(lián)在～2hr后完全。將反應(yīng)用EtOAc(15vol)稀釋，用1M HCl(2x)、NaHCO3(1x)和鹽水(1x)洗滌(1∶1aq/org)。將有機萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空中濃縮。將所得固體懸浮在EtOH/己烷(20∶80)中(容易攪拌必需的最小體積)，過濾，得到Boc-保護的結(jié)合產(chǎn)物，為絨毛狀白色固體，收率～80％。將Boc-保護的產(chǎn)物溶于4M HCl/二烷(4-5eq酸)和MeCN溶液(0.25體積，相當(dāng)于二烷溶液)中，在r.t.下攪拌直至LCMS表明完全去保護，～1hr。用甲苯濃縮反應(yīng)至干(2x)(體積與去保護溶液相同)，以大約定量的收率得到HCl鹽(f)，為白色結(jié)晶性固體。
將HCl鹽(f)溶于DMF(10-15vol)和DIPEA(5eq)。向其中加入Boc-L-N-甲基Ala(1.5eq)、HOBt(1.4eq)和EDC-HCl(1.4eq)。根據(jù)LCMS偶聯(lián)在～1hr后完全。將反應(yīng)用EtOAc(15vol)稀釋，用1M HCl(2x)、NaHCO3(1x)和鹽水(1x)洗滌(1∶1aq/org)。將有機萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空中濃縮，得到Boc-保護的結(jié)合產(chǎn)物，為米色泡沫狀固體，收率～85％。將Boc-保護的結(jié)合產(chǎn)物溶于4M HCl/二烷(4-5eq酸)和MeCN溶液(0.25體積，相當(dāng)于二烷溶液)中，在室溫下攪拌直至LCMS表明完全去保護，～1hr。用甲苯濃縮反應(yīng)至干(2x)(體積與去保護溶液相同)，將所得固體懸浮在MTBE/EtOAc(70∶30)溶液中(容易攪拌所需的最小體積)，過濾，收集，得到粗產(chǎn)物(g)，為灰白色自由流動性固體。將粗產(chǎn)物HCl鹽(g)懸浮在MeOH中(最少4vol)，在65℃下攪拌溶解。分兩份加入溫?zé)岬囊宜岙惐?6-8vol)，保持溫度在大約60℃，使溶液冷卻，同時攪拌。迅速發(fā)生結(jié)晶，將懸液在室溫下攪拌若干小時，然后在0℃下攪拌1小時，然后抽吸過濾收集固體，用MeOH/iPrOAc(1∶4，2vol)洗滌，干燥，最后得到產(chǎn)物，為白色/灰白色結(jié)晶性固體，收率～80％，從(f)計。
實施例5 2-[叔丁氧羰基-(1H-吡咯-2-基甲基)-氨基]-丙酸 將丙氨酸乙酯(5g，32.5mmol)、吡咯-2-甲醛(3.1g，32.5mmol)、氰基硼氫化鈉(2.04g，32.5mmol)和AcOH(1％)混合在DMF中，攪拌過夜。用H2O淬滅反應(yīng)，蒸發(fā)DMF。將混合物用EtOAc稀釋，用0.1N NaOH洗滌，干燥，濃縮，得到產(chǎn)物2.5g。將所得酯(2.5g，12.8mmol)、二碳酸二叔丁酯(3.06g，14mmol)混合在THF、H2O和NaHCO3中，攪拌過夜。蒸發(fā)THF，將混合物用EtOAc稀釋，用1N NaOH、飽和NH4Cl和鹽水洗滌。干燥后，濃縮混合物，得到Boc-保護的酯3.3g。在0℃下，將Boc-保護的酯(1.67g，5.6mmol)、氫氧化鋰一水合物(284mg，6.77mmol)混合在THF和H2O中。真空除去THF，將溶液用稀H2SO4酸化，用EtOAc萃取兩次。合并有機層，干燥，蒸發(fā)。
實施例6四氫吡喃基甘氨酸四氫吡喃基甘氨酸購自NovaBiochem，或者按照如下文獻合成Ghosh，A.K.；Thompson，W.J.；holloway，M.K.；McKee，S.P.；Duong，T.T.；Lee，H.Y.；Munson，P.M.；Smith，A.M.；Wai，J.M；Darke，P.L.；Zugay，J.A.；Emini，E.A.；Schleife，W.A.；Huff，J.R.；Anderson，P.S.J.Med.Chem，1993，36，2300-2310。
實施例7 哌啶基甘氨酸哌啶基甘氨酸按照如下文獻合成Shieh，W-C.；Xue，S.；Reel，N.；Wu，R.；Fitt，J.；Repic，O.TetrahedronAsymmetry，2001，12，2421-2425。
實施例8 4，4-二氟環(huán)己基甘氨酸4，4-二氟環(huán)己基甘氨酸按照US 2003/0216325所述工藝制備。
實施例9 Boc(S)-2-氨基-2-(4-羥基環(huán)己基)乙酸 遵照Sheih的工藝(TetrahedronAsymmetry，2001，12，2421-2425)，將酮a(8.4g)的EtOAc(30mL)溶液加入到N-Cbz-膦酰甘氨酸甲酯b TMG(4.5mL)的EtOAc(30mL)溶液中。將溶液維持在室溫下達48h，然后用1N HCl(3×50mL)、鹽水(1×50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮。使殘余物吸附到C鹽上，經(jīng)過色譜純化，然后進一步從EtOAc/己烷中重結(jié)晶純化，得到5.2g產(chǎn)物c。

遵照Sheih的工藝(TetrahedronAsymmetry，2001，12，2421-2425)，將烯酰胺(eneamide)c(5.0g)、(S，S)-Me-BPE-Rh(I)(1.5g，Strem Chemicals，Newburyport，MA)的MeOH(100mL)溶液在70psi H2下劇烈振蕩48h。在減壓下除去溶劑。將殘余物溶于EtOAc，與更多的EtOAc通過SiO2過濾。在減壓下除去溶劑，得到4.0g產(chǎn)物d，為無色固體。
將Cbz-氨基甲酸酯d(4.0g)、Boc2O(2.9g)、20％Pd(OH)2·C(1.0g)與MeOH(30mL)的混合物維持在H2氣氛下達6h?；旌衔锱cMeOH通過C鹽過濾。在減壓下除去溶劑，得到4.5g殘余物e，直接繼續(xù)反應(yīng)。
將上述殘余物e溶于H2O(10mL)、AcOH(30mL)、THF(5mL)和二氯乙酸(3mL)，維持在rt下過夜。加入水(5mL)，維持攪拌直至根據(jù)HPLC-MS監(jiān)測水解完全。小心地加入固體Na2CO3直至氣體放出停止，將混合物用aqNaHCO3洗滌，用10％EtOAc/DCM萃取。合并有機相，用鹽水洗滌一次，干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮。殘余物經(jīng)過色譜純化，得到2.9g產(chǎn)物f。
在0℃下，將酮f(1.5g)與MeOH(50mL)的混合物用NaBH4(290mg)處理20min。將混合物用10％aq檸檬酸酸化至～pH1，在減壓下除去MeOH。將殘余物用水稀釋，用20％EtOAc/DCM萃取。合并有機相，用鹽水洗滌一次，干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮。殘余物經(jīng)過色譜純化，得到1.17g產(chǎn)物g和0.23g產(chǎn)物h。
將酯g(1.17g)、LiOH·H2O(160mg)、THF(3mL)與水(4.5mL)的混合物在rt下劇烈攪拌過夜。將混合物用鹽水稀釋，小心地用EtOAc萃取。合并有機相，用鹽水洗滌一次，干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，得到酸i(525mg)。
實施例10 化合物29 將胺a(1.56mmol)、2-溴丙酸(0.72g，4.68mmol)、BOP(2.1g，4.68mmol)與DIPEA(1.6ml，9.36mmol)在10mL DMF中的混合物在室溫下攪拌2小時。LCMS分析表明反應(yīng)完成。向反應(yīng)加入100mL EtOAc，將有機層用飽和NaHCO3、繼之以鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，濃縮至干。粗產(chǎn)物經(jīng)過色譜純化，用50％EtOAc/己烷洗脫，得到化合物b。
將化合物b(0.832g，1.5mmol)用乙醇胺(200μl，2.73mmol)的3mL DMF溶液處理，攪拌過夜使反應(yīng)完全。反應(yīng)混合物經(jīng)過反相HPLC純化，得到兩種非對映體c(53mg)和d(化合物29)(150mg)。
實施例11 N-Boc-N-環(huán)丙基甲基-L-丙氨酸 將L-丙氨酸甲酯鹽酸鹽a(5g，35.8mmol)和環(huán)丙烷甲醛b(2.67ml，35.8mmol)懸浮在50ml THF w/1％AcOH中。5mL CH3OH的加入使渾濁溶液變得澄清。加入NaCNBH4(2.25g，35.8mmol)，將反應(yīng)混合物攪拌過夜。加入aq.NaOH淬滅反應(yīng)，用EtOAc萃取兩次，有機層經(jīng)Na2SO4干燥，濃縮至干。粗產(chǎn)物經(jīng)過色譜純化，用30％EtOAc/己烷洗脫(用茚三酮染色)，得到化合物c(1g，18％)。
將化合物c(1g，6.37mmol)和二碳酸二叔丁氧羰基酯(2.1g，9.55mmol)稀釋在THF(20mL)和H2O(20mL)中，加入NaHCO3(1.3g，15.9mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過夜使反應(yīng)完全。在減壓下除去THF，水層用EtOAc萃取3次。合并有機層，用1N NaOH、飽和NH4Cl、繼之以鹽水洗滌，濃縮至干。將Boc-保護的化合物d(1.39g，5.40mmol)與LiOH.H2O(1.14g，27mmol)在THF(20mL)和H2O(20mL)中在室溫下攪拌過夜。汽提除去THF，向水層加入10％檸檬酸調(diào)節(jié)至pH＝4，然后用EtOAc萃取3次。合并有機層，用鹽水洗滌，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過反相C-18柱純化，用0％-50％乙腈/H2O洗脫，得到純的化合物e，為白色固體(794mg)。
實施例12 酰氟偶聯(lián)工藝
將Boc-MeAla-Chg-Pro-OH(2.3mmol)與吡啶(6.9μmol)的無水二氯甲烷(23mL)溶液冷卻至0℃，歷經(jīng)30sec滴加氰尿酰氟(2.3mmol)。將混合物在0℃下攪拌15min，在環(huán)境溫度下攪拌5hr，然后用水淬滅?；旌衔镉枚燃淄檩腿∪?總計100mL)，合并有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥。過濾和在真空中濃縮，得到肽基酰氟(peptide acid fluoride)，為澄清無色的油，無需進一步純化即可直接使用。
向固體胺(0.50mmol)加入粗的酰氟(0.50mmol)與吡啶(1.5mmol)的二氯甲烷(2.5mL)溶液，將所得混合物在環(huán)境溫度或50℃下(密封容器)攪拌。將混合物倒入碳酸氫鈉水溶液中，用二氯甲烷萃取三次(總計100mL)。合并有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，在真空中濃縮。粗的肽酰胺無需進一步純化即可直接使用。
實施例13 1-苯基-1H-吡唑-5-胺 1-苯基-1H-吡唑-5-胺在商業(yè)上可從TCI America獲得(catalog#A0174)。
實施例14 3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-5-胺 3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-5-胺在商業(yè)上可從TCI America獲得(catalog#A1311)。
實施例15 5-苯基噻唑-2，4-二胺
5-苯基噻唑-2，4-二胺在商業(yè)上可從Acros Organics獲得(catalog#11234-0010)。
實施例16 5-(三氟甲基)-4-苯基噻吩-3-胺 5-(三氟甲基)-4-苯基噻吩-3-胺在商業(yè)上可從Acros Organics獲得(catalog#SEW03133DA)。
實施例17 4-苯基-1H-吡唑-3-胺 4-苯基-1H-吡唑-3-胺按照E.L.Anderson et al.；J.Med.Chem.，1964，7，259-268所述工藝制備。
實施例18 5-甲基-4-苯基-1H-吡唑-3-胺 5-甲基-4-苯基-1H-吡唑-3-胺按照E.L.Anderson et al.；J.Med.Chem.，1964，7，259-268所述工藝制備。
實施例19 3-苯基-3H-1，2，3-三唑-4-胺 3-苯基-3H-1，2，3-三唑-4-胺按照K.M.Baines，T.W.Rourke，K.Vaughan；J.Org.Chem.，1981，46，856-859所述工藝制備。
實施例20 4-苯基異唑-5-胺 4-苯基異唑-5-胺按照H.Peeters，W.Vogt；EP 43024所述工藝制備。
實施例21 3-苯基-1H-吡唑-4-胺 3-苯基-1H-吡唑-4-胺按照C.Chen，K.Wilcoxen，J.R.McCarthy；Tetrahedron Lett.，1988，39，8229-8232所述工藝制備。
實施例22 1-甲基-3-苯基-1H-吡唑-4-胺 1-甲基-3-苯基-1H-吡唑-4-胺按照C.Chen，K.Wilcoxen，J.R.McCarthy；Tetrahedron Lett.，1988，39，8229-8232所述工藝制備。
實施例23 1-甲基-5-苯基-1H-吡唑-4-胺 1-甲基-5-苯基-1H-吡唑-4-胺按照C.Chen，K.Wilcoxen，J.R.McCarthy；Tetrahedron Lett.，1988，39，8229-8232所述工藝制備。
實施例24 3-甲基-4-苯基異唑-5-胺 3-甲基-4-苯基異唑-5-胺按照H.Peeters，W.Vogt；EP 43024所述工藝制備。
實施例25 1-苯基-1H-四唑-5-胺 1-苯基-1H-四唑-5-胺按照R.A.Batey，D.A.Powell；Org.Lett.，2000，2，3237-3240所述工藝制備。
實施例26 4-苯基-1，2，5-二唑-3-胺 4-苯基-1，2，5-二唑-3-胺按照R.Lakhan，O.P.Singh；Ind.J.Chem.，1987，26B，690-692所述工藝制備。
實施例27 1-氨基-5-苯基-1H-四唑 1-氨基-5-苯基-1H-四唑按照T.L.Gilchrist，G.E.Gymer，C.W.Rees；J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1，1975，1747-1750所述工藝制備。
實施例28 4-氨基-3-苯基-4H-1，2，4-三唑 4-氨基-3-苯基-4H-1，2，4-三唑按照A.A.Ikizler，N.Yildirim；J.Heterocyclic Chem.，1998，35，377-380所述工藝制備。
實施例29 3-苯基噻吩-2-胺
3-苯基噻吩-2-胺按照Y.Yoshikawa et al.；EP 737682(US 5747518)所述工藝制備。
實施例30 2-苯基噻吩-3-胺 2-苯基噻吩-3-胺按照Y.Yoshikawa et al.；EP 737682(US 5747518)所述工藝制備。
實施例31 4-苯基噻吩-3-胺 4-苯基噻吩-3-胺按照G.Kirsch，D.Cagniant，P.Cagniant；J.HeterocyclicChem.，1982，19，443-445所述工藝制備。
實施例32 5-氨基-4-苯基噻唑-2-硫醇 5-氨基-4-苯基噻唑-2-硫醇按照A.H.Cook，I.Heilbron，A.L.Levy；J.Chem.Soc.，1947，1598-1609所述工藝制備。
實施例33 2-(甲硫基)-4-苯基噻唑-5-胺 2-(甲硫基)-4-苯基噻唑-5-胺按照A.H.Cook，I.Heilbron，A.L.Levy；J.Chem.Soc.，1947，1598-1609所述工藝制備。
實施例34 5-氨基-2-(甲基亞磺酰基)-4-苯基噻唑 在環(huán)境溫度下，向5-氨基-2-(甲硫基(methylsulfanyl))-4-苯基噻唑(305mg，1.37mmol)的乙酸(3.0mL)溶液滴加過氧化氫水溶液(660μl，30％wt，6.9mmol)。4hr后，使混合物在二氯甲烷(60mL)與水(60mL)之間分配。分離有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到純的5-氨基-2-(甲基亞磺?；?-4-苯基噻唑(285mg，87％)。
實施例35 5-氨基-2-(甲基磺?；?-4-苯基噻唑 向5-氨基-2-(甲硫基)-4-苯基噻唑(302mg，1.36mmol)的二氯甲烷(5.0mL)溶液逐份加入3-氯過苯甲酸(638mg，77％wt，2.9mmol)，同時冷卻至0℃。將混合物用二氯甲烷(3.0mL)稀釋，5min后升溫至環(huán)境溫度。3hr后逐份加入更多的3-氯過苯甲酸(305mg，77％wt，1.4mmol)。20hr后將混合物用硫代硫酸鈉(2mL，1.0M)處理，倒入飽和碳酸氫鈉水溶液中，用二氯甲烷萃取三次(總計100mL)。合并有機相，用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空中濃縮，得到暗褐色泡沫。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到純的5-氨基-2-(甲基磺?；?-4-苯基噻唑(90mg，26％)。
實施例36 5-氨基-2-(氨基磺酰基)-4-苯基噻唑和5-氨基-4-苯基噻唑
將5-氨基-2-巰基-4-苯基噻唑(1.01g，4.83mmol)與鄰苯二酸酐(716mg，4.84mmol)的乙酸(20mL)溶液在100℃下加熱64hr，冷卻。將混合物用冷水(150mL)稀釋，過濾收集沉淀，用水(50mL)洗滌，在高真空下干燥(1.46g，90％)。鄰苯二酰亞胺被微量二硫化物污染，不過無需進一步純化即可使用。
在0℃下，將2-巰基-4-苯基-5-鄰苯二酰亞氨基-噻唑(203mg，600μmol)的乙酸(4.5mL)與水(0.5mL)溶液用N-氯琥珀酰亞胺(243mg，1.82mmol)一次性處理。將混合物在0℃下攪拌10min，升溫至環(huán)境溫度達1hr，然后在二氯甲烷(50mL)與水(50mL)之間分配。水相用二氯甲烷萃取二次(2×25mL)，合并有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥。過濾和在真空中濃縮，得到2-(氯磺?；?-4-苯基-5-鄰苯二酰亞氨基-噻唑(主要組分)與4-苯基-5-鄰苯二酰亞氨基-噻唑(ca.2∶1)的混合物(231mg)，無需純化即可使用。
在環(huán)境溫度下，將磺酰氯與4-苯基-5-鄰苯二酰亞氨基-噻唑(231mg)在二氯甲烷(10mL)中的粗混合物用氨的甲醇溶液(900μl，2.0M)逐滴處理。10min后在真空中濃縮混合物。將殘余物懸浮在乙醇(10mL)中，用肼的乙醇溶液(ethanolic hydrazine)(660μl，1.0M，660μmol)處理，加熱至回流。1.5hr后加入另一部分肼的乙醇溶液(660μl，1.0M，660μmol)，繼續(xù)回流15hr。將冷卻了的混合物過濾，在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速色譜純化(乙酸乙酯/己烷)，得到純的5-氨基-2-(氨基磺?；?-4-苯基噻唑(56mg，3步收率36％)和5-氨基-4-苯基噻唑(17mg，3步收率16％)。
實施例37 5-氨基-2-(叔丁硫基)-4-苯基噻唑
向5-氨基-2-巰基-4-苯基噻唑(210mg，1.01mmol)的水(1.0mL)與叔丁醇(82mg，1.1mmol)懸液加入濃硫酸(3.0mL)，同時冷卻至約20℃。在環(huán)境溫度下1.5hr后加入另一部分叔丁醇的水溶液(300μl，1.0M，300μmol)。1.5hr后，將混合物倒入過量碳酸氫鈉水溶液中，用二氯甲烷萃取三次(總計120mL)。合并有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠色譜純化(乙酸乙酯/己烷)，得到5-氨基-2-(叔丁硫基)-4-苯基噻唑(220mg，82％)。
實施例38 5-氨基-2-(叔丁基亞磺?；?-4-苯基噻唑 在環(huán)境溫度下，向5-氨基-2-(叔丁硫基)-4-苯基噻唑(102mg，385μmol)的乙酸(5.0mL)溶液滴加過氧化氫水溶液(218μl，30％wt，1.9mmol)。5hr后使混合物在二氯甲烷(50mL)與水(50mL)之間分配。分離水相，用二氯甲烷(20mL)萃取。合并有機相，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，在真空中濃縮，得到基本上純的5-氨基-2-(叔丁基亞磺酰基)-4-苯基噻唑(110mg，quant.)。
實施例39 5-氨基-4-苯基-2-(三氟甲硫基)噻唑 在環(huán)境溫度下，將5-氨基-2-巰基-4-苯基噻唑(503mg，2.41mmol)的乙酸(5.0mL)懸液用己烷-2，5-二酮(290μl，2.47mmol)處理14hr，然后加熱至回流達3hr?；旌衔镌诨亓飨伦兊镁鶆?，冷卻后沉積出沉淀，過濾回收，用乙酸洗滌(3×1.0mL)，在真空中干燥，得到純的吡咯烷子基-噻唑(624mg，90％)，為淺黃色微晶性固體。
將巰基-噻唑(201mg，701μmol)與碳酸鉀(291mg，2.11mmol)的DMF(2.0mL)溶液用三氟甲基碘鼓泡飽和5min，密封容器，在50℃下加熱30min。將冷卻了的混合物再次用三氟甲基碘飽和，加熱至100℃達1.5hr。將混合物再次用三氟甲基碘飽和，恢復(fù)100℃(總計24hr)，冷卻。將混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次(總計100mL)。合并有機相，用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾，在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到純的(三氟甲硫基)-噻唑(72mg，29％)，為無色結(jié)晶性薄膜。
將噻唑(72mg)與鹽酸羥胺(71mg，1.0mmol)的乙醇(5.0mL)懸液加熱至回流達17hr，用乙酸(3mL)稀釋，回流另外2hr，濃縮至約3mL。將冷卻了的混合物用羥胺水溶液(1.0mL，50％wt)處理，恢復(fù)回流達42hr。將混合物用水(50mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)處理，用二氯甲烷萃取三次(總計100mL)。合并有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到純的5-氨基-4-苯基-2-(三氟甲硫基)噻唑(12.5mg，22％)。
實施例40 5-氨基-4-苯基-2-(三氟甲基)噻唑
在0℃下，將α-氨基苯基乙酰胺(2.00g，13.3mmol)的甲醇(50mL)溶液用三氟乙酸乙酯(3.2mL，27mmol)處理30min，升溫至環(huán)境溫度達18hr。在真空中濃縮混合物，用甲醇變得均勻，再次濃縮，得到純的三氟乙酰胺(3.27g，quant.)。
將三氟乙酰胺(881mg，3.58mmol)和Lawesson氏試劑(1.45g，3.59mmol)一起用無水吡啶(7.2mL)處理，將混合物加熱至100℃達20hr。將冷卻了的混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液中，用氯仿萃取三次(總計120mL)。合并有機相，用含有十分之一體積飽和碳酸氫鈉水溶液的水、和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥。過濾和在真空中濃縮，得到紅褐色油(829mg)。將粗產(chǎn)物用氫氧化鈉水溶液(25mL，1.0N)處理15min，用二氯甲烷萃取三次(總計100mL)。合并有機相，用氫氧化鈉水溶液(25mL，1.0N)和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾和在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到純的5-氨基-4-苯基-2-(三氟甲基)噻唑(65mg，7.5％)。
實施例41 3-氨基-4-苯基-1，2，5-噻二唑 在0℃下，歷經(jīng)20min向一氯化硫(24.0g，178mmol)的DMF(30mL)溶液逐份加入α-氨基苯基乙腈鹽酸鹽(10.0g，59.3mmol)。40min后使混合物升溫至環(huán)境溫度達20min，用DMF(20mL)稀釋，攪拌另外20hr，然后倒入冰水中。將混合物用醚(200mL)萃取，過濾，再用醚萃取(2×50mL)。合并有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，在真空中濃縮，得到3-氯-4-苯基-1，2，5-噻二唑，為移動性橙色的油(10.1g，87％)。這種油(9.35g)在減壓下的短程蒸餾得到澄清無色的油(7.75g，83％)，放置后結(jié)晶。
在0℃下，將3-氯-4-苯基-1，2，5-噻二唑(3.19g，16.2mmol)的THF(32mL)溶液用雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰(lithium bis(trimethylsilyl)amide)的THF溶液(17.0mL，1.0M，17.0mmol)逐滴處理。10min后使混合物升溫至環(huán)境溫度達1.5hr，用1N鹽酸處理，用醚萃取三次(總計300mL)。合并有機相，用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，在真空中濃縮。將殘余物溶于甲醇(50mL)和三乙胺(0.5mL)，加熱至回流達15hr，再次在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到3-氨基-4-苯基-1，2，5-噻二唑(1.96g，68％)，為無色固體。
實施例42 5-氨基-2-甲基-4-苯基噻唑 在0℃下，向α-氨基苯基乙腈鹽酸鹽(3.37g，20.0mmol)與粉碎的硫(641mg，20.0mmol)的乙醇(20mL)懸液加入三乙胺(4.18mL，30.0mmol)，然后加入乙醛(2.3mL，41mmol)。將容器密封，加熱至60-70℃達1hr。將冷卻了的混合物過濾，在真空中濃縮，殘余物用乙醇(20mL)和鹽酸(20mL，1N)處理15hr。將混合物用碳酸鈉水溶液處理，用乙酸乙酯萃取三次(總計300mL)。合并有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空中濃縮，得到暗褐色油。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到5-氨基-2-甲基-4-苯基噻唑(1.31g，34％)，從甲苯中結(jié)晶。
實施例43 5-氨基-2-甲基-4-苯基噻唑
將α-氨基苯基乙腈鹽酸鹽(1.69g，10.0mmol)、粉碎的硫(321mg，10.0mmol)與4-吡啶甲醛(1.91mL，20.0mmol)的乙醇(10mL)懸液用三乙胺(2.09mL，15.0mmol)處理，將混合物在50℃下攪拌80min。將冷卻了的混合物用乙醇(5mL)稀釋，在環(huán)境溫度下用羥胺水溶液(700μl，50％wt，11mmol)處理15hr，用二氯甲烷(50mL)稀釋。加入飽和碳酸氫鈉水溶液，分離水相，用二氯甲烷萃取兩次(總計100mL)。合并有機相，經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空中濃縮，得到暗褐色油性泡沫(3.23g)。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到5-氨基-2-(4-吡啶基)-4-苯基噻唑(1.41g，56％)。
實施例44 2，4-二苯基噻唑-5-胺 2，4-二苯基噻唑-5-胺按照K.Gewald，H.Schonfelder，U.Hain；J.Prakt.Chem.，1974，361，299-303所述工藝制備。
實施例45 4-苯基-2-(吡啶-2-基)噻唑-5-胺 4-苯基-2-(吡啶-2-基)噻唑-5-胺按照K.Gewald，H.Schonfelder，U.Hain；J.Prakt.Chem.，1974，361，299-303所述工藝制備。
實施例46 4-苯基-2-(吡啶-3-基)噻唑-5-胺
4-苯基-2-(吡啶-3-基)噻唑-5-胺按照K.Gewald，H.Schonfelder，U.Hain；J.Prakt.Chem.，1974，361，299-303所述工藝制備。
實施例47 5-氨基-2-(Fmoc-氨基)-4-苯基噻唑 在0℃下，將α-氨基苯基乙腈鹽酸鹽(3.19g，18.9mmol)與Fmoc-異硫氰酸酯(5.31g，18.9mmol)的DCM懸液用乙基二異丙基胺(3.62mL，20.8mmol)處理1hr，然后在環(huán)境溫度下處理3hr。將混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液中，用乙酸乙酯萃取三次。合并有機相，用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到5-氨基-2-(Fmoc-氨基)-4-苯基噻唑(3.75g，48％)。
實施例48 N-(5-氨基-4-苯基噻唑-2-基)乙酰胺 N-(5-氨基-4-苯基噻唑-2-基)乙酰胺按照實施例47所述相似工藝制備。
實施例49 N-(5-氨基-4-苯基噻唑-2-基)苯甲酰胺 N-(5-氨基-4-苯基噻唑-2-基)苯甲酰胺按照實施例47所述相似工藝制備。
實施例50 乙基5-氨基-4-苯基噻唑-2-基氨基甲酸酯 乙基5-氨基-4-苯基噻唑-2-基氨基甲酸酯按照實施例47所述相似工藝制備。
實施例51 N-(5-氨基-4-(2-氯苯基)噻唑-2-基)乙酰胺 N-(5-氨基-4-(2-氯苯基)噻唑-2-基)乙酰胺按照實施例47所述相似工藝制備。
實施例52 (9H-芴-9-基)甲基5-氨基-4-(2-氯苯基)噻唑-2-基氨基甲酸酯 (9H-芴-9-基)甲基5-氨基-4-(2-氯苯基)噻唑-2-基氨基甲酸酯按照實施例47所述相似工藝制備。
實施例53 5-氨基-2-(1-咪唑基)-4-苯基噻唑 在0℃下，將α-氨基苯基乙腈鹽酸鹽(5.01g，29.7mmol)與硫代羰基二咪唑(5.30g，29.7mmol)的DCM(100mL)懸液用乙基二異丙基胺(5.69mL，32.7mmol)處理15min，然后在環(huán)境溫度下處理3hr。將混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)和水(150mL)中，用二氯甲烷萃取三次(總計300mL)。合并有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，在真空中濃縮，得到暗褐色油(8.18g)。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到5-氨基-2-(1-咪唑基)-4-苯基噻唑(2.47g，34％)。
實施例54 25-二氨基-4-苯基噻唑的MeAla-Chg-Pro肽酰胺 在環(huán)境溫度下，將5-氨基-2-(Fmoc-氨基)-4-苯基噻唑(250mg，605μmol)用酰氟(730μmol；如前所述從Boc-MeAla-Chg-Pro-OH衍生)與吡啶(147μl，1.82mmol)的二氯甲烷(2.0mL)溶液處理6天。將混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液中，用二氯甲烷萃取三次(總計100mL)。合并有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，在真空中濃縮，得到粗的肽酰胺，為黃色的油(525mg)，無需純化即可隨后使用。
在環(huán)境溫度下，將粗的肽酰胺的DMF(9.0mL)溶液用哌啶(1.0mL)處理20min，然后在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到2，5-二氨基-4-苯基噻唑肽酰胺(228mg，2步收率61％)。
在環(huán)境溫度下，將粗的肽酰胺(48mg，78μmol)的二氯甲烷(2.0mL)溶液用三氟乙酸(2.0mL)處理30min。在真空中濃縮混合物，用二氯甲烷變得均勻，再次濃縮。殘余物經(jīng)過制備型反相HPLC純化(乙腈/水)，得到完全去保護的肽酰胺三氟乙酸鹽(42mg，73％)，為白色無定形固體。
實施例55 2，5-二氨基-4-(3-氯苯基)噻唑的MeAla-Chg-Pro肽酰胺 利用實施例55所述相同工藝制備2，5-二氨基-4-(3-氯苯基)噻唑的MeAla-Chg-Pro肽酰胺。
實施例56 5-氨基-2-(新戊酰氨基)-4-苯基噻唑的MeAla-Chg-Pro酰胺 在環(huán)境溫度下，將Boc-肽氨基-噻唑(48mg，78μmol)與乙基二異丙基胺(140μl，0.80mmol)的二氯甲烷(2.0mL)溶液用新戊酰氯(50μl，0.40mmol)處理3hr，然后用飽和碳酸氫鈉水溶液處理，用二氯甲烷萃取三次(總計60mL)。合并有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，在真空中濃縮。在環(huán)境溫度下將粗的油用三氟乙酸(5.0mL)的二氯甲烷(5.0mL)溶液處理20min。在真空中濃縮混合物，用二氯甲烷變得均勻，再次濃縮。將殘余物溶于乙酸水溶液(50％)，經(jīng)過制備型反相HPLC純化(乙腈/水)，得到純的肽酰胺三氟乙酸鹽(38mg，2步收率68％)，為白色無定形固體。
實施例57 5-氨基-2-(新戊酰氨基)-4-苯基噻唑的MeAla-Chg-Pro酰胺 在環(huán)境溫度下，將Boc-肽氨基-噻唑(38mg，62μmol)與乙基二異丙基胺(107μl，0.61mmol)的二氯甲烷(2.0mL)溶液用甲磺酰氯(24μl，0.31mmol)處理20min，然后用飽和碳酸氫鈉水溶液處理，用二氯甲烷萃取三次。合并有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，在真空中濃縮。在環(huán)境溫度下將粗的油用三氟乙酸(4mL)的二氯甲烷(4mL)溶液處理20min。在真空中濃縮混合物，用二氯甲烷變得均勻，再次濃縮。將殘余物溶于乙酸水溶液(50％)，經(jīng)過制備型反相HPLC純化(乙腈/水)，得到純的肽酰胺三氟乙酸鹽(11mg，2步收率23％)，為白色無定形固體。
實施例57 2-(乙?；被?-4-氨基-5-苯基噻唑 在環(huán)境溫度下，將α-溴苯基乙腈(1.08g，5.48mmol)的乙醇(10mL)溶液用N-乙?；螂?649mg，5.49mmol)處理4hr，然后加熱至回流達3.5hr。將冷卻了的混合物在真空中濃縮，然后在二氯甲烷與飽和碳酸氫鈉水溶液之間分配。將有機相用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到2-(乙?；被?-4-氨基-5-苯基噻唑(295mg，23％)。
實施例58 2，5-二苯基噻唑-4-胺 2，5-二苯基噻唑-4-胺利用實施例57所述相同工藝制備。
實施例59 5-苯基-2-(吡嗪-2-基)噻唑-4-胺 5-苯基-2-(吡嗪-2-基)噻唑-4-胺利用實施例57所述相同工藝制備。
實施例60 5-氨基-1-(3′-硝基苯基)吡唑 將3-硝基苯基肼鹽酸鹽(7.03g，36.3mmol)、二異丙基乙胺(9.5mL，54.5mmol)和乙醇(60mL)在室溫氮下攪拌2h。加入乙氧基亞甲基丙二腈(4.52g，36.3mmol)，然后使反應(yīng)回流1h。反應(yīng)冷卻至室溫。在減壓下除去溶劑直至沉淀破碎。過濾固體，得到6.54g環(huán)化產(chǎn)物(78％收率)。
將5-氨基-1-(3’-硝基苯基)-4-氰基吡唑(559mg，2.44mmol)和磷酸(86％，6mL)在170℃下回流15h。將反應(yīng)冷卻至室溫，用氫氧化銨中和。將有機相用二乙醚萃取三次(總計40mL)，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥。除去溶劑，得到5-氨基-1-(3’-硝基苯基)-吡唑，為黃色粉末(398mg，80％收率)。
實施例61 1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-5-胺 1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-5-胺利用實施例60所述相同工藝制備。
實施例62 1-(3-氯苯基)-1H-吡唑-5-胺 1-(3-氯苯基)-1H-吡唑-5-胺利用實施例60所述相同工藝制備。
實施例63 1-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-胺 1-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-胺利用實施例60所述相同工藝制備。
實施例64 1-(3-溴苯基)-1H-吡唑-5-胺 1-(3-溴苯基)-1H-吡唑-5-胺利用實施例60所述相同工藝制備。
實施例65 1-(3-三氯甲基苯基)-1H-吡唑-5-胺
1-(3-三氯甲基苯基)-1H-吡唑-5-胺利用實施例60所述相同工藝制備。
實施例66 1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-胺 1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-胺利用實施例60所述相同工藝制備。
實施例67 1-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-胺 在實施例60中5-氨基-4-氰基-1-(3′-甲氧基苯基)吡唑脫氰作用之后分離到1-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-胺。
實施例67 1-(3-羥基苯基)-1H-吡唑-5-胺 1-(3-羥基苯基)-1H-吡唑-5-胺利用實施例60所述相同工藝制備。
實施例68 4-氨基-5-苯基-1，2，3-噻二唑
將苯基丙酮酸(25g，149mmol)和肼基甲酸乙酯(16g，149mmol)在苯(225mL)中回流2hr，在真空中濃縮混合物。將粗產(chǎn)物溶于少量溫?zé)岬亩燃淄?，冷卻至環(huán)境溫度后得到腙，為黃色沉淀，過濾分離(30.4g，81％)，無需進一步純化即可使用。
在65℃下，歷經(jīng)45min向氫氧化鉀(18.2g，325mmol)的水(37mL)與2-(2-乙氧基乙氧基)-乙醇(37mL)溶液滴加Diazald(N-甲基-N-亞硝基-對-甲苯磺酰胺；18.6g，86.9mmol)的二乙醚(180mL)溶液，生成重氮甲烷。蒸餾生成的重氮甲烷的醚溶液，在0℃下直接加入到攪拌著的腙(10.9g，43.5mmol)的甲醇(150mL)溶液中。將系統(tǒng)用過量二乙醚沖洗直至餾出液變得澄清，用乙酸(1mL)處理混合物，在真空中濃縮。使所得油在乙酸乙酯(200mL)與碳酸氫鈉(200mL)之間分配，有機相經(jīng)硫酸鈉干燥。過濾和在真空中濃縮，得到甲基酯，為黃色固體(10.2g，89％)。
在環(huán)境溫度下，將腙-甲基酯(10.2g，38.6mmol)用亞硫酰氯(25mL，343mmol)處理24hr，在真空中濃縮混合物。從己烷中結(jié)晶，得到噻二唑-甲基酯(4.81g，56％)。
在環(huán)境溫度下，將噻二唑-甲基酯(2.79g，12.7mmol)用水合肼(1.09mL，93.9mmol)的甲醇(50mL)溶液處理24hr，過濾回收所得白色沉淀。從異丙醇中重結(jié)晶，得到噻二唑-酰肼(3.99g，83％)。
在0℃下，將噻二唑-酰肼(3.99g，18.1mmol)的水(40mL)與濃鹽酸(1.8mL，21.9mmol)溶液用亞硝酸鈉(1.52g，21.3mmol)的水(15mL)溶液逐滴處理2hr。過濾回收所得沉淀，得到噻二唑-?；B氮，為灰白色固體(3.95g，94％)。
按照K.Masuda et al.；Chem.Pharm.Bull.，1981，29，1743-1747所述工藝，使噻二唑-?；B氮(3.95g，17.1mmol)在乙醇(40mL)中回流45min，在真空中濃縮混合物。從苯中結(jié)晶，得到乙基氨基甲酸酯(3.37g，74％)。
在密封的容器中，將乙基氨基甲酸酯(399mg，1.60mmol)與溴化氫的乙酸(3mL，30％wt)溶液在80℃下加熱18hr。使冷卻了的混合物在乙酸乙酯(15mL)與水(15mL)之間分配，在真空中濃縮有機相。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到4-氨基-5-苯基-1，2，3-噻二唑(136mg，49％)。
實施例69 4-氨基-5-苯基異唑 將5-苯基-4-異唑羧酸(460mg，2.36mmol)和亞硫酰氯(1.71mL，23.6mmol)在回流下加熱3hr，在真空中濃縮混合物，得到酰氯，無需純化即可使用。
在0℃下，將粗的酰氯的丙酮溶液(7mL)用疊氮化鈉(165mg，2.62mmol)的水(2mL)溶液處理1.5hr，升溫至環(huán)境溫度，在真空中濃縮。將所得白色固體用水洗滌，在真空中干燥，無需純化即可使用。
將酰基疊氮(409mg，1.91mmol)在回流的甲醇中加熱6hr，在真空中濃縮混合物，得到甲基氨基甲酸酯，為白色固體，無需純化即可使用。
將甲基氨基甲酸酯(378mg，1.73mmol)用氫溴酸(13mL，48％wt，115mmol)處理，用乙酸(2mL)變得均勻，在65℃下加熱48hr，冷卻。將混合物用氫氧化鈉水溶液中和，用乙酸乙酯萃取(2×125mL)。合并有機相，經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空中濃縮，得到4-氨基-5-苯基異唑，為白色固體(193mg，70％)。
實施例70 5-烷基-2-氨基-3-苯基噻吩的合成 將苯乙腈(2.33mL，20mmol)用Verkade氏堿(2，8，9-三甲基-2，5，8，9-四氮雜-1-磷雜二環(huán)[3.3.3]十一烷；441mg，2.0mmol)與3，3-二甲基丁醛(2.64mL，200mmol)的甲醇(4mL)溶液處理，在密封的容器中將混合物在45℃下加熱16hr。將冷卻了的混合物在真空中濃縮，得到不飽和的腈，為無色的油，無需純化即可使用。
在密封的容器中，將腈(10.0mmol)、碳酸鉀(2.34g，23.4mmol)與粉碎的硫(330mg，10.3mmol)在乙醇(2mL)中的混合物在160℃下加熱24hr。將冷卻了的混合物用水稀釋，用二乙醚萃取兩次，合并有機相，在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到5-氨基-2-叔丁基-4-苯基噻唑(75％)。
實施例71 5-甲基-3-苯基噻吩-2-胺 5-甲基-3-苯基噻吩-2-胺利用實施例70所述相同工藝制備。
實施例72 5-異丙基-3-苯基噻吩-2-胺 5-異丙基-3-苯基噻吩-2-胺利用實施例70所述相同工藝制備。
實施例73 2-氨基-5-氯-3-苯基噻吩 在環(huán)境溫度下，將2-氨基-3-苯基-噻吩(12.0mmol)的THF(7mL)溶液用二碳酸二叔丁酯(2.97g，13.3mmol)和二異丙基乙胺(3.15mL，18.1mmol)處理60hr，在真空中濃縮混合物。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到2-(N-Boc-氨基)-3-苯基-噻吩(1.98g，59％)。
在0℃下，向2-(N-Boc-氨基)-3-苯基-噻吩(89mg，0.32mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液緩慢加入N-氯琥珀酰亞胺(48mg，0.36mmol)，使混合物升溫至環(huán)境溫度達16hr。將混合物用二氯甲烷稀釋，用水洗滌，在真空中濃縮有機相。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到2-(N-Boc-氨基)-5-氯-3-苯基-噻吩(66mg，66％)。
在環(huán)境溫度下，將2-(N-Boc-氨基)-5-氯-3-苯基-噻吩(66mg，0.21mmol)用三氟乙酸(1mL)的二氯甲烷(3mL)溶液處理1hr。將混合物用DMF(1mL)稀釋，在減壓下除去更多的揮發(fā)性產(chǎn)物。所得2-氨基-5-氯-3-苯基噻吩的DMF溶液無需純化即可用于隨后的偶聯(lián)步驟。
實施例74 1-甲基-4-(甲基氨基)-3-苯基吡唑 向1-甲基-4-氨基-3-苯基吡唑(572mg，3.30mmol)與二碳酸二叔丁酯(799mg，3.66mmol)的THF(10mL)與水(3mL)溶液滴加飽和碳酸氫鈉水溶液(3mL，1.2M，3.6mmol)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌7hr，然后倒入檸檬酸水溶液(0.5M)中，用醚(ether)萃取三次(總計100mL)。合并有機相，用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，在真空中濃縮，得到粗的氨基甲酸酯，為褐色的油(920mg)，無需純化即可隨后使用。

將氫化鈉的礦物油懸液(327mg，60％wt，8.18mmol)用THF洗滌(2×5mL)，在0℃下懸浮在THF(3.0mL)中。向其中滴加吡唑(744mg，2.72mmol)的THF(5.0mL)溶液，15min后滴加甲基碘(187μl，3.00mmol)。在0℃下另外30min后，使混合物升溫至環(huán)境溫度達18hr，然后用飽和氯化銨水溶液和足量水處理，以溶解固體?；旌衔镉妹演腿∪?總計120mL)，合并有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，在真空中濃縮，得到粗的N-甲基氨基甲酸酯，為琥珀色油(750mg，96％)，無需純化即可使用。
在環(huán)境溫度下，將粗的N-甲基氨基甲酸酯的DCM溶液(1.0mL)用三氟乙酸(1.0mL)處理40min。在真空中濃縮混合物，用二氯甲烷變得均勻，再次濃縮，得到基本上純的1-甲基-4-(甲基氨基)-3-苯基吡唑(150mg，quant.)，為褐色的油。
實施例75 N-甲基-4-苯基-1，2，3-噻二唑-5-胺 N-甲基-4-苯基-1，2，3-噻二唑-5-胺利用實施例74所述相同工藝制備。
實施例76 1-叔丁基-4-氨基-3-苯基吡唑和1-叔丁基-4-氨基-5-苯基吡唑 在環(huán)境溫度下，將2-溴苯乙酮(30.0g，151mmol)的DMF(120mL)溶液用鄰苯二酰亞氨基鉀(30.8g，166mmol)逐份處理，然后加熱至40℃達3.5hr。將冷卻了的混合物倒入水(600mL)中，用氯仿萃取(300mL+100mL)。合并有機相，用氫氧化鈉(200mL，0.2N)、水(2×100mL)和鹽水(100mL)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，在真空中濃縮。將所得奶油固體懸浮在醚(100mL)中，過濾回收，用醚(100mL)洗滌，在真空中干燥，得到純的2-鄰苯二酰亞氨基-苯乙酮，為白色固體(34.3g，86％)。
按照C.Chen，K.Wilcoxen，J.R.McCarthy；Tetrahedron Lett.，1988，39，8229-8232所述工藝，將2-鄰苯二酰亞氨基苯乙酮(13.3g，50.0mmol)的二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(26.7mL，200mmol)懸液在回流下加熱28hr，在真空中濃縮。將所得琥珀色油從異丙醇(100mL)中結(jié)晶，用異丙醇洗滌(2×5mL)，得到3-(二甲氨基)-1-苯基-2-鄰苯二酰亞氨基-2-丙烯-1-酮，為黃色針晶(13.7g，85％)。
將3-(二甲氨基)-1-苯基-2-鄰苯二酰亞氨基-2-丙烯-1-酮(3.00g，9.38mmol)與叔丁基肼鹽酸鹽(1.29g，10.3mmol)在乙醇(94mL)與水(9.4mL)中的混合物在環(huán)境溫度下攪拌64hr，然后在回流下加熱24hr。將冷卻了的混合物用肼(590μl，18.8mmol)處理，恢復(fù)回流達75min。冷卻和放置在環(huán)境溫度下后，有沉淀生成。將混合物過濾，固體用乙醇(5mL)與水(0.5mL)的混合物洗滌，在真空中濃縮濾液。使殘余物在醚(250mL)與飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)之間分配，用水(100mL)稀釋，水相用醚萃取二次(2×50mL)。合并有機相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空中濃縮，得到蒼白固體(1.92g)。經(jīng)過硅膠快速色譜處理(乙酸乙酯/己烷)，得到1-叔丁基-4-氨基-3-苯基吡唑(1.52g，2步收率75％)和1-叔丁基-4-氨基-5-苯基吡唑(114mg，2步收率6％)。
實施例77 1-(2，2，2-三氟乙基)-3-苯基-1H-吡唑-4-胺和1-(2，2，2-三氟乙基)-5-苯基-1H-吡唑-4-胺
1-(2，2，2-三氟乙基)-3-苯基-1H-吡唑-4-胺和1-(2，2，2-三氟乙基)-5-苯基-1H-吡唑-4-胺按照實施例76所述工藝從2，2，2-三氟乙基肼制備。
實施例78 IAP抑制作用測定法在下列實驗中使用被稱為ASMLXBIR3SG的嵌合BIR結(jié)構(gòu)域，其中110個殘基中有11個對應(yīng)于在XIAP-BIR3中見到的那些，其余對應(yīng)于ML-IAP-BIR。已經(jīng)顯示嵌合蛋白MLXBIR3SG結(jié)合和抑制胱天蛋白酶顯著好于天然BIR結(jié)構(gòu)域，但是所結(jié)合的Smac-類肽和成熟Smac具有與天然ML-IAP-BIR相似的親和性。在轉(zhuǎn)染到MCF7細胞中時，嵌合BIR結(jié)構(gòu)域MLXBIR3SG的胱天蛋白酶-9抑制作用提高已經(jīng)與阿霉素-誘導(dǎo)的程序性細胞死亡的抑制作用增加有關(guān)連。
MLXBIR3SG序列MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLETEEEEEEGAGATLSRGPAFPGMGSEELRLASFYDWPLTAEVPPELLAAAGFFHTGHQDKVRCFFCYGGLQSWKRGDDPWTEHAKWFPGCQFLLRSKGQEYINNIHLTHSL(SEQ ID NO.1)TR-FRET肽結(jié)合測定法按照Kolb等的工藝(Journal of Biomolecular Screening，1996，1(4)203)，在Wallac Victor2 Multilabeled Counter Reader(Perkin Elmer Life andAnalytical Sciences，Inc.)上進行定時-解析的熒光共振能量轉(zhuǎn)移競爭實驗(Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer competitionexperiments)。在試劑緩沖液(50mM Tris[pH 7.2]，120mM NaCl，0.1％牛球蛋白，5mM DTT和0.05％辛基糖苷)中制備雞尾酒試劑，其中含有300nM his-標記的MLXBIR3SG、200nM生物素基化SMAC肽(AVPI)、5μg/mL抗-his別藻藍蛋白(XL665)(CISBio International)和200ng/mL鏈霉抗生物素蛋白-銪(Perkin Elmer)(作為替代選擇，這種雞尾酒試劑可以使用銪-標記的抗-His(Perkin Elmer)和鏈霉抗生物素蛋白-別藻藍蛋白(Perkin Elmer)制備，濃度分別為6.5nM和25nM)。在室溫下溫育雞尾酒試劑達30分鐘。溫育后，將雞尾酒試劑加入到拮抗劑化合物(起始濃度為50μM)在384-孔黑色FIA平板(Greiner Bio-One，Inc.)中的1∶3系列稀釋液中。在室溫下溫育90分鐘后，用濾光器讀取熒光，銪的激發(fā)波長為340nm，銪和別藻藍蛋白的發(fā)射波長分別為615nm和665nm。計算拮抗劑數(shù)據(jù)，為別藻藍蛋白在665nm下的發(fā)射信號與銪在615nm下的發(fā)射信號之比(這些比例乘以系數(shù)10,000，以便數(shù)據(jù)處理)。將所得數(shù)值對拮抗劑濃度作圖，利用Kaleidograph軟件(SynergySoftware，Reading，PA)帶入4-參數(shù)方程。從IC50值測定拮抗劑效力的指標。在本測定法中證明本發(fā)明化合物具有IAP抑制活性。
熒光極化肽結(jié)合測定法按照Keating，S.M.，Marsters，J，Beresini，M.，Ladner，C.，Zioncheck，K.，Clark，K.，Arellano，F(xiàn).，and Bodary.，S.(2000)in Proceedings of SPIEIn VitroDiagnostic Instrumentation(Cohn，G.E.，Ed.)pp 128-137，Bellingham，WA的工藝，在Analyst HT 96-384(Molecular Devices Corp.)上進行極化實驗。向5-羧基熒光素-結(jié)合的AVPdi-Phe-NH2(AVP-diPhe-FAM)(最終濃度5nM)加入MLXBIR3SG在極化緩沖液(50mM Tris[pH 7.2]，120mM NaCl，1％牛球蛋白，5mM DTT和0.05％辛基糖苷)中的1∶2系列稀釋液(始于5μM的最終濃度)，制備熒光極化親和性測量樣品。
AVP-diPhe-FAM探針在96-孔黑色HE96平板(Molecular Devices Corp.)中，利用熒光素?zé)晒鈭F(λex＝485nm；λem＝530nm)的標準截留濾光器(cut-off filter)讀取在室溫下溫育10分鐘后的反應(yīng)。將熒光數(shù)值對蛋白質(zhì)濃度作圖，利用Kaleidograph軟件(Synergy software，Reading，PA)將數(shù)據(jù)帶入4-參數(shù)方程，得到IC50。向小孔加入30nM的MLXBIR3SG，進行競爭實驗，小孔含有5nMAVP-diPhe-FAM探針以及拮抗劑化合物在極化緩沖液中的1∶3系列稀釋液(始于300μM的濃度)。溫育10分鐘后讀取樣品。將熒光極化值對拮抗劑濃度作圖，利用Kaleidograph軟件(Synergy software，Reading，PA)將數(shù)據(jù)帶入4-參數(shù)方程，得到IC50值。從IC50值測定拮抗劑的抑制常數(shù)(Ki)。在本測定法中證明本發(fā)明化合物具有IAP抑制活性。
權(quán)利要求
1.式I化合物 其中X1、X2和X3獨立地是O或S；Y是(CHR7)n、O或S；其中n是1或2，R7是H、鹵素、烷基、芳基、芳烷基、氨基、芳基氨基、烷基氨基、芳烷基氨基、烷氧基、芳氧基或芳烷氧基；A是包含1至4個雜原子的5-元雜環(huán)，任選地被氨基、羥基、巰基、鹵素、羧基、脒基、胍基、烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、酰基、酰氧基、酰基氨基、烷氧基羰基氨基、環(huán)烷基、烷硫基、烷基亞磺?；⑼榛酋；被酋；?、烷基氨基磺酰基、烷基磺酰氨基或雜環(huán)取代；其中每個烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、?；ⅤＱ趸Ⅴ；被?、環(huán)烷基和雜環(huán)取代基任選地被羥基、鹵素、巰基、羧基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、氨基、硝基、氰基、環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)取代；R1是H，或者R1和R2一起構(gòu)成5-8元環(huán)；R2是烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；各自任選地被羥基、巰基、鹵素、氨基、羧基、烷基、鹵代烷基、烷氧基或烷硫基取代；R3是H，或者烷基；R4和R4’獨立地是H、羥基、氨基、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜芳基或雜芳基烷基，其中每個烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜芳基和雜芳基烷基任選地被鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、烷氧基、氨基和硝基取代；R5和R5’各自獨立地是H或烷基；R6和R6’各自獨立地是H、烷基、芳基或芳烷基；及其鹽和溶劑化物。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中環(huán)A具有式IIa或IIb 其中Q1是NR8、O或S；Q2、Q3、Q4、Q5、Q6、Q7和Q8獨立地是CR9或N；其中R9是H、氨基、羥基、巰基、鹵素、羧基、脒基、胍基、烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、?；ⅤＱ趸?、酰基氨基、環(huán)烷基或雜環(huán)取代；其中每個烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、?；?、酰氧基、?；被h(huán)烷基和雜環(huán)取代基任選地被羥基、鹵素、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)取代；R8是H、烷基、?；⒎蓟h(huán)烷基或雜環(huán)；其中每個烷基、芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)任選地被羥基、鹵素、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、氨基、硝基、環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)取代；Q9是CH或N。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中環(huán)A選自 其中R8是H、烷基或酰基。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R8是H。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2一起構(gòu)成5-8元環(huán)。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是H。
7.權(quán)利要求1的化合物，其中R2是烷基或環(huán)烷基。
8.權(quán)利要求1的化合物，其中R2是異丙基、叔丁基或環(huán)己基。
9.權(quán)利要求1的化合物，其中R3是甲基。
10.權(quán)利要求1的化合物，其中R4是H，或者甲基，R4’是H。
11.權(quán)利要求1的化合物，其中R5和R5’獨立地是H或甲基。
12.權(quán)利要求1的化合物，其中R6和R6’獨立地是H或甲基。
13.權(quán)利要求1的化合物，其中每個X1、X2和X3是O。
14.權(quán)利要求2的化合物，其中R1是H；R2是異丙基、叔丁基或環(huán)己基；R3是甲基；R4是H，或者甲基，R4’是H；R5和R5’是H或甲基；X1、X2和X3是O。
15.在細胞中誘導(dǎo)程序性細胞死亡的方法，包含向所述細胞引入權(quán)利要求1的化合物。
16.使細胞敏感于程序性細胞死亡信號的方法，包含向所述細胞引入權(quán)利要求1的化合物。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述程序性細胞死亡信號是通過使所述細胞與選自下列的化合物接觸來誘導(dǎo)的阿糖胞苷、氟達拉濱、5-氟-2’-脫氧尿苷、吉西他濱、甲氨蝶呤、博來霉素、順鉑、環(huán)磷酰胺、阿德里亞霉素(阿霉素)、米托蒽醌、喜樹堿、托泊替堪、秋水仙胺、秋水仙堿、紫杉酚、長春花堿、長春新堿、他莫西芬、芬甾酮、索素帝和絲裂霉素C。
18.權(quán)利要求16的方法，其中所述程序性細胞死亡信號是通過使所述細胞與Apo2L/TRAIL接觸來誘導(dǎo)的。
19.抑制IAP蛋白與胱天蛋白酶蛋白結(jié)合的方法，包含使所述IAP蛋白與權(quán)利要求1的化合物接觸。
20.治療哺乳動物與IAP過度表達有關(guān)的疾病或病癥的方法，包含對所述哺乳動物給予有效量的權(quán)利要求1的化合物。
21.治療癌癥的方法，包含對所述哺乳動物給予有效量的權(quán)利要求1的化合物。
全文摘要
本發(fā)明提供新穎的IAP抑制劑，它們可用作治療劑治療惡性腫瘤，其中這些化合物具有通式I，其中X、Y、A、R
文檔編號A61K38/06GK101035802SQ200580028974
公開日2007年9月12日 申請日期2005年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月2日
發(fā)明者弗雷德里克·科恩, 庫爾特·德夏耶斯, 韋恩·J·費爾布羅瑟, 馮柏年, 約翰·弗萊加爾, 劉易斯·J·加扎德, 崔曉薇 申請人:健泰科生物技術(shù)公司