專利名稱：一種中藥組合物及其制備方法和醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種中藥組合物及其制備方法和醫(yī)藥用途。

背景技術(shù)：
神經(jīng)損傷主要包括腦神經(jīng)損傷、脊髓神經(jīng)損傷和周圍神經(jīng)損傷等。
腦神經(jīng)損傷包括腦外傷、腦血管硬化(腦溢血、腦血栓)后遺癥、腦炎與腦膜炎后遺癥、脫髓鞘疾病等腦血管病后遺癥。
腦血管病是一種世界范圍的常見病，在我國(guó)以缺血性腦血管病為主，具有發(fā)病率高、病死率高、致殘率高等特點(diǎn)，一旦發(fā)病，將給患者和家庭帶來巨大的精神痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的結(jié)果，不論任何原因引起的缺血性腦血管病，其本質(zhì)就是因?yàn)閯?dòng)脈供血減少或中止而引起局部腦組織缺血或梗死，從而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死，臨床表現(xiàn)為各種神經(jīng)功能缺損的癥狀和體征。
缺血性腦血管病如果沒有得到及時(shí)的救治，神經(jīng)損傷將產(chǎn)生后遺癥，具體表現(xiàn)為智力減退、記憶力下降、注意力集中障礙、情緒變化等多種障礙，所以神經(jīng)保護(hù)在缺血性腦血管病的治療中具有舉足輕重的重要性，在腦缺血過程中保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受變性、壞死，對(duì)患者后期的預(yù)后具有重要的意義。
直接或間接暴力作用于脊柱和脊髓均可造成脊髓損傷。脊髓損傷后立即出現(xiàn)損傷平面以下的感覺、運(yùn)動(dòng)、反射、括約肌及植物神經(jīng)系統(tǒng)的完全的或不完全的功能障礙。脊髓損傷分高位損傷與底位損傷、胸部以上合并痙攣稱高位截癱、屬上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損害。常見頸胸端損傷，臨床表現(xiàn)為損傷平面以下的運(yùn)動(dòng)功能喪失、二便失禁、上肢肌肉萎縮、頸髓傷由于膈肌麻痹常伴呼吸困吸、咳嗽無力、血壓不穩(wěn)等、四肢呈痙攣性癱瘓。
周圍神經(jīng)損傷是指周圍運(yùn)動(dòng)、感覺和植物神經(jīng)的結(jié)構(gòu)和功能障礙，臨床上相當(dāng)多見。周圍神經(jīng)損傷后，臨床上主要表現(xiàn)為不同程度的運(yùn)動(dòng)、感覺障礙，同時(shí)可有肢體營(yíng)養(yǎng)障礙、反射障礙和植物神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等表現(xiàn)。
隨著對(duì)缺血性腦血管病、脊髓損傷、周圍神經(jīng)損傷等病理過程的逐步認(rèn)識(shí)，神經(jīng)保護(hù)劑得到了越來越多的研究開發(fā)和臨床應(yīng)用。
目前研究較多的神經(jīng)保護(hù)劑主要有Ca2+通道阻滯劑、興奮性氨基酸受體抑制劑、白由基清除劑、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞的藥物、具有穩(wěn)定細(xì)胞膜作用的藥物、雌激素、與炎癥相關(guān)的細(xì)胞保護(hù)劑、一氧化氮合酶(NOS)抑制劑、GABA受體激動(dòng)劑、抑制神經(jīng)凋亡的藥物等。
但在實(shí)際臨床中，神經(jīng)損傷常涉及多種病理過程，單用上述的任何一種神經(jīng)保護(hù)劑其臨床療效均不太理想，組合使用又缺乏相關(guān)的基礎(chǔ)和臨床研究，所以神經(jīng)保護(hù)劑的研究和臨床使用同樣亟需思路或使用方法上的突破。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一種新的中藥組合物，采用傳統(tǒng)中藥組合配方，具有神經(jīng)保護(hù)作用，以及促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)等作用。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種上述中藥組合物的制備方法。
本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供上述中藥組合物的醫(yī)藥用途。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是 一種中藥組合物，它主要由下述重量份配比的原料藥制成 人參或人參莖葉1-15份，燈盞細(xì)辛5-30份。
其原料藥配比可優(yōu)選如下 人參或人參莖葉1-10份，燈盞細(xì)辛10-25份。
其原料藥配比可進(jìn)一步優(yōu)選如下 人參或人參莖葉2-5份， 燈盞細(xì)辛15-20份。
上述中藥組合物可以制成藥劑學(xué)上可能的任意一種口服或非口服劑型的制劑；根據(jù)不同劑型的需要，可含有適當(dāng)?shù)乃幱幂o料。
上述中藥組合物，可通過常用的藥物提取方法將人參或人參莖葉和燈盞細(xì)辛分別提取或合并在一起提取，再制成各種劑型的制劑；也可通過包括下述主要步驟的方法制備 (1)、提取人參或人參莖葉主要包括水提、醇沉、過大孔樹脂柱、丙酮沉淀等步驟，具體方法如下 ①水提取所述重量份的人參或人參莖葉，加水提取，將水提液濃縮； ②醇沉在上述①濃縮后的水提液中加入乙醇使乙醇濃度達(dá)到60-85％，靜置，濾過，將濾液回收乙醇，再濾過； ③過大孔樹脂柱將上述②處理后的藥液通過中/低極性大孔吸附樹脂柱，先用水和/或低于20％的乙醇洗脫至洗脫液呈近無色，棄去水和/或低于20％的乙醇洗脫液；再用50-95％乙醇洗脫，收集50-95％乙醇洗脫液； ④丙酮沉淀將上述③收集的50-95％乙醇洗脫液回收乙醇，濃縮，加入丙酮1-3倍，攪拌，靜置，濾過，將濾渣干燥，得人參或人參莖葉提取物； (2)提取燈盞細(xì)辛包括提取總黃酮和總咖啡酸酯，具體方法如下 ①堿溶液滲漉提取取所述重量份的燈盞細(xì)辛，加入堿溶液滲漉提取，收集滲漉液； ②過大孔樹脂柱將上述①收集的滲漉液通過中/低極性大孔吸附樹脂，先用水洗至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；再用50-95％乙醇洗脫，收集50-95％乙醇洗脫液； ③第一次酸沉將上述②收集的50-95％乙醇洗脫液回收乙醇，調(diào)pH值為0.5-5，靜置，濾過，酸沉后的濾液和沉淀分別備用； ④提取總黃酮取上述③酸沉后的沉淀，用少量水和/或少量50-95％乙醇洗滌1-3次，減壓干燥，即得總黃酮提取物； ⑤提取總咖啡酸酯取上述③酸沉后的濾液，用堿溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5-7.5，并濃縮，過聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，再用60-95％乙醇洗脫，收集60-95％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，減壓干燥，即得總咖啡酸酯提取物； ⑥合并得燈盞細(xì)辛提取物將上述④的總黃酮提取物和⑤的總咖啡酸酯提取物混合，混勻，即得燈盞細(xì)辛提取物； (3)制成制劑取上述(1)步制得的人參或人參莖葉提取物和(2)步制得的燈盞細(xì)辛提取物，按照各種劑型藥物的常用制備方法，制成所需劑型的制劑，即得。
上述中藥組合物的制備方法可優(yōu)選如下 (1)、提取人參或人參莖葉主要包括水提、醇沉、過大孔樹脂柱、丙酮沉淀等步驟，具體方法如下 ①水提取所述重量份的人參或人參莖葉，加6-12倍量水提取1-3次，每次0.5-3小時(shí)，將水提液濃縮； ②醇沉在上述①濃縮后的水提液中加入乙醇使乙醇濃度達(dá)到60-85％，靜置，濾過，將濾液回收乙醇，再濾過； ③過大孔樹脂柱將上述②處理后的藥液以0.3-0.7 BV/h(BV/h是指每小時(shí)流過床層的流動(dòng)相的體積為樹脂床體積Bed Volume的倍數(shù))的速度通過中/低極性大孔吸附樹脂柱(常用的大孔吸附樹脂型號(hào)如D101、AB-8、X-5、HPD100等)，先用水和/或低于20％的乙醇洗脫至洗脫液呈近無色，棄去水和/或低于20％的乙醇洗脫液；再用50-80％乙醇洗脫，收集50-80％乙醇洗脫液； ④丙酮沉淀將上述③收集的50-80％乙醇洗脫液，加乙醇使含醇量為80-90％，靜置，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，加入丙酮1-3倍，攪拌，靜置，濾過，將濾渣干燥，得人參或人參莖葉提取物； 本步驟中，在加入丙酮處理前，還可以進(jìn)行下述精制處理(濾液回收乙醇，濃縮)按0.1-0.7g/100ml加入活性炭，煮沸，濾過，濾液濃縮(再加入丙酮處理)； (2)提取燈盞細(xì)辛包括提取總黃酮和總咖啡酸酯，具體方法如下 ①堿溶液滲漉提取取所述重量份的燈盞細(xì)辛，加入堿溶液(如碳酸氫鈉溶液、碳酸鈉溶液、氫氧化鈉溶液等)，以5-50ml/min.kg的速度滲漉提取，收集相當(dāng)于藥材重量5-15倍量的滲漉液； ②過大孔樹脂柱將上述①收集的滲漉液以1-3BV/h的速度通過中/低極性大孔吸附樹脂(常用的大孔吸附樹脂型號(hào)如D101、AB-8、X-5、HPD100等)，先用水洗至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；再用1.5-5BV 60-90％乙醇洗脫，收集60-90％乙醇洗脫液； ③第一次酸沉將上述②收集的60-90％乙醇洗脫液回收乙醇，調(diào)pH值為1-3，靜置，濾過，酸沉后的濾液和沉淀分別備用； ④提取總黃酮取上述③酸沉后的沉淀，用少量水和/或少量50-95％乙醇洗滌1-3次，減壓干燥，即得總黃酮提取物； 本步驟也可按下述方法處理取上述③酸沉后的沉淀，用少量水和/或少量50-95％乙醇洗滌1-3次，再加入水使沉淀混懸，加堿溶液使溶解，放置，濾過，濾液調(diào)pH值為0.5-5，靜置，濾過，取沉淀；將此沉淀再重復(fù)1-4次洗滌、溶解、酸沉處理；將最后的沉淀再用少量水和/或少量50-95％乙醇洗滌1-3次，減壓干燥，即得總黃酮提取物。
本步驟中，還可在任意一次酸沉處理之前或之后進(jìn)行下述精制處理按0.1-0.7g/100ml在藥液中加入活性炭，煮沸，濾過，濾液再進(jìn)行相應(yīng)處理。
⑤提取總咖啡酸酯取上述③酸沉后的濾液，用堿溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5-7.5，并濃縮，以0.1-2BV/h的速度通過聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，再用60-95％乙醇洗脫，收集1.5-5BV 60-95％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，減壓干燥，即得總咖啡酸酯提取物； 本步驟中，也可將上述③酸沉后的濾液，用堿溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5-7.5，濃縮后加乙醇至含醇量60-90％，放置，濾過，濾液回收乙醇，再過聚酰胺柱處理等。
⑥合并得燈盞細(xì)辛提取物將上述④的總黃酮提取物和⑤的總咖啡酸酯提取物混合，混勻，即得燈盞細(xì)辛提取物； (3)制成制劑取上述(1)步制得的人參或人參莖葉提取物和(2)步制得的燈盞細(xì)辛提取物，按照各種劑型藥物的常用制備方法，制成所需劑型的制劑，即得。
上述中藥組合物的醫(yī)藥用途，可用于制備具有下述任意一種或多種作用的藥物 神經(jīng)保護(hù)作用、促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)的作用、疏通血管作用、改善血液流變性作用等。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明采用傳統(tǒng)中藥組合配方，具有明顯的神經(jīng)保護(hù)作用，以及促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)等作用；結(jié)合中藥復(fù)方多組分、多靶點(diǎn)、多層次、多途徑治療復(fù)雜病癥的特色及優(yōu)勢(shì)，可有效阻斷缺血性腦血管病等多種疾病神經(jīng)損傷的大部分病理機(jī)制，不同于現(xiàn)有藥物單一作用的機(jī)制，也不是簡(jiǎn)單的聯(lián)合用藥，特別是對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的改善方面，有助于提高患者的生活質(zhì)量，達(dá)到改善預(yù)后的目的，具有重要的臨床應(yīng)用意義。而且長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)也證明本發(fā)明藥物無明顯毒副作用，安全性好。

具體實(shí)施例方式 下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于下述實(shí)施例。
實(shí)施例1 本實(shí)施例為由下述重量份配比的原料藥制成的中藥組合物(顆粒劑) 人參莖葉1份，燈盞細(xì)辛25份。
本實(shí)施例中藥組合物(顆粒劑)由包括下述主要步驟的方法制得 (1)、提取人參莖葉取所述重量份的人參莖葉，加水8倍量煎煮提取3次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮至稠膏。
(2)、提取燈盞細(xì)辛取所述重量份的燈盞細(xì)辛，加入70％乙醇提取2次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，回收乙醇，并濃縮至稠膏。
(3)、制成顆粒劑將上述(1)步制得的人參莖葉稠膏和(2)步制得的燈盞細(xì)辛稠膏混合均勻，加入上述兩種提取物總量50％的糊精，20％的蔗糖，制粒，干燥，裝成3g/袋的顆粒劑，貼標(biāo)簽，檢驗(yàn)，即得。
實(shí)施例2 本實(shí)施例為由下述重量份配比的原料藥制成的中藥組合物(膠囊劑) 人參3份，燈盞細(xì)辛20份。
本實(shí)施例中藥組合物(膠囊劑)由包括下述主要步驟的方法制得 取所述重量份的人參和燈盞細(xì)辛，加入60％乙醇10倍量提取3次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，回收乙醇，并濃縮至干，加入上述兩種提取物總量30％的淀粉，制粒，干燥，裝入膠囊殼中，制成膠囊劑，檢驗(yàn)，即得。
實(shí)施例3 本實(shí)施例為由下述重量份配比的原料藥制成的中藥組合物(片劑) 人參莖葉5份，燈盞細(xì)辛15份。
本實(shí)施例中藥組合物(片劑)由包括下述主要步驟的方法制得 (1)、提取人參莖葉 ①水提取所述重量份的人參莖葉，粉碎，加水提取3次，第1次加10倍量水提取3小時(shí)，第2次加8倍量水提取2小時(shí)，第3次加6倍量水提取0.5小時(shí)，合并水提液，濃縮至藥材重量的1/2； ②醇沉在上述①濃縮后的水提液中加入乙醇使乙醇濃度達(dá)到80％，4℃冷藏，靜置24小時(shí)，濾過，將濾液回收乙醇，再濾過； ③過大孔樹脂柱將上述②處理后的藥液以0.5BV/h的速度通過D101大孔吸附樹脂柱，先用水洗至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；繼續(xù)用20％乙醇洗脫至洗脫液呈近無色，棄去20％乙醇洗脫液；再用3BV的80％乙醇洗脫，收集80％乙醇洗脫液； ④丙酮沉淀在上述③收集的80％乙醇洗脫液中加入乙醇使含醇量為90％，靜置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，加入2倍量丙酮，攪拌，靜置30分鐘，濾過，將濾渣干燥，得人參莖葉提取物； (2)提取燈盞細(xì)辛 ①堿溶液滲漉提取取所述重量份的燈盞細(xì)辛，鍘碎，加入10％氫氧化鈉溶液浸泡1小時(shí)后，以5-15ml/min.kg速度滲濾提取，收集相當(dāng)于藥材重量5倍量的滲漉液； ②過大孔樹脂柱將上述①收集的滲漉液以2BV/h的速度通過HPD100大孔吸附樹脂，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；再用5BV 60％乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫液； ③第一次酸沉將上述②收集的60％乙醇洗脫液回收乙醇，用10％硫酸溶液調(diào)pH值為1-2，4℃冷藏，靜置12小時(shí)，濾過，酸沉后的濾液和沉淀分別備用； ④提取總黃酮取上述③酸沉后的沉淀，用少量水洗滌3次，再加入12倍量水，使沉淀混懸，用10％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值為8左右使溶解，放置12小時(shí)，濾過，濾液用10％硫酸溶液調(diào)pH值為1-2，4℃冷藏，靜置12小時(shí)，濾過，將沉淀用少量水洗滌3次，再用少量95％乙醇洗滌1次，減壓干燥(80℃，-0.09MPa)，即得總黃酮提取物； ⑤提取總咖啡酸酯取上述③酸沉后的濾液，用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.0左右，并濃縮至約為藥材重量的1/6，加入乙醇至含醇量為70％，4℃冷藏，放置12小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，以0.1BV/h的速度通過聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，再用1.5BV的95％乙醇洗脫，收集95％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，減壓干燥(80℃，-0.09MPa)，即得總咖啡酸酯提取物； ⑥合并得燈盞細(xì)辛提取物將上述④的總黃酮提取物和⑤的總咖啡酸酯提取物混合，粉碎，混勻，即得燈盞細(xì)辛提取物； (3)、制成片劑將上述(1)步制得的人參莖葉提取物和(2)步制得的燈盞細(xì)辛提取物混合均勻，加入上述兩種提取物總量10％的預(yù)膠化淀粉，制粒后壓片，制成0.5g/片的片劑，貼標(biāo)簽，檢驗(yàn)，即得。
實(shí)施例4 本實(shí)施例為由下述重量份配比的原料藥制成的中藥組合物(水針) 人參莖葉2份，燈盞細(xì)辛17份。
本實(shí)施例中藥組合物(水針)由包括下述主要步驟的方法制得 (1)、提取人參莖葉 ①水提取所述重量份的人參莖葉，粉碎，加8倍量水提取3次，每次1小時(shí)，合并水提液，濃縮至藥材重量的1/2； ②醇沉在上述①濃縮后的水提液中加入乙醇使乙醇濃度達(dá)到70％，4℃以下冷藏，靜置24小時(shí)以上，濾過，將濾液回收乙醇，再濾過； ③過大孔樹脂柱將上述②處理后的藥液以0.3BV/h的速度通過D101大孔吸附樹脂柱，先用水洗至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；繼續(xù)用10％乙醇洗脫至洗脫液呈近無色，棄去10％乙醇洗脫液；再用3BV的60％乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫液； ④丙酮沉淀在上述③收集的60％乙醇洗脫液中加入乙醇使含醇量為80％，靜置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，按0.5g/100ml加入活性炭，煮沸10分鐘，濾過，濾液濃縮，加入3倍量丙酮，攪拌，靜置30分鐘，濾過，將濾渣干燥，得人參莖葉提取物； (2)提取燈盞細(xì)辛 ①堿溶液滲漉提取取所述重量份的燈盞細(xì)辛，鍘碎，加入0.4％碳酸氫鈉溶液浸泡2小時(shí)后，以10-20ml/min.kg速度滲濾提取，收集相當(dāng)于藥材重量12倍量的滲漉液； ②過大孔樹脂柱將上述①收集的滲漉液以2BV/h的速度通過HPD100大孔吸附樹脂，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；再用3BV 80％乙醇洗脫，收集80％乙醇洗脫液； ③第一次酸沉將上述②收集的80％乙醇洗脫液回收乙醇，用20％硫酸溶液調(diào)pH值為2-3，4℃冷藏，靜置12小時(shí)，濾過，酸沉后的濾液和沉淀分別備用； ④提取總黃酮取上述③酸沉后的沉淀，用少量水洗滌2次，再加入10倍量水，使沉淀混懸，用5％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值為8左右使溶解，放置12小時(shí)，濾過，濾液用20％硫酸溶液調(diào)pH值為2-3，4℃冷藏，靜置12小時(shí)，濾過，將沉淀用少量水洗滌2次，再加入10倍量水，使沉淀混懸，用5％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值為8左右使溶解，按0.4g/100ml加入活性炭，煮沸10分鐘，濾過，濾液用20％硫酸溶液調(diào)pH值為2-3，4℃冷藏，靜置12小時(shí)，濾過，取沉淀用少量水洗滌2次，再用少量70％乙醇洗滌2次，減壓干燥(80℃，-0.09MPa)，即得總黃酮提取物； ⑤提取總咖啡酸酯取上述③酸沉后的濾液，用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.0左右，并濃縮至約為藥材重量的1/5，加入乙醇至含醇量為80％，4℃冷藏，放置12小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，以0.5BV/h的速度通過聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，再用3BV的80％乙醇洗脫，收集80％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，減壓干燥(80℃，-0.09MPa)，即得總咖啡酸酯提取物； ⑥合并得燈盞細(xì)辛提取物將上述④的總黃酮提取物和⑤的總咖啡酸酯提取物混合，粉碎，混勻，即得燈盞細(xì)辛提取物； (3)、制成注射劑(水針) 取上述(2)步制得的燈盞細(xì)辛提取物，加入50倍量注射用水混懸后，用0.5mol/L氫氧化鈉調(diào)pH值約為8左右，使提取物溶解澄明，得燈盞細(xì)辛提取物溶液；再取上述(1)步制得的人參莖葉提取物，加入10倍量注射用水溶解，得人參莖葉提取物溶液；將兩種提取物溶液混勻； 另取相當(dāng)于燈盞細(xì)辛提取物和人參莖葉提取物總重量80％的焦亞硫酸鈉，用5倍量注射用水溶解，與上述提取物溶液混勻，用0.5mol/L氫氧化鈉調(diào)pH至6.3～6.8，按0.2g/100ml加入活性炭，再加10％乙醇至總提取物濃度約為1.25g/100ml，攪拌10分鐘，分別用0.45μm、0.22μm的微孔濾膜濾過，濾液按10ml/支分裝入西林瓶，加蓋丁基膠塞及鋁蓋，115℃熱壓滅菌30分鐘，貼標(biāo)簽，檢驗(yàn)，即得。
實(shí)施例5 本實(shí)施例為由下述重量份配比的原料藥制成的中藥組合物(水針) 人參莖葉4份，燈盞細(xì)辛22份。
本實(shí)施例中藥組合物(水針)由包括下述主要步驟的方法制得 (1)、提取人參莖葉 ①水提取所述重量份的人參莖葉，粉碎，加10倍量水提取2次，第一次2小時(shí)，第2次1小時(shí)，合并水提液，濃縮至藥材重量的1/3； ②醇沉在上述①濃縮后的水提液中加入乙醇使乙醇濃度達(dá)到85％，4℃冷藏，靜置24小時(shí)以上，濾過，將濾液回收乙醇，再濾過； ③過大孔樹脂柱將上述②處理后的藥液以0.7BV/h的速度通過AB-8大孔吸附樹脂柱，先用水洗至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；繼續(xù)用15％乙醇洗脫至洗脫液呈近無色，棄去15％乙醇洗脫液；再用5BV的50％乙醇洗脫，收集50％乙醇洗脫液； ④丙酮沉淀在上述③收集的50％乙醇洗脫液中加入乙醇使含醇量為85％，靜置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，按0.7g/100ml加入活性炭，煮沸20分鐘，濾過，濾液濃縮，加入1倍量丙酮，攪拌，靜置40分鐘，濾過，將濾渣干燥，得人參莖葉提取物； (2)提取燈盞細(xì)辛 ①堿溶液滲漉提取取所述重量份的燈盞細(xì)辛，鍘碎，加入1％碳酸鈉溶液浸泡3小時(shí)后，以40-50ml/min.kg速度滲濾提取，收集相當(dāng)于藥材重量15倍量的滲漉液； ②過大孔樹脂柱將上述①收集的滲漉液以1BV/h的速度通過D101大孔吸附樹脂，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；再用1.5BV 90％乙醇洗脫，收集90％乙醇洗脫液； ③第一次酸沉將上述②收集的90％乙醇洗脫液回收乙醇，用20％鹽酸溶液調(diào)pH值為1-2，4℃冷藏，靜置12小時(shí)以上，濾過，酸沉后的濾液和沉淀分別備用； ④提取總黃酮取上述③酸沉后的沉淀，用少量水洗滌1次，再用少量95％乙醇洗滌1次，再加入8倍量水，使沉淀混懸，用10％碳酸氫鈉溶液調(diào)pH值為7-8使溶解，放置12小時(shí)以上，濾過，濾液用20％鹽酸溶液調(diào)pH值為1-2，4℃冷藏，靜置12小時(shí)以上，濾過，將沉淀用少量水洗滌2次，再用少量60％乙醇洗滌3次，再加入8倍量水，使沉淀混懸，用10％碳酸氫鈉溶液調(diào)pH值為7-8使溶解，按0.7g/100ml加入活性炭，煮沸10分鐘，濾過，濾液用20％鹽酸溶液調(diào)pH值為1-2，4℃冷藏，靜置12小時(shí)以上，濾過，取沉淀用少量水洗滌3次，再用少量60％乙醇洗滌2次，減壓干燥(80℃，-0.09MPa)，即得總黃酮提取物； ⑤提取總咖啡酸酯取上述③酸沉后的濾液，用10％碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.5左右，并濃縮至約為藥材重量的1/4，加入乙醇至含醇量為90％，4℃冷藏，放置12小時(shí)以上，濾過，濾液回收乙醇，以2BV/h的速度通過聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，再用5BV的60％乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，減壓干燥(80℃，-0.09MPa)，即得總咖啡酸酯提取物； ⑥合并得燈盞細(xì)辛提取物將上述④的總黃酮提取物和⑤的總咖啡酸酯提取物混合，粉碎，混勻，即得燈盞細(xì)辛提取物； (3)、制成注射劑(水針) 取上述(2)步制得的燈盞細(xì)辛提取物，加入約45倍量注射用水混懸后，用0.3mol/L氫氧化鈉調(diào)pH值約為7-8，使提取物溶解澄明，得燈盞細(xì)辛提取物溶液；再取上述(1)步制得的人參莖葉提取物，加入約12倍量注射用水溶解，得人參莖葉提取物溶液；將兩種提取物溶液混勻； 另取相當(dāng)于燈盞細(xì)辛提取物和人參莖葉提取物總重量85％的焦亞硫酸鈉，用約6倍量注射用水溶解，與上述提取物溶液混勻，用0.3mol/L氫氧化鈉調(diào)pH至6.5～7.0，按0.3g/100ml加入活性炭，再加10％乙醇至總提取物濃度約為2.5g/100ml，攪拌10分鐘，分別用0.45μm、0.22μm的微孔濾膜濾過，濾液按5ml/支分裝入安瓿，熔封，115℃熱壓滅菌30分鐘，貼標(biāo)簽，檢驗(yàn)，即得。
實(shí)施例6 本實(shí)施例為由下述重量份配比的原料藥制成的中藥組合物(凍干粉針) 人參莖葉15份，燈盞細(xì)辛10份。
本實(shí)施例中藥組合物(凍干粉針)由包括下述主要步驟的方法制得 (1)、提取人參莖葉 ①水提取所述重量份的人參莖葉，粉碎，加12倍量水提取3小時(shí)，將水提液濃縮至藥材重量的1/4； ②醇沉在上述①濃縮后的水提液中加入乙醇使乙醇濃度達(dá)到60％，4℃冷藏，靜置36小時(shí)，濾過，將濾液回收乙醇，再濾過； ③過大孔樹脂柱將上述②處理后的藥液以0.6BV/h的速度通過HPD100大孔吸附樹脂柱，先用水洗至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；繼續(xù)用5％乙醇洗脫至洗脫液呈近無色，棄去5％乙醇洗脫液；再用4BV的70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫液； ④丙酮沉淀在上述③收集的70％乙醇洗脫液中加入乙醇使含醇量為80％，靜置36小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，按0.1g/100ml加入活性炭，煮沸30分鐘，濾過，濾液濃縮，加入1.5倍量丙酮，攪拌，靜置20分鐘，濾過，將濾渣干燥，得人參莖葉提取物； (2)提取燈盞細(xì)辛 ①堿溶液滲漉提取取所述重量份的燈盞細(xì)辛，鍘碎，加入1％碳酸氫鈉溶液浸泡5小時(shí)后，以15-25ml/min.kg速度滲濾提取，收集相當(dāng)于藥材重量10倍量的滲漉液； ②過大孔樹脂柱將上述①收集的滲漉液以3BV/h的速度通過X-5大孔吸附樹脂，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；再用2BV 70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫液； ③第一次酸沉將上述②收集的70％乙醇洗脫液回收乙醇，用30％鹽酸溶液調(diào)pH值為0.5-1，4℃冷藏，靜置12小時(shí)以上，濾過，酸沉后的濾液和沉淀分別備用； ④提取總黃酮取上述③酸沉后的沉淀，用少量水洗滌3次，再加入8倍量水，使沉淀混懸，用5％碳酸氫鈉溶液調(diào)pH值為8-9使溶解，放置12小時(shí)以上，濾過，濾液用30％鹽酸溶液調(diào)pH值為0.5-1，4℃冷藏，靜置12小時(shí)以上，濾過，將沉淀用少量水洗滌3次，按0.1g/100ml加入活性炭，煮沸15分鐘，濾過，濾液用30％鹽酸溶液調(diào)pH值為0.5-1，4℃冷藏，靜置12小時(shí)以上，濾過，取沉淀用少量水洗滌3次，減壓干燥(80℃，-0.09MPa)，即得總黃酮提取物； ⑤提取總咖啡酸酯取上述③酸沉后的濾液，用5％碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5左右，并濃縮至約為藥材重量的1/5，加入乙醇至含醇量為60％，4℃冷藏，放置12小時(shí)以上，濾過，濾液回收乙醇，以1BV/h的速度通過聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，再用4BV的60％乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，減壓干燥(80℃，-0.09MPa)，即得總咖啡酸酯提取物； ⑥合并得燈盞細(xì)辛提取物將上述④的總黃酮提取物和⑤的總咖啡酸酯提取物混合，粉碎，混勻，即得燈盞細(xì)辛提取物； (3)、制成注射劑(凍干粉針) 取上述(2)步制得的燈盞細(xì)辛提取物，加入約50倍量注射用水混懸后，用0.5mol/L氫氧化鈉調(diào)pH值約為7-8，使提取物溶解澄明，得燈盞細(xì)辛提取物溶液；再取上述(1)步制得的人參莖葉提取物，加入約10倍量注射用水溶解，得人參莖葉提取物溶液；將兩種提取物溶液混勻； 另取相當(dāng)于燈盞細(xì)辛提取物和人參莖葉提取物總重量11倍的甘露醇，用約3倍量注射用水溶解，與上述提取物溶液混勻，加注射用水至總提取物濃度約為1.25g/100ml，再按0.2g/100ml加入活性炭，攪拌10分鐘，分別用0.45μm、0.22μm的微孔濾膜濾過，濾液按2ml/支分裝入西林小瓶，置于凍干機(jī)內(nèi)冷凍干燥，加蓋丁基膠塞及鋁蓋，貼標(biāo)簽，檢驗(yàn)，即得。
實(shí)施例7 本實(shí)施例為由下述重量份配比的原料藥制成的中藥組合物(凍干粉針) 人參2份，燈盞細(xì)辛5份。
本實(shí)施例中藥組合物(凍干粉針)由包括下述主要步驟的方法制得 (1)、提取人參 ①水提取所述重量份的人參，粉碎，加8倍量水提取2次，每次2小時(shí)，合并水提液，濃縮至藥材重量的1/2； ②醇沉在上述①濃縮后的水提液中加入乙醇使乙醇濃度達(dá)到60％，4℃冷藏，靜置24小時(shí)以上，濾過，將濾液回收乙醇，再濾過； ③過大孔樹脂柱將上述②處理后的藥液以0.6BV/h的速度通過X-5大孔吸附樹脂柱，先用水洗至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；繼續(xù)用10％乙醇洗脫至洗脫液呈近無色，棄去10％乙醇洗脫液；再用3BV的95％乙醇洗脫，收集95％乙醇洗脫液； ④丙酮沉淀將上述③收集的95％乙醇洗脫液回收乙醇，按0.5g/100ml加入活性炭，煮沸15分鐘，濾過，濾液濃縮，加入1倍量丙酮，攪拌，靜置30分鐘，濾過，將濾渣干燥，得人參提取物； (2)提取燈盞細(xì)辛 ①堿溶液滲漉提取取所述重量份的燈盞細(xì)辛，鍘碎，加入15％碳酸氫鈉溶液浸泡1小時(shí)后，以20-30ml/min.kg速度滲濾提取，收集相當(dāng)于藥材重量8倍量的滲漉液； ②過大孔樹脂柱將上述①收集的滲漉液以3BV/h的速度通過AB-8大孔吸附樹脂，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；再用4BV 50％乙醇洗脫，收集50％乙醇洗脫液； ③第一次酸沉將上述②收集的50％乙醇洗脫液回收乙醇，用10％鹽酸溶液調(diào)pH值為4-5，4℃冷藏，靜置12小時(shí)以上，濾過，酸沉后的濾液和沉淀分別備用； ④提取總黃酮取上述③酸沉后的沉淀，用少量水洗滌2次，再用少量80％乙醇洗滌2次，再加入6倍量水，使沉淀混懸，用2％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值為7-8使溶解，放置12小時(shí)以上，濾過，濾液用10％鹽酸溶液調(diào)pH值為4-5，4℃冷藏，靜置12小時(shí)以上，濾過，將沉淀用少量水洗滌2次，再用少量80％乙醇洗滌2次，再加入6倍量水，使沉淀混懸，用2％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值為7-8使溶解，放置12小時(shí)以上，濾過，濾液用10％鹽酸溶液調(diào)pH值為4-5，4℃冷藏，靜置12小時(shí)以上，濾過，將沉淀用少量水洗滌2次，再用少量80％乙醇洗滌2次，再加入6倍量水，使沉淀混懸，用2％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值為7-8使溶解，按0.4g/100ml加入活性炭，煮沸10分鐘，濾過，濾液用10％鹽酸溶液調(diào)pH值為4-5，4℃冷藏，靜置12小時(shí)以上，濾過，取沉淀用少量水洗滌3次，再用少量80％乙醇洗滌3次，減壓干燥(80℃，-0.09MPa)，即得總黃酮提取物； ⑤提取總咖啡酸酯取上述③酸沉后的濾液，用2％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.0左右，并濃縮至約為藥材重量的1/5，加入乙醇至含醇量為75％，4℃冷藏，放置12小時(shí)以上，濾過，濾液回收乙醇，以1BV/h的速度通過聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，再用4 BV的70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，減壓干燥(80℃，-0.09MPa)，即得總咖啡酸酯提取物； ⑥合并得燈盞細(xì)辛提取物將上述④的總黃酮提取物和⑤的總咖啡酸酯提取物混合，粉碎，混勻，即得燈盞細(xì)辛提取物； (3)、制成注射劑(凍干粉針) 取上述(2)步制得的燈盞細(xì)辛提取物，加入約60倍量注射用水混懸后，用1mol/L氫氧化鈉調(diào)pH值約為7-7.5，使提取物溶解澄明，得燈盞細(xì)辛提取物溶液；再取上述(1)步制得的人參提取物，加入約15倍量注射用水溶解，得人參提取物溶液；將兩種提取物溶液混勻； 另取相當(dāng)于燈盞細(xì)辛提取物和人參提取物總重量10倍的甘露醇，用約4倍量注射用水溶解，與上述提取物溶液混勻，加注射用水至總提取物濃度約為0.75g/100ml，再按0.4g/100ml加入活性炭，攪拌15分鐘，分別用0.45μm、0.22μm的微孔濾膜濾過，濾液按5ml/支分裝入西林瓶，置于凍干機(jī)內(nèi)冷凍干燥，加蓋丁基膠塞及鋁蓋，貼標(biāo)簽，檢驗(yàn)，即得。
實(shí)施例8 本實(shí)施例為由下述重量份配比的原料藥制成的中藥組合物(軟膠囊) 人參莖葉10份，燈盞細(xì)辛30份。
本實(shí)施例中藥組合物(軟膠囊)由包括下述主要步驟的方法制得 (1)、提取人參莖葉 ①水提取所述重量份的人參莖葉，粉碎，加8倍量水提取3次，每次1小時(shí)，合并水提液，濃縮至藥材重量的1/2； ②醇沉在上述①濃縮后的水提液中加入乙醇使乙醇濃度達(dá)到75％，4℃冷藏，靜置24小時(shí)以上，濾過，將濾液回收乙醇，再濾過； ③過大孔樹脂柱將上述②處理后的藥液以1BV/h的速度通過D101大孔吸附樹脂柱，先用水洗至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；繼續(xù)用10％乙醇洗脫至洗脫液呈近無色，棄去10％乙醇洗脫液；再用6BV的50％乙醇洗脫，收集50％乙醇洗脫液； ④丙酮沉淀將上述③收集的50％乙醇洗脫液回收乙醇，濃縮，加入2倍量丙酮，攪拌，靜置1小時(shí)，濾過，將濾渣干燥，得人參莖葉提取物； (2)提取燈盞細(xì)辛 ①堿溶液滲漉提取取所述重量份的燈盞細(xì)辛，鍘碎，加入5％碳酸鈉溶液浸泡4小時(shí)后，以30-40ml/min.kg速度滲濾提取，收集相當(dāng)于藥材重量12倍量的滲漉液； ②過大孔樹脂柱將上述①收集的滲漉液以3BV/h的速度通過HPD100大孔吸附樹脂，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；再用1.5BV 95％乙醇洗脫，收集95％乙醇洗脫液； ③第一次酸沉將上述②收集的95％乙醇洗脫液回收乙醇，用40％鹽酸溶液調(diào)pH值為3-4，4℃冷藏，靜置12小時(shí)以上，濾過，酸沉后的濾液和沉淀分別備用； ④提取總黃酮取上述③酸沉后的沉淀，用少量水洗滌2次，減壓干燥(80℃，-0.09MPa)，即得總黃酮提取物； ⑤提取總咖啡酸酯取上述③酸沉后的濾液，用5％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.0左右，并濃縮至約為藥材重量的1/3，加入乙醇至含醇量為85％，4℃冷藏，放置12小時(shí)以上，濾過，濾液回收乙醇，以1.5BV/h的速度通過聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，再用2 BV的85％乙醇洗脫，收集85％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，減壓干燥(80℃，-0.09MPa)，即得總咖啡酸酯提取物； ⑥合并得燈盞細(xì)辛提取物將上述④的總黃酮提取物和⑤的總咖啡酸酯提取物混合，粉碎，混勻，即得燈盞細(xì)辛提取物； (3)、制成軟膠囊劑 取上述(2)步制得的燈盞細(xì)辛提取物，和(1)步制得的人參莖葉提取物，混勻，按1∶1.2加入PEG400，混勻，制成軟膠囊，貼標(biāo)簽，檢驗(yàn)，即得。
發(fā)明人以上述實(shí)施例5制得的本發(fā)明藥物注射液(水針)為實(shí)驗(yàn)藥物，按照國(guó)家食品藥品監(jiān)督局《藥品注冊(cè)管理辦法》的規(guī)定要求，設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案，進(jìn)行了下述主要藥效學(xué)試驗(yàn)研究(對(duì)沙土鼠腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用、對(duì)局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)功能障礙的保護(hù)作用、改善小鼠微循環(huán)試驗(yàn))和長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究 1 對(duì)沙土鼠腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用 1.1試驗(yàn)材料 1.1.1藥品 本發(fā)明藥物按照上述實(shí)施例5的配方和方法制得的水針，發(fā)明人自制。(試驗(yàn)中藥物濃度均以總黃酮、總咖啡酸酯及總皂苷的總量計(jì)，下同) 陰性對(duì)照藥0.9％NaCl，四川科倫藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)A061121。
陽性對(duì)照藥尼莫地平注射液，山東新華制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)050108，規(guī)格2mg/10ml/支×5支。配制方法臨用時(shí)用5％葡萄糖配成所需濃度供試驗(yàn)用。
1.1.2儀器 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠出品。
電子天平，北京賽多利斯天平有限公司出品，分辨值0.001g。
TD-5-L離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠制造。
UV1240型紫外-可見分光光度計(jì)，日本島津。
1.1.3試劑 MDA檢測(cè)試劑盒南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)20070327； GSH-PX檢測(cè)試劑盒南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)20070328； SOD檢測(cè)試劑盒南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)20070327； LDH試劑盒南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)20070328； 一氧化氮(NO)南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)20070403； 一氧化氮合酶(Nos)南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)20070328； 總蛋白(雙縮脲法)試劑南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)20070328。
1.1.4動(dòng)物 沙土鼠54只，雄性，體重60～80g，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(浙)2003-0001。試驗(yàn)時(shí)在成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察室飼養(yǎng)及觀察。使用許可證SCXK(川)2004-049。
1.2方法和結(jié)果 選取沙土鼠54只，按體重隨機(jī)分為6組，分別為假手術(shù)組、模型組、陽性對(duì)照組、高劑量組、中劑量組、低劑量組。各組分別按表1所示藥物和劑量于手術(shù)前腹腔注射連續(xù)給藥10天，于第10天末次給藥后30min開始手術(shù)。各組動(dòng)物均在乙醚麻醉下分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，除假手術(shù)組外各組用血管夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈，40min后開夾使血流再通，縫合待動(dòng)物清醒后正常進(jìn)水進(jìn)食。各組于再灌注后24h斷頭取腦，稱重。將腦均分為2份。一份取大腦皮層測(cè)定水含量，并做病理切片觀察海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元，以2個(gè)視野下的存活錐體神經(jīng)元數(shù)總和來表示海馬損傷的程度。另一份用0.5mol/L、PH＝7.8的磷酸鹽緩沖水溶液冰浴下制備10％腦組織勻漿，按試劑盒操作步驟測(cè)定勻漿中MDA、GSH-PX、LDH、SOD、NO及NOS的含量，試驗(yàn)結(jié)果見表2～4。
表1 對(duì)沙土鼠腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用-給藥方案 表2對(duì)腦再灌注損傷沙土鼠腦組織GSH-PX、LDH活力和大腦皮層含水量的影響(X±SD) 注①模型組與假手術(shù)組比較 △P＜0.05 △△P＜0.01 △△△P＜0.001； ②各給藥組與模型組比較 *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001。
表2結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物高劑量、中劑量組分別能明顯和顯著升高GSH-PX活力(P＜0.05)，且能顯著降低LDH活力(P＜0.05和P＜0.01)。
表3對(duì)腦再灌注損傷沙土鼠腦組織N0、NOS、SOD和MDA含量的影響(X±SD) 注①模型組與假手術(shù)組比較 △P＜0.05 △△P＜0.01 △△△P＜0.001； ②各給藥組與模型組比較 *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001。
表3結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物高劑量、中劑量、低劑量組與模型組比較均能顯著增加SOD活力(P＜0.001，P＜0.01和P＜0.05)。高劑量組與模型組比能明顯降低MDA含量(P＜0.001)。
腦缺血再灌注后腦組織NOS活力顯著升高(P＜0.001)，NO含量顯著升高(P＜0.001)，對(duì)腦組織產(chǎn)生有害作用。本發(fā)明藥物高劑量、中劑量、低劑量組與模型組比較均能顯著降低腦內(nèi)NO水平(P＜0.001)；高劑量、中劑量、低劑量組與模型組比較均能顯著降低腦內(nèi)NOS活性(P＜0.01或P＜0.05)。
表4對(duì)沙土鼠腦缺血再灌注后海馬CA1區(qū)神經(jīng)元密度的影響(X±SD) 注①模型組與假手術(shù)組比較 △△△P＜0.001； ②各給藥組與模型組比較 **P＜0.01 ***P＜0.001。
表4結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物高劑量組、中劑量組及低劑量組分別能明顯和顯著減輕沙土鼠全腦缺血再灌注后海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的損傷，增加其存活率(P＜0.05和P＜0.01)。
上述沙土鼠腦缺血再灌注損傷神經(jīng)保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果顯示本發(fā)明藥物高劑量組、中劑量組及低劑量組與模型組比較能明顯增加再灌注損傷模型動(dòng)物大腦皮層SOD、GSH-PX酶活力，降低LDH活力，降低腦內(nèi)NO水平和NOS活性，促進(jìn)自由基的清除，減少M(fèi)DA的產(chǎn)生，對(duì)抗脂質(zhì)過氧化，降低大腦皮層水含量，減輕后海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的損傷，增加其存活率，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)。
2對(duì)局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)功能障礙的保護(hù)作用 2.1試驗(yàn)材料 2.1.1藥品 本發(fā)明藥物按照上述實(shí)施例5的配方和方法制得的水針，發(fā)明人自制。
陰性對(duì)照藥0.9％NaCl，四川科倫藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)A061121。
陽性對(duì)照藥舒血寧注射液，北京雙鶴高科天然藥物有限公司生產(chǎn)，批號(hào)050618，規(guī)格5ml×10支，每支含總黃酮苷4.2mg，含銀杏內(nèi)酯A 0.3mg，合計(jì)含4.5mg提取物/5ml。
2.1.2儀器 ACS-3H-B電子秤中山市金利電子衡器有限公司。
SHANGPING JA2003電子天平上海天平儀器廠。
2.1.3試劑 戊巴比妥鈉中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)(上海)化學(xué)試劑公司進(jìn)口分裝，25g/瓶，A.R級(jí)，批號(hào)040506。
龍膽紫成都科龍化工試劑廠，規(guī)格25g，批號(hào)041011。
2.1.4動(dòng)物 健康SD種大鼠，50只，雌雄各半，體重200～250g。由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK(川)2004-11。試驗(yàn)時(shí)在成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察室飼養(yǎng)及觀察。使用許可證SCXK(川)2004-049。
2.2方法和結(jié)果 取健康SD種大鼠50只，隨機(jī)分為5組，分別為模型組、陽性對(duì)照組、高劑量組、中劑量組、低劑量組。每組10只，按表5所示藥物和劑量尾靜脈注射給藥，1次/日，連續(xù)7天。于末次給藥后30min，左側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈注射血(凝塊直徑小于0.1mm的血栓混懸液0.4ml)造模，此后于第2，6，12和24h采用0-3級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)(見表6)評(píng)定每只大鼠的意識(shí)和運(yùn)動(dòng)能力。在處死前，又以0-3級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(見表7)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)的評(píng)分。隨后頸總動(dòng)脈注射龍膽紫染色，處死動(dòng)物，開顱取出腦組織，稱全腦重，遂切下未染色的腦組織(即缺血區(qū)腦組織)稱重，求出其占全腦重量的百分率，結(jié)果見表8～10。
表5對(duì)局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)功能障礙的保護(hù)作用-給藥方案 表6大鼠的意識(shí)和運(yùn)動(dòng)能力評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 表7大鼠神經(jīng)行為學(xué)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 表8改善局灶性腦缺血大鼠意識(shí)和運(yùn)動(dòng)能力的作用 注各給藥組與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
表8結(jié)果顯示，大劑量本發(fā)明藥物注射能顯著改善大鼠局灶性腦缺血2～12h的意識(shí)和運(yùn)動(dòng)能力(P＜0.01)，中劑量能明顯改善大鼠局灶性腦缺血2h的意識(shí)和運(yùn)動(dòng)能力(P＜0.05)。
表9改善局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)行為學(xué)的作用 注各給藥組與模型組比較 *P＜0.05 **P＜0.01。
表9結(jié)果顯示，大劑量本發(fā)明藥物注射能顯著改善大鼠局灶性腦缺血的神經(jīng)行為學(xué)癥狀(P＜0.05)。
表10本發(fā)明藥物注射液減少大鼠腦缺血百分率作用(X±SD) 注各給藥組與模型組比較 *P＜0.05，**P＜0.01。
表10結(jié)果顯示，大、中劑量本發(fā)明藥物注射能顯著和明顯降低局灶性腦缺血大鼠缺血區(qū)重量和腦缺血百分比(P＜0.01和P＜0.05)，中、小劑量有作用的趨勢(shì)。
上述局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)功能障礙試驗(yàn)結(jié)果顯示本發(fā)明藥物大劑量注射能顯著改善大鼠局灶性腦缺血2～12h的意識(shí)和運(yùn)動(dòng)能力(P＜0.01)；還能顯著改善大鼠局灶性腦缺血的神經(jīng)行為學(xué)癥狀(P＜0.05)。中劑量注射能明顯改善大鼠局灶性腦缺血2h的意識(shí)和運(yùn)動(dòng)能力(P＜0.05)；大劑量注射和中劑量注射能顯著和明顯降低局灶性腦缺血大鼠缺血區(qū)重量和腦缺血百分比(P＜0.01和P＜0.05)，中、小劑量有作用的趨勢(shì)。
3改善小鼠微循環(huán)試驗(yàn) 3.1試驗(yàn)材料 3.1.1藥品 本發(fā)明藥物按照上述實(shí)施例5的配方和方法制得的水針，發(fā)明人自制。
陽性對(duì)照藥舒血寧注射液，北京雙鶴高科天然藥物有限公司生產(chǎn)，批號(hào)050618，規(guī)格5ml×10支，每支含總黃酮苷4.2mg，含銀杏內(nèi)酯A 0.3mg，合計(jì)含4.5mg提取物/5ml。
陰性對(duì)照藥0.9％NaCl，四川科倫藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)A050506。
鹽酸腎上腺素注射液(Adr)上海禾豐制藥有限公司出品，批號(hào)0503027，規(guī)格1mg/1ml×10支。臨用時(shí)用生理鹽水配成0.1％(v/v)溶液備用。
3.1.2儀器 XSN-H生物顯微鏡，重慶光電儀器有限公司出品。
BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，泰盟科技有限公司出品。
3.1.3試劑 戊巴比妥鈉佛山市化工實(shí)驗(yàn)廠進(jìn)口分裝，AR級(jí)，25g/瓶，批號(hào)030526。用蒸餾水配成1％溶液。
3.1.4動(dòng)物 昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22g，健康一級(jí)動(dòng)物，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK(川)2004-11。試驗(yàn)時(shí)在成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察室飼養(yǎng)及觀察。使用許可證SCXK(川)2004-049。
3.2方法和結(jié)果 取昆明種小鼠60只，體重18～22g，隨機(jī)分為6組，分別為空白對(duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組、高劑量組、中劑量組、低劑量組。每組10只，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)時(shí)分別腹腔注射0.3％戊巴比妥鈉0.1ml/10g麻醉，然后將小鼠俯臥位固定在小鼠觀察臺(tái)上，滴加少許香柏油于耳廓表面，使耳廓平鋪于耳拖上，置顯微鏡載物臺(tái)上。尾靜脈注射0.1％Adr 10ml/kg，同時(shí)按表11所示藥物和劑量尾靜脈注射給藥一次，然后用40倍鏡觀察給藥前及給藥后1min、5min、10min、15min耳廓微循環(huán)的微血管管徑、血液流態(tài)(參照表12評(píng)分標(biāo)準(zhǔn))、血液流速及毛細(xì)血管開放數(shù)量的情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表13～17。
表11改善小鼠微循環(huán)試驗(yàn)-給藥方案 表12血液流態(tài)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 表13本發(fā)明藥物注射液對(duì)小鼠耳廓毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)開放數(shù)的影響(x±SD) 注①模型組與對(duì)照組比較 △P＜0.05 △△P＜0.01； ②各給藥組與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01。
表13顯示，12mg/kg本發(fā)明藥物注射液能明顯促進(jìn)注射鹽酸腎上腺素后1min、5min小鼠耳廓毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)開放數(shù)(P＜0.05)。
表14本發(fā)明藥物注射液對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)血液流速的影響 注①模型組與對(duì)照組比較 △△△P＜0.00l ②各給藥組與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01。
表14顯示，12mg/kg本發(fā)明藥物注射液在滴加Adr后5min、10min能明顯對(duì)抗腎上腺素所致小鼠耳廓微血管收縮，加快血流速度(P＜0.05)。
表15本發(fā)明藥物注射液對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)血液流態(tài)的影響 注①模型組與對(duì)照組比較 △△△P＜0.01 ②各給藥組與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01。
表15顯示，12～6mg/kg本發(fā)明藥物注射液在滴加Adr后5min～10min能明顯改善腎上腺素所致小鼠耳廓微循環(huán)血流速度減慢(P＜0.05)。
表16本發(fā)明藥物注射液對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)第三級(jí)動(dòng)脈血管管徑的影響 注①模型組與對(duì)照組比較 △△P＜0.01 △△△P＜0.001； ②各給藥組與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01。
表16顯示，12mg/kg本發(fā)明藥物注射液在滴加Adr后1min～10min能明顯對(duì)抗腎上腺素所致小鼠耳廓微動(dòng)脈血管收縮(p＜0.05)。
表17本發(fā)明藥物注射液對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)第三級(jí)靜脈血管管徑的影響 注①模型組與對(duì)照組比較 △P＜0.05 △△△P＜0.001； ②各給藥組與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001。
表17顯示，12～6mg/kg本發(fā)明藥物注射液在滴加Adr后1min～10min能顯著或明顯對(duì)抗腎上腺素所致小鼠耳廓微靜脈血管收縮(P＜0.01或p＜0)。
上述改善小鼠微循環(huán)試驗(yàn)結(jié)果顯示本發(fā)明藥物注射具有改善小鼠耳廓微循環(huán)功能，能明顯促進(jìn)注射鹽酸腎上腺素后小鼠耳廓毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)開放數(shù)，能明顯對(duì)抗腎上腺素所致小鼠耳廓微血管收縮，微靜脈血管收縮血，血流速度減慢，具有擴(kuò)張微血管和加快血流速度的作用。
4毒性試驗(yàn) 發(fā)明人還以上述實(shí)施例5所得的本發(fā)明藥物注射液(水針)進(jìn)行了長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究，結(jié)果表明80、40、20mg/kg(高、中、低)三劑量以0.5ml/100g大鼠連續(xù)90天腹腔注射給藥，各組動(dòng)物各外觀體征均未見異常，飼料消耗和體重增長(zhǎng)均正常。對(duì)部分臟器系數(shù)的影響無明顯的量效關(guān)系，相應(yīng)臟器的病理組織鏡檢也未見異常，提示這種影響不是藥物的毒性反應(yīng)所致。對(duì)血清鉀、鈉、氯離子也有一定影響，但這種影響產(chǎn)生的變化值均很小且都在正常范圍內(nèi)波動(dòng)，無生物學(xué)意義。
結(jié)論在80mg·kg-1以下劑量大鼠連續(xù)90天腹腔注射給藥是安全的。
權(quán)利要求
1.一種中藥組合物，它主要由下述重量份配比的原料藥制成
人參或人參莖葉1-15份，燈盞細(xì)辛5-30份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于所述的各原料藥的重量份配比為
人參或人參莖葉1-10份，燈盞細(xì)辛10-25份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于所述的各原料藥的重量份配比為
人參或人參莖葉2-5份，燈盞細(xì)辛15-20份。
4.一種權(quán)利要求1所述的中藥組合物的制備方法，包括下述主要步驟
(1)、提取人參或人參莖葉主要步驟包括水提、醇沉、過大孔樹脂柱、丙酮沉淀，具體方法如下
①水提取所述重量份的人參或人參莖葉，加水提取，將水提液濃縮；
②醇沉在上述①濃縮后的水提液中加入乙醇使乙醇濃度達(dá)到60-85％，靜置，濾過，將濾液回收乙醇，再濾過；
③過大孔樹脂柱將上述②處理后的藥液通過中/低極性大孔吸附樹脂柱，先用水和/或低于20％的乙醇洗脫至洗脫液呈近無色，棄去水和/或低于20％的乙醇洗脫液；再用50-95％乙醇洗脫，收集50-95％乙醇洗脫液；
④丙酮沉淀將上述③收集的50-95％乙醇洗脫液回收乙醇，濃縮，加入丙酮1-3倍，攪拌，靜置，濾過，將濾渣干燥，得人參或人參莖葉提取物；
(2)提取燈盞細(xì)辛包括提取總黃酮和總咖啡酸酯，具體方法如下
①堿溶液滲漉提取取所述重量份的燈盞細(xì)辛，加入堿溶液滲漉提取，收集滲漉液；
②過大孔樹脂柱將上述①收集的滲漉液通過中/低極性大孔吸附樹脂，先用水洗至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；再用50-95％乙醇洗脫，收集50-95％乙醇洗脫液；
③第一次酸沉將上述②收集的50-95％乙醇洗脫液回收乙醇，調(diào)pH值為0.5-5，靜置，濾過，酸沉后的濾液和沉淀分別備用；
④提取總黃酮取上述③酸沉后的沉淀，用水和/或50-95％乙醇洗滌1-3次，減壓干燥，即得總黃酮提取物；
⑤提取總咖啡酸酯取上述③酸沉后的濾液，用堿溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5-7.5，濃縮，過聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，再用60-95％乙醇洗脫，收集60-95％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，減壓干燥，即得總咖啡酸酯提取物；
⑥合并得燈盞細(xì)辛提取物將上述④的總黃酮提取物和⑤的總咖啡酸酯提取物混合，混勻，即得燈盞細(xì)辛提取物；
(3)制成制劑取上述(1)步制得的人參或人參莖葉提取物和(2)步制得的燈盞細(xì)辛提取物，按照各種劑型藥物的常用制備方法，制成所需劑型的制劑，即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于包括下述主要步驟
(1)、提取人參或人參莖葉主要步驟包括水提、醇沉、過大孔樹脂柱、丙酮沉淀，具體方法如下
①水提取所述重量份的人參或人參莖葉，加6-12倍量水提取1-3次，每次0.5-3小時(shí)，將水提液濃縮；
②醇沉在上述①濃縮后的水提液中加入乙醇使乙醇濃度達(dá)到60-85％，靜置，濾過，將濾液回收乙醇，再濾過；
③過大孔樹脂柱將上述②處理后的藥液以0.3-0.7BV/h的速度通過中/低極性大孔吸附樹脂柱，先用水和/或低于20％的乙醇洗脫至洗脫液呈近無色，棄去水和/或低于20％的乙醇洗脫液；再用50-80％乙醇洗脫，收集50-80％乙醇洗脫液；
④丙酮沉淀將上述③收集的50-80％乙醇洗脫液，加乙醇使含醇量為80-90％，靜置，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，加入丙酮1-3倍，攪拌，靜置，濾過，將濾渣干燥，得人參或人參莖葉提取物；
(2)提取燈盞細(xì)辛包括提取總黃酮和總咖啡酸酯，具體方法如下
①堿溶液滲漉提取取所述重量份的燈盞細(xì)辛，加入堿溶液，以5-50ml/min.kg的速度滲漉提取，收集相當(dāng)于藥材重量5-15倍量的滲漉液；
②過大孔樹脂柱將上述①收集的滲漉液以1-3BV/h的速度通過中/低極性大孔吸附樹脂，先用水洗至洗脫液呈近無色，棄去水洗脫液；再用1.5-5 BV60-90％乙醇洗脫，收集60-90％乙醇洗脫液；
③第一次酸沉將上述②收集的60-90％乙醇洗脫液回收乙醇，調(diào)pH值為1-3，靜置，濾過，酸沉后的濾液和沉淀分別備用；
④提取總黃酮取上述③酸沉后的沉淀，用水和/或50-95％乙醇洗滌1-3次，減壓干燥，即得總黃酮提取物；
⑤提取總咖啡酸酯取上述③酸沉后的濾液，用堿溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5-7.5，并濃縮，以0.1-2BV/h的速度通過聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫至洗脫液呈近無色，再用60-95％乙醇洗脫，收集1.5-5BV 60-95％乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，減壓干燥，即得總咖啡酸酯提取物；
⑥合并得燈盞細(xì)辛提取物將上述④的總黃酮提取物和⑤的總咖啡酸酯提取物混合，混勻，即得燈盞細(xì)辛提取物；
(3)制成制劑取上述(1)步制得的人參或人參莖葉提取物和(2)步制得的燈盞細(xì)辛提取物，按照各種劑型藥物的常用制備方法，制成所需劑型的制劑，即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于
所述的(1)步“提取人參或人參莖葉”的④“丙酮沉淀”步驟中，在加入丙酮處理前，進(jìn)行下述精制處理在濾液回收乙醇，濃縮之后，按0.1-0.7g/100ml加入活性炭，煮沸，濾過，濾液濃縮，然后再加入丙酮進(jìn)行相應(yīng)處理。
7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于
所述的(2)步“提取燈盞細(xì)辛”的④“提取總黃酮”步驟為取所述③酸沉后的沉淀，用水和/或50-95％乙醇洗滌1-3次，再加入水使沉淀混懸，加堿溶液使溶解，放置，濾過，濾液調(diào)pH值為0.5-5，靜置，濾過，取沉淀；將此沉淀再重復(fù)1-4次洗滌、溶解、酸沉處理；將最后的沉淀再用水和/或50-95％乙醇洗滌1-3次，減壓干燥，即得總黃酮提取物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于
所述的(2)步提取燈盞細(xì)辛的④提取總黃酮步驟中，在任意一次酸沉處理之前或之后進(jìn)行下述精制處理按0.1-0.7g/100ml在藥液中加入活性炭，煮沸，濾過，濾液再進(jìn)行相應(yīng)處理。
9.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于
所述的(2)步提取燈盞細(xì)辛的⑤“提取總咖啡酸酯”中，將上述③酸沉后的濾液，用堿溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5-7.5，濃縮后加乙醇至含醇量60-90％，放置，濾過，濾液回收乙醇，再過聚酰胺柱處理。
10.權(quán)利要求1所述的中藥組合物的醫(yī)藥用途，其特征在于將其用于制備具有下述任意一種或多種作用的藥物神經(jīng)保護(hù)作用、促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)作用、疏通血管作用、改善血液流變性作用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥組合物，它主要由下述重量份配比的原料藥制成人參或人參莖葉1-15份，燈盞細(xì)辛5-30份。本發(fā)明采用傳統(tǒng)中藥組合配方，結(jié)合中藥復(fù)方多組分、多靶點(diǎn)、多層次、多途徑治療復(fù)雜病癥的特色及優(yōu)勢(shì)，具有明顯的神經(jīng)保護(hù)作用以及促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)等作用；可有效阻斷缺血性腦血管病等多種疾病神經(jīng)損傷的大部分病理機(jī)制，特別是對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的改善方面，有助于提高患者的生活質(zhì)量，達(dá)到改善預(yù)后的目的，具有重要的臨床應(yīng)用意義。本發(fā)明還公開了上述中藥組合物的制備方法和醫(yī)藥用途。
文檔編號(hào)A61P9/00GK101249125SQ20071005104
公開日2008年8月27日 申請(qǐng)日期2007年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月29日
發(fā)明者唐德江, 犁 陳, 李文軍 申請(qǐng)人:重慶希爾安藥業(yè)有限公司, 成都精勤卓越藥物開發(fā)有限公司