專利名稱：一種抗衰老組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及本發(fā)明涉及含有來源于植物、動物或礦物組份的醫(yī)用配制品，特別涉 及一種抗衰老組合物。
背景技術(shù)：
衰老是一種自然規(guī)律，是生物隨著時間的推移而自發(fā)進(jìn)行的必然過程，表現(xiàn)為結(jié) 構(gòu)和機能衰退，適應(yīng)性和抵抗力減退。在生理學(xué)上，把衰老看作是從受精卵開始一直進(jìn)行到 老年的個體發(fā)育史。從病理學(xué)上，衰老是應(yīng)激和勞損，損傷和感染，免疫反應(yīng)衰退，營養(yǎng)不 足，代謝障礙以及疏忽和濫用積累的結(jié)果。雖然人們不可能違背這個規(guī)律，但是當(dāng)人們采用 良好的生活習(xí)慣和保健措施并適當(dāng)?shù)剡\動，就可以有效地延緩衰老，降低衰老相關(guān)疾病的 發(fā)病率，提高生活質(zhì)量。臨床上使用的一些化學(xué)合成抗衰老藥，雖然對衰老有一定的延緩作 用，但是這些藥物對患者的機體也造成了很大的損傷。尋找天然無毒副作用的抗衰老藥物 已經(jīng)成為研究的熱點。螺旋藻(Spirulina)是浮游自養(yǎng)的原核生物，其外觀為青綠色，顯微鏡觀察呈螺 旋狀，它為藍(lán)藻門(Cyanoptha)顫藻目(Oscilatorales)顫藻科(Oscilatoriaece)的一個 屬。螺旋藻作為寶貴的營養(yǎng)與藥物資源日益受到科學(xué)界的重視，被公認(rèn)為“人類未來的優(yōu)秀 糧食資源”。它不僅含有豐富的蛋白質(zhì)，還含有15%左右的碳水化合物。螺旋藻中所含有的 最主要的活性成分之一為螺旋藻多糖(PSP)，它主要由D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖和 葡萄糖醛酸組成，糖苷鍵為a-型，分子量約為12590D，是一種水溶性多糖。國內(nèi)外大量的 研究表明，PSP具有多種生理活性，它可促進(jìn)細(xì)胞生長、增強機體免疫力、抑制腫瘤生長、降 血糖、降血脂、抗輻射、抗突變及抗氧化等功能。螺旋藻多糖是從螺旋藻提取出的生理活性多糖，無毒。性狀無色的或淡黃色粉 末。溶于水，不溶于醇和油脂。螺旋藻中的螺旋藻多糖具有抗輻射損傷和改善放、化療引 起的副反應(yīng)作用，因此對腫瘤患者是食療佳品。螺旋藻多糖是采用現(xiàn)代化生物化學(xué)技術(shù)與 工藝，從螺旋藻中提取的，含多種且生物活性更高的純天然生物制品。它是首先在美國專 家經(jīng)數(shù)年的悉心研究，于九十年代中期開發(fā)出的，螺旋藻多糖現(xiàn)廣泛被用于化妝、保健、醫(yī) 藥等。據(jù)醫(yī)學(xué)專家新近分析，現(xiàn)代人由于所處生活環(huán)境受到現(xiàn)代工業(yè)污染愈來愈重與強烈 工作壓力加大，處于亞健康狀況人的比例在逐漸增加，因此，追求返樸歸真，鍛煉與保健相 結(jié)合的人愈來愈多，這符合我國薄大精深中醫(yī)學(xué)固本清源的精髓。螺旋藻多糖是經(jīng)螺旋藻 作原料，通過現(xiàn)代生物技術(shù)提取加工而成的高級生物制品，因此，它不僅保留了螺旋藻中富 含的多種生物活性物質(zhì)，且生物活性更高。研究證明螺旋藻多糖無論是注射或口服，小 鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬率提高33% -52%，吞噬指數(shù)提高0. 9-1. 8倍，T淋巴細(xì)胞數(shù)提高 46.8% -87. 7%，使小鼠的血清溶血素提高39. 5% -98. 0%脾臟白髓淋巴細(xì)胞排列密集，紅 髓內(nèi)巨噬細(xì)胞明顯增多，ANAE陽性淋巴細(xì)胞增加7. 3% -12. 8%，并且能極顯著地提高細(xì)胞 超氧化物岐化酶(S0D)的活力，促進(jìn)人體外周血中NR細(xì)胞的活性等，因此，螺旋藻多糖可以 顯著改善與提高人的機體非特異性的細(xì)胞與特異性的體液免疫功能，增強人體抵抗多種病
4毒感染能力。螺旋藻多糖對體內(nèi)腹水型肝癌細(xì)胞有顯著的抑制率，其中治療組抑制率54%， 防治組抑制率達(dá)91%。研究表明螺旋藻多糖雖然不能直接殺傷癌細(xì)胞，但對癌細(xì)胞中的 DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成具有抑制作用，且隨作用時間延長抑制作用而加強。螺旋藻多糖對 電離輻射的損傷具有明顯的防護(hù)效果，它能使患有急性放射的NIH小鼠存活率提高63%， 還能顯著減輕小鼠骨髓細(xì)胞的輻射遺傳損傷。銀杏(ginkgo biloba L.)又名白果，屬裸子植物。是冰川時期存活在地球上的孑 遺植物，素有“活化石”之稱。中國是銀杏的發(fā)源地，其資源占世界總量的70%左右。除黑 龍江、吉林、內(nèi)蒙古、青海、西藏外其他各省區(qū)都有分布。銀杏葉的主要活性成分為含有甙和酚羥基結(jié)構(gòu)的銀杏黃酮和銀杏內(nèi)酯，國內(nèi)外大 量的研究也表明，銀杏黃酮和銀杏內(nèi)酯同樣具有多種生理活性，它對心腦血管和神經(jīng)系統(tǒng) 疾病有很好的治療效果，同時還具有抗氧化、清除自由基、抗衰老、抗真菌、抗休克、抗過敏、 抗炎等作用，另外銀杏內(nèi)酯還是血小板活化因子(PAF)受體的特異拮抗劑(PAF與多種疾病 的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切)。銀杏葉提取物為銀杏科植物銀杏的干燥葉提取物。銀杏的活性成分是萜烯部分， 其中包括銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯。這些銀杏黃酮_糖甙成分具有強大的抗氧化與自由基能 力。銀杏葉提取物(GBE)能同時促進(jìn)大腦和身體肢體的循環(huán)。銀杏葉提取物的一個主要保 健功能就是抑制一種稱為血小板活化因子(PAF)的物質(zhì)，PAF是一種從細(xì)胞中釋放的介質(zhì)， 其會導(dǎo)致血小板聚集(堆積在一起)。高含量的PAF會導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞損傷，中樞神經(jīng)系統(tǒng)血 流量降低，發(fā)炎，和支氣管收縮。與自由基非常相似，高PAF水平也會導(dǎo)致衰老。銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯可在缺血(體內(nèi)組織缺少氧氣)時期內(nèi)保護(hù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的 神經(jīng)細(xì)胞不受損傷。該功能可能能對苦于中風(fēng)的患者有輔助治療的作用。除了抑制血小板 粘著外，銀杏提取物調(diào)節(jié)血管張力和彈力。換句話說，其可令血管循環(huán)更加有效率。該提升 循環(huán)效率作用對循環(huán)系統(tǒng)中的大血管(動脈)和較小血管(毛細(xì)血管)都有同樣作用。銀杏葉提取物可能在大腦，眼球視網(wǎng)膜和心血管系統(tǒng)中可發(fā)揮抗氧化特性。其在 大腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的抗氧化作用可能有助于防止因年齡導(dǎo)致的大腦功能衰落。銀杏葉 提取物在大腦中的抗氧化功能特別使人感興趣。大腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)特別易受自由基攻 擊。自由基導(dǎo)致大腦損傷被廣泛認(rèn)為是導(dǎo)致伴隨衰老而來的多種疾病的影響因素，其中甚 至包括阿茲海默癥。近年來螺旋藻多糖和銀杏葉提取物已被開發(fā)成了各式各樣的藥物或保健品。有關(guān) 螺旋藻多糖抗衰老作用的報道已經(jīng)很多，廣大科研工作者也進(jìn)行了大量的試驗研究。有關(guān) 銀杏葉提取物抗衰老的研究和報道還很少。將螺旋藻多糖和銀杏葉提取物復(fù)合用于抗衰老 的研究目前尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決得技術(shù)問題在于，提供一種抗衰老組合物，包括螺旋藻多糖和銀 杏葉提取物，利用螺旋藻多糖與銀杏葉提取物都含有羥基或酚羥基結(jié)構(gòu)，通過組合能發(fā)揮 協(xié)同增效作用，顯著提高抗衰老的效果。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種抗衰老組合物，包括螺旋藻多糖和銀杏葉提取物，所述的螺旋藻多糖和銀杏葉提取物的質(zhì)量比為0. 35 1. 5 0. 35 1. 5。所述螺旋藻多糖與銀杏葉提取物的質(zhì)量比優(yōu)選為2 1。所述螺旋藻多糖優(yōu)選為一種水溶性雜多糖，其多糖質(zhì)量百分比含量優(yōu)選>93%。所述銀杏葉提取物，其總黃酮質(zhì)量百分比含量優(yōu)選> 24%，其萜內(nèi)酯質(zhì)量百分比 含量優(yōu)選彡6%。所述螺旋藻多糖的制備方法為準(zhǔn)確稱取鈍頂螺旋藻粉30. 0g，加入300mL石油醚脫脂，間歇攪拌24h。倒出石 油醚，放入通風(fēng)櫥，自然干燥至恒重。再經(jīng)脫脂的螺旋藻粉內(nèi)加入360mL(12倍體積)pH10 NaOH溶液，使用超聲波細(xì)胞粉碎機處理，將經(jīng)超聲波處理過的螺旋藻粉，放入80°C水浴鍋 內(nèi)，間歇攪拌，浸提4h。離心，棄濾渣，收集上清液。上清液內(nèi)加入5% TCA至無絮狀沉淀產(chǎn) 生為止，4°C冰箱放置24h，離心，收集上清液。再加入5% TCA至無絮狀沉淀，5小時后離心， 收集上清液。在上清液內(nèi)加入5倍體積酒精，混勻，4°C冰箱放置24h。離心，收集沉淀，冷凍 干燥得螺旋藻多糖。所述銀杏葉提取物的制備方法可以為將干凈的銀杏葉按原料與萃取劑之比為 1 8-12W/V投料置提取罐中，浸提溫度60-80°C，提取時間2-4小時，浸提過程中，每小時 間歇攪拌原料2-3次，每次8-10分鐘，提取過程結(jié)束時，料液溫度控制在60-80°C，濾出料 液；向殘余銀杏葉中加入5-15倍的萃取劑進(jìn)行第二次提取，過程同上，合并兩次料液，待溫 度降到30°C以下后，精濾，去除180目以下的雜質(zhì)；將前述得到的料液泵入大孔樹脂吸附柱 上，用10-15倍柱體積的自來水洗滌去除雜質(zhì)后，用8-10倍的去離子水過柱，再用70%的乙 醇溶液沖洗樹脂吸附柱，收集乙醇洗脫液；乙醇洗脫液在60-80°C真空濃縮，回收溶劑，得 到銀杏葉提取物的濃縮液；干燥后得到的銀杏葉提取物。所述銀杏葉提取物的制備方法也可以為將干燥銀杏葉粉碎至10-20目，用濃度 為90%乙醇回流提取三次，將提取液合并，過濾，回收乙醇，對過濾液減壓濃縮至稠膏；在 上述稠膏中加入濃度為50-70%乙醇，加入量為0. 5-lml/g稠膏，攪勻后回流提取，過濾，沉 淀，同法再處理一次，合并濾液，攪拌，在濾液中加入濃度為2-3%殼聚糖溶液作為絮凝劑， 加入量為0. 02-0. 05ml/g稠膏，絮凝，靜置，離心分離；將前述離心分離得到的上清液，用濃 度為5-15%乙醇洗脫，得洗脫物，減壓回收乙醇，濃縮，再用水飽和乙酸乙酯萃取，回收有機 層中的溶劑后得濃縮液；將濃縮液真空干燥，得銀杏葉提取物。所述銀杏葉提取物的制備方法還可以為將銀杏葉干燥粉碎至80-100目粗粉，加 入20-40倍量的70%的乙醇回流提取三次，將提取液合并過濾，減壓回收至總體積的1/10 ； 濃縮液中加入相同體積的去離子水，陰涼環(huán)境中放置24小時，過濾或離心除去沉淀；充分 攪拌，往前述得到的濾液或上清液中加入濃氨水，調(diào)節(jié)PH至9，放置2小時，過濾或離心除去 沉淀雜質(zhì)；向前述濾液或上清液中加入鹽酸調(diào)節(jié)PH至3. 5-5. 5，加正己烷萃取4次；萃取后 的水液過大孔吸附樹脂柱，先以5倍柱床體積的去離子水洗脫，棄水洗液；再以8-10倍柱床 體積的80%-90%乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓揮去乙醇，之后用陶瓷膜超濾，截留分子 量為2-2. 5萬，超濾液經(jīng)減壓濃縮，濃縮液噴霧干燥后即得到銀杏葉提取物。本發(fā)明抗衰老組合物，包括螺旋藻多糖和銀杏葉提取物，螺旋藻多糖與銀杏葉提 取物組合的藥物對體內(nèi)和體外衰老的進(jìn)程都有很好的抑制作用，其抗衰老效果都顯著優(yōu)于 螺旋藻多糖和銀杏葉提取物單一使用。


圖1為本發(fā)明實施例所述復(fù)合螺旋藻多糖對超氧陰離子清除率試驗結(jié)果圖。
具體實施例方式本發(fā)明抗衰老組合物，包括螺旋藻多糖和銀杏葉提取物，所述的螺旋藻多糖和銀 杏葉提取物的質(zhì)量比為0. 35 1. 5 0.35 1.5。所述螺旋藻多糖與銀杏葉提取物的質(zhì)量比優(yōu)選為2 1。所述螺旋藻多糖優(yōu)選為一種水溶性雜多糖，其多糖質(zhì)量百分比含量優(yōu)選>93%。所述銀杏葉提取物，其總黃酮質(zhì)量百分比含量優(yōu)選> 24%，其萜內(nèi)酯質(zhì)量百分比 含量優(yōu)選彡6%。所述螺旋藻多糖的制備方法為準(zhǔn)確稱取鈍頂螺旋藻粉30. 0g,加入300mL石油醚脫脂，間歇攪拌24h。倒出石 油醚，放入通風(fēng)櫥，自然干燥至恒重。再經(jīng)脫脂的螺旋藻粉內(nèi)加入360mL(12倍體積)pH10 NaOH溶液，使用超聲波細(xì)胞粉碎機處理，將經(jīng)超聲波處理過的螺旋藻粉，放入80°C水浴鍋 內(nèi)，間歇攪拌，浸提4h。離心，棄濾渣，收集上清液。上清液內(nèi)加入5% TCA(三氯乙酸)至 無絮狀沉淀產(chǎn)生為止，4°C冰箱放置24h，離心，收集上清液。再加入5% TCA至無絮狀沉淀， 5小時后離心，收集上清液。在上清液內(nèi)加入5倍體積酒精，混勻，4°C冰箱放置24h。離心， 收集沉淀，冷凍干燥得螺旋藻多糖。所述銀杏葉提取物的制備方法可以為將干凈的銀杏葉按原料與萃取劑之比為 1 8-12(w/w)投料置提取罐中，浸提溫度60-80°C，提取時間2-4小時，浸提過程中，每小 時間歇攪拌原料2-3次，每次8-10分鐘，提取過程結(jié)束時，料液溫度控制在60-80°C，濾出料 液；向殘余銀杏葉中加入5-15倍的萃取劑進(jìn)行第二次提取，過程同上，合并兩次料液，待溫 度降到30°C以下后，精濾，去除180目以下的雜質(zhì)；將前述得到的料液泵入大孔樹脂吸附柱 上，用10-15倍柱體積的自來水洗滌去除雜質(zhì)后，用8-10倍的去離子水過柱，再用70%的乙 醇溶液沖洗樹脂吸附柱，收集乙醇洗脫液；乙醇洗脫液在60-80°C真空濃縮，回收溶劑，得 到銀杏葉提取物的濃縮液；干燥后得到的銀杏葉提取物。所述銀杏葉提取物的制備方法也可以為將干燥銀杏葉粉碎至10-20目，用濃度 為90%乙醇回流提取三次，將提取液合并，過濾，回收乙醇，對過濾液減壓濃縮至稠膏；在 上述稠膏中加入濃度為50-70%乙醇，加入量為0. 5-lml/g稠膏，攪勻后回流提取，過濾，沉 淀，同法再處理一次，合并濾液，攪拌，在濾液中加入濃度為2-3%殼聚糖溶液作為絮凝劑， 加入量為0. 02-0. 05ml/g稠膏，絮凝，靜置，離心分離；將前述離心分離得到的上清液，用濃 度為5-15%乙醇洗脫，得洗脫物，減壓回收乙醇，濃縮，再用水飽和乙酸乙酯萃取，回收有機 層中的溶劑后得濃縮液；將濃縮液真空干燥，得銀杏葉提取物。所述銀杏葉提取物的制備方法還可以為將銀杏葉干燥粉碎至80-100目粗粉，加 入20-40倍量的70%的乙醇回流提取三次，將提取液合并過濾，減壓回收至總體積的1/10 ； 濃縮液中加入相同體積的去離子水，陰涼環(huán)境中放置24小時，過濾或離心除去沉淀；充分 攪拌，往前述得到的濾液或上清液中加入濃氨水，調(diào)節(jié)PH至9，放置2小時，過濾或離心除去 沉淀雜質(zhì)；向前述濾液或上清液中加入鹽酸調(diào)節(jié)PH至3. 5-5. 5，加正己烷萃取4次；萃取后
7的水液過大孔吸附樹脂柱，先以5倍柱床體積的去離子水洗脫，棄水洗液；再以8-10倍柱床 體積的80% -90%乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓揮去乙醇，之后用陶瓷膜超濾，截留分子 量為2-2. 5萬，超濾液經(jīng)減壓濃縮，濃縮液噴霧干燥后即得到銀杏葉提取物。所述的螺旋藻多糖與銀杏葉提取物的最佳質(zhì)量比為2 1。所述的螺旋藻多糖為一種水溶性雜多糖，多糖含量> 93%，它主要由D-甘露糖、 D-葡萄糖、D-半乳糖和葡萄糖醛酸等通過a-型糖苷鍵連接而成，分子量約為12590D。所述的銀杏葉提取物，總黃酮含量> 24%，萜內(nèi)酯含量> 6%。本發(fā)明的組合藥物在對抑制由D-半乳糖致衰老小鼠方面有著顯著的效果，其步 驟如下1、試驗動物昆明種小白鼠2、小鼠分組與給藥劑量小鼠適應(yīng)性生長一周后，隨機分為空白對照組、模型組和 高、中、低劑量給藥組?？瞻讓φ战M與模型組每天灌服等體積的12. 5ml生理鹽水與羧甲 基纖維素鈉的等體積混合液。3、造模方法將D-半乳糖用生理鹽水配成0. 5%的溶液。在給藥的同時，模型組 與給藥組每天均無菌操作頸背皮下注射D-半乳糖125mg kg"1 cf1。空白對照同法皮下給 等體積生理鹽水，連續(xù)八周。4、試驗方法試驗結(jié)束后，小鼠稱重，無菌條件下頸動脈采血，3000r/min離心，收 集血清，等體積加入乙醇_氯仿(體積比5 3)混合液，震蕩2min，4000r/min離心5min 以除去蛋白質(zhì)，所得上清液即為SOD抽提液。取血后將小鼠放入75%酒精浸泡消毒，無菌操 作取出胸腺、脾臟、心臟，分別進(jìn)行脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)和心肌MDA含量以及大腦皮層脂質(zhì) 過氧化物含量等指標(biāo)的檢測。5、數(shù)據(jù)處理采用單因素方差分析(LSD)6、結(jié)果本試驗發(fā)現(xiàn)復(fù)合螺旋藻多糖組對致衰老小鼠的血清SOD活性提高和心、 腦MDA含量降低的藥效均優(yōu)越于單一成分組，表明含有相同官能團的螺旋藻多糖和銀杏葉 提取物復(fù)合使用，產(chǎn)生了協(xié)同增效作用。從試驗小鼠的腦中MDA含量來看，高劑量組螺旋 藻多糖銀杏葉提取物=2 1時，MDA含量最低，說明在該配比下的復(fù)合藥液清除自由基 的能力最高，使得過剩自由基攻擊細(xì)胞膜產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化物含量降到最低。從試驗小鼠 血清SOD的活性看，與單一成分組相比，復(fù)合組均能發(fā)揮協(xié)同增效作用，提高SOD活性，其 中高劑量的PSP GBE = 2 1時，小鼠血清SOD活力最高，酶活力比模型對照組提高了 38. 78%。因此，復(fù)合螺旋藻多糖與銀杏葉提取物對D-半乳糖致衰老小鼠抑制效果最優(yōu)配 比為PSP GBE = 2 1，而且高劑量的抗衰老效果最好，呈現(xiàn)劑量依賴性。本發(fā)明的組合藥物在抑制體外氧化方面有著顯著的效果，其步驟如下1、試驗材料本實驗室自提2、H202清除能力測定以pH 7. 4的磷酸鹽緩沖液配成lOmmol/L H202，取5ml上述溶液加入5ml樣品液 (不同濃度)，均勻混合用紫外可見分光光度計測定其在230nm處的吸光值~，試驗中以不 加H202溶液的樣品液的吸光值為以不加H202溶液的樣品溶液的吸光值為A2。清除率 (% ) = [A0-(ArA2)]/A03、超氧陰離子清除試驗
取0. 05mol/L pH 8. 2的Tris-HCl緩沖液4. 5ml于試管中，置25 "C水浴中預(yù) 熱20min。分別加入不同體積的待測液后，加入2. 5mmol/L鄰苯三酚(lOmmol/L HC1配 置)0. 4ml，混勻后在25°C水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)4min，立即加入8moL/L HC12滴終止反應(yīng)，蒸餾水 調(diào)零，在290nm處測定吸光度值?？瞻捉M以對應(yīng)體積的蒸餾水代替不同體積的樣品溶液，樣品對超氧陰離子的清除 率計算公式為清除率(％) = (A空白-A樣品)/A空白X1004、羥自由基的產(chǎn)生及清除活性測定取0. 15mol/L pH 7. 4 的磷酸鹽緩沖液 1. 0ml，40 ii g/ml 番紅花 1. 0ml，0. 945mmol/ L EDTA-Fel. 0ml (新鮮配制)，樣品溶液0. 5ml, 3% H2021. 0ml，混合后在37°C水浴中反應(yīng) 30min,在520nm處測定吸光度As，空白組以0. 5蒸餾水代替樣品，測定吸光度A0，對照組以 1. 5ml蒸餾水代替H202和樣品，測定吸光度A，用3. 5ml蒸餾水代替番紅花、EDTA_Fe、H202和 樣品，1.0ml磷酸鹽緩沖液調(diào)零。清除率(％) = (As-A0)/(A-A0)5、結(jié)果從試驗結(jié)果可以看出，對三種自由基離子H202、超氧陰離子自由基、羥基 自由基的清除率，螺旋藻多糖與銀杏葉提取物復(fù)合使用的清除率高于三種單一組的清除 率，而且不同的復(fù)合配比對最終的清除率有很大影響。對羥基自由基的清除率，PSP GBE =2 1時，在所試驗的濃度范圍內(nèi)，清除率均高于任何組，說明螺旋藻多糖與銀杏葉提取 物由于含有相似的官能團，產(chǎn)生了疊加的復(fù)合效應(yīng)。與對照組相比，螺旋藻多糖組、銀杏黃 酮組、銀杏內(nèi)酯組、復(fù)合藥物組的清除率分別比空白對照組提高了 45.82% (P<0.01)、 9. 63% (P > 0. 05)、46. 28% (P < 0. 01)和 68. 04% (P < 0. 01)。實施例1 昆明種雄性小白鼠50只，體重20 25g。隨機分為空白對照組、模型組、螺旋藻多 糖組(高、中、低劑量)、銀杏黃酮組(高、中、低劑量)、銀杏內(nèi)酯組(高、中、低劑量)、組合 藥物組(高、中、低劑量的螺旋藻多糖銀杏葉提取物=1 1、2 1、1 2)。將D-半乳 糖用生理鹽水配成0. 5 %的溶液。在給藥的同時，模型組與給藥組每天均無菌操作頸背皮下 注射D-半乳糖USmgAg—^cf1?？瞻讓φ胀ㄆは陆o等體積生理鹽水，連續(xù)八周。試驗結(jié) 束后，小鼠稱重，無菌條件下頸動脈采血，3000r/min離心，收集血清，等體積加入乙醇-氯 仿(體積比5 3)混合液，震蕩2min，4000r/min離心5min以除去蛋白質(zhì)，所得上清液即 為SOD抽提液。取血后將小鼠放入75%酒精浸泡消毒，無菌操作取出胸腺、脾臟、心臟，分別 進(jìn)行脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)和心肌MDA含量以及大腦皮層脂質(zhì)過氧化物含量等指標(biāo)的檢測。胸腺指數(shù)=胸腺重(mg) /體重(g)脾臟指數(shù)=脾臟重(mg) /體重(g)試驗結(jié)果見表1。表1復(fù)合螺旋藻多糖對小鼠胸腺指數(shù)的影響 注與模型組相比，*P< 0. 05，**P < 0. 01表2復(fù)合螺旋藻多糖對小鼠脾指數(shù)的影響 注與模型組相比，*P< 0. 05，**P < 0. 01實施例2 如圖1所示，為本發(fā)明實施例所述復(fù)合螺旋藻多糖對超氧陰離子清除率實驗結(jié)果 圖。其中，超氧陰離子清除試驗為取0. 05mol/L pH 8. 2的Tris-HCl緩沖液4. 5ml于試管中，置25 "C水浴中預(yù) 熱20min。分別加入不同體積的待測液后，加入2. 5mmol/L鄰苯三酚(lOmmol/L HC1配 置)0. 4ml，混勻后在25°C水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)4min，立即加入8mol/LHCl 2滴終止反應(yīng)，蒸餾水 調(diào)零，在290nm處測定吸光度值?？瞻捉M以對應(yīng)體積的蒸餾水代替不同體積的樣品溶液，樣品對超氧陰離子的清除 率計算公式為清除率(％ ) = (A空白-A樣品)/A空白X100。
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以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任 何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等 效實施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實例所作 的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。所有上述為這一知識產(chǎn)權(quán)的首要實施組合物，并沒有設(shè)定限制以其它形式實施這 種新型組合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將利用這一重要信息，對上述內(nèi)容修改，以實現(xiàn)類似的執(zhí)行 情況。但是，所有基于本發(fā)明的修改或改造新產(chǎn)品和/或方法，屬于保留的權(quán)利。
權(quán)利要求
一種抗衰老組合物，其特征在于，包括螺旋藻多糖和銀杏葉提取物，所述的螺旋藻多糖和銀杏葉提取物的質(zhì)量比為0.35～1.5∶0.35～1.5。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述抗衰老組合物，其特征在于，所述螺旋藻多糖與銀杏葉提取物 的質(zhì)量比為2 1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述抗衰老組合物，其特征在于，所述螺旋藻多糖為一種水溶性雜 多糖，其多糖質(zhì)量百分比含量> 93%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述抗衰老組合物，其特征在于，所述銀杏葉提取物，其總黃酮質(zhì)量 百分比含量> 24%，其萜內(nèi)酯質(zhì)量百分比含量> 6%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 4中任一電所述抗衰老組合物，其特征在于，所述螺旋藻多糖的制 備方法為準(zhǔn)確稱取鈍頂螺旋藻粉30. 0g,加入300mL石油醚脫脂，間歇攪拌24h ；倒出石油醚，放入通風(fēng)櫥，自然干燥至恒重；再經(jīng)脫脂的螺旋藻粉內(nèi)加入360mL pHIO的NaOH溶液，使用超聲波細(xì)胞粉碎機處理，將 經(jīng)超聲波處理過的螺旋藻粉，放入80°C水浴鍋內(nèi)，間歇攪拌，浸提4h ；離心，棄濾渣，收集上清液；上清液內(nèi)加入5%三氯乙酸至無絮狀沉淀產(chǎn)生為止，4°C冰箱放置24h，離心，收集上清液；再加入5%三氯乙酸至無絮狀沉淀，5小時后離心，收集上清液；在上清液內(nèi)加入5倍體積酒精，混勻，4°C冰箱放置24h。離心，收集沉淀，冷凍干燥得螺 旋藻多糖。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 5中任一電所述抗衰老組合物，其特征在于，所述銀杏葉提取物 的制備方法為將干凈的銀杏葉按原料與萃取劑之比為1 8-12 (w/w)投料置提取罐中，浸 提溫度60-80°C，提取時間2-4小時，浸提過程中，每小時間歇攪拌原料2-3次，每次8_10分 鐘，提取過程結(jié)束時，料液溫度控制在60-80°C，濾出料液；向殘余銀杏葉中加入5-15倍的 萃取劑進(jìn)行第二次提取，過程同上，合并兩次料液，待溫度降到30°C以下后，精濾，去除180 目以下的雜質(zhì)；將前述得到的料液泵入大孔樹脂吸附柱上，用10-15倍柱體積的自來水洗 滌去除雜質(zhì)后，用8-10倍的去離子水過柱，再用70%的乙醇溶液沖洗樹脂吸附柱，收集乙 醇洗脫液；乙醇洗脫液在60-80°C真空濃縮，回收溶劑，得到銀杏葉提取物的濃縮液；干燥 后得到的銀杏葉提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1 5中任一電所述抗衰老組合物，其特征在于，所述銀杏葉提取物的 制備方法為將干燥銀杏葉粉碎至10-20目，用濃度為90%乙醇回流提取三次，將提取液合 并，過濾，回收乙醇，對過濾液減壓濃縮至稠膏；在上述稠膏中加入濃度為50-70%乙醇，加 入量為0. 5-lml/g稠膏，攪勻后回流提取，過濾，沉淀，同法再處理一次，合并濾液，攪拌，在 濾液中加入濃度為2-3%殼聚糖溶液作為絮凝劑，加入量為0. 02-0. 05ml/g稠膏，絮凝，靜 置，離心分離；將前述離心分離得到的上清液，用濃度為5-15 %乙醇洗脫，得洗脫物，減壓 回收乙醇，濃縮，再用水飽和乙酸乙酯萃取，回收有機層中的溶劑后得濃縮液；將濃縮液真 空干燥，得銀杏葉提取物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1 5中任一電所述抗衰老組合物，其特征在于，所述銀杏葉提取物的 制備方法為將銀杏葉干燥粉碎至80-100目粗粉，加入20-40倍量的70%的乙醇回流提取三次，將提取液合并過濾，減壓回收至總體積的1/10 ；濃縮液中加入相同體積的去離子水， 陰涼環(huán)境中放置24小時，過濾或離心除去沉淀；充分?jǐn)嚢?，往前述得到的濾液或上清液中 加入濃氨水，調(diào)節(jié)PH至9，放置2小時，過濾或離心除去沉淀雜質(zhì)；向前述濾液或上清液中 加入鹽酸調(diào)節(jié)PH至3. 5-5. 5，加正己烷萃取4次；萃取后的水液過大孔吸附樹脂柱，先以5 倍柱床體積的去離子水洗脫，棄水洗液；再以8-10倍柱床體積的80% -90%乙醇洗脫，收集 醇洗脫液，減壓揮去乙醇，之后用陶瓷膜超濾，截留分子量為2-2. 5萬，超濾液經(jīng)減壓濃縮， 濃縮液噴霧干燥后即得到銀杏葉提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗衰老組合物，包括螺旋藻多糖和銀杏葉提取物，所述的螺旋藻多糖和銀杏葉提取物的質(zhì)量比為0.35～1.5∶0.35～1.5。所述螺旋藻多糖與銀杏葉提取物的質(zhì)量比優(yōu)選為2∶1。所述螺旋藻多糖為一種水溶性雜多糖，其多糖質(zhì)量百分比含量≥93％。所述銀杏葉提取物，其總黃酮質(zhì)量百分比含量≥24％，其萜內(nèi)酯質(zhì)量百分比含量≥6％。本發(fā)明所抗衰老組合物，包括螺旋藻多糖和銀杏葉提取物，利用螺旋藻多糖與銀杏葉提取物都含有羥基或酚羥基結(jié)構(gòu)，通過組合能發(fā)揮協(xié)同增效作用，顯著提高抗衰老的效果。
文檔編號A61K127/00GK101856374SQ201010197688
公開日2010年10月13日 申請日期2010年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月11日
發(fā)明者王清吉, 高玲 申請人:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)