專利名稱：一種細菌纖維素復合膜的制備方法及其作為面膜材料的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種細菌纖維素復合膜的制備方法，以及這種細菌纖維素 復合膜作為面膜材料的應用。
姊餘
細菌纖維素是在1886年由Brown發(fā)現(xiàn)的，木醋桿菌(Acetobacter xylinum)在靜止培養(yǎng)時于培養(yǎng)基表面形成一層白色纖維狀物質，經化學與
物理方法分析確定此類物質具有纖維素的結構與化學性質，因其屬細菌合 成而命名為細菌纖維素(bacterial cellulose BC)。細菌纖維素直徑僅為 人工合成纖維的1/10，為10nm~100nm,是一種新型的納米級生物材料。 其有許多獨特的性質，如高結晶度和高化學純度，高抗張強度和彈性模量， 很強的水結合性，極佳的形狀維持能力和抗撕力，較高的生物適應性和良 好的生物可降解性。所以這種新型生物納米材料的研究開發(fā)曰益受到各國 研究者的重視。隨著科學技術的發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，化妝品 在人們生活中占據(jù)越來越重要的位置，從而推動了化妝品科學技術的發(fā)展。 目前巿場上銷售的面膜類美容化妝品主要以粉狀、泥狀或膏狀為主。但是 使用時都要按照一定的要求配置后才能使用，使用不便。另外，巿場上的 主流面膜是以紙質面膜為主，缺點明顯，如面膜的延展性不好、面膜的性 能受到特定載體的影響等。細菌纖維素為納米級纖維材料，含水量高，在 經過改性后含水量更高且產量也提高，然而，將改性后的細菌纖維素復合 膜用作面膜載體或直接作為保濕面膜使用，目前還未見報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種細菌纖維素復合膜的制備方
法，以及將這種細菌纖維素復合膜用作面膜的應用。
本發(fā)明技術方案 一種細菌纖維素復合膜的制備方法，包括下列步驟:
a. 菌株選擇
選擇木醋桿菌(Gluco露etobacter xyli謡)CGMCC No丄1812或木 醋桿菌(Gluconacetobacter xyli謡)CGMCC No. 1. 2378;
b. 含聚谷氨酸的液體培養(yǎng)基的制備
液體培養(yǎng)基中以重量百分比計，含2%~4%的葡萄糖或果糖或蔗糖、 0. 5% ~ 1%的酵母粉、0. 5% ~ 1%胰蛋白胨、0. 5% ~ l%Na2HP04、 0. 2% ~ 0. 3%才寧 檬酸、2% ~ 3%碳酸鉤，余量為水，然后在上述液體培養(yǎng)基中添加0. 2 ~ 0. 8g/L 的聚谷氨酸，然后調節(jié)培養(yǎng)基的pH值為5~6,在12rC的溫度下滅菌20 25min,冷卻至3(TC后，備用；
c. 種子細胞培養(yǎng)
取1-2環(huán)活化好的斜面種子接入聚谷氨酸的液體培養(yǎng)基中，8~32°C 振蕩培養(yǎng)24 36小時，搖床轉速為140~180r/min,得種子液；
d. 靜態(tài)液體發(fā)酵生產細菌纖維素
以體積百分比為5y。 ioy。的接種量將種子液接種到步驟b制備的含聚谷
氨酸的液體培養(yǎng)基中，充分振蕩使菌液均勻，28 32t:靜置培養(yǎng)6 10天， 生成的細菌纖維素膜浮于液面；
e. 細菌纖維素膜純化
取生成的細菌纖維素膜，用水沖洗6~10次，除去膜表面培養(yǎng)基及雜 質，再將膜浸泡于0.08-0. 12M的堿溶液中，80 10(TC煮20~30min,去
除膜中的菌體和殘留培養(yǎng)基，膜呈乳白色半透明后，用蒸餾水沖洗并測膜 pH值到7. 0-7.2時，沖洗停止，保存待用。
所述細菌纖維素復合膜的制備方法，其特征是步驟b中含聚谷氨酸 的液體培養(yǎng)基的制備是指液體培養(yǎng)基中以重量百分比計，含2%的葡萄糖或
果糖或蔗糖、0. 5%的酵母粉、0. 5%胰蛋白胨、0. 5%Na2HP04、 0. 2%檸檬酸、 2%碳酸鈣，余量為水，然后在上述液體培養(yǎng)基中添加0.4-0. 6g/L的聚谷 氨酸，調節(jié)培養(yǎng)基的pH值為6，在12rC的溫度下滅菌20 - 25min，冷卻至 3(TC后，備用。
步驟b中調節(jié)培養(yǎng)基pH值使用的酸或鹽選自檸檬酸、醋酸、Na2HP04、 K2HP04、 KH2P04其中之一。
步驟c種子細胞培養(yǎng)搖床轉速為150 ~ 160r/min。
步驟d中以體積百分比為6%~8%的接種量將種子液接種到含聚谷氨酸 的液體培養(yǎng)基中，靜置培養(yǎng)6 8天。
步驟e中取生成的細菌纖維素膜，用水沖洗8 10次，再將膜浸泡于 O.IM的堿溶液中,100。C煮20min。
步驟e中所述堿溶液是Na2C0r溶液。
本發(fā)明制備的細菌纖維素復合膜作為面膜載體或保濕面膜的應用。
發(fā)明有益效果本發(fā)明向培養(yǎng)基中添加聚谷氨酸(PGA)提高了細菌纖 維素的產量，提高了濕膜的含水量和機械強度。本發(fā)明方法工藝簡單，成 本低，可以明顯提高原料的轉化率及細菌纖維素的產量和含水量，實驗證 實本發(fā)明可以使細菌纖維素的干重由原來的8 ~ 10g/L提高到14 ~ 16g/L,含 水量由98%至99%。
具體實施例方式
下面通過實施例對本發(fā)明進一步詳細描述，本發(fā)明所述利用聚谷氨酸 (PGA)制備細菌纖維素復合膜的方法，由步驟(l)菌株選擇，(2)含聚 谷氨酸(PGA)種子及液體培養(yǎng)基制備，(3)種子細胞培養(yǎng)，(4)靜態(tài)液體 發(fā)酵生產細菌纖維素，(5)細菌纖維素膜純化組成；其特征是所述菌株 選擇木醋桿菌(Gluconacetobacter xylinum) CGMCC No. 1. 1812或木醋桿 菌(Gluconacetobacter xyli誦)CGMCC No. 1. 2378;所述含聚谷氨酸(PGA )
種子及液體培養(yǎng)基制備是在以重量百分比計，含2%~4%的葡萄糖或果糖或 蔗糖，0. 5%~1%的酵母粉，0. 5%~1%胰蛋白胨，0. 5%~l%Na2HP04， 0. 2%~ 0. 3%檸檬酸，2% ~ 3%碳酸鈣的種子培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基中添加0. 2 ~ 0. 8g/L 的聚谷氨酸(PGA),然后調節(jié)培養(yǎng)基的pH值為5~6,在12rC的溫度下滅 菌20 25min，冷卻至3(TC后，備用；所述種子細胞培養(yǎng)是取1 ~ 2環(huán)活化 好的斜面種子接入聚谷氨酸(PGA)的液體培養(yǎng)基中，8°C~32°C振蕩培養(yǎng) 24小時-36小時，搖床轉速為140~180r/min,得種子液；所述靜態(tài)液體 發(fā)酵生產細菌纖維素是以體積百分比為5%~10%的接種量將種子液接種到 含聚谷氨酸(PGA)的液體培養(yǎng)基中，充分振蕩使菌液均勻，28。C 32。C靜 置培養(yǎng)6 10天，有生成的細菌纖維素膜浮于液面；所述細菌纖維素膜純 化是取生成的細菌纖維素膜，用水沖洗6-10次，除去膜表面培養(yǎng)基及雜 質，再將膜浸泡于0. 08 ~ 0. 12M的堿溶液中，80°C ~ 100°C煮20 min ~ 30min, 去除膜中的菌體和殘留培養(yǎng)基，膜呈乳白色半透明后，用蒸餾水沖洗并測 膜pH值到7. 0-7.2時，沖洗停止，保存待用。
上述利用添加聚谷氨酸(PGA)制備細菌纖維素復合膜的方法中，優(yōu)選 的實施方式是所述含聚谷氨酸(PGA)種子及液體培養(yǎng)基制備是在以重量 百分比計，含2%的葡萄糖或果糖或蔗糖，0.5%的酵母粉，0. 5%胰蛋白胨， 0. 5%Na2HP04， 0. 2%寧檬酸，2%碳酸錦的種子培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基中添加 0.4-0. 6g/L的聚谷氨酸(PGA),然后調節(jié)培養(yǎng)基的pH值為6。
所述種子細胞培養(yǎng)是取1~2環(huán)活化好的斜面種子接入含聚谷氨酸 (PGA)的液體培養(yǎng)基中，30。C-32。C振蕩培養(yǎng)24小時 26小時，搖床轉 速為150~160r/min,得種子液。
所述靜態(tài)液體發(fā)酵生產細菌纖維素是以體積百分比為6%~8%的接種量 將種子液接種到含聚谷氨酸(PGA)的液體培養(yǎng)基中，充分振蕩使菌液均勻， 30°C ~ 32。C靜置培養(yǎng)6 ~ 8天，有生成的細菌纖維素膜浮于液面。
所述細菌纖維素膜純化是取生成的細菌纖維素膜，用水沖洗8 ~ 10次， 除去膜表面培養(yǎng)基及雜質，再將膜浸泡于0. 1M的堿溶液中，100°C煮20 min, 去除膜中的菌體和殘留培養(yǎng)基，膜呈乳白色半透明后，用蒸餾水沖洗并測 膜pH值到7. 0-7.2時，沖洗停止。
其中上述利用添加聚谷氨酸(PGA)提高細菌纖維素產量、提高濕膜 含水量和機械強度的方法中，所述堿溶液優(yōu)選是Na2C0r溶液。
本發(fā)明所述種子培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基中主要由20~30g/L碳水化合物 原料，5 ~ 10g/L含氮原料，1 ~ 1. 5g/L防污染劑，0. 2 ~ 0. 6g/L添加劑組成， 將上述原料加水加熱溶解，pH調節(jié)到5 6,即可得到。
其中碳水化合物主要包括果糖、葡萄糖、蔗糖或椰子水等，含氮原料 主要指酵母膏或蛋白胨等，添加劑主要是指聚谷氨酸(PGA)。
所述PH調節(jié)主要釆用檸檬酸、醋酸或Na2HP04或K2HP0,或KH2P04。
實施例1
(1) 菌株選擇選擇木醋桿菌(""co/^ce^^c/^rxW//^^) CGMCC No. 1. 1812。
(2) 含聚谷氨酸種子及液體培養(yǎng)基制備在以重量百分比計，含2% 的果糖，0. 5%的酵母粉，0. 5%胰蛋白胨，0. 5%Na2HP04, 0. 2%檸檬酸，2% 碳酸鉤的種子培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基中添加0.5g/L的聚谷氨酸，然后調 節(jié)培養(yǎng)基的pH值為6，在12rC的溫度下滅菌20min,冷卻至3(TC后，
(3) 種子細胞培養(yǎng)取1~2環(huán)活化好的斜面種子(木醋桿菌 (Wwco/7"e^^Wer xy"/ 〃/z ) CGMCC No. 1. 1812 )接入含聚谷氨酸的
液體培養(yǎng)基中，30。C振蕩培養(yǎng)24小時，搖床轉速為160r/min,得種子
液；
(4) 靜態(tài)液體發(fā)酵生產細菌纖維素以體積百分比為6%的接種量將 種子液接種到含聚谷氨酸的液體培養(yǎng)基中，充分振蕩使菌液均勻，30°C 靜置培養(yǎng)8天，有生成的細菌纖維素膜浮于液面。
(5 )細菌纖維素膜純化取生成的細菌纖維素膜，用水沖洗8 ~ 10 次，除去膜表面培養(yǎng)基及雜質，再將膜浸泡于0.1M的Na2C0r溶液中， 100。C煮20min,去除膜中的菌體和殘留培養(yǎng)基，膜呈乳白色半透明后， 用蒸餾水沖洗并測膜PH值到7. 0 ~ 7. 2時，沖洗停止，80°C千燥至恒重，
稱細菌纖維素重量，計算產量和含水量。
經測定纖維素的產量為15g纖維素/L培養(yǎng)基，含水量為99.0%, 而以同樣方法培養(yǎng)的不加聚谷氨酸的細菌纖維素產量為8. 5 g纖維素/L 培養(yǎng)基，含水量為97. 5%。
實施例2
按重量百分比計算，取2%的葡萄糖，0. 5%的酵母粉，0. 5%胰蛋白胨， 0. 5°/。Na2HP04, 0. 2%杼檬酸，2%碳酸鉤，0. 05%聚谷氨酸，調節(jié)pH至6. 0。 121°C滅菌20min。以此為液體培養(yǎng)基，取一環(huán)活化好的斜面種子木醋 桿菌(《/i/"朋ce^ ^Wei" xy/2'/2湖)CGMCC No. 1. 2378，接入液體培 養(yǎng)基中，30。C振蕩培養(yǎng)24小時，搖床轉速為160r/min,作為種子液。 以6%的接種量接種到液體培養(yǎng)基(500mL三角瓶盛有200mL液體培養(yǎng) 基)，接種時需充分振蕩，以使菌液均勻，30°C恒溫靜置培養(yǎng)6天。恒 溫靜置培養(yǎng)6天后生成的細菌纖維素膜浮于液面。膜取出后，用水多次 沖洗，除去膜表面培養(yǎng)基及雜質。再將膜浸泡于0. 1M的Na2COr溶液， 100。C煮沸20min,去除膜中的菌體和殘留培養(yǎng)基，膜呈乳白色半透明 后，用蒸餾水多次沖洗，用pH試紙輕壓膜測pH值，約7.2時，停止沖 洗。80。C干燥至恒重，進行稱重。
經測定纖維素的產量為14g纖維素/L培養(yǎng)基，含水量為99%。 相比較同樣方法培養(yǎng)的不加聚谷氨酸的細菌纖維素產量為7. 5 g纖維素 /L培養(yǎng)基,含水量為98%。
實施例3
按重量百分比計算，取2%的葡萄糖，0. 5%的酵母粉，0. 5%胰蛋白胨， 0. 5°/ Na2HP04， 0. 2%檸檬酸,2%碳酸鉤，0. 04%聚谷氨酸,調節(jié)pH至6. 0。 121°C滅菌20min。以此為液體培養(yǎng)基，取一環(huán)活化好的斜面種子木醋 桿菌(Wwc簡ce油^r z/7//7wz7) CGMCC No. 1. 1812,接入液體培 養(yǎng)基，32。C振蕩培養(yǎng)24小時，搖床轉速為160r/min,作為種子。以7%
的接種量接種到液體培養(yǎng)基(分裝到發(fā)酵淺盤中，發(fā)酵盤清洗干凈后，
臭氧水消毒)中，接種時需充分振蕩，以使菌液均勻，厚度為10mm, 32°C 恒溫靜置培養(yǎng)6天。恒溫靜置培養(yǎng)6天后生成的細菌纖維素膜浮于液面， 約厚為8mm。膜取出后，用水多次沖洗，除去膜表面培養(yǎng)基及雜質。再 將膜浸泡于O. 1M的Na2C0r溶液，100°C煮沸20min,去除膜中的菌體和 殘留培養(yǎng)基，膜呈乳白色半透明。然后用蒸餾水多次沖洗，用PH試紙 輕壓膜測pH值，pH約7.2時80。C干燥至恒重，進行稱重。
經測定纖維素的產量為16g纖維素/L培養(yǎng)基，含水量為99%。 相比較同樣方法培養(yǎng)的不加聚谷氨酸的細菌纖維素產量為9. 5 g纖維素 /L培養(yǎng)基，含水量為98%。
實施例4
(1) 菌株選擇選擇木醋桿菌(W"co朋ce"&"erz/"/7咖)CGMCC No. 1. 2378。
(2) 含聚谷氨酸種子及液體培養(yǎng)基制備在以重量百分比計，含4% 的蔗糖，1%的酵母粉，l"/。胰蛋白胨，l%Na2HP04， 0. 3%檸檬酸，3%碳 酸鉤的種子培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基中添加0.8g/L的海藻酸鈉，然后調節(jié) 培養(yǎng)基的pH值為5. 3，在12rC的溫度下滅菌20min,冷卻至3(TC后，
備用；
(3) 種子細胞培養(yǎng)取1-2環(huán)活化好的斜面種子(木醋桿菌 ("歸腐e她Cer 1//// 咖)CGMCC No. 1. 2378 )接入含聚谷氨酸
的液體培養(yǎng)基中，32。C振蕩培養(yǎng)24小時，搖床轉速為180r/min,得種 子液；
(4) 靜態(tài)液體發(fā)酵生產細菌纖維素以體積百分比為8%的接種量將 種子液接種到含聚谷氨酸的液體培養(yǎng)基中，充分振蕩使菌液均勻，32°C 靜置培養(yǎng)7天，有生成的細菌纖維素膜浮于液面。
(5) 細菌纖維素膜純化取生成的細菌纖維素膜，用水沖洗10次， 除去膜表面培養(yǎng)基及雜質，再將膜浸泡于O. 12M的NaOH溶液中，100°C
煮30min，去除膜中的菌體和殘留培養(yǎng)基，膜呈乳白色半透明后，用蒸 餾水沖洗并測膜pH值到7.0-7. 1時，沖洗停止，80。C干燥至恒重，稱 細菌纖維素重量，計算產量。
經測定纖維素的產量為15.5g纖維素/L培養(yǎng)基，含水量為99%。 而以同樣方法培養(yǎng)的不加聚谷氨酸的細菌纖維素產量為9.0g纖維素/L 培養(yǎng)基，含水量為98%。
(1 )菌株選擇選擇木醋桿菌(Gluconacetobacter xylinum) CGMCC No. 1. 1812。
(2)含聚谷氨酸種子及液體培養(yǎng)基制備在以重量百分比計，含3% 的葡萄糖，0. 8Yn的酵母粉，0. 7%胰蛋白胨，0. 8%Na2HP04, 0. 25%檸檬酸， 2. 5%碳酸努的種子培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基中添加0. 7g/L的聚谷氨酸，然 后調節(jié)培養(yǎng)基的pH值為5.7,在12rC的溫度下滅菌20min,冷卻至30 'C后，備用；
(3 )種子細胞培養(yǎng)取1 ~ 2環(huán)活化好的斜面種子木醋桿菌 (Gluconacetobacter xylinum)CGMCC No. 1. 1812接入含聚谷氨酸的 液體培養(yǎng)基中，22。C振蕩培養(yǎng)36小時，搖床轉速為150r/min，得種子 液；
(4) 靜態(tài)液體發(fā)酵生產細菌纖維素以體積百分比為5%的接種量將 種子液接種到含聚谷氨酸的液體培養(yǎng)基中，充分振蕩使菌液均勻，28°C 靜置培養(yǎng)10天，有生成的細菌纖維素膜浮于液面。
(5) 細菌纖維素膜純化取生成的細菌纖維素膜，用水沖洗10次， 除去膜表面培養(yǎng)基及雜質，再將膜浸泡于O. 09M的NaOH溶液中，80°C 煮30min,去除膜中的菌體和殘留培養(yǎng)基，膜呈乳白色半透明后，用蒸 餾水沖洗并測膜pH值到7. 1-7.2時，沖洗停止，70。C干燥至恒重，稱 細菌纖維素重量，計算產量。
經測定纖維素的產量為15.8g纖維素/L培養(yǎng)基，含水量為99%。
實施例5
而以同樣方法培養(yǎng)的不加聚谷氨酸的細菌纖維素產量為9. 2 g纖維素/L
培養(yǎng)基，含水量為98%。
所述內容僅為本發(fā)明構思下的基本說明，而依據(jù)本發(fā)明的技術方案所 作的任何等效變換，均應屬于本發(fā)明的保護范圍。
權利要求
1. 一種細菌纖維素復合膜的制備方法，包括下列步驟:a. 菌株選擇選擇木醋桿菌(Gluconacetobacter xylinum)CGMCC No.1.1812或木醋桿菌(Gluconacetobacter xylinum)CGMCCNo.1.2378；b. 含聚谷氨酸的液體培養(yǎng)基的制備液體培養(yǎng)基中以重量百分比計，含2％～4％的葡萄糖或果糖或蔗糖、0.5％～1％的酵母粉、0.5％～1％胰蛋白胨、0.5％～1％Na2HPO4、0.2％～0.3％檸檬酸、2％～3％碳酸鈣，余量為水，然后在上述液體培養(yǎng)基中添加0.2～0.8g/L的聚谷氨酸，然后調節(jié)培養(yǎng)基的pH值為5～6，在121℃的溫度下滅菌20～25min，冷卻至30℃后，備用；c. 種子細胞培養(yǎng)取1～2環(huán)活化好的斜面種子接入聚谷氨酸的液體培養(yǎng)基中，8～32℃振蕩培養(yǎng)24～36小時，搖床轉速為140～180r/min，得種子液；d. 靜態(tài)液體發(fā)酵生產細菌纖維素以體積百分比為5％～10％的接種量將種子液接種到步驟b制備的含聚谷氨酸的液體培養(yǎng)基中，充分振蕩使菌液均勻，28～32℃靜置培養(yǎng)6～10天，生成的細菌纖維素膜浮于液面；e. 細菌纖維素膜純化取生成的細菌纖維素膜，用水沖洗6～10次，除去膜表面培養(yǎng)基及雜質，再將膜浸泡于0.08～0.12M的堿溶液中，80～100℃煮20～30min，去除膜中的菌體和殘留培養(yǎng)基，膜呈乳白色半透明后，用蒸餾水沖洗并測膜pH值到7.0～7.2時，沖洗停止，保存待用。
2. 權利要求1所述一種細菌纖維素復合膜的制備方法，其特征是步 驟b中含聚谷氨酸的液體培養(yǎng)基的制備是指液體培養(yǎng)基中以重量百分比計,含2%的葡萄糖或果糖或蔗糖、0. 5%的酵母粉、0. 5%胰蛋白胨、0. 5%Na2HP04、 0.2%檸檬酸、2%碳酸鉤，余量為水，然后在上述液體培養(yǎng)基中添加0.4~ 0.6g/L的聚谷氨酸，調節(jié)培養(yǎng)基的pH值為6，在12rC的溫度下滅菌20 25min，冷卻至3(TC后，備用。
3. 權利要求1或2所述一種細菌纖維素復合膜的制備方法，其特征是: 步驟b中調節(jié)培養(yǎng)基pH值使用的酸或鹽選自杼檬酸、醋酸、Na2HP04、 K2HP04、 KH2P04其中之一。
4. 權利要求1所述一種細菌纖維素復合膜的制備方法，其特征是步 驟c種子細胞培養(yǎng)搖床轉速為150 ~ 160r/min。
5. 權利要求1所述一種細菌纖維素復合膜的制備方法，其特征是步 驟d中以體積百分比為6%~8%的接種量將種子液接種到含聚谷氨酸的液體 培養(yǎng)基中，靜置培養(yǎng)6 8天。
6. 權利要求1所述一種細菌纖維素復合膜的制備方法，其特征是步 驟e中取生成的細菌纖維素膜，用水沖洗8 10次，再將膜浸泡于O. 1M的 堿溶液中，IO(TC煮20 min。
7. 權利要求1或6所述一種細菌纖維素復合膜的制備方法，其特征是: 所述堿溶液是Na2C0r溶液。
8. 權利要求1所述方法制備的細菌纖維素復合膜作為面膜載體或保濕 面膜的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種細菌纖維素復合膜的制備方法及其作為面膜材料的應用，制備方法步驟為(1)菌株選擇，(2)含聚谷氨酸(PGA)種子及液體培養(yǎng)基制備，(3)種子細胞培養(yǎng)，(4)靜態(tài)液體發(fā)酵生產細菌纖維素，(5)細菌纖維素膜純化。該細菌纖維素復合膜可用作面膜載體或直接作為濕面膜使用。本發(fā)明向培養(yǎng)基中添加聚谷氨酸(PGA)提高了細菌纖維素的產量，提高了濕膜的含水量和機械強度，工藝簡單，成本低，實驗證實本發(fā)明可以使細菌纖維素的干重由原來的8～10g/L提高到14～16g/L，含水量由98％至99％。
文檔編號A61K8/73GK101386877SQ20081020202
公開日2009年3月18日 申請日期2008年10月30日 優(yōu)先權日2008年10月30日
發(fā)明者霞 馬 申請人:上海應用技術學院