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      乳清蛋白肽作為制備改善學(xué)習(xí)記憶藥物、保健食品或食品的用途的制作方法

      文檔序號(hào):983936閱讀:320來(lái)源:國(guó)知局
      專利名稱:乳清蛋白肽作為制備改善學(xué)習(xí)記憶藥物、保健食品或食品的用途的制作方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明涉及一種乳清蛋白肽的一種新用途,具體來(lái)說(shuō)指改善學(xué)習(xí)記憶的藥物、保 健食品或食品的用途。屬醫(yī)藥和食品保健領(lǐng)域。
      背景技術(shù)
      生物活性肽是指具有特殊生理功能的肽類物質(zhì)。1902年倫敦大學(xué)醫(yī)學(xué)院的 Bayliss和Martling從動(dòng)物的胃腸中發(fā)現(xiàn)了一種能引起胰腺分泌活動(dòng)的物質(zhì),稱為分泌 素,這是人類第一次發(fā)現(xiàn)生物活性肽類物質(zhì)。此后,伴隨著生物化學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的飛 速發(fā)展,肽的研究取得了驚人的進(jìn)展,已成為目前研究的新熱點(diǎn)。
      肽與蛋白質(zhì)都是氨基酸以酰胺鍵互相連接在一起形成的化合物,不同的是肽的氨 基酸聚合度小,蛋白質(zhì)的聚合度大。在結(jié)構(gòu)上,肽處于氨基酸和蛋白質(zhì)的中間位置,但它具 有氨基酸與蛋白質(zhì)所不能替代的功能。長(zhǎng)期以來(lái),人們僅僅把食物蛋白質(zhì)當(dāng)作一種營(yíng)養(yǎng)豐 富的成分,認(rèn)為蛋白質(zhì)只有水解成游離氨基酸后才能被吸收。但是近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),蛋白 質(zhì)經(jīng)消化道酶促水解后,主要以10個(gè)或10個(gè)以下氨基酸組成的寡肽形式被吸收。寡肽比單 個(gè)氨基酸的吸收更有效,并能直接參與蛋白質(zhì)的合成,因此提高了機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的利用率。 在氨基酸運(yùn)輸系統(tǒng)功能出現(xiàn)障礙的情況下,攝入寡肽卻能獲得很好的吸收效果。生物體內(nèi) 已發(fā)現(xiàn)幾百種肽,是機(jī)體完成各種復(fù)雜的生理活性必不可少的參與者。
      自然界中存在著大量的生物活性肽,它們?cè)谏锘顒?dòng)中起著非常重要的作用,具 有改善和提高礦物質(zhì)吸收、抗氧化、抗菌、抗腫瘤、保護(hù)心血管、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老等作用。應(yīng) 用這些活性肽可以作為藥物、疫苗以及保健品等。大量研究證明,當(dāng)人體內(nèi)缺乏一些調(diào)節(jié)生 理功能的肽時(shí),會(huì)導(dǎo)致人體機(jī)能的改變。因此從營(yíng)養(yǎng)學(xué)的角度出發(fā),在食物結(jié)構(gòu)調(diào)整以滿足 人體必需氨基酸需要的同時(shí),適當(dāng)補(bǔ)充某些生物活性肽對(duì)增強(qiáng)防病、抗病能力以及延緩衰 老都具有深遠(yuǎn)意義。目前,開(kāi)發(fā)和研究生物活性肽類食品在國(guó)際保健品行業(yè)中已成為一個(gè) 焦點(diǎn)。許多天然的生物活性肽具有改善和提高礦物質(zhì)吸收的特性,它們有特異、安全和較高 的活性,這類生物制劑具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
      人乳與動(dòng)物乳被認(rèn)為是最接近“完善”的食品,所含各種營(yíng)養(yǎng)素及維生素、微量元 素等,種類齊全、配比合理,其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值是其他食品不能相比的。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展與人民生 活水平的提高,勢(shì)必對(duì)乳業(yè)與乳品業(yè)提出更高的要求。我國(guó)“八五”期間牛奶產(chǎn)量由原來(lái)的 475. 1萬(wàn)噸增至608. 0萬(wàn)噸,平均年遞增9. 7% ;乳品由原來(lái)的31.21萬(wàn)噸增至42. 45萬(wàn)噸, 平均年遞增8.3%。乳蛋白是生產(chǎn)乳制品(特別是奶酪)的重要原料;而蛋白酶是生產(chǎn)乳 品的重要手段。
      乳清蛋白被譽(yù)為“蛋白之王”,屬于干酪生產(chǎn)中的副產(chǎn)品,是利用現(xiàn)代生產(chǎn)工藝去 除酪蛋白(CN)后,分離出來(lái)的乳清中所含的蛋白質(zhì)。其純度高、消化吸收率高、氨基酸組成 合理、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值獨(dú)特,廣泛用于乳產(chǎn)品加工中。其主要包括α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、清 蛋白、免疫球蛋白和乳鐵蛋白等,是公認(rèn)的人體優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)補(bǔ)充劑之一。近年來(lái),隨著乳源性活性肽研究與產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的興起,除酪蛋白外,乳清蛋白中也發(fā)現(xiàn)了具有潛在生物活性的 肽段,這為進(jìn)一步提升乳清蛋白產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)功能,提高乳清蛋白產(chǎn)品的利用價(jià)值及附加產(chǎn) 值提供了新的思路和方法。許多研究表明,乳清蛋白經(jīng)酶解等得到了許多具有很高的生物 活性多肽,在體內(nèi)和體外顯示不同的功能,如抗高血壓、降血糖、抗氧化、抗血栓、促進(jìn)礦物 質(zhì)吸收等。乳清蛋白酶解肽以其安全有效的諸多優(yōu)點(diǎn),逐漸得到人們的重視,如今已成為研 究開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)。但是,迄今為止,還沒(méi)有乳清蛋白肽在改善學(xué)習(xí)記憶藥品、保健食品以及食 品中應(yīng)用的任何報(bào)道。發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明的目的是,提供一種易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好且成本低的低分子 量乳清蛋白肽在制備改善學(xué)習(xí)記憶的藥物、保健食品或食品中的用途,為通過(guò)飲食改善學(xué) 習(xí)記憶提供一種新途徑。
      其中所述的藥物或保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑、口服液。
      其中所述的食品為淀粉制品、乳及乳制品、豆制品、烘焙制品。
      其中所述的化妝品為乳液、膏霜、油劑、水劑、凝膠、氣霧劑、面膜。
      本發(fā)明是發(fā)現(xiàn)了現(xiàn)有物質(zhì)一乳清蛋白肽具有改善學(xué)習(xí)記憶的功能,發(fā)明了乳清蛋 白肽作為制備改善學(xué)習(xí)記憶的藥物、保健食品或食品的用途。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充乳清蛋白 肽能夠改善實(shí)驗(yàn)小鼠的被動(dòng)和主動(dòng)回避條件反射能力,增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)小鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能 力。具體實(shí)施方案
      下面結(jié)合具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明,這些實(shí)例應(yīng)被理解為僅是舉例 說(shuō)明,而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
      實(shí)施例1 乳清蛋白肽對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響研究
      一、材料與方法
      1、材料
      1. 1乳清蛋白肽(whey protein peptides,WPP)由北京中食海氏生物技術(shù)有限公 司提供。淡黃色粉末,分子量集中在ISO-IOOODa范圍內(nèi)的小分子肽混合物,純度為79%。
      1. 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物=SPF級(jí)C57BL/6J近交系小鼠60只,雄性,初斷乳,體重10 12g。 由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,(動(dòng)物合格證號(hào)SCXKll-00-0004,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許 可證號(hào)SYXK (京)2002-0002,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SYXK (京)2002-0001)。動(dòng)物飼養(yǎng)條 件SPF級(jí)動(dòng)物室,溫度范圍22士2°C,相對(duì)濕度50% 60%,晝夜12h 1濁。飼料合格 證號(hào)京動(dòng)許字O000)第015號(hào)(北京市科奧協(xié)力飼料有限公司)。
      1. 3儀器DSM_2型Morris水迷宮系統(tǒng)(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所)、DT_200小 鼠跳臺(tái)測(cè)試儀(成都泰盟科技有限公司)、SCS-2型程控小鼠穿梭箱(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物 研究所)。
      2、方法
      2. 1動(dòng)物分組將60只小鼠隨機(jī)分為4組,即對(duì)照組和3個(gè)WPP干預(yù)組,每組15 只。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間內(nèi),對(duì)照組給予普通飼料喂養(yǎng),低、中、高WPP干預(yù)組分別給予WPP含量為0. 225%,0. 45%和1. 35%的飼料喂養(yǎng)。動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水,連續(xù)喂養(yǎng)30天,期間記錄 動(dòng)物進(jìn)食量和體重增長(zhǎng),計(jì)算食物利用率。
      2. 2行為學(xué)實(shí)驗(yàn)
      2. 2. 1 跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)(Step-down test)
      動(dòng)物連續(xù)喂養(yǎng)30天后,于第31天開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。
      小鼠跳臺(tái)反射箱大小為25cmX25XcmX40cm,由不透明有機(jī)玻璃分隔成6間,一 角放置作為動(dòng)物逃避電擊安全區(qū)的橡膠平臺(tái),箱底為不銹鋼銅柵。實(shí)驗(yàn)時(shí)先將動(dòng)物放入反 應(yīng)箱內(nèi)(臺(tái)上、臺(tái)下)適應(yīng)環(huán)境:3min,然后將動(dòng)物放置反應(yīng)箱內(nèi)的銅柵上,立即通以36V的 交流電,觀察動(dòng)物受到電擊跳回平臺(tái),以及再次跳至銅柵上的情況。如此訓(xùn)練5min,儀器自 動(dòng)記錄每只鼠受電擊的次數(shù)或稱錯(cuò)誤次數(shù)(EM),以此作為學(xué)習(xí)成績(jī)。24h后進(jìn)行重復(fù)測(cè) 驗(yàn),在底部銅柵通電的情況下,直接將動(dòng)物置于平臺(tái)上,記錄各鼠第一次跳下平臺(tái)的時(shí)間, 即停留潛伏期(st印-down latency, SDL)和各鼠!Bmin內(nèi)的錯(cuò)誤次數(shù)(EN2)以此作為記憶 成績(jī)。停止實(shí)驗(yàn)5天后再進(jìn)行一次重復(fù)實(shí)驗(yàn),記錄上述指標(biāo),作為記憶消退階段的成績(jī)。
      2. 2. 2 穿梭箱實(shí)驗(yàn)(Shuttle test)
      本實(shí)驗(yàn)在跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)完成后2天開(kāi)始,整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物均正常進(jìn)食。
      穿梭箱大小為30cmX IOcmX 20cm,頂部有蜂鳴音控制器,箱底部為可通電的不銹 鋼格柵,間隔0. 5cm,箱底中央部有一高1. 2cm的擋板將箱底部分隔成左右兩側(cè)。將小鼠放 入穿梭箱內(nèi)任何一側(cè),IOs后開(kāi)始出現(xiàn)蜂鳴音,持續(xù)5s,蜂鳴音后給予電刺激(100v,0. 2mA, 50Hz,AC),持續(xù)10s。小鼠在遭遇電擊后即逃避,必須跑到對(duì)側(cè)頂端,擋住光電管后才可中 斷電擊,此為被動(dòng)回避反應(yīng),在每次電擊前給予條件刺激(蜂鳴音),反復(fù)強(qiáng)化后,小鼠在接 受條件刺激后即跳向?qū)?cè)并擋住光電管而逃避電擊,此為主動(dòng)回避反應(yīng),連續(xù)訓(xùn)練4d,每天 10次。記錄以下指標(biāo)⑴主動(dòng)回避時(shí)間,即試驗(yàn)中出現(xiàn)主動(dòng)回避時(shí)間的總和;(2)電擊次 數(shù),即在10個(gè)循環(huán)中小鼠被電擊到的次數(shù);(3)電擊時(shí)間,即動(dòng)物被電擊的累計(jì)時(shí)間。
      2. 2. 3Morris /K迷宮實(shí)驗(yàn)(Morris Water Maze, MWM)
      該實(shí)驗(yàn)于穿梭箱實(shí)驗(yàn)結(jié)束后2天開(kāi)始進(jìn)行,整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物均正常進(jìn)食。 Morris水迷宮由圓形水池(直徑120cm,高50cm)、平臺(tái)(直徑10cm,高20cm)以及圖象自 動(dòng)采集和處理系統(tǒng)(攝像機(jī)、錄像機(jī)、顯示器和分析軟件等)組成。實(shí)驗(yàn)時(shí),人為將水池劃 分為四個(gè)象限,平臺(tái)隨機(jī)置于第一象限并固定于水下1-1. 5cm,水溫保持在21 士 1°C。
      整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程分為定位航行實(shí)驗(yàn)(place navigation test)和空間探索實(shí)驗(yàn) (spatial probe test)兩部分。(1)定位航行實(shí)驗(yàn)用于測(cè)量小鼠在水迷宮中的學(xué)習(xí)和記 憶能力,實(shí)驗(yàn)歷時(shí)6d,每天訓(xùn)練4次。實(shí)驗(yàn)時(shí)分別從4個(gè)象限任選一入水點(diǎn)將動(dòng)物面向池 壁放入水中,記錄小鼠從入水到找到平臺(tái)所需的時(shí)間(逃避潛伏期,escape latency)、游戲 路程和游泳速度。如果動(dòng)物在60s內(nèi)末找到平臺(tái),則將由實(shí)驗(yàn)者將其引導(dǎo)至平臺(tái)并在平臺(tái) 上停留10s,逃避潛伏期記為60s。(2)空間探索實(shí)驗(yàn)用于測(cè)量小鼠對(duì)平臺(tái)空間位置的記 憶保持能力,方法為第7d撤去平臺(tái),將小鼠從平臺(tái)所在象限的對(duì)側(cè)任選一個(gè)入水點(diǎn)放入水 中,記錄120s內(nèi)小鼠在目標(biāo)象限(平臺(tái)所在象限)的停留時(shí)間及準(zhǔn)確穿越平臺(tái)所在位置的 次數(shù)。
      2. 3統(tǒng)計(jì)分析方法
      所有數(shù)據(jù)均用SPSS 16.0 for windows軟件包處理。以單因素方差分析進(jìn)行進(jìn)行5差異顯著性檢驗(yàn),以α =0.05為顯著性標(biāo)準(zhǔn)。
      二、結(jié)果
      1.跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
      統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果顯示,3個(gè)乳清肽干預(yù)組與對(duì)照組相比,訓(xùn)練后24h和第5d的平均 潛伏期和錯(cuò)誤次數(shù)差異均無(wú)顯著性。但從潛伏期變化趨勢(shì)看,0. 45%和1. 35% WPP干預(yù)組 潛伏期時(shí)間下降幅度較對(duì)照組明顯減小,且訓(xùn)練后第5天3個(gè)WPP干預(yù)組的平均潛伏期絕 對(duì)值均較對(duì)照組長(zhǎng),提示W(wǎng)PP干預(yù)組小鼠記憶消退速度較對(duì)照組減慢(表1)。
      表IWPP對(duì)小鼠跳臺(tái)潛伏期的影響
      權(quán)利要求
      1.乳清蛋白肽作為制備改善學(xué)習(xí)記憶藥物、保健食品或食品的用途。
      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳清蛋白肽作為制備改善學(xué)習(xí)記憶藥物、保健食品或食品的 用途,其特征在于所述改善學(xué)習(xí)記憶藥物和保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑或 口服液。
      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳清蛋白肽作為制備改善學(xué)習(xí)記憶藥物、保健食品或食品的 用途,其特征在于所述改善學(xué)習(xí)記憶食品為淀粉制品、乳及乳制品、豆制品或烘焙制品。
      全文摘要
      本發(fā)明公開(kāi)一種乳清蛋白肽作為制備改善學(xué)習(xí)記憶藥物、保健食品或食品的用途。乳清蛋白肽具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點(diǎn),能夠促進(jìn)實(shí)驗(yàn)小鼠主動(dòng)回避條件反射的建立,減緩被動(dòng)回避條件反射記憶消退速度,同時(shí)改善實(shí)驗(yàn)小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力,具有改善學(xué)習(xí)記憶的功效,將其應(yīng)用于制備改善學(xué)習(xí)記憶藥物、保健食品和食品,具有一定的科學(xué)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)效益,為通過(guò)飲食改善學(xué)習(xí)記憶提供一種新途徑。
      文檔編號(hào)A61K38/02GK102028931SQ20091017740
      公開(kāi)日2011年4月27日 申請(qǐng)日期2009年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月29日
      發(fā)明者李勇, 許雅君 申請(qǐng)人:李勇, 黑龍江省索康營(yíng)養(yǎng)科技有限公司
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