專利名稱：：一種紫杉醇納米乳注射液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種納米乳注射液，具體涉及一種紫杉醇納米乳注射液。紫杉醇是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的二辟類化合物，其化學(xué)名稱為5(3，20-環(huán)氧-1，2(1，4,7卩,10卩,1301-六羥基紫杉烷-11-烯-9-酮-4,10-二乙酸酉旨-2-苯曱酸酯-13-(2'11，3'8)-^苯甲酰-3-苯基異絲氨酸酯，分子式為C47H51N014，分子量為853.92,結(jié)構(gòu)式如下紫杉醇難溶于水及許多藥用溶媒，水中溶解度僅為0.006mg.mr1。紫杉醇在pH4~8范圍內(nèi)比較穩(wěn)定，堿性條件下很快分解，在曱醇鈉溶液中發(fā)生劇烈反應(yīng)，酸性條件下比較穩(wěn)定。此外，紫杉醇在一定條件下可以被Mn02、Jone's試劑氧化，但極難被還原，其化學(xué)性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定。紫杉醇(Paclitaxel)是從紫杉(紅豆杉)的樹皮中提取的一種抗癌藥，紫杉醇具有獨(dú)特的作用機(jī)制，能誘導(dǎo)和促進(jìn)微管蛋白聚合、微管裝配與微管穩(wěn)定，從而阻止腫瘤細(xì)胞的生長。微管是真核細(xì)l包的一種組成成份，它是由兩條類似的多肽(a和卩)為單位構(gòu)成的微管蛋白二聚體形成的。正常情況下，微管和微管蛋白二聚體之間存在動(dòng)態(tài)平衡。紫杉醇可以使兩者之間失去動(dòng)態(tài)平衡，導(dǎo)致細(xì)胞在有絲分裂時(shí)不能形成紡錘體和紡錘絲，抑制了細(xì)胞分裂和增殖，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。體外研究表明，紫杉醇可以濃度依賴性、可逆性地結(jié)合到微管上，尤其是結(jié)合到N端微管蛋白的卩-亞單位上，這一作用降低了聚合所需的微管蛋白的濃度，使動(dòng)態(tài)平衡向著
背景技術(shù)：
：微管裝配的方向移動(dòng)，增加聚合的速率與產(chǎn)量。紫杉醇誘導(dǎo)形成的微管較短，并且比不用紫杉醇時(shí)正常形成的微管的屈回性約大10倍。另外，紫杉醇抑制有絲分裂所必需的微管網(wǎng)的正常動(dòng)態(tài)再生，會(huì)防止正常的有絲分裂紡錘體的形成，導(dǎo)致染色體斷裂并抑制細(xì)胞復(fù)制和移行。紫杉醇改變了細(xì)胞的有絲分裂過程，使有絲分裂持續(xù)時(shí)間從0.5h增加到15h，并抑制細(xì)胞質(zhì)分裂，這導(dǎo)致形成多核細(xì)胞。這些多核細(xì)胞繼續(xù)回復(fù)到Gl期，然后試圖再次進(jìn)行有絲分裂，但在有絲分裂中沒有阻滯細(xì)胞(Arrestingcells),在許多細(xì)胞中還觀察到^t核。抑制紡錘體的形成似乎與這種不正常的有絲分裂有關(guān)。體內(nèi)試馬全中，紫杉醇對(duì)動(dòng)物移植性腫瘤B16、Lewis肺癌、P388和C38等都有較強(qiáng)的生長抑制。對(duì)KB細(xì)胞和L1210細(xì)胞集落形成的抑制強(qiáng)度超過長春新堿與秋水仙堿。在14名患急性髓性或淋巴細(xì)胞白血病的病人中，紫杉醇治療(劑量105mg.m-2)前后，自然死亡的帶有DNA鏈斷裂特征的單核細(xì)胞之比例從治療前的0.4%~16%增加到治療后的3.4%~45%。人類實(shí)體癌(肝癌、乳腺癌和子宮癌)細(xì)胞抹與紫杉醇一起孵育，也觀察到細(xì)胞自然死亡。自然死亡的人肝癌或乳腺癌細(xì)胞林的百分率，隨紫杉醇濃度增加而上升。在白血病和卵巢癌細(xì)胞抹中，自然死亡似乎與酪氨酸和蛋白激酶C調(diào)節(jié)的磷酸化有關(guān)。因此，紫杉醇對(duì)卵巢癌、乳腺癌、頭頸部癌、非小細(xì)胞性肺癌、前列腺癌等均有較好的療效。紫杉醇至今已在40多個(gè)國家獲準(zhǔn)上市，并在乳腺癌、肺癌、白血病、胃腸道癌及介入治療后的血管再狹窄等治療上顯示出令人鼓舞的療效。美國FDA于1993年將其用于初始治療或其它化療失敗的晚期卵巢癌，現(xiàn)又批準(zhǔn)紫杉醇用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治療，紫杉醇對(duì)肺癌及其他癌癥的治療也正在進(jìn)行I或II期臨床試驗(yàn)。紫杉醇由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)新穎，作用機(jī)理獨(dú)特，1993年上市后為臨床迅速接受，年銷售額隨著上市國家數(shù)的增加和適應(yīng)癥的擴(kuò)大直線上升，成為當(dāng)前、也是歷史上世界范圍內(nèi)最為暢銷的一個(gè)抗腫瘤藥物，紫杉醇的開發(fā)利用被譽(yù)為90年代抗腫瘤藥三大成就之一。目前紫杉醇已在美國、英國、荷蘭等40多個(gè)國家作為一線抗腫瘤藥物上市。該藥對(duì)鉑類藥物耐藥的卵巢癌療效較好。作為新型的廣譜抗腫瘤藥物，除腎癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、結(jié)腸直腸癌等之外，紫杉醇對(duì)其它常見實(shí)體瘤均有抗腫瘤活性。它既是婦科卵巢癌、乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌的一線用藥，也是腫瘤晚期仍行之有效的化療藥物。4從目前的大量臨床試驗(yàn)結(jié)果看，其尤以對(duì)卵巢癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、食管癌和頭頸部腫瘤等的療效最為突出。紫杉醇在國內(nèi)亦已為臨床廣泛接受。但是，除了資源匱乏外，紫杉醇水溶性較低的問題給它的臨床應(yīng)用帶來一定的困難。由于紫杉醇水溶性低，口服幾乎不吸收，臨床應(yīng)用的主要是紫杉醇注射液。目前在國外及國內(nèi)上市的注射劑是以聚氧乙烯蓖麻油(CremophorEL)與無水乙醇作為混合溶々某的，該溶劑存在一定毒性和致敏性。為了降低紫杉醇的全身毒性和溶媒的毒副作用，近年來，人們對(duì)紫杉醇的藥用劑型進(jìn)行了大量的研究和探討。一方面，提高紫杉醇的水中溶解度，減少制劑中的CremophorEL。在紫杉醇水溶性衍生物方面已經(jīng)有大量的研究，最終目的是提高紫杉醇的水溶性。另一方面，采用脂質(zhì)體包合、B環(huán)糊精包合、聚乙二醇及其衍生物修飾、制成乳劑或粉針劑等方式，將紫杉醇制成把向制劑。但目前多數(shù)靶向制劑尚處于實(shí)驗(yàn)研究階段，其開發(fā)還有許多問題有待解決，如脂質(zhì)體靶向系統(tǒng)在靶部位分布不理想等缺點(diǎn)；磁性制劑尚屬實(shí)驗(yàn)研究階段。因此，如何將治療藥物安全、高效、靶向性的導(dǎo)入人體內(nèi)特定器官、組織，并提高藥物在靶組織內(nèi)的濃度是目前研究的重點(diǎn)。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的目的是提供一種療效提高，毒副作用減輕的更適于臨床應(yīng)用的紫杉醇納米乳注射液。本發(fā)明研制的紫杉醇納米乳注射液，通過物理方法制備而成，其中以卵磷脂、大豆磷脂或合成磷脂等磷脂，或其混合物作為乳化劑，聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯兼有乳化劑和助穩(wěn)定劑的作用，再加之起穩(wěn)定作用的助表面活性劑，通過一定的配比形成了自乳化釋藥系統(tǒng)。此外，還可以引入穩(wěn)定劑，例如油酸、甘膽酸鈉、亞好u酸鈉、亞碌u酸氫鈉、乳酸、枸椽酸鈉或枸椽酸，以及抗氧化劑維生素E。將上述原料通過恒速攪拌處理，形成自乳化微粒，孩t粒粒徑在10~100nm范圍內(nèi)，進(jìn)而通過0.22pm膜無菌過濾，得到澄清穩(wěn)定溶液型注射液。本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術(shù)中紫杉醇在水中的溶解度低且易水解的不足，通過調(diào)節(jié)pH值和篩選適當(dāng)?shù)妮o料，使紫杉醇分散在水中形成納米粒，提高了藥物的穩(wěn)定性。其制備方法可靠，操作簡便，所需能耗很低，不產(chǎn)生環(huán)境污染。與原有劑型相比，藥物在體內(nèi)的生物利用度顯著提高，進(jìn)而提高療效，增強(qiáng)藥物的靶向性，顯著降低藥物不良反應(yīng)，可以充分發(fā)揮紫杉醇的治療效果，降低其使用量并減輕毒副作用，因此更適于臨床應(yīng)用。用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明上述目的的技術(shù)方案如下一種紫杉醇納米乳注射液，其中按重量份數(shù)計(jì)，該注射液包含紫杉醇13份，磷脂1030份，聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯50100份，助表面活斗生劑107(H分，；容劑3080^f分。在上述注射液中，磷脂可以選自卯磷脂、大豆磷脂和合成磷脂中的一種或多種；助表面活性劑可以選自1,2-丙二醇、丙三醇和聚乙二醇中的一種或多種；溶劑可以為無水乙醇和/或乙酸乙酯。上述注射液還可以包含穩(wěn)定劑，例如油酸、甘膽酸鈉、亞石克酸鈉、亞硫酸氫鈉、乳酸、枸椽酸鈉和枸椽酸中的一種或多種。上述注射液還可以包含抗氧化劑，例如維生素E。上述注射液為膠束溶液，其中納米乳微粒直徑為10100nm,pH值為36。本發(fā)明還提供了上述注射液的制備方法，其中包括恒速攪拌原料形成納米乳微粒的步驟，例如以100轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速恒速攪拌原料形成納米乳微粒的步驟。上述制備方法還可以包括無菌過濾步驟，例如采用孔徑為0.22pm的濾膜的無菌過濾步驟。本發(fā)明的紫杉醇納米乳注射液是一種新型制劑，是一種注射用抗腫瘤納米制劑產(chǎn)品，其可以顯著提高藥物在體內(nèi)的生物利用度，減少原有制劑中的聚氧乙烯荒麻油(Cremophor)在臨床應(yīng)用中的毒副作用，增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性。這種紫杉醇納米乳注射液具有以下優(yōu)勢(shì)(1)可以提高紫杉醇的水溶性，紫杉醇的納米乳在生理?xiàng)l件下水解釋放出紫杉醇，它不需要Cremophor的增溶作用，并且還能降低藥物的全身清除率。(2)降低溶劑的毒性和致敏性，避免因使用聚氧乙烯蓖麻油導(dǎo)致的過敏反應(yīng)而引起的支氣管痙攣、呼吸急促、疲倦、低血壓等，以及在生產(chǎn)過程中容器、注射器、輸液袋與聚氧乙烯蓖麻油接觸浸出的大量增塑劑鄰苯二曱酸二乙基乙酸所導(dǎo)致過敏的反應(yīng)。(3)解決稀釋后的不穩(wěn)定性問題。傳統(tǒng)紫杉醇注射液被稀釋至0.3-1.2g/L時(shí)，若超過24h，會(huì)出現(xiàn)顆粒性沉淀，分析表明沉淀已不是紫杉醇，必須使用濾器。本發(fā)明的紫杉醇納米注射液不會(huì)在稀釋后產(chǎn)生沉淀。(4)減少劑量，提高藥物穩(wěn)定性，減少因配伍產(chǎn)生的變化。臨床常用的60種藥物與紫杉醇注射液配伍會(huì)引起輸液渾濁，某些藥物與紫杉醇竟?fàn)幗Y(jié)合血漿蛋白將使毒性增加。本發(fā)明的紫杉醇納米乳注射液應(yīng)用載藥微粒攜帶藥物，將其定向輸送到病變的靶器官及肺瘤細(xì)胞，不但減少給藥劑量，更可以減輕或避免藥物本身與其它藥物配伍的毒副作用，提高藥物作用穩(wěn)定性。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:紫杉醇納米乳注射液處方實(shí)例原輔料名稱用量紫杉醇1份卵磷脂20份1,2-丙二醇15份聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯75份無水乙醇55份丙三醇(甘油)35份制備工藝原輔料預(yù)處理—配料—100轉(zhuǎn)/分鐘勻速攪拌—過濾(0.22pm膜)—輔料配液-無菌壓濾(0.22(im膜)—灌裝—壓塞—軋蓋—貼簽—燈檢—包裝—檢驗(yàn)合格后入庫。產(chǎn)品為淡黃色透明溶液，可以與注射用水以任一比例混合，形成的混合液有乳光。利用透射電鏡及激光粒徑儀對(duì)其形態(tài)學(xué)進(jìn)行研究，表明本品粒度分布較窄，20-100nm粒度的納米粒大于90%,粒度圓整，分散性好；采用HPLC法對(duì)游離紫杉醇進(jìn)行測(cè)定，納米粒載藥量大于98%;本品在陰涼干燥處放置6個(gè)月，含量變化小于2%,有關(guān)物質(zhì)小于1°/。，初步顯示本品的穩(wěn)定性較好；本品與輸液配伍后，溶液在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，說明本品適合于注射給藥。藥代動(dòng)力學(xué)初步評(píng)價(jià)。(1)釆用犬進(jìn)行初步測(cè)定(間隔清除期7天)本發(fā)明的納米制劑及上市制劑在犬體內(nèi)的藥代特性。給藥采用靜脈點(diǎn)滴(40min),LC-MS/MS測(cè)定給藥后不同時(shí)間的血藥濃度，分別計(jì)算每只犬的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(AUC、T1/2、CL)并根據(jù)上述參數(shù)作出評(píng)價(jià)。結(jié)果表明(參見表l)，本發(fā)明的納米乳制劑的AUC高于普通上市注射液，最大達(dá)峰濃度是上市制劑的50%，體內(nèi)停留時(shí)間是上市制劑的2倍，其它對(duì)比參數(shù)基本接近。表l比格犬靜脈點(diǎn)滴不同紫杉醇(60mg/m2)制劑后的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>(2)靶向性試驗(yàn)。采用H22肝癌接種小鼠，制備30只荷瘤小鼠，建立模型。連續(xù)給藥4次，于第4次給藥后2h、4h各處死一半，剖出主要臟器(心、肝、脾、肺、腎、肌肉、脂肪、卵巢及骨髓)及腫瘤并稱重。HPLC測(cè)定紫杉醇在腫瘤和主要臟器內(nèi)的組織分布，在小鼠組織中藥物絕對(duì)含量的檢測(cè)過程中，在給予紫杉醇納米乳注射液的同一時(shí)間處死的荷瘤小鼠，將各組織(脾、肝、心、肺、脂肪、肌肉和腎)合并后研磨并檢測(cè)(除腫瘤及卵巢)，上市紫杉醇注射液試驗(yàn)組處理方法相同。結(jié)果顯示紫杉醇納米乳注射液在荷瘤小鼠組織中(參見表2和3)的分布是市售制劑的5~6倍，對(duì)腫瘤的抑制率(82.5%)明顯高于市售注射劑組(42.3%)。說明紫杉醇納米乳注射液在動(dòng)物體內(nèi)具有較好的腫瘤草巴向性，抗腫瘤效果好，毒副作用降低。表2紫杉醇納米乳注射液及上市紫杉醇注射液在荷瘤小鼠血漿A、組織*中的藥物濃度藥物給藥后時(shí)間血漿脾肝心月申脂肪納米乳2h70.567±17.2486546.84764.01844.4493.71504.6制劑4h26.160±3.3424387.18249.51126.22623.94370.1上市2h10.480±70扁7386.99824.26143.526085.330086.2制劑4h11.360±7.56468875.1131212.311769.227252.133915.9ng/ml，ng/g;顯纟且織；7±S，n=6表3紫杉醇納米乳注射液及上市紫杉醇注射液在荷瘤小鼠組織*中的藥物濃度藥物給藥后時(shí)間肌肉腫瘤卵巢腎納米乳制劑2h540.6426.6±377.43299.7±1654.712107.54h461.9454.3±344.71145.7±751.22201.8上市制劑2h112.9209.1±100.71293.1±1439.131250.04h199.4293.2±165.0479.2±205.229553.9氺[ig/g濕組織；i士S,n=6實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫杉醇納米乳注射液及上市紫杉醇注射液在組織中分布廣泛，紫杉醇納米乳注射液在腫瘤、卵巢中的藥物濃度明顯高于上市紫杉醇注射液；給藥后4h,納米乳制劑仍高于上市制劑，各組織中仍能檢測(cè)出紫杉醇。9權(quán)利要求1.一種紫杉醇納米乳注射液，其中按重量份數(shù)計(jì)，該注射液包含紫杉醇1～3份，磷脂10～30份，聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯50～100份，助表面活性劑10～70份，溶劑30～80份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射液，其特征在于，所述磷脂選自卵磷脂、大豆磷脂和合成磷脂中的一種或多種。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的注射液，其特征在于，所述助表面活性劑選自1,2-丙二醇、丙三醇和聚乙二醇中的一種或多種。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的注射液，其特征在于，所述溶劑為無水乙醇和/或乙酸乙酯。5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的注射液，其特征在于，所述注射液還包含穩(wěn)定劑，例如油酸、甘膽酸鈉、亞石克酸鈉、亞碌^酸氫鈉、乳酸、枸椽酸鈉和枸椽酸中的一種或多種。6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的注射液，其特征在于，所述注射液還包含抗氧化劑，例如維生素E。7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的注射液，其特征在于，所述注射液為膠束溶液。8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的注射液，其特征在于，所述注射液中納米乳孩t粒直徑為10100nm。9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的注射液，其特征在于，所述注射液的pH值為36。10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的注射液的制備方法，其中包括恒速攪拌原料形成納米乳微粒的步驟，例如以100轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速恒速攪拌原料形成納米乳微粒的步驟。11.根據(jù)權(quán)利要求IO所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括無菌過濾步驟，例如采用孔徑為0.22(im的濾膜的無菌過濾步驟。全文摘要本發(fā)明提供一種紫杉醇納米乳注射液，其中按重量份數(shù)計(jì)，該注射液包含紫杉醇1～3份，磷脂10～30份，聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯50～100份，助表面活性劑10～70份，溶劑30～80份。該注射劑可以提高紫杉醇的水溶性，提高藥物在體內(nèi)的生物利用度，減少原有制劑中的聚氧乙烯蓖麻油在臨床應(yīng)用中的毒副作用，增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性，減少劑量，減少因配伍產(chǎn)生的變化。文檔編號(hào)A61P35/00GK101548949SQ20091007687公開日2009年10月7日申請(qǐng)日期2009年1月23日優(yōu)先權(quán)日2009年1月23日發(fā)明者劉悉承,張小寧,瑩沙,王俊紅,陳義弘申請(qǐng)人:?？谑兄扑帍S有限公司