專利名稱：：晶體1h-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基氨基)-甲基]-1h-吲哚-2-基]-2...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及處于其晶體形式的lF-咪唑并[4，5-W吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基氨基)-甲基-l樂吲哚-2-基-2-甲基，硫酸鹽(1:1)，三水合物，(E6070)。具有通過抑制IKKp蛋白激酶而抑制NF-kB激活的能力的E6070,是治療炎性、自身免疫和增殖性疾病和病癥的有效治療劑。
背景技術(shù)：
：炎癥是由于損傷或感染部位的血管的膨脹和通透性增加導(dǎo)致的過程。質(zhì)的表達(dá)，使循環(huán)白細(xì)胞粘附于血管壁并遷移到組織內(nèi)損傷/感染部位。這些細(xì)胞表面蛋白質(zhì)被稱為"細(xì)胞粘附分子"，使得白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間相互作用，并介導(dǎo)白細(xì)胞向組織內(nèi)遷移。此外，在炎癥和免j^應(yīng)中，許多細(xì)胞-細(xì)Jf^目互作用需要細(xì)胞粘附分子。具有3類粘附分子選擇蛋白、整聯(lián)蛋白和免疫球蛋白相關(guān)的蛋白質(zhì)，其可在白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)。幾種粘附分子，包括E-選擇蛋白和ICAM，被細(xì)胞因子例如IL-1和TNF誘導(dǎo)，并且它們的表達(dá)被轉(zhuǎn)錄因子NF-kb介導(dǎo)。粘附分子的持續(xù)或不適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)可導(dǎo)致炎性病癥或自身免疫病癥。E-選擇蛋白和/或ICAM的夸^達(dá)可導(dǎo)致慢性炎癥并與幾種炎性病癥或自身免疫病癥相關(guān)。因此，細(xì)胞粘附分子的抑制劑可用于治療這些疾病。現(xiàn)有的治療不能很好地控制炎性疾病或自身免疫疾病，并且廣泛地努力開發(fā)更好的藥物。例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是特征在于軟骨和骨破壞的關(guān)節(jié)內(nèi)慢性炎癥的狀態(tài)。炎性疾病或自身免疫疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的傳統(tǒng)治療包括非甾體抗炎藥和水楊酸鹽、金化合物、羥基氯喹、柳氮磺他啶、皮質(zhì)類甾醇、口服青霉胺、和細(xì)胞毒性或免疫抑制性藥物。然而，許多這樣的治療不總U夠有效的并且導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用。最近，可注射形式的TNFa中和蛋白質(zhì)已經(jīng)成功地市場化用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和Crohn，s疾病，然而，用于這些炎性疾病或自身免疫疾病的可口服使用的抑制劑還沒有研發(fā)出來。lH-咪唑并[4,5-6吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基曱基#^)-甲基-1〃-吲哚-2-基-2-曱基(ER-807447)能通過抑制IKK(3蛋白激酶而抑制NF-kB激活，是一種有效的抗細(xì)胞因子劑/抗炎劑。公開的PCT申請WO2004/06336A2和公開的U.S.申請2004/0186127Al公開了ER-807447,其作為具有抗炎/自身免疫和抗增殖作用的新一類脫氮嘌呤(deazapurine)治療劑的成員(這兩個(gè)公開的申請?jiān)诖耍?入本文作為參考)。這些脫氮嘌呤治療劑是可口月艮4吏用的并且無嚴(yán)重的副作用。盡管治療效力是治療劑的首要關(guān)注問題，但是候選藥物的鹽和晶體形式可能是其開發(fā)的關(guān)鍵。候選藥物的每種鹽或每種晶體形式(多晶形物)可具有不同的物理和化學(xué)性質(zhì)，例如，溶解度、穩(wěn)定性、或可再生產(chǎn)能力。這些性質(zhì)可影響最終的藥物劑型、生產(chǎn)過程的優(yōu)化、和體內(nèi)吸收。此外，尋找最適合形式用于進(jìn)一步的藥物開發(fā)，可降低該開發(fā)的期限和成本。在藥物開發(fā)中得到純晶體形式是非常有用的。其允許更好地表征候選藥物的化學(xué)和物理性質(zhì)。晶體形式可具有比無定形更有利的藥性或更易于處理。它也可具有更好的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性。候選藥物的固態(tài)物理性質(zhì)影響其作為藥物活性成分的選擇和其藥物組合物形式的選擇。例如，一種這樣的物理性質(zhì)是研磨之前和之后的固體的可流動(dòng)性?？闪鲃?dòng)性影響在加工成藥物組合物期間處理物質(zhì)的容易度。當(dāng)粉末化的化合物顆粒不能容易地流經(jīng)彼此時(shí)，制劑專家必須在開發(fā)片劑或膠嚢制劑中考慮該事實(shí)，這可能必需利用助流劑例如膠態(tài)二氧化硅、滑石、淀粉或三代磷酸釣。藥物化合物的另一個(gè)重要的固態(tài)狀態(tài)性質(zhì)是其在含水流體中的溶解速度?；颊呶改c道流體中活性成分的溶解速度可具有治療影響，這是因?yàn)樗绊懣谠率┯玫幕钚猿煞挚傻竭_(dá)患者血流的速度。晶體化合物的晶胞中的分子構(gòu)型和取向影響這些實(shí)際的物理性質(zhì)。晶體(或多晶形物)形式通常具有不同于無定形物質(zhì)或其它多晶形物形式的熱行為。通過這些技術(shù)例如毛細(xì)管熔點(diǎn)、熱重分析(TGA)和差示掃描量熱法(DSC)在實(shí)驗(yàn)室重測量熱行為，并且熱行為可用于區(qū)分一些多晶形物與其它的多晶形物。晶體形式或特定的多晶形物形式一般具有通過尤其是粉末X射線衍射(XRD)、單晶X射線晶體學(xué)和紅外光鐠可檢測的截然不同的晶體學(xué)和光鐠學(xué)性質(zhì)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及晶體1^~咪唑并[4，5-6吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基曱基#^)-甲基]-l好-吲咮-2-基-2-甲基，硫酸鹽(1:1)，三7jC合物，E6070,其制備，和其治療用途。因此，含有晶體E6070和藥學(xué)可接受載體的藥物組合物代表本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案。本發(fā)明還涉及治療炎性病癥、自身免疫病癥或增殖性病癥的方法，其包括向需要其的患者施用治療有效量的晶體E6070的步驟?？墒┯眉兊木wE6070或作為本發(fā)明的藥物組合物施用晶體E6070。圖1顯示晶體E6070的優(yōu)選制備。圖2顯示晶體E6070的紅外光語。圖3描述晶體E6070的粉末X射線衍射圖案。圖4是E6070單晶分析的編號(hào)圖。圖5是E6070晶體的不對稱單元的ORTEP圖案。圖6描述晶體E6070的氫鍵網(wǎng)絡(luò)及其分子間相互作用。圖7描述由E6070單晶數(shù)據(jù)計(jì)算的X射線衍射圖案。圖8描i^多種溶劑系統(tǒng)中重結(jié)晶的17批晶體E6070的XRD圖案。圖9描^fr多種溫度下的晶體E6070的XRD圖案。圖10描述水合或脫水的E6070的可逆XRD圖案。圖11描述晶體E6070的吸附/解吸附等溫線。圖12描述在10'C/分鐘的加熱速度下，在敞口盤中晶體E6070的TG-DTA熱分析圖。圖13描述晶體E6070的XRD圖案:(1)起始，(2)40。C/75%RH(1M)，和(3)60。C(1M)。圖14描述晶體E6070的TODTA熱分析圖:(1爽始，(2)40'C/75%RH(1M)，和(3)60。C(IM)。圖15是E6070晶體的顯微照片。圖16是晶體E6070的固態(tài)13CNMR鐠。具體實(shí)施方式E6070,l好-咪唑并[4,5-6]吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基^J0-曱基-L^吲咮-2-基]-2-曱基，硫酸鹽(1:1)，三水合物是ER-807447的三7jc合硫酸鹽。E6070具有化學(xué)結(jié)構(gòu)(1)和分子式C23H36N607S(CAS登記號(hào)532391-43-8)。NH2(|)E6070具有與ER-807447相同的通過抑制IKKP蛋白激酶而抑制NF-kB激活的能力，E6070用作治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及其它炎性或自身免疫和增殖性疾病和病癥的治療劑。E6070可用于治療的疾病和病癥包括但不限于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸勿Crohn，s疾病、中才區(qū)神經(jīng)系統(tǒng)疾病(CNS)例如多發(fā)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼裔、哮喘、異基因移植物排斥/移植物抗宿主病(GVHD)、銀屑病、特應(yīng)性皮炎、濕滲、蕁麻滲(uticaria)、變應(yīng)性鼻炎、重癥肌無力、糖尿病、特發(fā)性血小板減少性紫癜(Idiopathicthrombocytopenicpurpura)、腎小球腎炎、心血管疾病和癌癥。本發(fā)明涉及晶體E6070及其^為治療劑治療這些疾病和病癥的用途。本發(fā)明還涉及制備晶體E6070的方法，其根據(jù)以下反應(yīng)根據(jù)該方法，首先，將ER807447懸浮在水中以形成含水懸浮液。將硫酸添加到所述含水懸浮液中以形成溶液，同時(shí)保持溶液的內(nèi)部溫度低于25'C。該溶液典型地為黃色?？扇芜x地過濾該溶液以從溶液中除去顆粒。本領(lǐng)域中公知的除去顆粒的其它技術(shù)，離心等可用作過濾步驟。然后緩慢將溶液升溫直到E6070從溶液中結(jié)晶?？蓪⑷芤荷郎氐郊s100'C。在約70'C的溫^JL生典型的晶體形成。優(yōu)選的升溫速度典型地為從約30分鐘至5小時(shí)?？梢証使用更長或更短的時(shí)間，尤其取決于批量的大小。E6070可能不易于從高度稀釋的溶液中結(jié)晶。為了提高結(jié)晶，抗溶劑可用于制備晶體E6070的方法中或用來重結(jié)晶晶體E6070。實(shí)施例5中描述了重結(jié)晶步驟。在上述方法中，可在添加石克酸之前將抗溶劑添加到水懸液中，或在添加硫酸和任選的過濾步驟之后將抗溶劑添加到溶液中?？捎玫目谷軇┘捌鋺?yīng)用是本領(lǐng)域公知的。典型的抗溶劑包括水可混溶的抗溶劑例如甲醇、乙醇、l-丙醇、2-丙醇、丙酮及其混合物。當(dāng)使用抗溶劑時(shí)，溶液可能變成不透明的。通常不需要將溶液升溫到與僅4吏用水溶液時(shí)的溫度一樣高的溫度。通過根據(jù)以下步驟形成ER807447的硫酸鹽可制備晶體E6070:在水(10體積)中懸浮ER807447(lwt)并攪拌。添加1MH2S04(1當(dāng)量，2.6體積)，保持內(nèi)部溫度低于25'C。立刻形成黃色溶液。過濾溶液并將濾液轉(zhuǎn)移到含有水(10體積)的及JI器中。添加晶種(O.Olwt)。用2.5小時(shí)緩慢升溫至70。C。隨溫度的增加，E6070開始從溶液中結(jié)晶。在70。C攪拌30分鐘，然后用2小時(shí)慢慢冷卻至RT。通過紙(P5)過濾，并用水(2x10體積)沖洗。在N2/真空下干燥以得到E6070,為黃色自由流動(dòng)的晶體粉末(1.2wts，91%)。最大MpK:5.9kg最小攪拌體積10體積最大攪拌體積20體積收率91%、99.95%HPLC純在其晶體形式中，取決于粒度，E6070是黃色至橙黃色或粉紅色固體。粒度越小，晶體E6070越顯示黃色。在粒度較大時(shí)，晶體E6070具有橙黃色或粉紅色的顏色。研磨較大的晶體E6070粒子得到黃色的較小粒子，但是不改變E6070的晶體形式。晶體E6070的含水量是約10%,確定E6070為ER-807447硫酸鹽的三水合物形式。如上在制備晶體E6070中討論的，當(dāng)加熱溶液時(shí)晶體產(chǎn)物開始沉淀。從升溫溶液中沉淀晶體既引人注意又與眾不同。與晶體E6070的有限溶解度相比，無定形E6070極易溶于水，可溶性大于晶體E6070的10倍。晶體E6070，和其三水合物，非常不可溶于水并且也具有非常低的吸濕性。這些性質(zhì)^吏得晶體E6070比其無定形形式更穩(wěn)定。通過將其無定形形式溶解在水中，并逐步加熱溶液以沉淀晶體E6070、或向E6070水溶液中添加抗溶劑，可以由其無定形形式制備晶體E6070。也可從多種溶劑體系中制備晶體E6070。如實(shí)施例4中所述，從多種溶劑體系中重結(jié)晶19批E6070。對于分沖斤的17批，全部顯示相同的晶形。此外，在分析的17批中，7JC含量和硫酸離子含量沒有顯著差異。如下面實(shí)施例中所述的和附圖中所示的，通過紅外(IR)光諉、X-射線粉末衍射(XRD)、單晶X-射線衍射、熱分析、吸濕性測定、和固態(tài)"CNMR譜表征晶體E6070。晶體E6070三水合物是非吸濕性的，盡管將其加熱到150。C時(shí)，其會(huì)脫水(失去全部的水)?？勺儨囟萖-射線粉末衍射(XRD)圖案表明損失水導(dǎo)致可逆的無定形化，并且同樣地脫水的E6070在暴露于大氣濕度時(shí)可回到其水合、穩(wěn)定的晶體狀態(tài)。見圖9和10。秀做合浙本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含治療有效量的晶體E6070和藥學(xué)可接受的載體(也稱為藥學(xué)可接受的賦形劑)。如上所述，E6070具有生物學(xué)特性4吏其用于治療炎性、自身免疫和/或增殖性疾病和病癥。用于治療那些疾病和病癥的藥物組合物包含對于治療患有特定疾病或病癥的患者適當(dāng)?shù)闹委熡行Я康木wE6070。晶體E6070的"治療有效量"(在此的討論涉及藥物組合物，以下的討論涉及根據(jù)本發(fā)明的治療方法)指足夠降低炎性或自身免疫^^應(yīng)或病癥的作用或足夠預(yù)防、殺死或抑制肺瘤細(xì)胞生長的量。治療任何特定患者所需的實(shí)際量將取決于多種因素，包括治療的病癥和其嚴(yán)重程度；施用的具體藥物組合物；患者的年齡、體重、綜^#康、性別和飲食；施用方式；施用時(shí)間；施用途徑；以及E6070的排泄速度；治療持續(xù)時(shí)間；與施用的具體化合物組合或同時(shí)使用的任何藥物；以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中熟知的其它這樣的因素。這些因素討論于Goodman和Gilman的"ThePharmacologicalBasisofTherapeutics",第十版，A.Gilman，J.Hardman和L.Limbird,eds"McGraw-HillPress,155-173,2001，其在此引入作為參考。本發(fā)明的藥物組合物可以是維持E6070結(jié)晶形式的任何藥物形式。所述藥物組合物可以是固體形式、液體懸浮物、可注射的組合物、局部施用形式、或經(jīng)皮施用形式。這些形式公開于出版的PCT申請WO2004/06336A2和出版的U.S.申請2004/0186127Al中，其在此引入作為參考。取決于藥物組合物的類型，藥學(xué)可接受的載體可選自本領(lǐng)域公知載體的任何一種或組合。藥學(xué)可接受的載體的選擇取決于待使用的藥物形式和所需的施用方法。對于本發(fā)明的藥物組合物，也就是具有晶體E6070的藥物組合物，應(yīng)選擇維持晶體E6070的載體。換句話說，載體將不應(yīng)明顯改變E6070的晶形，例如不應(yīng)使用將會(huì)溶解晶體E6070的液體載體。栽體另外不應(yīng)與E6070不相容，例如通過產(chǎn)生任何不希望的生物作用或另外以有害的方式與藥物組合物的任何其它成分相互作用。優(yōu)選以易于施用和劑量均一的單位劑型來配制^^發(fā)明的藥物組合物。"單位劑型"指適用于待治療患者的治療劑的物理上分離的單元。然而，應(yīng)當(dāng)理解，根據(jù)本發(fā)明的E6070的總?cè)談┝考捌渌幬锝M成將由主治醫(yī)生在合理的醫(yī)療判斷范圍內(nèi)確定。由于E6070的晶形在其制備過程中更容易維持，因此固體劑型是本發(fā)明藥物組合物的優(yōu)選形式。特別優(yōu)選用于口服施用的固體劑型，其包括膠囊、片劑、丸劑、粉末、和顆粒。在這樣的固體劑型中，活性化合物與至少一種惰性、藥學(xué)可接受的栽體例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣混合。所述固體劑型也可包括一種或多種的a)填充劑或膨脹劑例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、和硅酸；b)粘合劑例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖、和阿拉伯膠；c)保濕劑例如甘油；d)崩解劑例如瓊脂-瓊脂、碳酸釣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸鹽、和碳酸鈉；e)溶出延緩劑(dissolutionretardingagents)例如石蠟；f)吸收加速劑例如季銨化合物；g)潤濕劑例如十六烷醇和單硬脂酸甘油酯；h)吸收劑例如高冷土和膨潤土；和i)潤滑劑例如滑石、硬脂酸釣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷M酸鈉。固體劑型也可包含緩沖劑。它們可任選地包含不透明劑并且也可以是僅僅或優(yōu)選地，在腸道的某些部分，任選地，以延遲方式釋放活性成分的纟且合物，Remington'sPharmaceuticalSciences,第十六版，E.W.Martin(MackPublishingCo"Easton,Pa"1980)公開了用于配制藥物組合物的多種載體及制備其的公知技術(shù)。本發(fā)明藥物組合物的固體劑型也可制^^得具有包衣和殼，例如腸溶包衣和藥物制劑領(lǐng)域中公知的其它包衣。晶體E6070可以處于具有一種或多種上述栽體的固體微嚢化的形式。晶體E6070的微嚢化形式也可與賦形劑例如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等一起用在軟填充和硬填充的明皿嚢中。本發(fā)明優(yōu)選的固體藥物組合物是7mm-直徑、圓的、雙凸面的黃色膜包衣的片劑，其包含l、10或50mg晶體E6070作為活性藥物成分。所有強(qiáng)度的都通過濕法制粒過程生產(chǎn)。在這些優(yōu)選藥物組合物中的載體(或賦形劑)包括甘露醇、淀粉、聚乙烯聚吡咯烷酮、聚維酮、硬脂酸鎂、羥丙基甲基纖維素2910、滑石、聚乙二醇8000、二氧化鈥、和氧化鐵(黃色)。^y^濕謬五6。70的浴#才法本發(fā)明還提供治療炎性或自身免疫病癥和治療增殖性病癥的方法。不希望限于任何特定的理論，和如上所述的，E6070抑制粘附分子的表達(dá),例如通過炎癥細(xì)胞因子的刺激誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞表面上的E-選擇蛋白和ICAM-1。這樣的細(xì)胞表面分子對炎癥和免^^應(yīng)中炎癥細(xì)胞浸潤和細(xì)胞-細(xì)船目互作用起到至關(guān)重要的作用。E6070還降低轉(zhuǎn)錄因子NF-kB的活化并抑制炎癥細(xì)胞因子信號(hào)通路中的轉(zhuǎn)錄活化，其調(diào)節(jié)在幾種炎癥疾病的病理學(xué)中涉及的許多基因例如IL-1和TNF。更一般而言，確定NF-KB為炎癥病理學(xué)中的關(guān)鍵角色提示NF-KB靶向的治療法可在炎癥和免疫病癥中是有效的(一般地參見，NF-kBinDefenseandDisease,J.Clin.Investig.2001，107，7)。為了治療炎性、自身免疫或增殖性疾病和病癥，根據(jù)本發(fā)明，可采用任何量、任何形式的藥物組合物和任何治療有效的施用途徑，施用晶體E6070和包含其的藥物組合物。換句話說，以所需劑量與適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)可接受的載體配制后，可經(jīng)口服、直腸、胃腸外、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、皿內(nèi)、局部(以粉末、軟骨或滴劑)、經(jīng)頰(bucally)、以口腔或鼻腔噴霧或類似的方式，將包含晶體E6070的適當(dāng)藥物組合物施用給患者。在本發(fā)明的方法中，以治療有效量施用晶體E6070。典型地，可以以每天一次或多次，每天約0.001mg/kg約50mg/kg、從約O.Olmg/kg~約25mg/kg、或從約0.1mg/kg約10mg/kg對象體重的劑量水平施用晶體E6070,以得到理想的治療效果。小于0.001mg/kg或大于50mg/kg(例如50~100mg/kg)的劑量也可施用給正在進(jìn)行治療的患者。濕體E6070時(shí)浙務(wù)^^t在實(shí)施例1:晶體E6070的制備利用上述和圖1所示的方法合成晶體E6070。所用溶劑是特級(jí)的。所有其它化學(xué)品是分析級(jí)的。元素分析:通過QuantitativeTechnologies,Inc.(QTI),WhitehouseNJ,USA測定E6070的碳、氫、氮和硫的含量。通過釆用2400Perkin-ElmerCHN元素分析儀的燃燒分析測定C、H和N。通過燃燒分析隨后高氯酸鋇滴定測定硫含量。C、H、N和S的百分元素成分值，如通過QTI測定的，與E6070的分子式C23H36N607S—致。試驗(yàn)值全部在理論值的±0.3%內(nèi)。理論和試!Hi都表明藥物分子加1個(gè)硫酸分子和3個(gè)水分子。表l:元素分析結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實(shí)施例2:晶體E6070的紅外光^普對于在帶有DuraSampl/iIIDiamond國ATR采樣附件的NicoletMagna-IR550傅立葉變換紅外光"^XSensIRTechnologies,DanburyCT)上的純粉末試驗(yàn)，記錄E6070的IR吸收光鐠。圖2顯示了晶體E6070的IR吸收光譜。特征吸收帶的歸屬與晶體E6070的指定結(jié)構(gòu)一致，如表2所示。優(yōu)選地，晶體E6070的特征在于在純樣品紅外光語中具有選自1656、1620、1549、1136、1085、和1033cm1的至少兩個(gè)吸收帶。表2:晶體E6070的特征吸收帶<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實(shí)施例3:晶體E6070的粉末X-射線衍射圖案將晶體E6070置于X-射線粉末衍射儀(RINT-2000，Rigaku，日本)的樣品臺(tái)上，并在表3所示的條件下分析。圖3顯示晶體E6070的粉末X-射線衍射(XRD)圖案。表3:粉末X畫射線衍射測量糾耙Cu檢測器閃爍計(jì)數(shù)器管電壓40kV管電流200mA狹縫DS1/2。,RS0.3mm,SS1/2。掃描速度:2°/分鐘步/取樣0.02o掃描范圍5~40°樣品支持器:玻璃支持器(直徑5mm)測角儀垂直測角儀單色光源使用實(shí)施例4:晶體E6070的單晶X-射線衍射分析和計(jì)算的XRD圖案釆用AT250天平(Mettler,Switzerland)稱量約1.8mgE6070，并在加熱下溶解在3.0mL丙酮(1.5mL)和水(1.5mL)的混合物中。在室溫下將該溶液儲(chǔ)藏在干燥器中。儲(chǔ)藏該溶液3天后，出現(xiàn)小的棱柱形晶體。將約0.10x0.10x0.05mm尺寸的E6070晶體放置于玻璃纖維上。在R-AXISV成^^1測器系統(tǒng)(Rigaku，日本)上用o軸振動(dòng)法(振動(dòng)范圍-IO(TC到IOO'C;步10°)采用0.75A的波長收集衍射數(shù)據(jù)。所有的測量在PharmaceuticalIndustryBeamlineBL32B2atSPring隱8(SuperPhotonring-8GeV)上進(jìn)行。i用用于結(jié)構(gòu)分析的Oj對fl/aeflr處理收集的數(shù)據(jù)。采用0.072的最終R因子解晶體結(jié)構(gòu)。表4總結(jié)了E6070晶體的數(shù)據(jù)收集和晶體學(xué)分析結(jié)果。表4:單晶E6070的數(shù)據(jù)收集和晶體學(xué)分析晶體數(shù)據(jù)晶體系統(tǒng)空間組z值數(shù)據(jù)收集衍射儀福射測量的>^射NoR合并(1G/79畫0J31)完全(16.79-0.73A)結(jié)構(gòu)解析和精化結(jié)構(gòu)解析精化單斜晶P2^na=16.915(3)Ab=12.384(2)Ac=12.554(2)AP=97.089(8)°V=2609.7(9)A34R-AXISV同步輻射X=0.75A總計(jì)20149獨(dú)特56423.3%79.9%直接法(SHELXS-97)全矩陣最小二乘法(SHELXL-97)反射No.4630變量No.470反射/錄比9.85殘留R;Rw氣0.072;0.207*R:未加權(quán)R因子，Rw:加權(quán)R因子圖4和5中分別顯示了X-射線晶體學(xué)分析的編號(hào)圖和ORTEP圖。圖5中，在50%可能性水平顯示熱橢圓體。晶體結(jié)構(gòu)顯示不對稱單元中活性成分的質(zhì)子化的N-甲基胺(N6)和咪唑并吡啶環(huán)(N3),l個(gè)SO,離子和3個(gè)水分子。E6070通過水分子的氫鍵網(wǎng)絡(luò)形成H2S04鹽，如圖6所示。在ORTEP圖中，(圖5)，觀察到環(huán)己烷環(huán)的兩個(gè)碳原子的無序狀態(tài)。該行為可能由在那部分的構(gòu)型變化引起的?；谝陨?，E6070的結(jié)構(gòu)確定為如上在圖5中所示的。圖7描述由單晶數(shù)據(jù)計(jì)算的X-射線粉末衍射數(shù)據(jù)。計(jì)算的粉末衍射圖案與晶體E6070的XRD圖案相匹配(對比，例如，圖3)。這顯示E6070的單晶與E6070晶體粉末是同形的。實(shí)施例5:從各種溶劑中結(jié)晶的影響表5中顯示從19種溶劑系統(tǒng)中結(jié)晶約100mg恥湊的E6070，這是因?yàn)樵谟袡C(jī)化合物的各種多晶形物的分離中，結(jié)晶溶劑的性質(zhì)是已知的因素。通過將樣品溶解在水中隨后添加適當(dāng)?shù)目谷軇?，來制備重結(jié)晶的E6070。下面表5列出了所用的抗溶劑。在沒有標(biāo)注抗溶劑的情形下，在冷卻至室溫之前將水溶液升溫到IO(TC來重結(jié)晶E6070。如圖8所示，除了僅僅兩批即(2批)和(5批)比其它批顯示較低的XRD強(qiáng)度(數(shù)據(jù)未顯示)以外，在結(jié)晶的物質(zhì)的XRD圖案中沒有觀察到顯著差異。而且，所有批顯示幾乎相同的7jc含量和硫酸離子含量(表6)。這些結(jié)果表示E6070以穩(wěn)定的晶體形式存在。表5:結(jié)晶溶劑批號(hào)溶劑E6070濃度1乙醇/水(1:4.5,v/v)約13mg/mL2水約500mg/1.3mL3水約50mg/1.1mL4丙酮/水(1.3:1，v/v)約19mg/mL51-丙醇/水(1.5:1,v/v)鈣17mg/mL62-丙醇/水(1.8:1,v/v)纟虧16mg/mL7水約389mg/mL8丙酮/水/ET0H(2:1:1.7，v/v/v)纟;16mg/mL9乙醇/水(1:2.2,v/v)421mg/mL10水纟;13mg/mL11丙酮/水(1:2,v/v)約29mg/mL12丙酮/水(1:4,v/v)纟;37mg/mL13丙酮/水(1:3，v/v)纟^34mg/mL14水約36mg/mL15水纟^17mg/mL162-丙醇/水(1:1,v/v)纟虧23mg/mL17水約73mg/mL18乙醇/水(1:1.6，v/v)纟^61mg/mL19乙醇/水(5:1，v/v)纟虧65mg/mL表6:E6070的水和硫酸離子含量批號(hào)水含量'S(V—含量*(%)(%)理論值10.017.819.717.139.123.7410.120.169.918.3了9.817.5810.017.599.817.7109.818.21110.017.71210.017.9139.717.514N.T.17.515N.T.18.516N.T.18.117N.T.17.818N.T.18.519N.T.18.6N.T.:沒有檢測*小量樣品用于上述測量。實(shí)施例6:變溫粉末X-射線衍射將晶體E6070壓到樣品支持器中，然后置于X-射線衍射儀RINT-2000(Rigaku，日本)的臺(tái)上。圖9顯示在各種溫度下E6070藥物物質(zhì)的XRD圖案。在表7中所列的M下操作儀器。表8和圖9中確定了特征XRD峰。可優(yōu)選用于表征和確定晶體E6070的峰包括8.3±0.2。20、10.1±0.2。26、14.3±0.2。29、15.3±0.2°29、18.1±0.2°29、21.1±0.2。26、24.1±0.2°20、和29.2±0.2°20。這些峰的任何組合可用于表征晶體E6070。當(dāng)以逐步方式從30。C至160'C加熱藥物物質(zhì)時(shí)，在90。C觀察到新的衍射圖案，其表示大概由于失去水而引起的晶體轉(zhuǎn)化。峰強(qiáng)度逐步降低并在高于1601C時(shí)完全消失。因此，晶體E6070中失去水導(dǎo)致晶體轉(zhuǎn)化和明顯的晶M陷。表7:粉末X-射線衍射測量糾乾Cu檢測器閃爍計(jì)數(shù)器管電壓40kV管電流200mA狹縫DS1/2。，RS0.3mm，SS1/2°掃描速度5°/分鐘步/取樣0.02°掃描范圍5~40°樣品支持器:玻璃支持器(直徑5mm)測角儀垂直測角儀單色光源使用表8:E6070的特征X-射線衍射(PXRD)峰26Gl)8.3±0.28.9±0.210.1±0.214.3±0.215.3±0.216.0±0.216.6±0.218.1±0.220.5±0.221.2±0.222.6±0.224.1±0.225.1±0.226.8±0.227.6±0.229.2±0.2如圖10所示，晶體E6070可經(jīng)歷可逆的轉(zhuǎn)化變成其無定形形式。圖IO中的PXRD圖(1)顯示在環(huán)境條件下(25"C，60。/。相對濕度)的晶體E6070。加熱至100"C，同時(shí)失去水合的水，PXRD圖(3)顯示失去結(jié)晶性。冷卻至環(huán)境條件再7JC合E6070，如PXRD圖(2)所示重新回到其晶體形式。采用上述的衍射儀進(jìn)行該試驗(yàn)。實(shí)施例7:晶體E6070的熱性能和吸濕性能熱分析:采用RigakuThermoflexTAS200TG8101D(Rigaku,Tokyo,Japan)，在表9的測量條件下進(jìn)行熱重差熱分析(TG~DTA)。利用銦校準(zhǔn)溫度軸和池常數(shù)。準(zhǔn)確稱重固體樣品(l~5mg)，加入敞口鋁盤中，然后加熱。表9熱分析測量條件樣品盤鋁盤參比空鋁盤氣氛無凈化^Ht加熱速度10匸/分鐘溫度范圍25"C300匸吸濕性測量:利用自動(dòng)控制氣氛的微量天平MB-300W(VTICorporation,FL，USA)，將樣品暴露于25匸的各種相對濕度(RH)下。在該系統(tǒng)中，將樣品懸掛在25"C的等溫室，通過調(diào)節(jié)干的(0%RH)和潮濕的(100%RH)氮?dú)獾南鄬α髁浚瑢H從5%調(diào)整到95%。每2分鐘利用微量天平測量所述樣品的重量。用于平衡的重量穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)^1每次測量的最大重量變化小于0.2%(w/w)。盡管晶體E6070包含約10%的水，這幾乎等于三水合物的水含量，但是當(dāng)暴露于多種可控濕度下，在25C從0%至93%RH，沒有發(fā)現(xiàn)吸收或失去任何水分。圖11顯示該試驗(yàn)的吸附/解吸附等溫線。在TODTA熱分析鐠圖中，在卯t:i5or:的溫度范圍內(nèi)觀察到約io。/。的重量損失，其中DTA曲線顯示兩個(gè)寬的吸熱峰(圖12)。這些吸熱峰意味著E6070的脫水行為，這是由于重量的損失可與其7JC含量相比。實(shí)施例8:晶體E6070的物理穩(wěn)定性在下面兩種條件下評(píng)價(jià)晶體E6070的物理穩(wěn)定性60t:i個(gè)月和40t:/75。/。RH(開放)1個(gè)月。結(jié)果，在每種著重(stressed)條件下在XRD圖案中沒有觀察到變化(圖13)。而且，兩種著重的樣品顯示與開始相同的TG-DTA熱分析語圖(圖14)。因此，晶體E6070顯示在固體狀態(tài)下是物理上穩(wěn)定的。實(shí)施例9:E6070的結(jié)晶-lgM^b次利用M攪拌制備lg恥漠的晶體E6070,來檢查放大試驗(yàn)的晶形并測量大小。該批的XRD圖案與之前批次的相同，并且TG熱分析鐠圖顯示水含量與三7jC合物的理論值一致，即10.0%。il^明以克,制備的晶體E6070的晶形與上述實(shí)施例中描述的那些相同。圖15是該lg恥漠結(jié)晶的E6070晶形的顯微照片。最大晶體尺寸看起來小于100fim。實(shí)施例10:晶體E6070的研磨晶體E6070的顏色取決于粒度并隨粒度變化。當(dāng)在HosakawaMicronPowderSystems中微粉化單批的E6070時(shí)證實(shí)了這一點(diǎn)，&目當(dāng)于研磨操作。如表9中所示的，研磨了5個(gè)測試試驗(yàn)樣品，其中"d(0.5)"表示50%樣品具有該粒度或更小，"d(0.9)"表示卯％的樣品具有該粒度或更小。在這些試驗(yàn)中，試驗(yàn)2和3與試驗(yàn)4和51-5之間具有顯著差異，其中隨著平均粒度的降低樣品的黃色色調(diào)增加。實(shí)施例11:晶體E6070的固態(tài)13CNMR鐠為了得到晶體E6070的固態(tài)13CNMR譜，釆用晶體E6070粉末填充7.5mm的轉(zhuǎn)子。在對于13C在75.3MHz操作的ChemagneticsCMX-II300NMRspectrometer上i己錄鐠圖。利用CPMAS(交叉極^ft魔角轉(zhuǎn)動(dòng)(cross-polarizationmagic-anglespinning))和邊帶全抑制(totalsidebandsuppression(TOSS))得到13CNMR譜。轉(zhuǎn)子在魔角以4kHz的速度轉(zhuǎn)動(dòng)。幅度可變的交叉極化(variable-amplitudecrosspolarization(VACP))和雙脈沖相調(diào)制(two-phasephasemodulation(TPPM))也用于得到該譜圖。力卯。脈沖寬是4.2ns，并且"C180。脈沖寬是8.4jis。采用30.03kHz的譜寬得到2048個(gè)點(diǎn)，相應(yīng)于68ms的數(shù)據(jù)采集時(shí)間。利用1ms的接觸時(shí)間得到譜圖，脈沖之間的重復(fù)時(shí)間是5s。對總共16384個(gè)瞬態(tài)平均來得到譜圖。利用六甲基苯的甲基J^作為外參比歸屬化學(xué)位移，所述甲基峰具有17.35ppm的化學(xué)位移值。圖16顯示晶體E6070的固態(tài)13CNMR鐠。如鐠圖所示，晶體E6070的特征峰出現(xiàn)在16.1、25.5、37.8、57.1、67.2、67.4、100.2、109.9、114.8、115.9、121.9、126.2、128.3、131.7、138.8、146.9、152.3和158.0ppm。報(bào)導(dǎo)的化學(xué)位移在土0.3ppm內(nèi)。表10:晶體E6070的研磨橙黃色/粉紅色顏色黃色可在約120~160ppm區(qū)域發(fā)現(xiàn)確定晶體E6070的優(yōu)選特征峰。一般地，可在完整片劑的固態(tài)13CNMR鐠中觀察到這些優(yōu)選的峰，其與其它的峰沒有顯著的重疊。原因在于許多常用的賦形劑也將在固態(tài)13CNMR鐠中顯示，所述賦形劑為添加到活性藥物成分(API)中以制備藥物片劑組合物的成分。鑒于它們的化學(xué)性質(zhì)，這些賦形劑的共振一般出現(xiàn)在"CNMRi普的50到110卯m。如果片劑組合物中賦形劑占主導(dǎo)地位，那么賦形劑的峰可顯著比API的峰強(qiáng)。此外，賦形劑的峰也出現(xiàn)在脂族區(qū)(0~50ppm)和jH&區(qū)(160~190ppm)。而且，賦形劑的峰很少位于120~160ppm。由此原因，固態(tài)13CNMR鐠中確定和比較活性成分唪的優(yōu)選范圍是120~160ppm。優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的晶體E6070的特征在于在固態(tài)13CNMR譜中具j選自121.9±0.3ppm、126.2±0.3ppm、128.3±0.3ppm、131.7±0.3ppm、138.8±0.3ppm、146.9±0.3ppm、152.3±0.3ppm和158.0±0.3ppm的至少兩個(gè)峰。權(quán)利要求1.晶體1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基氨基)-甲基]-1H-吲哚-2-基]-2-甲基，硫酸鹽(1∶1)，三水合物。2.權(quán)利要求1的晶體l樂咪唑并[4,5-6吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基狄)-甲基-l樂吲哚-2-基-2-曱基，硫酸鹽(l:l)，三水合物，其特征在于在粉末X-射線衍射圖案中具有選自8.3±0.2。20、10.1±0.2°29、14.3±0.2°29、15.3±0.2。29和18.1±0.2。29的至少兩個(gè)峰。3.權(quán)利要求1的晶體lH-咪唑并[4，5-6吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基絲)-甲基-l樂吲咮-2-基]-2-甲基，硫酸鹽(l:l),三水合物，其具有單斜晶系和P2^n空間組。4.權(quán)利要求4的晶體l好-咪唑并[4，5-6吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基曱基^J+甲基l-lH-吲咮-2-基]-2-曱基，石克酸鹽(l:l)，三水合物，其特征在于晶體晶格^^t為a=16.915(3)Ab=12.384(2)Ac=12.554(2)A|3=97.089(8)°V=2609.7(9)A3并且Z值-4。5.權(quán)利要求1的晶體l好-咪唑并[4，5-6吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基絲)-甲基-l樂吲哚-2-基-2-甲基，硫酸鹽(l:l)，三水合物，其特征在于在固態(tài)"CNMR鐠中具有選自121.9±0.3ppm、126.2土0.3ppm、128.3±0.3ppm、131.7±0.3ppm、138.8±0.3ppm、146.9±0.3ppm、152.3±0.3ppm、和158.0±0.3ppm的至少兩個(gè)峰。6.權(quán)利要求1的晶體l好-咪唑并[4,5-6吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基絲)國曱基-l樂吲咮-2國基畫2畫甲基，硫酸鹽(l:l)，三水合物，其特征在于在純樣品的紅外光譜中具有選自1656、1620、1549、1136、1085和1033cm1的至少兩個(gè)吸收帶。7.—種藥物組合物，其包含晶體1〃-咪唑并[4,5-61吡咬-5-胺，7國[5畫[(環(huán)己基甲基絲)-曱基H樂吲咮畫2國基-2國甲基，硫酸鹽(l:l)，三水合物，和藥學(xué)可接受的栽體。8.權(quán)利要求7的藥物組合物，其中所述晶體1樂咪唑并[4，5-6吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基狄)國曱基-l樂吲哚畫2國基畫2畫甲基，疏酸鹽(l:l)，三水合物的特征在于在粉末X-射線衍射圖案中具有選自8.3±0.2°29、10.1±0.2°29、14.3±0.2°20、15.3±0.2°29、18.1±0.2。26、21.1±0.2。29、24.1±0.2°26和29.2±0.2°20的至少兩個(gè)峰。9.權(quán)利要求7的藥物組合物，其中所述晶體1樂咪唑并[4，5-6吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基絲)-曱基-l樂吲咮-2-基-2-曱基，硫酸鹽(l:l)，三水合物具有單斜晶系和P2z/n空間組。10.權(quán)利要求9的藥物組合物，其中所述晶體lH-咪唑并[4,5-6吡啶畫5畫胺，7國[5誦[(環(huán)己基甲基絲)畫甲基畫l^-吲咮國2畫基-2-曱基，硫酸鹽(l:l)，三水合物的特征在于晶體晶格參數(shù)為a=16.915(3)Ab=12.384(2)Ac=12.554(2)AP=97.089(8)。V=2609.7(9)A3并且Z值-4。11.權(quán)利要求7的藥物組合物，其中所述晶體l樂咪唑并[4,5-6]吡啶-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基絲)-曱基-l樂吲咮-2-基-2-甲基，硫酸鹽(l:l),三水合物的4征在于在固態(tài)13CNMR鐠中具有選自121.9±0.3卯m、126.2±0.3ppm、128.3±0.3ppm、131.7±0.3ppm、138.8±0.3ppm、146.9±0.3ppm、152.3±0.3ppm和158.0±0.3ppm的至少兩個(gè)峰。12.權(quán)利要求7的藥物組合物，其中所述晶體l樂咪唑并[4，5-6吡啶-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基絲)-曱基-l樂丐l咮-2-基-2-甲基，硫酸鹽(l:l)，三水合物的特征在于在純樣品的紅外光語中具有選自1656、1620、1549、1136、1085和1033cm"的至少兩個(gè)吸收帶。13.—種治療炎性病癥、自身免疫病癥或增殖性病癥的方法，包括給需要其的患者施用治療可接受量的晶體l樂咪唑并[4，5-6吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基絲)-甲基-l樂吲咮-2-基-2-甲基，硫酸鹽(l:l)，三水合物的步驟。14.權(quán)利要求13的方法，其中所述晶體lH-咪唑并[4,5-6吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基絲)-甲基-l樂吲哚-2-基-2-甲基，疏酸鹽(l:l)，三水合物作為藥物組合物施用，所述藥物組合物包含晶體1ff-咪唑并[4，5-6吡啶-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基曱基絲)-曱基-l樂吲哚-2-基-2-曱基，硫酸鹽(l:l)，三7jC合物和藥學(xué)可接受的載體。15.—種制備晶體l樂咪唑并[4,5-6]吡咬-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基氨基)誦曱基陽l樂吲咮-2國基I-2-甲基，硫酸鹽(l:l)，三水合物，E6070的方法，其才艮據(jù)以下>^應(yīng)進(jìn)行包括步驟將ER807447懸浮在水中以形成含水懸浮液；將H2S04添加到所述含水懸浮液中以形成溶液，同時(shí)保持溶液的內(nèi)部溫度低于25'C，任選地過濾所述溶液，和緩慢使溶液升溫直到E6070從溶液中結(jié)晶。16.權(quán)利要求16的方法，其還包括在所述升溫步驟之前，將E6070晶種添加到所述溶液中的步驟。17.權(quán)利要求16的方法，其中所述升溫步驟包括用約2.5小時(shí)將所述溶液緩慢升溫到約70'C。18.權(quán)利要求15的方法，其中所述升溫步驟包括用約2.5小時(shí)將所述溶液緩慢升溫到約70'C。全文摘要本發(fā)明涉及晶體1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-胺，7-[5-[(環(huán)己基甲基氨基)-甲基]-1H-吲哚-2-基]-2-甲基，硫酸鹽(1∶1)，三水合物，E6070，其制備方法，其治療用途。含有晶體E6070和藥學(xué)可接受載體的藥物組合物代表本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案。本發(fā)明還涉及治療炎性病癥、自身免疫病癥或增殖性病癥的方法，其包括給需要其的患者施用治療有效量的晶體E6070。文檔編號(hào)A61P37/00GK101111495SQ200680003585公開日2008年1月23日申請日期2006年2月1日優(yōu)先權(quán)日2005年2月2日發(fā)明者查爾斯·E·查斯,櫛田郁雄申請人:衛(wèi)材株式會(huì)社