專利名稱：補鐵劑鐵脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的補鐵劑，特別是鐵脂質(zhì)體及其制備方法，屬于生物 科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
缺鐵性貧血是目前我國和國際上最常見的疾病之一，補鐵的藥品和營養(yǎng) 品種類繁多，但由于腸鐵的吸收機制未被闡明，人們在未知機制的情況下， 開發(fā)了多種補鐵劑，具有很大的盲目性，效果不甚理想，有些還具有很大毒 性，較差的口感性和對消化道的刺激性。隨著近年來對腸鐵吸收機制的了解 讓我們得知了腸鐵的吸收機制和調(diào)控途徑，為開發(fā)和生產(chǎn)新型補鐵劑提供了 理論依據(jù)。血紅素鐵是一種生物態(tài)鐵，與其它的補鐵劑相比有較高的生物利 用率，可直接被腸道粘膜細胞吸收，消化道刺激癥狀輕。然而，由于它由卟 啉和一分子亞鐵構(gòu)成卟啉化合物，結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，易氧化，且不溶于水，還帶 有特殊氣味。更重要的是，如果與血紅素鐵吸收的基因突變或受到低表達調(diào) 控，將會阻止和抑制血紅素鐵的吸收，這些特點大大限制了其在食品、保健 品等工業(yè)中的應(yīng)用，尤其是作為口服保健品，上述特性使其開發(fā)應(yīng)用受到一 定限制。其他無機的補鐵劑如硫酸亞鐵，檸檬酸鐵等能對消化道產(chǎn)生刺激作 用，使用不當(dāng)還會引起中毒癥狀，對于炎癥性貧血和遺傳原因造成的貧血沒 有緩解作用。近年來，脂質(zhì)體作為一種新型的生物藥劑載體，已被廣泛應(yīng)用。 脂質(zhì)體是一種由脂質(zhì)雙分子層組成，內(nèi)部為水相的閉合囊泡，大小從幾十納 米到幾十微米，在脂質(zhì)體的水相和膜內(nèi)可以包裹多種物質(zhì)。有天然膜成分組 成的脂質(zhì)體，其脂質(zhì)體膜的雙層結(jié)構(gòu)原則上與天然細胞膜一樣，分散在水中 時形成多層囊泡，而且每一層均為脂質(zhì)雙分子層，各層之間被水相隔開，適 合于生物體內(nèi)吸收和降解。脂質(zhì)體無毒性和無免疫原性，作為藥物載體，具 有靶向性。臨床使用，具有減少藥物用量，提高吸收效率，降低毒性等優(yōu)勢。 雖然脂質(zhì)體作為藥物載體具有以上優(yōu)良性能，但現(xiàn)有文獻中未發(fā)現(xiàn)有關(guān)鐵脂
質(zhì)體(或稱為脂質(zhì)體鐵)的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對目前各種補鐵制劑在實際應(yīng)用中的局限性和脂質(zhì)體 作為藥物載體的優(yōu)點，提供一種新型補鐵劑鐵脂質(zhì)體(或稱為脂質(zhì)體鐵)。 本發(fā)明的目的還在于提供一種鐵脂質(zhì)體的制備方法。 .本發(fā)明的鐵脂質(zhì)體的組成以質(zhì)量份數(shù)比表示為-血紅素鐵和/或無機鐵膽固醇卵磷脂=(0.1-200): (1 10): (l(MOO) 本發(fā)明的鐵脂質(zhì)體由脂質(zhì)雙分子層組成，內(nèi)部為血紅素鐵和/或無機鐵
PBS溶液水相的閉合大單室囊泡，粒徑為1.2 0.2Wn，其中經(jīng)過0.8Mm的濾膜 過濾后，平均粒徑為0.59士0.05to，最大包封率為36%。 本發(fā)明的鐵脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟-
(1) 將質(zhì)量比(1 10): (10~100)的膽固醇和卵磷脂在25 38'C恒溫條件 下用乙醇溶液完全溶解；
(2) 按血紅素鐵和/或無機鐵膽固醇卵磷脂以((U 200): (1 10):
(10~100)的質(zhì)量比稱取血紅素鐵和/或無機鐵，完全溶入PBS中，其中，卵 磷脂:PBS固液比為1: 15，得到PBS鐵溶液；
(3) 將步驟(1)得到的完全溶解的卵磷脂一膽固醇溶液在45 50。C條件下 緩慢滴入步驟(2)所得高速旋轉(zhuǎn)的PBS鐵溶液中，然后在45 5(TC條件下恒 溫緯拌或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2~5 h，使乙醇充分揮發(fā)，得到均勻乳狀脂質(zhì)體混懸液；
(4) 將所得到的脂質(zhì)體混懸液用探針式超聲200-300W在冷水浴條件下分 散10 15min，靜置l~2h，然后用不同孔徑的濾膜反復(fù)過濾5 35次得到直徑 在0.2 lWn的鐵脂質(zhì)體，入棕色瓶，靜止l 2h，制得補鐵劑鐵脂質(zhì)體，充N2 密閉、4"C保存。
步驟(2)中PBS的PH值為6.0~7.5更好。
將上述方法制得的鐵脂質(zhì)體混懸液分別用普通生物顯微鏡、透射電鏡進 行觀察，普通生物顯微鏡觀察，脂質(zhì)體輪廓清晰，呈圓球狀囊形顆粒(見附 圖l);透射電鏡采用磷鉤酸負染法進行，脂質(zhì)體呈典型單室，其雙分子膜規(guī) 整、均一、連續(xù)，呈圓形微球體(見附圖2)。
取上述方法制備的鐵脂質(zhì)體混懸液，分別經(jīng)過不同孔徑的濾膜，粒徑為
1.2 0.2Mm，其中經(jīng)過0.8Mm的濾膜過濾后，經(jīng)相應(yīng)的水合介質(zhì)稀釋后，用 JI-1155型激光散射粒度測定儀測定脂質(zhì)體的粒徑及分布，有效粒徑 0. 59±0. 05Pm (見附圖3)。
取2ml鐵脂質(zhì)體于透析袋中，透析去掉PBS中多余鐵，取出，置10ml的 離心管中，再加入相應(yīng)體積的乙醚，混勻超聲后離心。離心條件為25。C，3500g， 20分鐘，然后再用4000g， 10分鐘。棄上清，下部為鐵溶液，用分光光度法 測定，得出脂質(zhì)體中鐵的含量，進而計算出鐵脂質(zhì)體的包封率在30-36%。
差示掃描量熱法(differential scanning calorimetry ,DSC)艮卩DSC曲線(也 稱為DSC熱分析相圖)考察本發(fā)明鐵脂質(zhì)體制備方法過程中物質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化、 藥物與脂質(zhì)體的相互作用、表面活性劑對脂質(zhì)體柔性的影響。
單一組分磷脂形成的脂質(zhì)體DSC曲線上可發(fā)現(xiàn)兩個特征不同的吸熱峰。 前一吸熱峰峰形平緩且峰面積較小，來源于磷脂分子中極性端的熱運動，磷 脂LP雙層結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變?yōu)镻P稱為預(yù)相變。磷脂極性區(qū)結(jié)合其他分子特別極性物 質(zhì)會顯著影響預(yù)相變。后出現(xiàn)的吸熱峰稱為主相變，峰面積較大，來源于磷脂
分子中碳氫鏈的熔融,結(jié)構(gòu)中含有不飽和鍵會降低主rm ，增加碳鏈長度會提
高主rm ，同樣，結(jié)合脂溶性物質(zhì)主要影響主rm。多組分磷脂形成的脂質(zhì)體 與單組分脂質(zhì)體的熱轉(zhuǎn)變特征不相同。從熱分析相圖上可以反映出不同組分 在脂質(zhì)雙層中的均一狀態(tài)。如果兩種組分的結(jié)構(gòu)相差較大,則影響體系的均一
性，將會擴大相變半峰寬(An/2)，而且使峰形不對稱。如果主:rm消失,說
明脂質(zhì)體形成一種介于膠晶態(tài)與液晶態(tài)之間的一種狀態(tài)。當(dāng)脂質(zhì)體膜由兩種
以上成分組成時，它們各自有特定的rm ,在一定的環(huán)境下它們可以同時存在
著不同的相(即液晶相及膠晶相)稱之為相分離。脂質(zhì)體中添加不同物質(zhì)，可 誘導(dǎo)脂膜表面產(chǎn)生區(qū)塊結(jié)構(gòu)，如藥物、表面活性劑等有可能影響脂質(zhì)體膜的
Tm變化。
以上結(jié)果顯示，本發(fā)明鐵脂質(zhì)體呈均一大單室型，經(jīng)過O. 8Mm濾膜后有效 粒徑為0.59土0.05Mm，最大包封率為36%。這就大大增加了血紅素鐵和/或無 機鐵的水溶性和穩(wěn)定性，及給藥專一性，提高了藥物的生物利用率。
本發(fā)明取得的有益效果如下
將有機鐵和/或無機鐵包進脂質(zhì)體中，除具有無毒性、無免疫原性的特點
外，還具有很好的靶向性。能夠大大的減少藥物用量，提高吸收效率，降低 毒性。本發(fā)明采用的乙醇注入法，能夠形成穩(wěn)定且具有較高包封率的脂質(zhì)體， 采用這種方法可以有效節(jié)省脂質(zhì)體制備的時間，簡化制備過程，對工藝條件 的要求相對較少，容易控制，操作簡便。


.圖1是血紅素鐵脂質(zhì)體在生物光學(xué)顯微鏡下放大400倍的照片，可見脂 質(zhì)體輪廓清晰，呈圓球狀囊形顆粒，且在懸液中分布比較均勻。
圖2是血紅素鐵脂質(zhì)體在透射電鏡下放大6000倍的照片，可見脂質(zhì)體雙 分子膜規(guī)整、均一、連續(xù)，呈圓形微球體。
圖3是用激光散射粒度測定儀測試血紅素鐵脂質(zhì)體的粒徑分布結(jié)果，由 圖中可看出經(jīng)過0. 8Mm濾膜的脂質(zhì)體的平均粒徑為0. 59Mm，此外根據(jù)需要將 脂質(zhì)體分別經(jīng)過不同孔徑的濾膜，以符合不同應(yīng)用的需要。
圖4至圖6是血紅素鐵脂質(zhì)體各組成物質(zhì)經(jīng)過差示掃描量熱法(DSC)檢 測后的相變過程。從圖中可看出膽固醇，卵磷脂，血紅素鐵的主相變溫度分 別為147. 78°C 、 191。C和203。C。
圖7和圖8分別是空白脂質(zhì)體和血紅素鐵脂質(zhì)體經(jīng)過差示掃描量熱法 (DSC)檢測后的相變過程。如圖所示，在空白脂質(zhì)體(只含有膽固醇、卵磷 脂)的DSC曲線上，其主相變溫度為78.89"C，而膽固醇、卵磷脂相變峰消失。 提示，膽固醇和卵磷脂的結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，二者的結(jié)合致使相變峰有了變化。 而在血紅素鐵脂質(zhì)體的DSC曲線上，其相變峰只有一個，主相變溫度為62. 83 'C，兩者相變溫度和峰形、峰位置相近，說明加入血紅素鐵后，仍然能形成 磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)的變化。以上證據(jù)充分證明脂質(zhì)體已經(jīng)形成，其中包含 著血紅素鐵，達到了實驗?zāi)康摹?
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發(fā)明。 實施例
補鐵劑鐵脂質(zhì)體的組成
血紅素鐵和/或無機鐵膽固醇卵磷脂質(zhì)量比為(0.1~200): (1 10): (10 100)。
制備方法
稱取重量比為(l-10): (10-100)的磷脂和膽固醇在25 38。C恒溫條件下
完全溶入有機溶劑乙醇中。同時，按血紅素鐵和/或無機鐵膽固醇卵磷脂 質(zhì)量比為(0.1 200): (1 10): (10-100)稱取血紅素鐵和/或無機鐵，完全溶
入PBS中，其中，卵磷脂:PBS固液比為1: 15， PBS的PH值為6.5 7.5，得
到PBS鐵溶液。將完全溶解的磷脂一膽固醇溶液在45 5(TC條件下，緩慢滴 入高速旋轉(zhuǎn)的PBS鐵溶液中，后以45 5(TC條件下恒溫攪拌或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2~5 h 使乙醇充分揮發(fā)，得到均勻乳狀脂質(zhì)體混懸液。將脂質(zhì)體混懸液用探針式超 聲200~300W分散10~15 min，在冷水浴條件下控制混懸液溫度在3(TC左右， 靜置1~2 h，然后用不同孔徑的濾膜反復(fù)過濾5~35次得到直徑在0.2~1卿的鐵 脂質(zhì)體，入棕色瓶，靜止l 2h，制得補鐵劑鐵脂質(zhì)體，充N2密閉、4。C保存。
權(quán)利要求
1、一種補鐵劑鐵脂質(zhì)體，其特征在于其組成以質(zhì)量份數(shù)比表示為血紅素鐵和/或無機鐵∶膽固醇∶卵磷脂＝(0.1～200)∶(1～10)∶(10～100。
2、 如權(quán)利要求1所述的補鐵劑鐵脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于包括以 下步驟(1) 將質(zhì)量比Cl 10): (10-100)的膽固醇和卵磷脂在25 38。C恒溫條件 下用乙醇溶液完全溶解；(2) 按血紅素鐵和/或無機鐵膽固醇卵磷脂以(0.1 200): (1~10):(10-100)的質(zhì)量比稱取血紅素鐵和/或無機鐵，完全溶入PBS中，其中，卵 磷脂:PBS固液比為1: 15，得到PBS鐵溶液；(3) 將步驟(1)得到的完全溶解的卵磷脂一膽固醇溶液在45 5(TC條件下 緩慢滴入步驟(2)所得高速旋轉(zhuǎn)的PBS鐵溶液中，然后在45 5(TC條件下恒 溫攪拌或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2 5 h，使乙醇充分揮發(fā)，得到均勻乳狀脂質(zhì)體混懸液；(4) 將所得到的脂質(zhì)體混懸液用探針式超聲200 300W在冷水浴條件下分 散10~15 min，靜置1~2 h，然后用不同孔徑的濾膜反復(fù)過濾5~35次得到直徑 在0.2 1陶的鐵脂質(zhì)體，入棕色瓶，靜止l 2h，制得補鐵劑鐵脂質(zhì)體，充& 密閉、4'C保存。
3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟(2)中PBS的PH值 為6.0 7.5。
全文摘要
本發(fā)明用乙醇注入法制備鐵脂質(zhì)體，得到一種新型補鐵劑。將卵磷脂、膽固醇乙醇溶液在特定條件下采用分散到含PBS鐵溶液中制備而成，其組成以質(zhì)量份數(shù)比表示為血紅素鐵和/或無機鐵∶膽固醇∶卵磷脂＝(0.1～200)∶(1～10)∶(10～100)。本發(fā)明的鐵脂質(zhì)體無毒性和無免疫原性，作為藥物載體，具有靶向性。臨床使用，可減少藥物用量，提高吸收效率，降低毒性，大大增加了血紅素鐵的溶解度和穩(wěn)定性，提高了生物利用率。本發(fā)明的制備方法能夠形成穩(wěn)定且具有較高包封率的脂質(zhì)體，采用這種方法可以有效節(jié)省脂質(zhì)體制備的時間，簡化制備過程，對工藝條件的要求相對較少，容易控制，操作簡便。
文檔編號A61P3/00GK101336931SQ200810054580
公開日2009年1月7日 申請日期2008年2月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月29日
發(fā)明者常彥忠, 段相林, 蘭 葛 申請人:河北師范大學(xué)