專利名稱：：防治動(dòng)脈粥樣硬化中藥及蔥白提取物在防治動(dòng)脈粥樣硬化的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于防治動(dòng)脈粥樣硬化的中藥及應(yīng)用，具體涉及一種蔥白提取物防治脂肪肝中藥及蔥白提取物在防治動(dòng)脈粥樣硬化的應(yīng)用。
技術(shù)領(lǐng)域：
動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是一組稱為動(dòng)M化的血管病中最常見，最重要的一種。是導(dǎo)致冠心病等心腦血管疾病的最主要的致病因素，是發(fā)達(dá)國(guó)家的主要死亡原因、也是我國(guó)的主要死亡原因。AS的發(fā)生與內(nèi)皮功能障礙密切相關(guān)，多種細(xì)胞因子和細(xì)胞凋亡影響AS的進(jìn)程。目前主要的治療手段是使用血管生成抑制劑和降脂藥物，雖然介入治療可以使血管再通，但是再狹窄仍然是目前無法解決的醫(yī)學(xué)難題，尤其是遠(yuǎn)期療效并無明顯優(yōu)勢(shì)。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)尚無理想治療藥物的情況下，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)，尤其是中醫(yī)藥在防治動(dòng)脈粥樣硬化的研究已成為該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，并已取得一系列重大的研究成果，使我們看到了曙光。中醫(yī)藥注重整體調(diào)節(jié)，中醫(yī)治病的療效取決于臨床辯證論治的準(zhǔn)確性，且具有多系統(tǒng)、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)。中藥的作用機(jī)制與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的病機(jī)理論非常相似，中藥治療更有利于疾病的治療。中醫(yī)藥治療AS相關(guān)癥狀具有幾千年的歷史，積累了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，具有療效顯著，價(jià)粉氐廉、毒副作用小的優(yōu)勢(shì)，但是由于中醫(yī)藥本身的復(fù)雜性，影響了療效的發(fā)揮，給臨床和科研帶來不便，嚴(yán)重的制約了中醫(yī)藥的開發(fā)研究。AS屬中醫(yī)"痰凝、血瘀"范疇。其病位在心脈。發(fā)病多與心、肝、脾、胃、腎等臟腑功能失調(diào)有關(guān)。其病機(jī)為"本虛標(biāo)實(shí)"。中醫(yī)治療多集中在消除"痰、瘀"等瀉實(shí)、或補(bǔ)虛瀉實(shí)的方法，研究重點(diǎn)多集中于降血脂的研究，較少動(dòng)M化本身的研究，對(duì)導(dǎo)致"痰瘀"的本質(zhì)，至今沒有相關(guān)的研究。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種防治動(dòng)脈粥樣硬化中藥及蔥白提取物在防治動(dòng)脈粥樣硬化的應(yīng)用，提出用"通陽宣瘠"立法治療AS的新理念。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的之一的技術(shù)方案為蔥白提取物在防治動(dòng)脈粥樣硬化的應(yīng)用。所述蔥白提取物是蔥白的脂溶性有效提取物和中極性類有效提取物的混合物；或蔥白提取物是蔥白的脂溶性有效提取物。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的之二的技術(shù)方案為防治動(dòng)脈粥樣硬化的中藥，它是蔥白提取物。所述所述蔥白提取物是蔥白的脂溶性有效提取物和中極性類有效提取物的混合物；或蔥白的脂溶性有效提取物。它是按藥物制備方法制備的藥物口服制劑。所述藥物口服制劑是膠嚢制劑，皿嚢制劑，口服液制劑，滴丸制劑，片劑制劑。蔥白來源為百合科植物分蔥AlliumfisturosumL.var.caespitosumMakio或香蔥Al1iumschoe,rasum的新鮮鱗莖。本發(fā)明通過采用蔥白提取物，提出用"通陽宣痹"立法治療AS,蔥白提取物具有明顯的抗氧化損傷，改善內(nèi)皮功能的作用；它不僅可以使各種血管活性物質(zhì)在體內(nèi)的表達(dá)及比例正常，而且可以使內(nèi)皮功能得以恢復(fù)；具有較好的降血脂、抗AS的功效。具體實(shí)施方案這里蔥白的脂溶性有效提取物它是將干燥的蔥白或干蔥汁或干燥全蔥中的一種或一種以上的組合粉碎后，經(jīng)C02超臨界萃取分離提取而的物質(zhì)，所述脂溶性提取物在2(TC相對(duì)密度為0.8330-0.8350;折光率在D20。C為1.36001.3700。所述C02超臨界萃取的壓力為1540Mpa，溫度2(K60"C。所述C02超臨界萃取后的分離壓力為410Mpa，溫度2040X:。所述C02超臨界萃取后的分離包括兩次分離，分離I的壓力為4~10Mpa溫度2040°C;分離II的壓力為4~10Mpa溫度2040°C?；蚴抢萌軇┓ㄟM(jìn)行提取的它是將干燥的蔥白或干蔥汁或千燥全蔥中的一種或一種以上的組合4分碎后，采用乙醚、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丁醇和乙醇中的一種溶劑冷浸或熱提1~24小時(shí)，過濾的提取液，將提取液濃縮去掉溶劑，即得脂溶性有效部分提取物；所述原料與溶劑的重量體積比為lg:6~15ml。它是采用石油醚(3060°C)進(jìn)行提取。它是采用石油醚(6090°C)、氯仿、乙酸乙酯、丁醇和乙醇中的一種溶劑進(jìn)行提取。所述中極性類有效提取物是它是直接將千燥的蔥白或?qū)⑶г锏氖[白經(jīng)脂溶性有效部分提取后的剩余部分，用乙醇進(jìn)行回流提取，過濾后，將濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.0~1.3g/ffll的千青，在干膏中加水，大孔吸附樹脂柱吸附后，用乙醇沖洗至檢識(shí)不出皂苷類成分，回收溶劑，干燥，得到極性有效提取物。或是直接將干燥的蔥白或?qū)⑶г锏氖[白經(jīng)脂溶性有效部分提取后的剩余部分，用乙醇進(jìn)行回流提取，過濾后，將濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.0~1.3Anl的干膏，在干膏中加水，再用水飽合的正丁醇、丙醇或乙酸乙酯溶液中的一種進(jìn)行冷浸、滲漏、熱提或萃取中的一種處理至水層，檢識(shí)無明顯顏色變化為止，分出萃取部分再減壓濃縮至千后，再用水稀釋，大孔樹脂柱脫色，回收溶劑，千燥，得到極性有效提取物。將上述提取的兩種物質(zhì)完全混合，即同一批蔥白經(jīng)脂溶性有效提取物和中極性類有效提取物兩次提取后的兩種物質(zhì)全部混合?；蛑徊捎檬[白的脂溶性有效提取物。將上述提取物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)一、研究材料與方法(一)、材料1、動(dòng)物體重為2kg土20g的健康新西蘭白兔32只，雌雄各半；2、藥物蔥白提取物，用蒸餾水配制成濃度為10%的溶液；速效救心丸用蒸餾水配制成濃度為2.4%的液體，均4TC冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?、主要儀器及試劑(1)、主要試劑膽固醇；一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氣化物歧化酶(SOD)、氧化低密度脂蛋白(0X-LDL)、C反應(yīng)蛋白(Creactiveprotein,CRP)測(cè)定試劑盒;內(nèi)皮素(ET-1)、血栓烷(TXBJ、6-酮前列環(huán)素(6-keto-PGFla)放免測(cè)定試劑盒；甘油三酯試劑盒，膽固醇試劑、HDL、LDL試劑,ApoAI、ApoBlOO檢測(cè)試劑盒；fas、bcl-2、c-町c單克隆抗體及即用型SABC免疫組化染色試劑盒；細(xì)胞凋亡試劑盒。(2)、主要儀器FJ2003/50G型y免疫計(jì)數(shù)器；DG3022型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀；SS00PP半自動(dòng)生化分析儀；XYJ-801型電動(dòng)離心機(jī)；ECGLAB2.0心電圖工作站；BX-60型(Hympus光學(xué)顯微鏡；全自動(dòng)圖象分析儀，OlympusBX-50顯微攝影系統(tǒng)，美國(guó)PalarodDMCI數(shù)碼相才幾，HUMIAS-2000醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)；H600型透射(日立)電鏡。(二)、方法1、分組:模方法將以上動(dòng)物隨機(jī)分為4組，分籠銅養(yǎng)(祠養(yǎng)環(huán)境溫度保持在26。C，室內(nèi)濕度控制在70%左右，自動(dòng)通風(fēng)器保持室內(nèi)通風(fēng))，觀察兩組動(dòng)物毛色、目艮神、進(jìn)食、活動(dòng)、糞便，每周記錄一次體重；適應(yīng)性喂養(yǎng)l周后，正常對(duì)照組繼續(xù)以^f出伺料喂養(yǎng)，空白模型組、本發(fā)明蔥白提取物組、速效救心丸組按朱愉的方法造樣予以高脂飼料喂飼，配方為基礎(chǔ)飼料80%、蛋黃粉15%、食用豬油5%、膽固醇每只每天l克，每日進(jìn)食100120g，自由飲7jc，喂養(yǎng)3周，將銅料中的膽固醇減去，再喂5周。2、給藥方法從造模即日起各組按體重5ml/kg.d量分別用生理鹽水、本發(fā)明蔥白提取物、速效救心丸溶液灌胃，連續(xù)灌胃8周。3、實(shí)驗(yàn)步驟(1)、取材前禁食不禁水16h,各組兔進(jìn)行高頻心電圖檢查，記錄時(shí)間為30分鐘。應(yīng)用ECGLAB2.0心電圖工作站進(jìn)行心率變異性分析；(2)、未次給藥后l小時(shí)，取兔耳緣靜脈血于肝素管內(nèi)，2500轉(zhuǎn)離心10分鐘，取血清備用。用硝酸還原酶法測(cè)定NO的濃度；用黃噪呤氧化酶法測(cè)定SOD;用好u代巴比妥酸法測(cè)定MDA;生化法測(cè)定CRP;用ELISA法測(cè)定OX-LDL;用放射免疫法測(cè)定ET-l、TXB2、6-keto-PGFla;血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、栽脂蛋白AI(ApoAI)和栽脂蛋白B(ApoB)采用HI-TACHI自動(dòng)分析儀測(cè)定，并計(jì)算ApoAI/ApoB的比值和動(dòng)脈硬化指數(shù)(AI)[AI-(TC-HDL-C)/HDL-C]。所有檢測(cè)均由武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)中心完成。(3)、給藥結(jié)束后禁食不禁水16h,用氣栓法處死動(dòng)物，取含斑塊的新鮮腹主動(dòng)脈標(biāo)本，用10%的多聚甲醛固定組織，備免疫組化用。①免疫組化取材方法及步驟免疫組化參照^t明書。用光學(xué)顯微4竟(10x40倍)觀察fas、bcl-2、c-myc免疫陽性纖維的分布；用HUMIAS-2000醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)，通過顯微攝像系統(tǒng)放大400倍，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，測(cè)定腹主動(dòng)脈斑塊中fas、bci-2、ciyc陽性纖維的平均灰度值。陰性對(duì)照片以PBS替代fas、bcl-2、c-myc單克隆抗體；②AS斑塊面積4安①的方法取材，在病變明顯處取腹主動(dòng)脈3cm，在背側(cè)面縱行切開，平鋪在濾紙上，用10%甲醛溶液固定IO分鐘，用蘇丹m染色，粥樣斑塊被染成猩紅色，用透明方格紙(l咖xlmm)測(cè)量每條動(dòng)脈的AS斑塊面積，計(jì)算出斑塊面積占血營(yíng)面積的百分比。③內(nèi),度、中l(wèi)M"度以及內(nèi)膜/中膜厚度比:按①的方法取材，在病變明顯處取材，標(biāo)本用35%的磷酸鈉甲醛緩沖液固定，處置、浸泡后用石蠟包埋。按3-4jum的厚度進(jìn)行切割，切片用HE染色，用HPIAS1000電腦圖形分析系統(tǒng)對(duì)內(nèi)膜厚度、中膜厚度以及內(nèi)膜/中膜厚度比；④光鏡、電鏡觀測(cè)主動(dòng)脈組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的變化腹主動(dòng)脈粥樣硬化最重處取材，常規(guī)制片，玻片入0.01%多聚賴氨酸中浸泡，水浴恒溫?fù)破?0。C10S，烤千入二甲苯脫蠟15min，無水乙醇洗蠟5min，95%乙醇5min，蒸餾水洗，HIRR,S蘇木素染色10min,水洗多余染料，酸乙醇(lOOml乙醇+lml乙酸)分色1-5S。水洗促蘭，1%伊紅染色，95%的脫水兩次各2-3min，無水乙醇脫水兩次各2~3min,二甲苯透明，中性樹脂封片，光鏡檢測(cè)。迅速取動(dòng)脈主千，立即投入2.5%的戊二醛固定，o.r廁PBs漂洗，iyw我酸后固定，丙酮逐級(jí)脫水，50%—70%—90%—100%,共4次，Epon812環(huán)氧樹脂全埋，修塊機(jī)修塊，超薄切片機(jī)切片，醋酸鈾雙層染色，透射電鏡觀察并照相；⑤VSMC凋亡的檢測(cè)用①方法，用10%的多聚甲醛固定組織，石蠟包埋,切片常規(guī)脫蠟入水，按細(xì)胞凋亡試劑盒說明書進(jìn)行操作。結(jié)果用HUMIAS-2000醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)分析。5、統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差"土s)表示，結(jié)果用單因素方差分析，組間用q檢驗(yàn)。P<0.05為有顯著性差異；P<0.01為有非常顯著性差異；P>0.05為無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用SPSS11.5軟件包進(jìn)行方差分析。二、結(jié)果(一)、對(duì)心率變異的影響與正常對(duì)照組比，；漠型組各項(xiàng)指標(biāo)均有不同程度的下降(P〈0.01);與模型組比，除速效救心丸組對(duì)SDNN的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〉0.05)，其它指標(biāo)均有明顯改善(P<0.05,P<0.01);與速效救心丸組比，本發(fā)明蔥白提取物對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)的改善明顯優(yōu)于速效救心丸(P<0.05，P<0.01)。結(jié)果見表l表1各組心率變異性分析圖<table>complextableseeoriginaltableonpage8</column></row><table>(二)、本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔血清NO和ET-1的影響造模后NO的含量明顯下降(P<0.01)，ET-1的含量明顯增加p<0.01);干預(yù)治療后速效救心丸和本發(fā)明蔥白提取物均能有效調(diào)節(jié)NO和ET-1的舍量(p<0.01)。結(jié)果見表2:表2本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔血清NO和ET-1的影響<table>complextableseeoriginaltableonpage8</column></row><table>(三)、本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔血清6-keto-PGFla和TXB2的影響造模后6-keto-PGF1a的舍量明顯下降(P<0.01)，TXB2的舍量明顯升高(P<0.01)，6-keto—PGF1a/TXB2的比值下降；千預(yù)治療后速效殺支心丸和本發(fā)明蔥白揭_取物均能有效調(diào)節(jié)6-keto-PGF1a和TXB2的含量(P<0.01)，6-keto-PGFla/TXB2的比值也相應(yīng)增加(P<0.01)。結(jié)果見表3:表三本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔血清6-keto-PGFla和TXB2的影響(n=8，義±6—keto-PGa(pg/ml)TXB2(pg/ml)6-keto-PGF:a/TXB2624.07±2.030.89±0.003944,33±4.24*0.27±0.005*862.82±3.0"0.54±0.005'正常對(duì)照組558.69±1.23空白模型組256.00±5.28*速效救心丸組462.26±4.43*本發(fā)明蔥白提取物組484.25±5.79'724.87±3.O.W±0.006'與正常對(duì)照組比ΔP<0.01汰與模型組比*P<0.01;與速效救心丸組比*P<0.01(四)、本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔血清MDA和SOD的影響造模后SOD的含量明顯下降(P<0.01),MDA的含量明顯增加(P<0.01);干預(yù)治療后速效救心丸和本發(fā)明蔥白提取物均能有效調(diào)節(jié)MDA和SOD的含量(P<0.01)。結(jié)果見表4:表4本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔血清MDA和SOD的影響(n-8,x±s》組別MDA(umol/L)銅鋅-SOD(U/ml)T-SOD(U/ml)正常對(duì)照組1.36±0.081553.28±7.611387.87±3.69空白模型組4.50±0.15A1048.25±7.53'1180.91±8.314速效救心丸組2.09±0.07"1352.28±4.68"1029.21±4.38"本發(fā)明蔥白提3.39±0.1441.81±5.1279.29±5.82，*取物組與正常對(duì)照組比ΔP<0.01;與模型組比*P<0.01;與速效救心丸組比*P<0.01(五)、本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔血清C-RP和OXLDL的影響造模后C-RP和OXLDL的含量明顯增加(/VAW);干預(yù)治療后速效救心丸和本發(fā)明蔥白提取物降低C-RP和OXLDL的含量(戶W.W);本發(fā)明蔥白提取物千預(yù)治療后C-RP的舍量與正常對(duì)照組比無顯著差異M)。結(jié)果見表5:表5本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔血清C-RP和OXLDL的影響<table>Complextableseetheoriginaldocumentpagex</column></row><table>(六)、本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔TC、TG和AI指數(shù)的影響模型組兔TC、TG及AI指數(shù)較正常組明顯升高(P<0.01);干預(yù)治療后各項(xiàng)指標(biāo)明顯改善，本發(fā)明蔥白提取物療效優(yōu)于速效救心丸(P<0.01)。結(jié)果見表6:表6本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔TC、TG和AI的影響<table>Complextableseetheoriginaldocumentpagex</column></row><table>物組與正常對(duì)照組比"P<0.01;與模型組比2'P<0.01;與速效救心丸組比3)P<0.01(七)、本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔HDL-C、LDLC和HDL/LDL的影響模型組兔HDL-C較正常對(duì)照組明顯減少(P〈0.01)，而LDLC較正常組明顯升高(P<0.01),HDL/LDL明顯降低(P<0.01);干預(yù)治療后各項(xiàng)指標(biāo)明顯改善，本發(fā)明蔥白提取物療效優(yōu)于速效救心丸(P<0.01)。結(jié)果見表7表7本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔HDL-C和LDL-C的影響(n=8，^±s)HDL-C(咖ol/L)LDL-C(mmol/L)HDL-C/LDL-C正常對(duì)照組4.36±0.0217.18±0.0270.61±0.005空白模型組1.92±0.042"15.34±0.046"0.13±0.003速效救心丸組2.34±0.0492'13.09±0.0482)0.18±0.004:本發(fā)明蔥白提3.75±0.026"."9.61±0.0852)"0.39±0.005取物組與正常對(duì)照組比1)P<0.01;與模型組比2)P<0.01;與速效救心丸組比3)P<0.01(八)、本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔apoA、apoB和apoB/apoA的影響模型組兔apoA較正常對(duì)照組明顯減少(P<0.01)，而apoB較正常組明顯升高(P<0.01)，apoB/apoA明顯升高(P<0.01);千預(yù)治療后各項(xiàng)指標(biāo)明顯改善,本發(fā)明蔥白提取物療效優(yōu)于速效救心丸(P〈0.01)。結(jié)果見表8表8本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔apoA和apoB的影響(n=8,^±s)apoA(g/L)apoB(g/L)apoB/apoA正常對(duì)照組1.31±0.0100.19±0.0100.15±0.008空白模型組0.56±0.026"0.43±0.019"0.77±0.066"速效救心丸組0.84±0.02"0.35±0.0082'0.42±0.00721本發(fā)明蔥白提1.07±0.019"0.27±0.0172"0.26±0.0192'"取物組與正常對(duì)照組比1)P<0.01;與模型組比2)P<0.01;與速效救心丸組比3)P<0.01(九)、對(duì)PDGF-B、bFGF、TGF-61、VEGF的影響正常組VEGF無表達(dá),模型組大鼠PDGF-B、bFGF、TGF-Bl、VEGF的表達(dá)增強(qiáng)(P<0.01);與模型組比，本發(fā)明蔥白提取物組各項(xiàng)指標(biāo)均明顯改善(P<0.05,P<0.01)，速效救心丸組除能有改善bFGF(P<0.05)外，對(duì)其余各項(xiàng)指標(biāo)均無影響(P〉0.05);本發(fā)明蔥白提取物與速效救心丸比，除VEGF差異無顯著性(P>0.05)外,其余各項(xiàng)指標(biāo)差異顯著(P<0.05，P<0.01)。結(jié)果見表9表9本發(fā)明蔥白提取物對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化兔生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子表達(dá)的影響(n=8,x±s)分組PDGF-BbFGFVEGFTGF-B.'正常對(duì)照140.2±13.5894.50一132.47±11.55組19.76空白模型182.6±23.85"136.60±49,86±166.04±組23.88"16.7315.83"速效救心170.8±16.584'113.8936.98161.30±丸組10.492)10.394112.064i本發(fā)明蔥142.13±89,4724.66134.33±白提取物21.372"'15.513'5)6.393)"13.463"'組與正常對(duì)照組比1)P<0.01;與模型組比2)P<0.053)P<0.014)P>0.05;與速效救心丸組比5)P<0.056)P<0.017)P>0.05(十)、腹主動(dòng)脈斑塊中凋亡基因fas、bcl-2、c-myc的表達(dá)模型組fas和c-myc表達(dá)明顯增加(P<0.01)，bcl-2表達(dá)明顯減少(P<0.01);千預(yù)治療后各項(xiàng)指標(biāo)均有不同程度的改善(P<0.01,P<0.05),且本發(fā)明蔥白提取物療效好于速效救心丸。結(jié)果見表IO表10本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔凋亡基因fas、bcl-2、ciyc表達(dá)的影響(n=8,x士s)<table><row><column>分組</column><column>fas</column></row><row><column>正常對(duì)照組</column><column>108.53±6.11</column></row><row><column>空白模型組</column><column>164.20±10.021</column></row><row><column>速效救心丸組</column><column>135.37±4.972'</column></row><row><column>本發(fā)明蔥白提</column><column>112.47±2.932"</column></row><row><column>取物組</column><column>bcl－2</column><column>108.27±2.52</column><column>85.70±2.24</column><column>91.97±2.16"</column><column>106,23±4.222</column><column>c—myc</column><column>113.83±2.52</column><column>147.20土3.651</column><column>131.03±9.352</column><column>122.37±2.322</column></row><table>與正常對(duì)照組比1)P<0.01;與模型組比2)P<0.01;與速效救心丸組比3)P<0.054)P<0.01(十一)、AS斑塊面積本發(fā)明蔥白提取物和速效救心丸對(duì)斑塊均有一定的影響，且本發(fā)明蔥白提取物療效明顯優(yōu)于速效救心丸，差異具有顯著性(P<0.01)，說明本發(fā)明蔥白提取物具有明顯的抗AS作用。結(jié)果見表ll:表十一本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔主動(dòng)脈斑塊面積的影響(n-8，X土s)<table><row><column>/</column><column>主動(dòng)脈總面積(mm2)</column><column>主動(dòng)脈斑塊面積(mm2)</column><column>比值(％)</column></row><row><column>正常對(duì)照組</column><column>128.00±3.61</column><column>0</column><column>0</column></row><row><column>空白才莫型組</column><column>132.20±3.63</column><column>32.57±2.79</column><column>0.25士0.017</column></row><row><column>速效救心丸組</column><column>134.17±8.54</column><column>22.31±1.70</column><column>0,17±0.018</column></row><row><column>本發(fā)明蔥白</column><column>138.83±4.71</column><column>16.15±0.95</column><column>0.12±0.0102</column></row><row><column>提取物組</column></row><table>與正常對(duì)照組比l)P復(fù)Ol;與模型組比2)P〈0.01;與速效救心丸組比3)P<0.01(十二)、內(nèi)膜厚度、中膜厚度以及內(nèi)膜/中膜厚度比模型組內(nèi)膜厚度和正常對(duì)照組比，明顯增厚(P<0.01);干預(yù)治療后內(nèi)膜厚度明顯變薄，和模型組比，差異顯著(P<0.01)，且本發(fā)明蔥白提取物療效優(yōu)于速效救心丸。結(jié)果見表12:表12本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔內(nèi)膜厚度和中膜厚度的影響(n-8，^土s)膜厚度(nm)中膜厚度(pm)內(nèi)膜/中膜厚度比(％)正常對(duì)照組111."±17.40360.89土20.S328.91土2.03空白模型組251.04±22.88368.04±16.3756.72土1121速效救心丸組180.56±28.22362.50±9.4642.38±6.5723本發(fā)明蔥白提取物組150.55±16.42357.29±12.0624.53±3.00"注:表中數(shù)值為目鏡測(cè)微器中格數(shù)，1格約等于1.0695ym與正常對(duì)照組比1)P<0.01;與;f莫型組比2)P<0,01;與速效救心丸組比3)P<0.01(十三)、光鏡、電鏡觀測(cè)主動(dòng)脈組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的變化光鏡下，正常組內(nèi)皮細(xì)胞呈扁平的梭形或多角形，呈鋪石樣鑲嵌排列，界限清楚，彼此不重疊。才莫型組兔主動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚，最厚處可達(dá)正常管壁的3~5倍，內(nèi)含大量的泡沫細(xì)胞、SMC、粥樣壞死物質(zhì)及少量的膠原纖維。正常對(duì)照組主動(dòng)脈內(nèi)膜等結(jié)構(gòu)完整，各種細(xì)胞器正常。模型組血管組織中細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，血管內(nèi)皮斷裂、水腫，未見內(nèi)皮細(xì)胞及基底膜，新生細(xì)胞增多，血管腔面為大量膠原纖維覆蓋，內(nèi)含成纖維母細(xì)胞、線粒峰消失、部分吞喧脂質(zhì)，并可發(fā)現(xiàn)較多的脂滴。本發(fā)明蔥白提取物組可見內(nèi)皮細(xì)胞和基底膜結(jié)構(gòu)基本正常，僅可見部分內(nèi)皮細(xì)胞脫落，殘存內(nèi)皮細(xì)胞腫脹變性等病理改變，膠原纖維增生明顯較模型組減輕，各種細(xì)胞器基本正常。速效救心丸組內(nèi)皮結(jié)構(gòu)接近正常，仍可見內(nèi)皮腫脹變性等病理變化，基底膜基本完整，脂滴顆粒也較多見。光鏡和電鏡檢查結(jié)果提示中藥"本發(fā)明蔥白提取物"可減輕由于動(dòng)脈粥樣硬化造成的動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷、平滑肌增生以及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的損傷，療效明顯好于對(duì)照組。(十四)、VSMC凋亡的檢測(cè)模型組VSMC凋亡細(xì)胞數(shù)明顯低于正常對(duì)照組(P<0.01);千預(yù)治療后，VSMC凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增多(P〈0.01),且本發(fā)明蔥白提取物療效優(yōu)于速效救心丸。結(jié)果見表14表14本發(fā)明蔥白提取物對(duì)AS兔VSMC凋亡的影響(n=8，x±s)VSMC調(diào)亡細(xì)胞數(shù)正常對(duì)照組18.39±0.24空白模型組10.84±0.39"速效救心丸組12.69±0.17"本發(fā)明蔥白提取15.55±0.352)3)物組與正常對(duì)照組比1)P<0.01;與模型組比2)P<0.01;與速效救心丸組比3)P<0.01三、結(jié)論(一)、我們的研究表明AS兔心率變異性程度明顯降低，說明AS過程中存在HRV，HRV分析可以為冠心病的診斷、治療提供一定的依據(jù)。藥物千預(yù)治療可以提高HRV程度，HRV可以作為評(píng)價(jià)藥物療效的指標(biāo)之一。從本發(fā)明蔥白提取物對(duì)SDNN的作用效果來看，本發(fā)明蔥白提取物可能通過降脂、興奮迷走神經(jīng)而發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，而達(dá)到防治冠心病的效果。在系列實(shí)驗(yàn)中我們也發(fā)現(xiàn)本發(fā)明蔥白提取物有很好的降脂作用，并通過調(diào)節(jié)各種細(xì)胞因子防治AS。我們?cè)谇捌谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)本發(fā)明蔥白提取物對(duì)急性心肌缺血心電圖的最明顯的影響是能明顯減慢心率，改善心肌缺血。本發(fā)明蔥白提取物對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化引起的心肌缺血的療效關(guān)鍵在于其防治AS的作用，這也正是本發(fā)明蔥白提取物防治冠心病的優(yōu)勢(shì)所在。結(jié)合中醫(yī)病機(jī)理論，我們認(rèn)為中醫(yī)"通陽宣痹"法的作用機(jī)理可能是通過調(diào)節(jié)交感、迷走神經(jīng)緊張性和均衡性，進(jìn)而調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝而起到抗AS的作用。說明"陽氣不通"可能是導(dǎo)致脂質(zhì)代謝障礙的病理基礎(chǔ)。(二)、AS的病理變化類似于中醫(yī)的"痰凝血淤"。其病機(jī)為"陽氣不通"，痰淤互結(jié)，脈絡(luò)痹阻。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，AS兔模型體內(nèi)存在著明顯的脂質(zhì)過氧化損傷，內(nèi)皮功能障礙，血管活性物質(zhì)分泌異常以及AS過程中伴隨著慢性炎癥反應(yīng)，干預(yù)治療能清除氧自由基，減輕炎癥反應(yīng)，改善內(nèi)皮功能狀態(tài)，進(jìn)而逆轉(zhuǎn)AS的進(jìn)程，達(dá)到治療AS的目的。本發(fā)明蔥白提取物真有明顯的抗氧化，改善內(nèi)皮功能的作用。這一結(jié)果說明中醫(yī)對(duì)本病病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)是有科學(xué)依據(jù)的，中醫(yī)的"陽氣不通"可能就是N0/ET、6-Keto-PGFla/TXB2比例失衡的病理基礎(chǔ)，而脂質(zhì)過氧化形成的氧化物可能是痰凝血淤的物質(zhì)基礎(chǔ)，通過"通陽宣痹，，療法，不僅可以使各種血管活性物質(zhì)在體內(nèi)的表達(dá)及比例正常，而且可以使內(nèi)皮功能得以恢復(fù)。說明應(yīng)用"通陽宣痹"的治法可能是有效防治AS的最佳選擇。(三)、本研究表明模型組TG、TC、LDL-C和ApoB較正常對(duì)照組明顯升高，而HDL-C和ApoA則明顯降低，AI明顯升高，HDL-C/LDL-C比明顯降低，ApoB/ApoA比明顯升高，結(jié)論和相關(guān)報(bào)道一致。干預(yù)治療后各項(xiàng)指標(biāo)均有不同程度的改善，且本發(fā)明蔥白提取物療效優(yōu)于速效救心丸，提示本方有較好的降血脂、抗AS的功效。(四)、正常組VEGF無表達(dá)，模型組大鼠PDGF-B、bFGF、TNF-I31、VEGF的表達(dá)增強(qiáng)；本發(fā)明蔥白提取物對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)均有明顯改善，速效救心丸組除對(duì)bFGF有明顯文善外，對(duì)其余各項(xiàng)指標(biāo)的影響均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果提示"通陽宣痹"方藥本發(fā)明蔥白提取物可能通過生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子影響動(dòng)脈粥洋硬化斑塊血管新生而起到防治AS的作用，和速效救心丸比有明顯的優(yōu)勢(shì)。因?yàn)槟壳吧袩o速效救心丸防治AS的報(bào)道，我們的實(shí)驗(yàn)雖然也發(fā)現(xiàn)速效救心丸對(duì)bFGF的表達(dá)有明顯影響，對(duì)其余各項(xiàng)指標(biāo)都有改善的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。出現(xiàn)如此明顯差異的原因，可能與兩者用藥不同有關(guān)，可能正是"通陽宣痹"方藥防止AS的優(yōu)勢(shì)所在。AS是冠心病的病理生理基礎(chǔ)，有效的防治AS是預(yù)防冠心病的有效途徑，尋找一種既能防治AS，又能改善心^L缺血的有效藥物是防治冠心病的關(guān)鍵。我們以現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的病機(jī)理論為基礎(chǔ)，結(jié)合中醫(yī)對(duì)AS的病機(jī)理論的認(rèn)識(shí)，把"通陽宣痹"法作為治療本病的切入點(diǎn)，收到較好的效果。我們的前期研究已證明，本藥對(duì)心肌缺血也具有較好的療效，在本實(shí)驗(yàn)中又證實(shí)具有抗AS的作用。因此，通過以上實(shí)驗(yàn)說明本藥對(duì)冠心病可能具有較好的療效。(五)、我們的研究表明細(xì)胞凋亡與動(dòng)脈斑塊的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，本發(fā)明蔥白提取物可能通過細(xì)胞凋亡基因有效調(diào)控SMC的凋亡，提高斑塊的穩(wěn)定性而減少臨床事件的發(fā)生，同時(shí)還可以改善SMC的結(jié)構(gòu)、調(diào)節(jié)SMC的功能而防治AS，且療效好于速效救心丸，說明本方組方合理，也反證出"通陽宣痹，，具有一定的科學(xué)性，動(dòng)脈斑塊的物質(zhì)基礎(chǔ)就是痰濁淤血，4匕痰祛游可以消斑，通陽赤可以消斑，且通陽療效好于化痰祛淤法，以此組方是防治AS的有效途徑。權(quán)利要求1.一種蔥白提取物在防治動(dòng)脈粥樣硬化的應(yīng)用。2、如權(quán)利要求1所迷蔥白提取物在防治動(dòng)脈粥樣硬化的應(yīng)用，其特征是所述蔥白提取物是蔥白的脂溶性有效提取物和中極性類有效提取物的混合物。3、如權(quán)利要求1所述蔥白提取物在防治動(dòng)脈粥樣硬化的應(yīng)用，其特征是所述蔥白提取物是蔥白的脂溶性有效提取物。4、一種防治動(dòng)脈粥樣硬化的中藥，它是蔥白提取物。5、如權(quán)利要求4所述防治動(dòng)脈粥樣硬化的中藥，其特征是蔥白提取物是蔥白的脂溶性有效提取物和中極性類有效提取物的混合物。6、如權(quán)利要求4所述防治動(dòng)脈粥樣硬化的中藥，其特征是蔥白提取物是蔥白的脂溶性有效提取物。7、如權(quán)利要求4、5和6所述防治動(dòng)脈粥樣硬化的中藥，其特征是它是按藥物制備方法制備的藥物口服制劑。8、如權(quán)利要求7所述防治動(dòng)脈粥樣硬化的中藥，其特征是所述藥物口服制劑皿嚢制劑，庫m囊制劑，口服液制劑，滴丸制劑，片劑制劑。全文摘要本發(fā)明公開了一種防治動(dòng)脈粥樣硬化中藥及蔥白提取物在防治動(dòng)脈粥樣硬化的應(yīng)用。它是將蔥白提取物的蔥白的脂溶性有效提取物和中極性類有效提取物的混合物；或蔥白的脂溶性有效提取物在治動(dòng)脈粥樣硬化的應(yīng)用及藥物制劑。本發(fā)明通過采用蔥白提取物，提出用“通陽宣痹”立法治療AS，蔥白提取物具有明顯的抗氧化，改善內(nèi)皮功能的作用；它不僅可以使各種血管活性物質(zhì)在體內(nèi)的表達(dá)及比例正常，而且可以使內(nèi)皮功能得以恢復(fù)；具有較好的降血脂、抗AS的功效。文檔編號(hào)A61K36/8962GK101204502SQ20061012554公開日2008年6月25日申請(qǐng)日期2006年12月21日優(yōu)先權(quán)日2006年12月21日發(fā)明者張介眉申請(qǐng)人:張介眉