專利名稱：動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)中的細(xì)菌控制的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于減少動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)(holding system)中細(xì)菌的方法。更 具體而言，本發(fā)明提供了用于控制動(dòng)物、動(dòng)物生產(chǎn)系統(tǒng)(如飼育場(chǎng)、飼養(yǎng)圏等) 或其組合中病原細(xì)菌的方法。
背景技術(shù)：
供人消費(fèi)的肉和肉產(chǎn)品的污染是食品工業(yè)中一直存在的問題。人們特別 擔(dān)心的是;U^桿菌Cfoc力er/c力/a co/力、沙門氏菌(5WM7/7e//a ^p.)和彎曲 桿菌(&邵/A^c^r ; /^)病原體，所有這些都能在人體內(nèi)導(dǎo)致經(jīng)食物傳播 的疾病。這些病原體所致的人類疾病通常是由吃了污染的肉產(chǎn)品(包括雞、火 雞、牛肉和豬肉)引起的。這類病原體也可以通過4ftA動(dòng)物生產(chǎn)而直接對(duì)Ait 成#^危害。此外，動(dòng)物胃腸道中攜帶的其它病原體也可以直接或間接i4^t Aii^條危害。豬、家禽和牛類的細(xì)菌污染源很多，包括不潔凈的墊#飼料。用于豬、 家禽、牛類和其他生產(chǎn)動(dòng)物的干祠料會(huì)被細(xì)菌(包括沙門氏菌和大腸桿菌 Uco7力)所污染。這類污染可能會(huì)在加工、儲(chǔ)藏或運(yùn)輸過程中J^i。例如， 肉牛的肉和肉產(chǎn)品的常見污染源頭M宰場(chǎng)，在ii^發(fā)生獸皮上、M上或 排泄物內(nèi)的細(xì)菌對(duì)動(dòng)物尸體的污染。為減少人的經(jīng)食物傳播的疾病，研究已經(jīng)轉(zhuǎn)向了在活動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行屠宰 前干涉。益生菌、日糧和抗病原體方法都祐^1于設(shè)法實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)。例如，流水號(hào)為5,965,128的美國(guó)專利(Doyle等A;也可參見Zhao等 人(1998) J Clin Microbiol, 36, 641-647)教導(dǎo)了在實(shí)驗(yàn)性接種過的牛類體 內(nèi)使用益生菌來減少或預(yù)防￡"http://0157: H7的攜帶。但是，5， 965， 128號(hào)美 國(guó)專利所教導(dǎo)的方法具有高度的4&X性并且包^H吏用瘤胃套管插入^^f亍牛 類的接種。這種方法無法提供方便的益生菌給藥方法。其他的研究(Brashears 等人(2003) JFoodProt， 66, 748-754; Younts-Dahl等人(20Q4) JFoodProt，67， 889-893)已經(jīng)證明乳酸菌aa"Mac/7/M)、 丙酸桿菌 CProi72'如/6ac"r/咖)或兩者均有的補(bǔ)充給藥都能在牛類中減少A co7/0157: H7的排放，但是不能清除所述病原體。Garner和Ware公開了類似的結(jié)果(US 2003/0175305、 US 2003/0175306、 US 2003/0175307和WO 2004/030624)。也進(jìn)行了改變?nèi)占Z療法以減少牛類中病原^#放的研究。Allen等(美國(guó) 專利No. 6,270，812)教導(dǎo)了在祠育場(chǎng)的肥育日糧中^JD海藻添加劑來減少屠 宰后排泄物樣品中病原性大腸桿菌。其他研究人員(Braeden等人(2004) J Food Prot， 67， 1824-1828)發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充給予含Tasco-14的飼料會(huì)降低牛類中 涵桿菌0157: H7的患病率。另有^Wf究人員(Diez-Gonzalez等人(1998) Science, 281， 1666-1668)證明了突然給谷飼牛類提供干草日糧會(huì)減少;U^ 桿菌數(shù)量。但是，日^t牛類體內(nèi);^桿菌0157: H7水平的作用大小是不穩(wěn) 定的，并且結(jié)果仍然有爭(zhēng)議。特異性耙向并清除牛類、家禽和豬中的病原體是另 一種治療經(jīng)食物傳播 疾病的方法。例如，抗生素》喊霉素會(huì)顯著降低牛類中; 桿菌0157: H7的 排泄物排放(Ransom等人(2003) Research Fact Sheet, National Cattleman's Beef Association, Centennial CO)。雖然新霉素不用于人類醫(yī)學(xué)中，但是 這種抗生素的廣泛使用可能會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生對(duì)通常用于人類醫(yī)學(xué)中的相關(guān)抗生素 (如慶大霉素、卡那霉素等)的抗性。禁止在食物中預(yù)防性使用抗生素的歐洲 禁令和抗生素抗性廣泛散播的可能性阻礙了這類化絲的<^1 。也考慮過用噬菌體來處理動(dòng)物廢物。噬菌體是可以特異性感染并殺死細(xì) 菌的細(xì)菌病毒，并且在自然界中分布廣泛。喧菌體識(shí)別細(xì)菌表面的受體，吸 附到其上并且將它們的遺傳物質(zhì)注入到宿主細(xì)胞中。它們降解宿主細(xì)胞的DNA 并且合成它們自身的遺傳物質(zhì)及所需的殼衣蛋白，然后在裂解所述細(xì)胞前重 新組裝噬菌體顆粒的多個(gè)拷貝。然后所釋放的噬菌體將感染病破壞周圍環(huán)境 中的其他細(xì)菌。這一過程會(huì)持續(xù)到所有細(xì)菌嘲紳皮vMJ斤述體系中清除。US 6， 656，463 ^^開了^ft^ Felix 0-1噬菌體來減少豬體內(nèi)的沙門氏菌的 數(shù)量。Smith等(J Gen Microbiol (1987) 133， 1111-1126)已經(jīng)證明噬菌體 可被用于控制家畜中腸產(chǎn)毒f生大腸桿菌的感染。該研究顯示菌抹特異性噬菌 體可以通過單次口服劑量或通過用噬菌體對(duì)動(dòng)物房中的墊草噴霧來治愈或預(yù) 防大腸桿菌所致腹瀉。但是所述喧菌體只有在給予大腸桿菌之前或與大腸桿 菌同時(shí)給予時(shí)才有效。此外，Smith等所用的病原體不同于;t^桿菌0157:Kudva等(A卯1 Env Microbiol (1999) 65， 3767-3773)證明嗟菌體可有 效減少培養(yǎng)物中大腸桿菌0157: H7數(shù)量或從培養(yǎng)物中有效地清除大腸桿菌 0157: H7。 M地，單獨(dú)一種噬菌體不能清除^M桿菌0157: 117培##，然 而三種0-157特異性噬菌體的混合物能夠從培養(yǎng)物中清除所述細(xì)菌。但是， Kudva等(1999)的體外實(shí)驗(yàn)不能說明這類噬菌體在控制家畜體內(nèi)的大腸桿菌 0157: H7時(shí)會(huì)有效。已經(jīng)報(bào)導(dǎo)過了其他的體外研究；但是，當(dāng)在體內(nèi)測(cè)試這 些喧菌體時(shí)，沒有觀察到效力或觀察到很低的效力(參見Callaway T.R.等人 (2004) J Animal Sci. 82 (E. S叩pl): E93-99的綜述)。需要進(jìn)行進(jìn)一步的改 進(jìn)以有效地使用噬菌體來減少牛類的^M桿菌0157感染。流水號(hào)為6， 485， 902的美國(guó)專利(Waddell等人)教導(dǎo)了^JU特異性噬菌體 來減少牛類腸胃道中的;U^桿菌0157: H7 7JC平。在用;tM桿菌0157: H7攻 擊之前和之后，以高劑量經(jīng)口給予小牛六種噬菌體的混合物。該研究表明與 未接受噬菌體的小牛相比， 桿菌0157: H7在排泄物中的排放減少。但是， 該方法所要求的高劑量表明噬菌體會(huì)在腸胃道中失活。雖然改善了屠宰后的衛(wèi)生*,但是受污染的肉和肉產(chǎn)品導(dǎo)致的在人體 內(nèi)經(jīng)食物傳播的疾病仍是食品工業(yè)中一直存在的問題。通常，這些疾病可以 歸咎于;U^桿菌、沙門氏菌和/或彎曲桿菌。已經(jīng)對(duì)減少家禽、豬和牛類中病 原體發(fā)病率的各種方法進(jìn)行了研究，包括用益生菌補(bǔ)充給藥、日糧添加劑、 日糧變化、抗生素和噬菌體。但是，大多數(shù)方法都是經(jīng)濟(jì)上不可行的、有爭(zhēng) 議的或未經(jīng)證實(shí)的。此外，大多數(shù)研究使用實(shí)驗(yàn)性感染的動(dòng)物，這不能真實(shí) 地反映抗病原體治療對(duì)自然感染的動(dòng)物的作用。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及一種用于減少動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)中病原體細(xì)菌的方法。 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種用于減少動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)中細(xì)菌的方法。 本發(fā)明提供了一種用于減少動(dòng)物體內(nèi)存在的耙病原體數(shù)量的方法(A)，包 括給予所述動(dòng)物一種或多種控釋的噬菌體菌抹或噬菌體組件或其組合，使得 所述一種或多種控釋的噬菌體菌林得以在體內(nèi)釋放，吸附所述一種或多種靶病原體，并^yj斤述動(dòng)物體內(nèi)減少所述一種或多種耙病原體的數(shù)量。在上述方法中，所述一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌體組件或其組 合以每天每只動(dòng)物約107至1013 pfu的治療劑量給予約1至12天?；蛘?，所述一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌體組件以每天每只動(dòng)物約105至IO1。 pfu的維持劑量再給予30至90天。又或者，所述一種或多種控釋的噬菌體菌 抹或噬菌體組件開始以每天每只動(dòng)物約107至10" pfu的治療劑量給予約1至 12天，之后以每天每只動(dòng)物約105至IO1。 pfu的維持劑量給予30至90天。上述控釋的噬菌體菌林或噬菌體組件可以通過加到動(dòng)物飼料或飲用水 中、通過pAX或注射(肌內(nèi)、JM內(nèi)或鞘內(nèi))或通過直腸給藥、局部給藥或者 這些方法的組合iM^予。本發(fā)明還提供了一種用于減少存在于寄養(yǎng)系統(tǒng)中的一種或多種靶病原體 數(shù)量的方法(B)，包括給予動(dòng)物飼料、飲用水、動(dòng)物或其組—種或多種控釋 的噬菌體菌林或噬菌體組件，使得所述一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌 體組件得以在所述飼料、飲用水、動(dòng)物消化道、糞便或其組合中釋放，吸附 并殺死周圍環(huán)境中的所述把病原體，從而減少所述寄養(yǎng)系統(tǒng)中所述一種或多 種病原體的數(shù)量。上述控釋的噬菌體菌抹或噬菌體組件可以通過加到動(dòng)物飼 料或々大用水中、通過p^/v或注射(肌內(nèi)、 內(nèi)或鞘內(nèi))或通過直腸給藥、局 部給藥或者這些方法的組合^予。所迷寄養(yǎng)系統(tǒng)包括但不限于飼育場(chǎng)、屠 宰前的寄養(yǎng)欄、銅養(yǎng)圏(包括例如飼養(yǎng)棚或飼養(yǎng)欄)、寵物動(dòng)物園、開》文式或 封閉式水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)以及其他動(dòng)物飼養(yǎng)區(qū)等等。當(dāng)把來自具有各種病原體控制狀況的不同畜牧場(chǎng)的動(dòng)物放入到寄養(yǎng)系統(tǒng) (例如寄養(yǎng)或祠養(yǎng)圈，如祠育場(chǎng))中時(shí)，可以將噬菌體給予所述動(dòng)物。以每天 每只動(dòng)物約107至10" pfu的劑量給予所述動(dòng)物噬菌體約1至12天。然后可 以每天每只動(dòng)物約105至IO1。 pfu的維持劑量給予30至90天。^^I這一方案 有助于減少該病原體對(duì)所述畜牧場(chǎng)的蒼沐污染。本發(fā)明還提供了 一種用于預(yù)防由一種或多種耙病原體導(dǎo)致的感染傳播的 方法。所述方法包括給予所述動(dòng)物一種或多種噬菌體菌抹、噬菌體組件或兩 者的組合，使得所述一種或多種噬菌體菌抹、噬菌體組件或兩者的組合得以 在所述動(dòng)物的消化道內(nèi)釋放，吸附并殺死所述把病原體，從而減少動(dòng)物廢物 中所述一種或多種病原體的數(shù)量。所述耙病原體可為大腸桿菌0157:H7、 色葡萄球菌(i^/ 力/7o^w^Ay犯rewi)、密螺旋體(7>e/70/ efl7<2)或其他胃腸道 中攜帶的病原體或者它們的組合。所述一種或多種噬菌體菌林、噬菌體組件 或兩者的組合都可以以控釋的噬菌體菌株、噬菌體組件或兩者的組合的形式 提供。本發(fā)明還提供了用于減少動(dòng)物體內(nèi)的病原體的處理方案，所述病原體例如，但不限于大腸桿菌、沙門氏菌、彎曲桿菌和葡萄球菌。將要被運(yùn)輸或被屠宰的動(dòng)物可以^:輸?shù)?-7天前用一種或多種控釋的噬菌體菌抹或噬菌體 組件或者兩者的組合來處理。偵冗這一方法，可到治療的第3-5天時(shí)將所述 動(dòng)物的病原體水平降低到低水平，因此使得從治療的大約第4 動(dòng)物可 以被安全運(yùn)輸。這樣就提供了一個(gè)"安全運(yùn)輸和加工"的區(qū)間，在此期間來 自于所述寄養(yǎng)系統(tǒng)(例如但不限于寄養(yǎng)或飼養(yǎng)圏，如飼育場(chǎng))的動(dòng)物可以^皮安全:^^r^p加工。此外，本發(fā)明提供了一種或多種控釋的噬菌體、噬菌體組件或兩者的組 合在用于送遞到動(dòng)物廢物中以預(yù)防細(xì)菌感染通過所述廢物傳4番中的用途。所 述一種或多種控釋的噬菌體、噬菌體組件或兩者的組合可以以未包封的形式直接被送遞到所il^物(離體)中或者可以以控釋形式給予所述動(dòng)物以通過動(dòng) 物腸道纟皮iHit到所iiA物。使用噬菌體來減少動(dòng)物體內(nèi)或動(dòng)物和動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)中的病原細(xì)菌將有助 于增加食品來源的安全性并且大體上有助于減少農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、水源水、寵物和 環(huán)境的病原體污染，所述動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)包括寵物動(dòng)物園和寄養(yǎng)或祠養(yǎng)圍如飼育場(chǎng)。例如，除減少大腸桿菌0157: H7傳播"卜，噬菌體也能減少M(fèi)色葡 萄球菌的計(jì)數(shù)， 桿菌0157: H7會(huì)在人類中導(dǎo)致嚴(yán)重的^:問題，M色 葡萄球菌會(huì)感染牛類的乳頭和乳房并導(dǎo)致乳腺炎。此外，當(dāng)動(dòng)物在圏欄中走 動(dòng)時(shí)通itA浴的方式可以治療導(dǎo)致蹄病的密螺4t體感染。耙病原體特異性噬 菌體、噬菌體組件或兩者的組合都可以被安全地給予動(dòng)物，而不影響天然存 在于動(dòng)物或環(huán)境中的非病原性菌群。該方法通過用有效送遞系統(tǒng)中的安全噬菌體來處理動(dòng)物克服了現(xiàn)有技術(shù) 的缺陷。此外，通it^予控釋的噬菌體或噬菌體組件，可以調(diào)整所述噬菌體 或噬菌體組件的體內(nèi)停留時(shí)間以確^^所要求時(shí)段內(nèi)所述動(dòng)物的消化道和腸 道中嗟菌體群或噬菌體組件的存活和持續(xù)水平，并且如果需要的話確保在所要求時(shí)段內(nèi)動(dòng)物廢物中噬菌體群或噬菌體組件的存活和持續(xù)水平以控制動(dòng)物 或動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)(包括寄養(yǎng)或飼養(yǎng)圏，如飼育場(chǎng))或前述兩者中的靶向病原體 群。所述喧菌體或噬菌體組件不含毒素或其它潛在的對(duì)環(huán)境有害的化合物。 這些高效噬菌體提供了一種用于控制家畜、寵物和其它動(dòng)物以及所述動(dòng)物寄 養(yǎng)系統(tǒng)(包括寄養(yǎng)或飼養(yǎng)圏，如飼育場(chǎng))、其它動(dòng)物飼養(yǎng)區(qū)(特別是高強(qiáng)度畜牧) 和周圍環(huán)境中細(xì)菌菌群的經(jīng)濟(jì)可O安全的方法上*明內(nèi)容部分未必描述了本發(fā)明的所有特征。


參照下述關(guān)于附圖的說明，本發(fā)明的上述特征和其他特征將會(huì)更加顯而 易見。圖1示出了加到脫月旨奶粉中的噬菌體效價(jià)(前)與固定和重懸后獲得的噬 菌體效價(jià)(^)。圖2示出了加到大豆蛋白粉中的噬菌體效價(jià)(前)與固定和重懸后獲得的 噬菌體效價(jià)(后)圖3示出了包封對(duì)于噬菌體活性的作用。示出了包封前后噬菌體的效價(jià)。 圖4A示出了低pH對(duì)于包封的噬菌體的穩(wěn)定性的作用。在研磨前后測(cè)定 包封的逸菌體的效價(jià)。所有的噬菌體濃度已經(jīng)按照包封物質(zhì)的重量進(jìn)行了修 正。圖4B示出了低pH對(duì)噬菌體侵染性的作用，所述噔菌體既未被固定也未 被包封。圖5示出了當(dāng)在室溫(RT)或在4-C下分別儲(chǔ)存時(shí)，經(jīng)過4.5個(gè)月(131幻 和10個(gè)月(311天)后包封固定的噬菌體的穩(wěn)定性。圖6示出了在10天的研究期間內(nèi)，與對(duì)照動(dòng)物相比，噬菌體處理的動(dòng)物 桿菌0157: H7排》文的減少。圖7示出了在10天的研究期間內(nèi)，與對(duì)照組相比，噬菌體處理組中;U^ 桿菌0157: H7陽性動(dòng)物數(shù)量減少。圖8示出了在10天的研究期間內(nèi)，在處理過的動(dòng)物的糞便中排放的游離 噬菌體的水平。圖9示出了通it;斤述動(dòng)物(牛類)之前或&，所給予的噬菌體的>(仏性 的RFLP才莫式。所i^莫式是^JD三種不同的酶獲得的。圖10示出了送去屠宰前用于處理牛類的建"i義方案。也鑒定了所建i義的安 4^運(yùn)輸和加工的時(shí)段。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明涉及一種用于減少動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)中病原性細(xì)菌的方法。更具體地 說，本發(fā)明^供了用于控制動(dòng)物、動(dòng)物生產(chǎn)系統(tǒng)(如飼育場(chǎng)、飼養(yǎng)圏等)或其 組合中病原細(xì)菌的方法。下文描述的是優(yōu)選的實(shí)施方案。本發(fā)明提供了一種用于減少存在于動(dòng)物體內(nèi)的一種或多種耙病原體數(shù)量的方法，包括給予所述動(dòng)物一種或多種控釋 的喧菌體菌^^喧菌體組件，使得所述一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌體組件得以在體內(nèi)和腸道內(nèi)釋放并iLA所述動(dòng)物體內(nèi)清除所述一種或多種病 原體。還提供了 一種用于減少存在于動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)(例如但不限于寄養(yǎng)或祠養(yǎng) 圈，如飼育場(chǎng))中的一種或多種耙病原體數(shù)量的方法，包括給動(dòng)物伺料、^U I 水、動(dòng)物或其組合提供一種或多種控釋的噬菌體菌^/或噬菌體組件，使得 所述一種或多種控釋的噬菌體菌林、噬菌體組件或兩者的組合都得以在所述 飼料、飲用水、動(dòng)物消化道、糞便或其組合中釋放，吸附所述乾病原體，從 而殺死或減少所述動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)中所述一種或多種靶病原體的數(shù)量。動(dòng)物寄 養(yǎng)系統(tǒng)可以包括但不限于飼育場(chǎng)、屠宰前的寄養(yǎng)欄或圏、銅養(yǎng)團(tuán)(包括例如飼 養(yǎng)棚或飼養(yǎng)欄)、寵物動(dòng)物園、開放式或封閉式7jc產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)、其他動(dòng)物飼養(yǎng) 區(qū)等等。術(shù)語"動(dòng)物"或"動(dòng)物們"是指任何會(huì)受病原體影響或攜帶病原體的動(dòng) 物。例如但非意在以任何方式限制，動(dòng)物可以包括用于農(nóng)業(yè)用途的動(dòng)物；非 限制性實(shí)例包括家禽如雞或火雞等；豬；家畜，該術(shù)語包括所有的有蹄類動(dòng) 物如馬、山羊、綿羊和牛類(包括肉牛、乳牛和野牛)等。動(dòng)物還包括馴養(yǎng)動(dòng) 物，例如但不限于家庭寵物如貓、狗等。另一個(gè)動(dòng)物的非限制性實(shí)例包括各 種7jc產(chǎn)養(yǎng)殖物種，如魚和貝殼類。術(shù)語"喧菌體(bacteriophage)"或"噬菌體(phage)，，是本領(lǐng)域中眾所 周知的并JIJ逸常表示感染細(xì)菌的病毒。噬菌體是通過佳月部分或全部的宿主 的生物合成機(jī)制在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)繁殖的寄生病毒，并且可以是裂解性或溶源性 的。本發(fā)明所用的噬菌體可以是任何的噬菌體，對(duì)所要研究的靶病原體有效 的裂解性或溶源性噬菌體。但是，本發(fā)明所用的噬菌體優(yōu)選非溶源性的，這 意味著噬菌M染后所述喧菌體DM不^到宿主的基因組DNA中。特異性 針對(duì)一種或多種靼病原體的噬菌體可以使用本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來分離，例如 Maniatis等人(1982， Molecular cloning: a laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.;該文獻(xiàn)通過引用的方式納 /v^說明書)。如果需要的話，可以使用不同噬菌體的混^來乾向本文所述 的一種或多種病原體。類似地，"噬菌體組件"或"多個(gè)謹(jǐn)菌體組件"可以包括任何的噬菌體組 件，這些噬菌體組件包括但不限于噬菌體尾、噬菌體蛋白或其它在殺死一種或多種乾細(xì)菌和減緩一種或多種靶細(xì)菌生長(zhǎng)或復(fù)制方面有效的組成分子或分 子構(gòu)建體。如果需要的話，嗟菌體菌抹、噬菌體組件或兩者的混^(M為"噬菌 體和/或噬菌體組件")可被用于對(duì)抗單個(gè)細(xì)菌耙標(biāo)或多個(gè)細(xì)菌耙標(biāo)。術(shù)語"靶 病原體"或"靶細(xì)菌，，是指可能導(dǎo)!Uv、動(dòng)物、魚、烏或植物疾病的病原性 細(xì)菌。所述耙細(xì)菌可以是任何類型的細(xì)菌，例如但不限于下列細(xì)菌種類和菌抹；U^桿菌、鏈球菌CSYre;7"cocc2〕、腐質(zhì)霉0Kza /co/a)、沙門氏菌、彎 曲桿菌、李斯特菌(Z/Wer/a)、勞森氏菌(Zaff^o/ /a)、葡萄球菌、巴斯德氏 菌(/^/ewe"a)、分枝桿菌(妳c由"er/咖)、嗜jfe^f菌(化咖;7力///"5)、纏 繞桿菌(^fe/7co6a"er)、分枝桿菌(妙co6a"e77咖)、霉?jié){菌旨co/7/ay邁/)、 奈瑟(氏)菌GVe"eWa)、克雷白(氏)桿菌U7e657'e7/a)、腸道細(xì)菌 Cfi^ero6a"er)、變形菌CPrWeiw)、類桿菌C&c^rcA/es)、假單胞菌 C^e"^/o鵬s)、疏螺^t體菌Cfforre//"5)、檸檬酸細(xì)菌(""o&"er)、丙酸桿 菌(/Yop2》/7o6a"er)、 密螺旋體、志賀氏菌(幼/ge//3)、腸球菌 C^erococcw)、 細(xì)螺旋體(Ze/^卿/re》、包括炭疽桿菌(勘"7to a/^Arac^)的桿菌(勘C27h'力和其它A^動(dòng)物的病原性細(xì)菌。所要研究的細(xì) 菌是已知會(huì)污染動(dòng)物飼料、液體動(dòng)物飼料或動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)的細(xì)菌，其中所述 動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)通常包括但不限于寄養(yǎng)或飼養(yǎng)圏，如飼育場(chǎng)。特別要研究的細(xì) 菌是還會(huì)感染家畜(包括豬和供人消費(fèi)的家禽)的細(xì)菌，例如但不限于沙門氏 菌、彎曲桿菌和大腸桿菌0157: H7或其4^f可組合。在一個(gè)非限制性實(shí)例中， 所述耙病原體可以是^桿菌、葡萄球菌、密螺旋體或其^f可組合。所述喧菌體和/或噬菌體組件可以在^<^生溶液中提供。所ii^M生溶液可以 是4^f可適用于本發(fā)明目的的溶液。例如，所述喧菌體和/或噬菌體組件可以在 水中或在本領(lǐng)域已知的適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中提供，所述培養(yǎng)基例如LB培養(yǎng)基、SM、 TM、 PBS、 TBS或其它常見緩沖液。例如但非意在限制，所述喧菌體可以被儲(chǔ) 存在LB培養(yǎng)基中。所述噬菌體和/或噬菌體組件也可以以固體(dry)形式提供，以與液體動(dòng) 物飼料或動(dòng)物飼料^^。固體形式的噬菌體和/或噬菌體組件的實(shí)例包括但不 限于凍干的噬菌體和/或噬菌體組件、固定在基質(zhì)上的噬菌體和/或噬菌體組 件、按下文所述包封的噬菌體和/或噬菌體組件、按下文所述以膠嚢形式提供 的噬菌體和/或噬菌體組件、按下文所述以片劑形式提供的噬菌體和/或噬菌 體組件，或其組合。"控釋"是指給予所述動(dòng)物的試劑，例如一種或多種噬菌體和/或噬菌體 組件是以一種包括所述一種或多種噬菌體和/或噬菌體組件的各種制劑的組 合物的形式存在的。例如所述一種和/或多種噬菌體和/或噬菌體組件可以以液體或固體形式存在，所述形式包括 一種或多種噬菌體和/或噬菌體組件， 凍干的噬菌體和/或噬菌體組件，固定在基質(zhì)上的噬菌體和/或噬菌體組件， 包封的噬菌體和/或噬菌體組件，以膠嚢形式提供的噬菌體和/或噬菌體組件， 以片劑形式提供的噬菌體和/或噬菌體組件，包封的、膠嚢形式、片劑形式或 其組合形式的噬菌體和/或噬菌體組件，其中所述噬菌體和/或噬菌體組件的 包封的、膠嚢或片劑形式包括在動(dòng)物消化道的不同區(qū)域或動(dòng)物廢物中以不同 速率釋^^斤述嗟菌體和/或噬菌體組件的組^^。所述包封的、膠嚢或片劑形式的組合物可以包括聚合物、蠟、凝膠、吸水化合物、排水化合物、或同時(shí) 含有吸水和排水化合物、脂肪酸、糖、蛋白質(zhì)或合成材料，以可控方式影響 組合物中的試劑的釋放。可以使用包括噬菌體或噬菌體組件的^^種控釋組合 物，使得所述嗟菌體和/或噬菌體組件可以在給予動(dòng)物前、通過所述動(dòng)物消化 道的過程中或離開所述動(dòng)物^被釋放。本發(fā)明的固定的噬菌體組合物表現(xiàn)出所需的儲(chǔ)藏性質(zhì)并且可以與動(dòng)物飼 料混合以幫助減少把細(xì)菌的排放，所述動(dòng)物包括但不P艮于家畜、鳥、家禽、 馴養(yǎng)動(dòng)物、魚和貝殼類。以液體、固定的、包封的、包有膠嚢的、片劑形式 或其組合形式存在的控釋的噬菌體和/或噬菌體組件可根據(jù)需要與作為曰糧 療法的 一部分施加到動(dòng)物銅料中其他的添加劑或補(bǔ)充劑混合或被摻入到顆粒 銅料中。因此可以防止所述嗟菌體和/或噬菌體組件在飼料中沉降?；蛘撸?以增強(qiáng)所述飼料或包封的噬菌體和/或兩者的組合的粘性以提供改進(jìn)的混合 和遞送性質(zhì)。所述控釋的噬菌體和/或噬菌體組件也可以與々jUD7jc混合。此外， 可以使用備選的給藥形式來給予本發(fā)明的所述控釋的噬菌體、噬菌體組件或 兩者的組合，所*藥形式包括但不限于吸入給藥、注射給藥、肌內(nèi)給藥、 皿內(nèi)給藥、鞘內(nèi)給藥、陰*藥、直腸給藥、局部給藥或以上給藥方式的 組合。噬菌體和/或噬菌體組件的凍干可以佳j!H^f可已知的凍干步驟來進(jìn)行，例 如但不限于Clark and Geary (1973， Preservation of bacteriophages by freezing and freeze-drying, Cryobiology, 10， 351-360; Ackermann等人 2004， Long term bacteriophage preservation, World Federation Culture Collections Newsletter, 38， 35 (在jtbit過引用的方式納A4^說明書)中公開的方法。所述噬菌體或噬菌體組件或者兩者的組合也可以以固定在基質(zhì)上的形式 提供。術(shù)語"基質(zhì)"是指^f可適合的可溶于水、可攝取或能夠被動(dòng)物吸收、 或適合與液體動(dòng)物飼料共用的固體基質(zhì)。此外，如果任何所吸收的噬菌體都可以在水性環(huán)境中^^質(zhì)中被釋放出來，那么所ii^質(zhì)可以是非水溶性。所 *質(zhì)應(yīng)該能將所述噬菌體和/或噬菌體組件吸收到其表面上并且在適當(dāng)?shù)?環(huán)境中釋放所述喧菌體和/或噬菌體組件。所述嗟菌體和/或噬菌體組件不應(yīng) 當(dāng)與基質(zhì)過于強(qiáng)烈地粘著以致于在培養(yǎng)基中適當(dāng)重懸時(shí)不能將它們釋放出 來。優(yōu)選地，所述吸收的、固定的噬菌體和/或噬菌體組件與基質(zhì)非共價(jià)地結(jié) 合，使得在需要的時(shí)候可以將它們^^質(zhì)中釋放出來?？捎糜诒景l(fā)明的M 的非限制性實(shí)例包括脫脂奶粉、大豆蛋白粉、白蛋白粉、單細(xì)胞蛋白、海藻 糖、甘露醇或其它粉末狀的糖或糖醇、藥用碳、乳膠孩o求、合成的植物源塑料例如但不限于大豆塑料或玉米塑料、或者其它的惰性表面、7jC溶性碳水化合物M料或其組合。優(yōu)選地，所*質(zhì)通常被認(rèn)為是安全的(GRAS)。如果基質(zhì)的量超it7JC性噬菌體和/或噬菌體組件溶液的量，則可通過4^f可 本領(lǐng)域已知的方法將水性溶液中的所述嗟菌體或噬菌體組件或者兩者的組合 施加到基質(zhì)上，例如滴或噴。優(yōu)選地，所述基質(zhì)處于固體或半固體狀態(tài)且嗟 菌體(和/或噬菌體組件)與M未形成液態(tài)懸浮液。 一旦將噬菌體溶液加到基 質(zhì)中，就可以用積^^設(shè)備混合所述基質(zhì)并且允許其風(fēng)干。也可以使用市售的 流^iilM^干^U將噬菌體固定在固體基質(zhì)上。這些方法中，優(yōu)選將所述 噬菌體溶液噴在基質(zhì)上。所述抗細(xì)菌組合物包括固定的噬菌體或噬菌體組件或兩者的組合，且基 質(zhì)可以在約0'C至50。C或其間的任何溫度下干燥，例如在0、 2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20、 22、 24、 26、 28、 30、 32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48或50。C或者其間的任何溫度下。例如，所述抗細(xì)菌組合物可以在約10燥過程還可通過提供在所述抗細(xì)菌組合物上方或穿it^斤述抗細(xì)菌組合物的氣 ^u^加速?；蛘撸稍镆部梢酝?真空下加熱所述固定的材料來進(jìn)行。干燥一段時(shí)間之后，如杲需要的話可以向基質(zhì)施加額外的水性溶液，并 且再次干燥所g質(zhì)?？筛鶕?jù)需要重復(fù)這一過程以在基質(zhì)上獲得所需量的噬 菌體。使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)能夠容易地確U質(zhì)上噬菌體的效價(jià)。固定的或凍干的噬菌體和/或噬菌體組件也可以在作為飼料添加劑來給予動(dòng)物前被包封起來。術(shù)語"包封"是指給固定的噬菌體或噬菌體組件或者 兩者的組合包被上可以增加噬菌體對(duì)其環(huán)境的物理化學(xué)壓力的抗性的物質(zhì)。 所述固定的噬菌體和/或噬菌體組件可以用任何本領(lǐng)域已知的物質(zhì)通過任何 本領(lǐng)域已知的適合方法來包被，例如但不限于美國(guó)公開文本2003/0109025 (Durand等人，在此通過引用的方式納/^^說明書)中所公開的。 在該方法中，將包被物質(zhì)的微滴注入含有本發(fā)明的一種或多種固定的噬菌體 菌林或噬菌體組件或者兩者的組合的腔室(chamber)中并且快速冷卻?；蛘?， 可以將包被組合物與所述的本發(fā)明的一種或多種固定的噬菌體和/或噬菌體 組件混合，持續(xù)攪拌并且根據(jù)需要進(jìn)行冷卻或干燥。所述包被物質(zhì)可以是任何本領(lǐng)域已知的適合的包被物質(zhì)。例如非意在限 制，所述包被物質(zhì)可以包拾熔化溫度在約20。C至100。C之間的物質(zhì)，例如在 約30。C至80。C之間或其間的^^可溫度；例如，熔化溫度可以是20、 22、 24、 26、 28、 30、 32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48、 50、 52、 54、 56、 58、 60、 62、 64、 66、 68、 70、 72、 74、 76、 78、 80、 82、 84、 86、 88、 90、 92、 94、 96、 98或IOO'C或其間的任何溫度。如果所述包,皮物質(zhì)是^^t才聶入的或 用于口服的，那么優(yōu)選的物質(zhì)是食品級(jí)的物質(zhì)。這類物質(zhì)的非限制性實(shí)例包 括植物脂肪酸；如棕櫚酸和石tl旨酸的脂肪酸，例如St6arine^1 ;動(dòng)物蠟、 植物蠟，例如巴西棕櫚(Carnauba)蠟和蠟^t生物。其它可以加到所述包被物 質(zhì)中的添加劑分子；這類添加劑可以包括抗氧化劑、糖、蛋白質(zhì)或其它合成 材料。也可以使用其它的包被物質(zhì)，例如基于非脂質(zhì)的材料(例如，參見美國(guó)專 利No. 6,723, 358和No. 4， 230， 687,在此通過引用的方式納7^^說明書)，例 如糖或其它7JC溶性的碳水化合物基成分。所述本發(fā)明組合物中的噬菌體或噬 菌體組件或者兩者的組合也可以用其它的非食品級(jí)的物質(zhì)來包被。其它的添 加劑分子可被加到所述包被物質(zhì)中；這類添加劑可以包括抗氧化劑、糖、蛋 白質(zhì)或其它^^成材料。脂質(zhì)基包封的方法某種程度上保護(hù)所述謹(jǐn)菌體、噬菌體組件或兩者的組 合免受其可能要面臨的惡劣環(huán)境的影響，例如液體祠料發(fā)酵M范圍內(nèi)的低 pH環(huán)境或動(dòng)物的消化系統(tǒng)。所選擇的用于包封的脂質(zhì)M料也應(yīng)該具有會(huì)在 所需環(huán)境中崩解以釋放嗟菌體和/或噬菌體組件的性質(zhì)。例如，消化酶可以降 解包封材料并且有助于動(dòng)物腸道內(nèi)噬菌體和/或噬菌體組件的釋放，或者所述 發(fā)酵液體祠料中的酶可以幫助一些噬菌體和/或噬菌體組件從包封中釋放。所以，如果需要的話，可以使用多種用于包封所述嗟菌體和/或噬菌體組件的材 料以使得在發(fā)酵液體祠料中有所選擇的釋放并且在動(dòng)物腸道中釋放，同時(shí)保 護(hù)噬菌體、噬菌體組件或兩者的組合。此外，用基于非脂質(zhì)的材料包封的噬菌體和/或噬菌體組件會(huì)溶于水，立即釋放謹(jǐn)菌體或噬菌體組件；或者稍后與 液體祠料介質(zhì)混合。根據(jù)所選的制劑，或者所述制品是以膠嚢形式還是片劑 形式提供的，噬菌體和/或噬菌體組件也可以時(shí)間控制的方式餘改。所皿嚢 或片劑制劑可有助于液體祠料^^質(zhì)中噬菌體和/或噬菌體組件的定時(shí)釋放。因 此，用不同材料"給或包封的控釋的噬菌體、噬菌體組件或兩者的組合的混 合物可以與動(dòng)物飼料、液體動(dòng)物銅料組合和》'^^，或者以其他方式給予動(dòng)物。 也可以膠嚢形式提供固定的、凍干的和/或包封的噬菌體和/或噬菌體組 件。"膠嚢形式"是指所述固定的、凍干的和/或包封的噬菌體或噬菌體組件或者兩者的組合都是以可溶于^^性環(huán)境的膠嚢提供的，例如皿嚢。所皿 嚢可以用本領(lǐng)域已知的任何適合的物質(zhì)來制備，例如但不限于皿、蟲膠、蠟、合成的或其他化^。也可以片劑形式^:供固定的、凍干的和/或包封的噬菌體和/或噬菌體組 件。"片劑形式"^—指所述固定的、凍干的和/或包封的噬菌體或噬菌體組件 或者兩者的組合都是以可溶于水性環(huán)境的壓縮片劑提供的。所述片劑可以用本領(lǐng)域已知的任何適合的物質(zhì)通it^領(lǐng)域已知的^^r適合的方法來制備。例 如，如本領(lǐng)域技^A員已知的，所迷片劑可以包括津w']和其它片劑生產(chǎn)中 所需組分。片劑可以是即釋片劑，其中所述謹(jǐn)菌體和/或噬菌體組件根據(jù)其溶出度被釋放到液體飼料中；或者可以包括定時(shí)釋放的組合物，其中所述喧菌 體和/或噬菌體組件以時(shí)間 性方式被釋放到水性環(huán)境中，包括液體飼料、 動(dòng)物腸絲兩者的組合。參見W0 02/45695; US 4,601, 894; US 4, 687, 757、 US 4, 680,323、 US 4， 994， 276、 US 3, 538, 214、 US (在o):hit過引用的方式納入 本說明書)中幾個(gè)可被用于幫助水性環(huán)境中噬菌體或噬菌體組件的時(shí)間控制 釋方丈的定時(shí)^^i試劑的實(shí)例。包括嗟菌體和/或噬菌體組件的液體形式、固體形式的本發(fā)明的抗細(xì)菌組液體ii飼料，口并i;助減少所述如;料中細(xì)菌的量，所述噬菌體^/或噬菌體組件是凍干的或吸收到基質(zhì)上的、包封的或者膠嚢或片劑形式，或其組合。 這種液體或固體形式的處理過的飼料可^皮用于飼養(yǎng)^^T家畜包括豬或家禽。 如果控釋的噬菌體和/或噬菌體組件被單獨(dú)用來或與未包封的噬菌體和/或噬菌體組件-~^用來處理飼料，那么除減少所述飼料的細(xì)菌含量外，還可以進(jìn) 一步減少動(dòng)物或動(dòng)物廢物中的細(xì)菌污染。使用控釋的噬菌體、噬菌體組件或 其組合有助于在進(jìn)一步加工動(dòng)物前從所述動(dòng)物體內(nèi)清除腸道中已經(jīng)存在的細(xì)菌。術(shù)語"動(dòng)物飼料"^:指干的或含水量少于25% w/w的動(dòng)物飼料。優(yōu)選地， 所述含水量為約5至20% w/w,或者約10至15% w/w。動(dòng)物詞^?？砂?谷類成分和非谷類成分，所it^l成分可以包括小麥、大麥、大豆、麩皮和 其它谷類，所述非谷類成分可以包括維生素、礦物質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂肪和其它 補(bǔ)充劑。但是，所述動(dòng)物飼料中也可以存在其它組分。動(dòng)物飼料組合物的定 義并非意在以伶f可方式進(jìn)行限制。所述動(dòng)物飼料也可以是液體動(dòng)物飼料。術(shù)語"液體動(dòng)物飼料，，是指7JC和飼料。液體動(dòng)物飼料通常含有谷類成分和非^l成分，所^類成分可以包 括小麥、大麥、大豆、麩皮和其它谷類，所述非谷類成分可以包括維生素、 礦物質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂肪和其它補(bǔ)充劑。有兩種液體飼料未發(fā)酵液體飼^ 發(fā)酵液體飼料。未發(fā)酵液體祠料是在臨喂食前制備的祠料和水的混合物。發(fā) 酵液體飼料是在，動(dòng)物前，在給定的溫度下儲(chǔ)存一段給定的時(shí)間以使其開 始發(fā)酵的飼料和水的混合物。全部的飼料或只有谷類飼料能夠祐發(fā)酵。由飼 料中存在的天然菌叢所引發(fā)的飼料的天然發(fā)酵能夠產(chǎn)生足夠的乳M具有有 益效果?；蛘?，也可以通it^入乳酸菌(LAB)來將其移植到所述液體祠料中(如 美國(guó)專利6， 326，037; 6， 699， 514;和^^開的美國(guó)專利申請(qǐng)2001/0055633所述， 在othit過引用的方式納^^說明書)。本發(fā)明的方法可以偵月伶阿類型的液體 飼料，例如NFLF、 FLF、包括LAB的FLF。此外，所述液體動(dòng)物飼料也可以含 有其它成分。液體動(dòng)物飼料的組合物的定義并非意在以任何方式進(jìn)行P艮制。液體飼料的發(fā)酵可以通過任何本領(lǐng)域已知的方法來實(shí)現(xiàn)。例如，并非意 在以任何方式進(jìn)行限制，所述液體飼料可以通過以約1. 5:1至4:1的比例或 其之間的任何量》'^^(meal)和水來制備，并肚約15。C至30。C的溫度范圍 內(nèi)，在攪拌的密閉罐中務(wù)賭約24小時(shí)至10天或其間的伶f可量。在Canibe和 Jensen ((2003) J. Anim. Sci. ， 81， 2019-2031;在itbit過引用的方式納入 本說明書)所教導(dǎo)的一個(gè)備選的非限制性實(shí)例中，粉(meal)與7條1: 2. 5 ';給 并JL^20。C下，在攪拌的密閉罐中M4天。處理過的動(dòng)物祠料是與有效量的抗細(xì)菌組合物混合的動(dòng)物飼料，所述組合物含有一種或多種噬菌體菌林、 一種或多種噬菌體菌林的一種或多種噬菌 體組件或其組合。所述動(dòng)物飼料可以與固體或液體形式的抗細(xì)菌組合物混合。 所述處理過的動(dòng)物祠料或處理過的液體動(dòng)物祠料包括有效量的抗細(xì)菌組合 物。所述處理過的動(dòng)物銅料可以通過任何本領(lǐng)域已知的方法來制備。例如，抗細(xì)菌組合物可以與固體形式的動(dòng)物飼料(例如但不限于^^末)混合；或者凍 干制品可以與動(dòng)物飼料^^;或者抗細(xì)菌組合物可以被施加到液體形式(例如 噴霧、浸液或滴紀(jì)的動(dòng)物祠料中以產(chǎn)生處理過的動(dòng)物飼料。然后可以干:^^斤 述處理過的動(dòng)物飼料。含有一種或多種噬菌體菌林、 一種或多種噬菌體菌林 的一種或多種噬菌體組件或其組合的抗細(xì)菌組合物的有效量為動(dòng)物祠料干重 的約103 pfu/g至10" pfu/g;例如，動(dòng)物飼料干重的約105 pfu/g至109 pfu/g。 在另一個(gè)實(shí)例中，含有一種或多種噬菌體菌林、 一種或多種噬菌體菌林的一 種或多種噬菌體組件或其組合的量為約動(dòng)物飼料干重的約106 pfu/g至108 pfu/g。當(dāng)使用NFLF時(shí)，在用水混合前或混合后可以向所述祠料中加入嗟菌體和/或 噬菌體組件。當(dāng)^J ] FLF時(shí)，可以在發(fā)酵前、發(fā)酵過程中或發(fā)酵后加入喧菌 體或噬菌體組件。例如，可以在飼料發(fā)酵前加入喧菌體或噬菌體組件或者兩 者的組合。在更M的實(shí)例中，可以在發(fā)酵前加入噔菌體和/或噬菌體組件。 可以使用約l(^pfu/ml至10"pfu/ml或其間的任何量的液體飼料；例如，每 ml液體飼料可以力口入103、 104、 105、 106、 107、 108、 109、 IO1。、 IO11、 1012、 1013 pfu的噬菌體和/或噬菌體組件。在一個(gè)非限制性實(shí)例中，液體動(dòng)物祠料的約 1()5pfu/ml至10、fu/ml。在另一個(gè)實(shí)例中，噬菌體、噬菌體組件或其組合的 量可以是液體動(dòng)物飼料的約106 pfu/ml至108 pfu/ml。由于喧菌^^通常在pH 大于2. 5的環(huán)境中是有活性的，所以噬菌體可以^C^到FLF中(pH通常在約3 至9之間或其間的4^f可值，例如pH大約為5)并仍然具有生物活性。如絲 FLF中觀察到較低的pH值，例如如^將吝'Wf菌引入到液體飼料中，那么噬 菌體、包封的噬菌體或其組合可以被用于處理所述FLF，在加入孝Uf菌之前加 入噬菌體。當(dāng)在發(fā)酵前加入噬菌體或噬菌體組件時(shí)，則可以在用水混合祠料 之前或^加入所述嗟菌體或噬菌體組件。本發(fā)明可被用于任何類型動(dòng)物的動(dòng)物祠料或液體動(dòng)物飼料，包括但不限 于用于農(nóng)業(yè)用途的動(dòng)物。例如但非意在以4封可方式限制，根據(jù)本發(fā)明制備的物，包括但不限于家禽，如雞或火雞等；豬；家畜，如馬、山羊、綿羊、肉 牛、乳牛和野牛等；馴養(yǎng)動(dòng)物，例如包括貓、狗等的家庭寵物；魚和貝殼類； 以及寵物動(dòng)物園或其它動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)中的動(dòng)物。但是，應(yīng)該理解的是所述控 釋的噬菌體、噬菌體組件或兩者的組合都可以通過其他途徑被給予動(dòng)物，所 述途徑根據(jù)需要包括但不限于口腔、浸潤(rùn)、^、注射、肌內(nèi)、 內(nèi)、鞘 內(nèi)、陰道、直腸、局部或其組合。動(dòng)物應(yīng)該接受任何有效減少動(dòng)物體內(nèi)靶病原 量的量的一種或多種控 釋的喧菌體或喧菌體組件。例如，所述控釋的噬菌體可以每天每只動(dòng)物約105 至10" pfu或其間4^f可量的劑量給藥，例如每天每只動(dòng)物約105、 106、 107、 108、 109、 101。、 1011、 10"或10"pfu，持續(xù)所需的一段時(shí)間。例如且并非意在 限制，噬菌體可以每天每只動(dòng)物約109至1013 pfu的治療劑量給藥、或者每天 約103至1011 pfu、或者每天約109至1011 pfu。所述處理時(shí)^:可以是約1至 12天或其間的任何量，例如對(duì)動(dòng)物進(jìn)一步處理前的1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11或12天。或者，可以使用每天約10s至10"pfu或其間任何量的維 持劑量。例如，維持劑量可以是每天約105、 106、 107、 108、 109或101Q pfu, 持續(xù)所需的一段時(shí)間。例如且并非意在P艮制，所需的維持時(shí)段可以是約10至 180天或其間的4^f可天數(shù)；例如，維持時(shí)賴:可以是IO、 15、 20、 25、 30、 35、 40、 45、 50、 55、 60、 65、 70、 75、 80、 85、 90、 95、 100、 105、 110、 115、 120、 125、 130、 135、 140、 145、 150、 155、 160、 165、 170、 175或180天 或其間的^f可天數(shù)。在一個(gè)非限制性實(shí)例中，維持時(shí)段可以是約30至90天 或約30至60天?；蛘?，可以每天約109至1013或其間的任何量的治療劑量來 給予控釋的嗟菌體或樣菌體組件，持續(xù)約1至12天或其間的任何量，例如1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11或12天,然后是約105至1G1。 pfu或其間 的任何量的維持劑量，持續(xù)所需的一段時(shí)間，例如但不限于在對(duì)動(dòng)物進(jìn)一步 處理前的約10至180天、約30至90天、或約30至60天或者其間的任啊量。因此，本發(fā)明^^供了 一種用于減少動(dòng)物體內(nèi) 一種或多種靼病原 量的 方法，包括給予所述動(dòng)物一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌體組件或者兩 者的組合，使得所述一種或多種噬菌體菌林得以在體內(nèi)釋放并吸附所述一種 或多種靶病原體，從而從所述動(dòng)物體內(nèi)減少所述一種或多種病原體。此外， 在所述給藥步驟中， 一種或多種控釋的噬菌體菌抹或噬菌體組件或者兩者的 組合都可以被給予所述動(dòng)物，例如持續(xù)約1至12天、或約5至7天或者其間 的任何天數(shù)，之后所述動(dòng)物可以被送出(例如送去屠宰)。在該實(shí)施例中，由于經(jīng)過了處理期，動(dòng)物體內(nèi)的病原體載量(load)(例如但不限于;U^桿菌0157) 在另外的48-72小時(shí)內(nèi)會(huì)被減少或清除，在此期間所述動(dòng)物會(huì),支奮宰。該方 法確保將要屠宰的動(dòng)物含有減少的病原體載量(load)且較清潔的動(dòng)物將^^E 力p工廠中被加工。本發(fā)明還提供了 一種用于減少動(dòng)物體內(nèi) 一種或多種耙病原體數(shù)量的方 法，包括以每天每只動(dòng)物約105至1013 pfu的劑量給予所迷動(dòng)物一種或多種控 釋的噬菌體菌抹或噬菌體組件或者兩者的組合，持續(xù)一段所需的時(shí)間，使得 所述一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌體組件得以在體內(nèi)釋放并從所述動(dòng) 物體內(nèi)清除所述一種或多種病原體。通過使用如上所述的治療療法、維持療法或這兩種療法的組合^予動(dòng) 物控釋的噬菌體或噬菌體組件，通常動(dòng)物體內(nèi)、動(dòng)物廢物中和寄養(yǎng)或飼養(yǎng)圏 (如祠育場(chǎng))中靶細(xì)菌菌群的量會(huì)下降。使用本發(fā)明的方法可以減少靼病原體， 從而增加給人消耗的食品供應(yīng)的安全性。因此，本發(fā)明還提供了一種用于減少存在于動(dòng)物寄養(yǎng)系統(tǒng)中(例如但不限 于寄養(yǎng)圏如詞育場(chǎng)、祠養(yǎng)圏如棚或欄、寵物動(dòng)物園等)的一種或多種耙病原體 數(shù)量的方法。所述方法包括給予動(dòng)物飼料、々欠用水、動(dòng)物或其組—種或多 種控釋的噬菌體菌林或能夠吸附并殺死所述乾病原體的噬菌體組件，使得所 述一種或多種控釋的噬菌體菌抹或噬菌體組件或者兩者的組合得以在所述飼 料、飲用水、動(dòng)物消化道、動(dòng)物廢物或其組合中釋放，并減少所述動(dòng)物寄養(yǎng) 系統(tǒng)中所述一種或多種耙病原體的教:量。本發(fā)明還提供了一種用于減少動(dòng)物體內(nèi)的病原體的治療方案，所述病原 體例如但不限于大腸桿菌、沙門氏菌、彎曲桿菌和葡萄球菌。并非意在限制， 要被運(yùn)輸或被屠宰的動(dòng)物可以在要被運(yùn)輸?shù)?-7天前用一種或多種控釋的噬 菌體菌林或噬菌體組件或者兩者的組合來處理。當(dāng)^f吏用這一方法時(shí)，到治療的笫3-5天時(shí)所述動(dòng)物的病原體水平將會(huì)降低到低水平，因此使得從治療的 大約笫4 M，動(dòng)物可以被安全運(yùn)輸。這提供了一個(gè)"安4^#加工"的 區(qū)間，在此期間來自于所述寄養(yǎng)系統(tǒng)(例如但不限于寄養(yǎng)或飼養(yǎng)圏，如飼育場(chǎng))的動(dòng)物可以,皮安全;^ir^加工。此外，本發(fā)明提供了一種或多種控釋的噬菌體、噬菌體組件或兩者的組 合在用于遞送到動(dòng)物糞便中以預(yù)防細(xì)菌感染通過所述糞便傳播中的用途。所 述一種或多種噬菌體和/或噬菌體組件可以是以未包封的形式直接被遞送到 所述糞便(離體)中或者可以以包封的或控釋形式給予所述動(dòng)物以通過動(dòng)物腸道被遞送到所述糞便。在糞便中存在的抗靶病原體的噬菌體有助于預(yù)防由各種病原體引起的細(xì)菌感染的傳播。除減少大腸桿菌0157: H7傳播"卜，噬菌體也能減少M(fèi)色 葡萄球菌的計(jì)數(shù)， 桿菌0157: H7會(huì)在人類中導(dǎo)致嚴(yán)重的*問題， 色葡萄球菌會(huì)感染牛類的乳頭和乳房并導(dǎo)致乳腺炎。此外，當(dāng)動(dòng)物在欄中走 動(dòng)時(shí)通*浴的方式可以治療導(dǎo)致蹄病的密螺旋體感染。 本發(fā)明將在下述實(shí)施例中被進(jìn)一步說明。實(shí)施例實(shí)施例l:嗟菌體的分離、擴(kuò)增和滴定噬菌體分離自^拿大的乳牛和肉牛農(nóng)場(chǎng)獲得的糞便樣品。使糞便樣品 與;^桿菌0157: H7反應(yīng)并置于瓊脂平板上。分離任何獲得的噬菌體斑并按 標(biāo)準(zhǔn)的喧菌體純化方案(Maniatis等人(1981) Molecular cloning: a laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y.)進(jìn)行純化。大腸桿菌0157: H7的分離菌林來擴(kuò)增按上述方法分離純化的噬菌體。 將純化的噬菌體與細(xì)菌混合在"^，在室溫下放置IO分鐘并按本領(lǐng)域常用的 標(biāo)準(zhǔn)方案(Maniatis等人(198" Molecular cloning: a laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y.)進(jìn)行擴(kuò)增。 過濾滅菌并使用LB培養(yǎng)基中的擴(kuò)增樣品。噬菌體溶液的濃度使用標(biāo)準(zhǔn)的噬菌體滴定方案(Maniatis等人(198D Molecular cloning: a laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y.)來確定。用LB稀釋含有喧菌體的制品，混合并 與大腸桿菌0157: H7孵育10分鐘，置于瓊脂平板上。根據(jù)在不同稀釋度下獲 得的菌斑數(shù)量并乘以適當(dāng)?shù)南♂屜礗M^確定謹(jǐn)菌體的濃度。實(shí)施例2:噬菌體的固定按實(shí)施例1所述制備的大腸桿菌0157: H7特異性喧菌體PIO和R4被固定 在兩種不同的基質(zhì)上奶粉(不含脂肪)和大豆蛋白。奶粉(Carnation)和大豆 蛋白(Supro)為^食品商店的現(xiàn)貨。兩種材^H吏用相同的方案。將50 g的粉末(奶粉或U蛋白)縣玻璃盤中。將溶液中的噬菌體均勻 地噴到每種粉末^i^上。對(duì)奶^f^I不同效價(jià)的噬菌體，范圍從l(fpfu/g至109 pfu/g，每種都產(chǎn)生類似的結(jié)果。將噬菌*;^并在37"C下干燥2小 時(shí)，或者直至完全干燥。將所得的噬菌體組合物研磨成細(xì)粉，顆粒大小在 50-600拜且平均顆粒大小為200 jim。將0. 5 g的每種粉末狀噬菌體組絲 重懸于10 ml反滲透(RO)水中并測(cè)試噬菌體的回收率。將不含嗟菌體的奶粉 或粉末狀大豆蛋白用作對(duì)照。使用固體奶粉作為基質(zhì)制備的噬菌體組合物的 結(jié)絲圖1中出示。使用U蛋白作為M制備的噬菌體組^的結(jié)^^圖2 中出示。對(duì)于固定在奶粉上的噬菌體，結(jié)g明噬菌體可以從所述喧菌體組合物中被回4liUM見察到活性喪失。圖i表明固^獲得的噬菌體效價(jià)("后")類似于加入到粉末中的噬菌體的量("前")。對(duì)于包括大豆蛋白的噬菌體組合物觀察到了類似的結(jié)果(圖2;"后"固定的噬菌體；"前，，加到基質(zhì)中的噬 菌體的量)。這些結(jié)果也表明當(dāng)引入到水性培養(yǎng)基中時(shí)，固定的噬菌體可以容易g 基質(zhì)中釋;改出來。圖1和2中示出的結(jié)果是關(guān)于4十對(duì);tM桿菌的喧菌體的， 對(duì)于針對(duì)沙門氏菌和彎曲桿菌的噬菌M到了同樣的結(jié)果。實(shí)施例3:喧菌體組合物的包封噬菌體組合物是按實(shí)施例2所述來制備的，且包封一般是按流水號(hào)為 2003/0109025的美國(guó)專利(在jthit過引用的方式納7v^說明書)所述進(jìn)行的， 同時(shí)進(jìn)行了一些修改以員噬菌體活性。簡(jiǎn)言之，400 g的固定噬菌體 和1.2 kg的植物脂肪酸進(jìn)行包封。包封的噬菌體制品所能達(dá)到的最大溫度為 39°C。也可以佳J^標(biāo)準(zhǔn)方法來將噬菌體組合物制備為片劑，所述方法例如WO 02/45695; US 4， 601， 894; US 4， 687， 757， US 4， 680， 323， US 4, 994,276， US 3， 538， 214中所述，其中所述藥物制劑被按實(shí)施例2制備的固定喧菌體所代替。一旦所述包被操作完成，則收集包封的固定噬菌體顆粒并存儲(chǔ)于密封容 器中。平均顆粒大小在100至1000 ，之間。包括喧菌體的片劑^賭于密 閉容器中。通過確定固定噬菌體制品在包封前("前"，圖3)后("后"，圖3)的活性 來確定包封對(duì)于固定在奶粉上的噬菌體組合物的效價(jià)的作用。為進(jìn)行這一分 析，將包封的噬菌體重懸并用搗碎器研磨。將重懸的包封噬菌體混合以破裂 包封的顆粒并釋放所述謹(jǐn)菌體。將0.5 g包封的固定噬菌體與45.5 ml重懸 介質(zhì)(LB培養(yǎng)基或RO水)〉m^，并加入250 jtl消泡劑以防止在^f磨時(shí)起泡。這一分析的結(jié)禮在圖3中示出。使用片劑化的嗟菌體得到了類似的結(jié)果。這些結(jié)果證明可以將噬菌體從包封的或片劑化的噬菌體組合物中回收， 且包封或片劑化不^^吏固定的噬菌體失活。圖3中示出的結(jié)果是關(guān)于針對(duì)大 腸桿菌的噬菌體的；對(duì)于針對(duì)沙門氏菌和彎曲桿菌的噬菌體得到了類似的結(jié) 果。實(shí)施例4:包封噬菌體的穩(wěn)定性^#^文按實(shí)施例3所述將固定、包封并片劑化。按下述方式測(cè)試當(dāng)物理或化學(xué) 破裂時(shí)包封的固定噬菌體的釋放將0. 5 g包封的固定喧菌體與45. 5 ml重 懸介質(zhì)(LB培養(yǎng)基或RO水U^。加入250 jil消泡劑以防止在研磨時(shí)起泡。 如上所述制備包封的固定噬菌體的對(duì)照樣品，但不進(jìn)行研磨，以確定重懸培 養(yǎng)基中包封噬菌體的非特異性浸取(leaching)。以類似的方式處理片劑化的 噬菌體。還檢測(cè)了低pH下包封的噬菌體的穩(wěn)定性。重懸后(如上所必，將所述包 封的固定噬菌體在pH 2.15下孵育30或60分鐘，用NaOH中和到pH 7. 0，然 后用搗碎器研磨；將另一個(gè)樣品(對(duì)照)重懸并立即研磨。在4W前用0.45拜 的針筒濾器將對(duì)照和測(cè)試樣品過濾滅菌。以類似的方式處理片劑化的噬菌體。圖4A示出了這些分析的結(jié)杲。數(shù)據(jù)表明重懸包封的固定噬菌體會(huì)產(chǎn)生約 1 x 107 pfu/g的嗟菌體濃度。類似地，在pH 2.15下單獨(dú)孵育所述喧菌體不 ^^嗟菌體的顯著#^文(30分鐘后噬菌體濃度約為1 x 106 pfu/g，或60分 鐘后噬菌體濃度約為3xl07 pfu/g)。但是，研磨并iicH所述包封噬菌體顆粒 后，釋放的噬菌體的量與固定時(shí)加載到奶粉上的量(約5xl09 pfu/g)大致相 同。但是，在pH 2.15下賻育未包封和未固定噬菌體30和60分鐘會(huì)導(dǎo)致噬 菌體的感染性M上完全喪失(圖4B)。使用片劑化的噬菌體得到了類似的結(jié) 果。這些結(jié)果證明破裂包封噬菌體顆粒后噬菌體可以被釋放出來。此外，這 些結(jié)g明包封噬菌體可以被長(zhǎng)時(shí)間暴露于2.15的pH下而沒有或幾乎沒有 活性(效價(jià))喪失。未包封和未固定的噬菌體的結(jié)果與Jepson和March(2004， Vaccine, 22: 2413-2419)的結(jié)果一致，其中在低于2. 2的pH下僅經(jīng)過5分鐘 后就觀察到了噬菌體生存能力的劇烈P爭(zhēng)低。本發(fā)明的包封排除了這種活性缺 失。^^片劑化的噬菌^到了類似的結(jié)杲。圖4A中示出的結(jié)果是關(guān)于針對(duì);^桿菌的噬菌體的；對(duì)于針對(duì)沙門氏菌 和彎曲桿菌的噬菌體得到了類似的結(jié)果。實(shí)施例5:固定噬菌體的穩(wěn)定性將噬菌體固定于基質(zhì)上，在該實(shí)施例中奶斜o實(shí)施例2所M所述材料 務(wù)賭于室溫(RT)或4。C(4C)下的密封容器中。在10個(gè)月中，在不同時(shí)間點(diǎn)取 樣并且確定噬菌體效價(jià)。初始時(shí)噬菌體濃度為3xl06 pfu/g。圖5表明所述固定噬菌體(噬菌體組合物)在室溫或4'C下穩(wěn)定了至少131 天(4.5個(gè)月)，JL^4。C下穩(wěn)定了至少311天(10個(gè)月)。加入干燥劑或?qū)⑹删?旨賭于干燥環(huán)境中可以進(jìn)一步增加噬菌體組合物的生存能力。實(shí)施例6:用包封噬菌體處理被大腸桿菌0157: H7天然污染的牛類在該劑量范圍研究中，所有階段均使用從拍賣市場(chǎng)得到的外來雜交品種 的飼育場(chǎng)小牛。研究動(dòng)物的單個(gè)動(dòng)物重量在200 kg和250 kg之間(441 lbs 和551 lbs)。在第4天，從每只動(dòng)物取50至100 g排泄物樣品并且鑒定了 40個(gè)動(dòng)物 桿菌0157: H7陽性培^^以在^f究中^J^ 。使用計(jì)算機(jī)生成的隨機(jī)分配到三個(gè)實(shí)驗(yàn)組之一的表M選定用于本研究 的動(dòng)物分為不同的組 一個(gè)對(duì)照組或噬菌體處理組(10" pfu/動(dòng)物/A)。每組 中有20只動(dòng)物，每個(gè)欄住10只動(dòng)物。所述飼料被配制成滿足或超出銅育場(chǎng)動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需求，并且在所述研究 前進(jìn)行了測(cè)試以確保它不含; 桿菌0157: H7和;U^桿菌0157: H7噬菌體。 在整個(gè)祠養(yǎng)期間允許所述動(dòng)物隨意地消耗飼#水。對(duì)于對(duì)照組中的動(dòng)物，絲只動(dòng)物IO g對(duì)照包封材料(不含嗟菌體)分別 將其充分混合到它們的日配給中。將所述包封材料加入到飼料中，持續(xù)5天。對(duì)于噬菌體處理組中的動(dòng)物，使用了 3種固定(參見實(shí)施例2 )和包封(參 見實(shí)施例3)的謹(jǐn)菌體';a^物。M只動(dòng)物10 g包封噬菌體制品(等價(jià)于10" pfu/動(dòng)物/幻以適當(dāng)劑量與日配^^)料充分^^， 4吏得所述逸菌體在24小時(shí) 內(nèi)被遞i!U'J動(dòng)物體內(nèi)。將所述包封材料加入到飼料中，持續(xù)5天。將所述動(dòng)物iiLA封閉的1級(jí)研究室中。在該研究的第O、 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9和10天收集雙份的50至 100g排泄物樣品。 一份樣品用于確定噬菌體計(jì)數(shù)，另一份用于確定 桿菌 0157: H7排放和總^M菌計(jì)數(shù)。對(duì)于每只動(dòng)物均^^]新的觸診套筒來收集排泄物樣品，然后將其轉(zhuǎn)移到適合的容器中并扭輸前儲(chǔ)存在4x:下。除血液外，在處死時(shí)從下述特定組織中取樣10至20g:肝臟、脾臟、腎、 三頭肌、半JWl^p膈。用適當(dāng)?shù)拿枋龊头治鼋y(tǒng)計(jì)學(xué)方法來比較實(shí)iHa之間的;U^桿菌0157: H7 排放、總大腸桿菌和大腸菌排泄物計(jì)數(shù)和總噬菌體計(jì)數(shù)，由于所述測(cè)量f^ 了對(duì)每只動(dòng)物的重復(fù)測(cè)量，所以要進(jìn)行檢驗(yàn)。天然攜帶所述病原體的牛類中大腸桿菌0157: H7計(jì)數(shù)的減少與對(duì)照M^目比，用第2至4天給予的噬菌體處理測(cè)試組的牛類^it成大 腸桿菌0157:H7排放的顯著下降(參見圖6)。與噬菌體處理組相比，對(duì)照組中 細(xì)菌載量(load)—直較高。與喧菌體處理組相比，即佳是在治療的"一天， 對(duì)照組中細(xì)菌排放仍然較高，表明欄中較高病原體載量(load)導(dǎo)致了再污染。除雄桿菌0157: H7排放7JC平外，與對(duì)照M^目比，噬菌體處^&中每個(gè) 治療期(第1-6天)和治療后期(第7-10 A)中的動(dòng)物排放總量較低(參見圖7)。 這證明了包封噬菌體在降低農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物病原體載量(load)方面以及在減少攜帶 病原體的動(dòng)物的it量方面的作用。在使用109 pfu/動(dòng)物/天和1011 pfu/動(dòng)物/天的噬菌體劑量的研究中得到 了類似的結(jié)果。^桿菌0157: H7噬菌>{^^動(dòng)物身上的排放在整個(gè)研究過程中一直5M宗上述治療方案中^J^的三種噬菌體的排放。 在給藥后觀察到噬菌體處S^且中;U^桿菌0157: H7特異性排放數(shù)量的增 加，在第1天ii^高數(shù)值并JL^接下來的4 ^E持續(xù)處在該數(shù)值(參見圖8)。 到第6天時(shí)，噬菌>^#放水平達(dá)到100 pfu/g以下，這'^處于在許多飼育 場(chǎng)動(dòng)物中觀察到的噬菌糾，放的本底水平內(nèi)。該數(shù)據(jù)表明給予牛類的噬菌體被有效的遞送到腸內(nèi)，經(jīng)受了皺胃的M 并且在整個(gè)噬菌體給藥期間維持在所需的水平。但是，在最后一次噬菌體劑 量后，噬菌體在大約l-2天內(nèi)就被從系統(tǒng)中清除了，表明由于非特異性結(jié)合 使得動(dòng)物體內(nèi)沒有噬菌體存留。在篩選飼育場(chǎng)動(dòng)物的過程中，觀察到許多動(dòng) 物體內(nèi)有低7]c平的天然噬菌體，因》Me治療結(jié)束時(shí)可以不必使喧菌體計(jì)l^t于本底xK平之下。噬菌體的RFLP分析用RFLP分析研究過程中回收的所有噬菌體以確定從，寇菌體處理過的動(dòng)物 身上分離的噬菌體是否與那些用于該治療的虔菌體相同。從嗟菌斑中純化噬 菌體DM并用于分析。用分離好的噬菌^ii行擴(kuò)增并^^解產(chǎn)物中分離出DNA。從分離自排泄物樣品的噬菌體DM獲得的RFLP模式i兌明用于治療的4^ 三種噬菌體在通過鈹胃后存活了下來并到達(dá)了小腸。單個(gè)噬菌體的RFLP模式 W明通過牛類的GI道后所給予的噬菌體在基因組水平?jīng)]有變化。圖9中顯 示了使用三種不同的酶的對(duì)所給予的噬菌體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)得到的一種4^性RFLP 模式。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步表明這些噬菌體可用作有效的抗感染試劑。 噬菌體的組織吸收在研究結(jié)束時(shí)(第10天)處死動(dòng)物并且在尸檢時(shí)收集組織。收集下述組織 肝臟、脾臟、腎臟、三頭肌、半肌^t和膈。將組織樣品勻漿并進(jìn)行喧菌體測(cè) 試。在所分析的組織和血液中均未檢測(cè)到噬菌體。在使用109 pfu/動(dòng)物/天和1011 pfu/動(dòng)物/天的噬菌體劑量的研究中得到 了類似的結(jié)果。治療方案建議的用于在屠宰前減少牛類中;^桿菌0157: H7的治療方案如下在 運(yùn)輸前一周用噬菌體混合物處理所有將要屠宰的動(dòng)物。當(dāng)佳月這種方法時(shí)，到治療的第3-5天，所有動(dòng)物的病原體7&平##^被降低到極低的7片平(如本研究中所見，接近于或低于檢測(cè)水平)，因此使得從治療的第4 M,動(dòng)物可 以被安全運(yùn)輸。這提供了一個(gè)一周的"安全運(yùn)輸和加工"的區(qū)間，在此期間來自于飼育場(chǎng)的動(dòng)物可以被安全i^^r^加工(參見圖10)。這#了農(nóng)夫一個(gè)&輸期前后± 3天的區(qū)間。所有引文通過引用的方式納7v^"i兌明書。已經(jīng)參照一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案描述了本發(fā)明。但是，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員 來說顯而易見的是，可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種修改和變動(dòng)而不背離權(quán)利要求書所 限定的本^發(fā)明的范圍。
權(quán)利要求
1.一種用于減少動(dòng)物體內(nèi)靶病原體數(shù)量的方法，包括給予所述動(dòng)物一種或多種控釋的噬菌體菌株或噬菌體組件或者兩者的組合，使得所述一種或多種噬菌體菌株得以在體內(nèi)釋放并吸附所述一種或多種靶病原體，從而從所述動(dòng)物體內(nèi)減少所述一種或多種病原體。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種控釋的噬菌體菌抹或噬菌體組 件或者兩者的組^^都以每只動(dòng)物約105至1013 pfu的治療劑量給予約1至 12天。
3. 權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌體組 件以每天每只動(dòng)物約105至101。 pfu的維持劑量給予。
4. 權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌體組 件或者兩者的組合都以每天每只動(dòng)物約105至1013 pfu的治療劑量給予約 1至12天，之后再以約105至101。 pfu的維持劑量給予。
5. 權(quán)利要求l的方法，其中所*藥步驟包括口月峰藥、pA/v給藥、注射 給藥、肌內(nèi)給藥、 內(nèi)給藥、鞘內(nèi)給藥、直腸給藥、局部給藥或上述 給藥方式的組合。
6. 權(quán)利要求5的方法，其中所述口服給藥包括在動(dòng)物飼料、^U^7K或者兩 者的組合中提供所述一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌體組件或者兩 者的組合。
7. 權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌體組 件或者兩者的組合都是被固定在M上、被凍干、被固定在基質(zhì)上并被 包封、被凍干并被包封、以膠嚢形式提供、以片劑形式提供或以上述形 式的組^^形式^^供。
8. 權(quán)利要求7的方法，其中所ii^選自脫脂奶粉、U蛋白、白蛋白粉、 單細(xì)胞蛋白、海藻糖、甘露醇、糖、糖醇、其他基于7jc溶性碳水化合物 的材料、合成的植物源塑料，以及它們的細(xì)L合。
9. 權(quán)利要求8的方法，其中所述一種或多種控釋的噬菌體菌抹、噬菌體組 件或兩者的組合都A^選自植物脂肪酸、脂肪酸、石^l旨酸、棕櫚酸、動(dòng) 物蠟、植物蠟、巴西棕櫚#蠟衍生物的材料來包封的。
10. 權(quán)利要求8的方法，其中所述一種或多種控釋的噬菌體菌林、噬菌體組 件或兩者的組合都是用選自糖和基于可溶性非脂質(zhì)的材料的材料來包封的。
11. 權(quán)利要求1的方法，其中所述謹(jǐn)菌體組件選自噬菌體尾、嗟菌體蛋白以 及它們的纟且合。
12. —種用于減少存在于寄養(yǎng)系統(tǒng)中的靶病原 量的方法，包括給予動(dòng)物 飼料、飲用水、動(dòng)物或它們的組—種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌 體組件，使得所述一種或多種控釋的噬菌體菌抹或噬菌體組件得以在所 述飼料、飲用水、動(dòng)物消化道、糞便或它們的組合中釋放，吸附并殺死 所述耙病原體，從而減少所述寄養(yǎng)系統(tǒng)中所述一種或多種病原體的數(shù)量。
13. 權(quán)利要求12的方法，其中所述一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌體組 件或者兩者的組合都以每只動(dòng)物約105至1013 pfu的治療劑量給予約1至 12天。
14. 權(quán)利要求12的方法，其中所述一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌體組 件是以每天每只動(dòng)物約105至101。 pfu的維持劑量給予的。
15. 權(quán)利要求12的方法，其中所述一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌體組 件或者兩者的組合都以每天每只動(dòng)物約105至1013 pfu的治療劑量給予約 1至12天，之后再以約105至101。 pfu的維持劑量給予。
16. 權(quán)利要求12的方法，其中所粉藥步驟包括口月峰藥、PiL7v給藥、注射 給藥、肌內(nèi)給藥、 內(nèi)給藥、鞘內(nèi)給藥、直腸給藥、局部給藥或上述 給藥方式的組合。
17. 權(quán)利要求16的方法，其中所述口服給藥包括在動(dòng)物飼料、^^bjc或者兩 者的組合中提供所述一種或多種控釋的噬菌體菌林或噬菌體組件或者兩 者的組合。
18. 權(quán)利要求12的方法，其中所述一種或多種控釋的噬菌體菌林、噬菌體組 件或兩者的組合都是被固定在M上、被凍干、被固定在基質(zhì)上并被包 封、；故凍干并^皮包封、以膠嚢形式l^供、以片劑形式^^或以上述形式 的組合形式提供。
19. 權(quán)利要求18的方法，其中所ii^t選自脫脂奶粉、U蛋白、白蛋白粉、單細(xì)胞蛋白、海藻糖、甘露醇、糖、糖醇、其他基于水溶性碳水化合物 的材料、合成的植物源塑料，以及它們的組合。
20. 權(quán)利要求19的方法，其中所述一種或多種控釋的噬菌體菌林、噬菌體組 件或兩者的組合都^選自植物脂肪酸、脂肪酸、石B旨酸、棕櫚酸、動(dòng) 物蠟、植物蠟、巴西棕櫚*蠟衍生物的材料來包封的。
21. 權(quán)利要求19的方法，其中所述一種或多種控釋的噬菌體菌林、噬菌體組 件或兩者的組合都^！選自糖和基于可溶性非脂質(zhì)的材料的材料來包封 的。
22. 權(quán)利要求12的方法，其中所述嗟菌體組件選自噬菌體尾、噬菌體分子、 分子構(gòu)建體或噬菌體蛋白以及它們的組合。
23. 權(quán)利要求1的方法，其中在所#藥步驟中，所述一種或多種控釋的噬 菌體菌林或噬菌體組件或者兩者的組合^N皮持續(xù)給予至所述動(dòng)物5-7天 的時(shí)間。
24. 權(quán)利要求23的方法，其中在給藥步驟后，所述動(dòng)物被屠宰。
25. —種用于預(yù)防由一種或多種靶病原體導(dǎo)致的動(dòng)物體內(nèi)感染的傳播的方法， 所述方法包括給予所述動(dòng)物一種或多種噬菌體菌林、噬菌體組件或兩者 的組合，使得所述一種或多種噬菌體菌林、噬菌體組件或兩者的組合得 以在所述動(dòng)物的消化道內(nèi)釋放，吸附并殺死所述耙病原體，從而減少動(dòng) 物廢物中所述一種或多種病原體的數(shù)量。
26. 權(quán)利要求25的方法，其中所述耙病原體為大腸桿菌0157:H7、金黃色葡 萄球菌、密螺旋體或其他胃腸道中攜帶的病原體或者它們的組合。
27. 權(quán)利要求25或26的方法，其中所述一種或多種噬菌體菌林、噬菌體組 件或兩者的組合都是以控釋的噬菌體菌抹、噬菌體組件或兩者的組合的 形式l^供的。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于減少動(dòng)物體內(nèi)或飼育場(chǎng)中的靶病原體數(shù)量的方法。所述方法包括給予所述動(dòng)物一種或多種控釋的噬菌體菌株或噬菌體組件或者兩者的組合，使得所述一種或多種噬菌體菌株得以在體內(nèi)釋放并吸附所述一種或多種靶病原體，從而從所述動(dòng)物體內(nèi)減少所述一種或多種病原體。所述控釋的噬菌體菌株或噬菌體組件可以在進(jìn)一步動(dòng)物處理前以治療劑量給藥接著以維持劑量的形式給藥，或者以一直維持劑量的形式給藥，以控制飼育場(chǎng)中的靶病原體。
文檔編號(hào)A61K35/76GK101237876SQ200680026594
公開日2008年8月6日 申請(qǐng)日期2006年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月26日
發(fā)明者K·莫西, R·恩格爾哈特 申請(qǐng)人:甘戈金生命科學(xué)有限公司