專利名稱：一種羅勒提取物的精制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的羅勒藥材的提取，尤其是精制后的羅勒提取物，在抗炎及防治血栓 形成等心血管疾病的醫(yī)治中有突出的效果
背景技術(shù)：
羅勒Ocimum basilicum L.，英文名稱Sweet Basil，是唇形科羅勒屬一年生草本 植物，《中藥大辭典》謂其有疏風(fēng)解表、化濕和中、行氣活血、強心安神、解毒消腫等功效。羅 勒作為藥用的歷史可以追溯到古希臘和羅馬時代，其葉水煎劑可用于治療心血管疾病、糖 尿病、疼痛、發(fā)燒、嘔吐、支氣管炎、耳痛、關(guān)節(jié)炎和哮喘。其葉汁可用于治療慢性發(fā)燒、出血、 痢疾和消化不良，也可用于治療癬菌病和皮膚疾病。據(jù)文獻報道，羅勒全草含揮發(fā)油，主要成分為丁子香酚(70% )包括甲基丁子香 酚和丁子香素，有助血液循環(huán)，加強新陳代謝，令呆滯皮膚恢復(fù)健康等作用，與藥理學(xué)活性 有關(guān)的成分有三萜類、生物堿、皂甙和黃酮類等。羅勒的種子含精油(含有約17%亞麻酸 和50%以上的亞油酸)。國內(nèi)有關(guān)羅勒提取精加工方法的披露較少，用于疾病治療有些報道，如專利公開 號為CN1078644的“丁香羅勒乳膏及其制造工藝和用途”的專利，主要有用于治療疥瘡和陰 虱；專利公開號為CN1823913的“復(fù)方丁香羅勒制劑”的專利，主要用于治療腹瀉；專利公開 號為CN1498625的“羅勒多糖在制備治療抗腫瘤轉(zhuǎn)移的藥品中的應(yīng)用”的專利，主要用于治 療腫瘤轉(zhuǎn)移等。用于治療疥瘡的丁香羅勒油已被收入中華人民共和國國家標準。但在國內(nèi) 未見羅勒的精制提取及其精制物用于治療心血管疾病的相關(guān)信息。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于采用該精制的方法，使羅勒提取物產(chǎn)生極好的臨床效果，即更 好的發(fā)揮抗炎、抗血栓作用，為本地藥資源的開發(fā)提供有價值的實驗數(shù)據(jù)。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種羅勒提取物的精制方法，包括以下步驟；其1將羅勒干草切段l-2cm，用8-10倍量的蒸餾水浸泡l_2h，經(jīng)超聲振蕩提取，過 濾，合并濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，溫度為55-70°C;將濃縮液與正丁醇以1 1體 積比實施萃取，用力振搖，靜止2-4h后，分離正丁醇層，連續(xù)萃取3-4次，合并正丁醇層溶 液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓回收正丁醇，溫度為85-100°C ；將濃縮液進行冷凍干燥，即得羅 勒正丁醇提取物；其2將羅勒干草切段l-2cm，用8-10倍量的75 %或95 %的乙醇溶液浸泡Ih后， 經(jīng)超聲振蕩提取，過濾，合并濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，溫度為50-60°C，回收乙醇 得流浸膏；用1倍量的蒸餾水溶解浸膏，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯進行萃取，其體積比 為1 1 ；用力振搖靜止2-4h后，分離有機層，繼續(xù)萃取2-3次，直至無色，合并乙酸乙酯層， 置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，回收乙酸乙酯，溫度為35-50°C ；再將濃縮液進行冷凍干燥，即 得羅勒乙酸乙酯提取物；其次將回收的乙酸乙酯殘液以1 1體積比繼續(xù)用正丁醇進行萃取，用力振搖后，靜止2-4h，分出正丁醇層，連續(xù)萃取3-4次，合并正丁醇層，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀中減壓濃縮，回收正丁醇，溫度為85-100°C ；將濃縮液進行冷凍干燥，即得羅勒正丁醇提 取物；其3將羅勒干草切段l-2cm，置于連續(xù)加熱的回流提取器中，并加入8-10倍量石油 醚，加熱到60-90°C，煎煮2-3次，每次l-3h，棄濾液，將末次殘渣的石油醚完全揮發(fā)后，加入 8-10倍量氯仿，加熱到60-70°C，煎煮2-3次，每次l_3h，過濾，合并濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 中減壓濃縮，回收氯仿，溫度為35-50°C ；再將濃縮液進行冷凍干燥，即得羅勒氯仿提取物； 其次將回收的氯仿殘渣，加入8-10倍量乙酸乙酯，加熱75-90°C，煎煮2-3次，每次l_3h，過 濾，合并濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮回收乙酸乙酯，溫度為35-50°C ；將濃縮液進行冷 凍干燥，即得羅勒乙酸乙酯提取物。
所述的精制方法，采用超聲振蕩提取為2-3次，每次30min ；使用頻率為25Hz，控制 溫度為< 60°C。所述的精制方法，精制后的提取物比直接用水或乙醇進行提取的粗提取物具有更 好的抗炎、抗血栓等防治心血管疾病的作用。所述的精制方法，選用的試劑均為市售產(chǎn)品。本發(fā)明來源于國家自然科學(xué)基金資助項目，該項目首次研究了新疆羅勒的化學(xué)成 分，運用HPLC法測定了蘆丁的含量，分離得到6個化合物，乙醇提取氯仿可溶部分分離得到 了 谷留醇、胡蘿卜苷、豆留醇、豆留醇_3-β-D-葡萄糖苷留體類化合物；乙醇提取正丁 醇可溶部分分離得到了蘆丁和槲皮素-3-β -D-葡萄糖苷黃酮類化合物；并對其基源進行 了生藥學(xué)的初步鑒定，認為新疆羅勒含有腺毛，花冠顏色為紫色，無草酸鈣結(jié)晶，毛茸類型 與其他羅勒有區(qū)別；并通過藥理學(xué)實驗發(fā)現(xiàn)羅勒的水及乙醇提取物具有抗血栓、調(diào)血脂、降 血壓、保護心臟等防治心血管疾病的作用。本發(fā)明方法的重要精制步驟為將以水或乙醇作為溶劑進行提取的羅勒提取物分別用石油醚，氯仿，乙酸乙酯進 行萃取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，回收乙酸乙酯，進行冷凍干燥后，即得到精制的羅勒乙酸乙酯提取物。將回收的乙酸乙酯殘液以1 1體積比繼續(xù)用正丁醇進行萃取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，回收正 丁醇，進行冷凍干燥，即得到精制的羅勒正丁醇提取物。將回收的氯仿殘渣，加入8-10倍量乙酸乙酯，加熱、煎煮、合并濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀中減壓濃縮回收乙酸乙酯，冷凍干燥，即得精制的羅勒乙酸乙酯提取物。本發(fā)明方法是羅勒精制提取物在抗炎及抗血栓作用上明顯優(yōu)于直接用水或乙醇 進行提取的粗提取物，在提高藥效、減少用藥劑量方面顯效，在防治心血管疾病方面具有良 好的應(yīng)用前景，彰顯技術(shù)進步。
具體實施例方式本發(fā)明對照實施例作進一步說明。實施例1將羅勒干草切段約1cm，用8倍量蒸餾水浸泡Ih后，連續(xù)超聲振蕩提取2次，頻 率為25Hz，溫度< 60°C，每次30min，過濾，合并濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，溫度為 60°C ；將濃縮液用正丁醇進行萃取，正丁醇與水體積比為1 1，用力振搖后，靜止2小時，分出正丁醇層，連續(xù)萃取3次，合并正丁醇層，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓回收正丁醇，溫度為 900C ；將濃縮液進行冷凍干燥，其溫度為_56°C，時間為24h，即得羅勒正丁醇提取物實施例2將羅勒干草切段約lcm，用10倍量的75%的乙醇溶液浸泡Ih后，連續(xù)超聲振蕩提 取3次，頻率為25Hz，溫度< 50°C，每次30min，過濾，合并濾液，減壓濃縮溫度為56°C，回收 乙醇后得流浸膏；用1倍量蒸餾水分散浸膏后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯進行萃取，有 機溶劑與的水體積比為1 1，用力振搖后，靜止2小時，分出有機層，連續(xù)萃取，直至有機層 最終為無色；最后合并乙酸乙酯層，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓回收乙酸乙酯，溫度為40°C ；將 濃縮液進行冷凍干燥，其溫度為_56°C，時間為24h，即得羅勒乙酸乙酯提取物。實施例3將實施例2中的羅勒用乙酸乙酯萃取后，將殘液繼續(xù)用正丁醇進行萃取，正丁醇 與水的體積比為1 1，用力振搖后，靜止2小時，分出正丁醇層，連續(xù)萃取3次，合并正丁 醇層，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓回收正丁醇，溫度為85°C，將濃縮液進行冷凍干燥，其溫度 為-56°C，時間為24h，即得羅勒正丁醇提取物。實施例4將羅勒干草切碎約1cm，置于連續(xù)加熱回流提取器中，并加入9倍量石油醚，加熱 80°C，煎煮3次，每次2h，棄濾液，將末次殘渣的石油醚揮發(fā)完全后，加入8倍量氯仿加熱 到65°C，煎煮3次，每次2h，過濾，合并濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮回收氯仿，溫度為 450C ；將濃縮液進行冷凍干燥，其溫度為_56°C，時間為24h，即得羅勒氯仿提取物。實施例5將實施例4中羅勒殘渣的氯仿?lián)]發(fā)完全后，加入10倍量乙酸乙酯加熱85°C，煎煮 2次，每次1. 5h，過濾，合并濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮回收乙酸乙酯，溫度為45°C ； 濃縮液進行冷凍干燥，其溫度為_56°C，時間為24h，即得羅勒乙酸乙酯提取物。實驗動物一組用實施例1、2的方法獲取羅勒精制提取物；實驗材料SD大鼠90只，體重200 250g，雌雄兼半，隨機分為9組，即生理鹽水組，阿司匹 林組(5mg · kg—1)，復(fù)方丹參組(300mg · kg—1)，OBL-乙醇高、低劑量組，OBL-正丁醇高、低劑 量組，OBL-乙酸乙酯高、低劑量組(300、IOOmg · kg-1)，每組10只。實驗步驟大鼠灌胃給藥，給藥容量為IOml · kg—1，每天給藥1次，連續(xù)給藥15d，末次給藥Ih 后摘取眼球取血，用3. 8%枸櫞酸鈉按照取血量與抗凝劑9 1抗凝處理，1000r/min離心 5min，吸出上層富含血小板血漿(PRP)，余下的血液3000r/min離心lOmin，制備貧血小板血 漿(PRP)，使血小板數(shù)至(350 450) X 109/L，取0. 2ml PRP至比濁管中，37°C溫育5min，隨 后在PRP中加入一定量的ADP或凝血酶，采用LBY-NJ血液凝聚儀測定對照管和測試管5min 內(nèi)的最大聚集率，計算出藥物對血小板聚集的抑制率，其聚集的抑制百分率=(生理鹽水 組聚集百分率_各給藥組聚集百分率)/生理鹽水組聚集百分率X 100 %。數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計軟件處理，所有結(jié)果用表示，采用單因素方差分析和SNK兩 兩比較，P < 0. 05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
本發(fā)明提取物對ADP、凝血酶誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集的影響，見表1。表 1
mwADP凝血酶
一_聚集率(%)抑制率(%)聚集率(%)抑制率(。Γ
生理鹽水55.07 士 3.85~51.37+2.87—
阿司匹林33·19±3. 09α39.7334.25±3.37.80
復(fù)方丹參37. 17±2. 36α32.5033. 03土 1.94Α40.02
OBL-乙醇高31.67±2.04α42.4929.99±2.65Α45.54
OBL-乙醇低38.61±2.95‘29.8836.35±1.65Α34.00
OBL-正丁醇高26.44±1.9α51.9923.86±1.91Α56.68
OBL-正丁醇低32.71±1.61‘40.6028.71±1.72Α47.87
OBL-乙酸乙酯高21.17±2.61.5620.04±1.80Α63.60
OBL-乙酸乙酯低29. 12±2. 51Α47. 12_29. 49±3. 88‘46.45注與生理鹽水組比較ΑΡ < 0. 01上表數(shù)據(jù)表明與生理鹽水組相比，羅勒各給藥組對ADP和凝血酶誘導(dǎo)的血小 板聚集均有明顯的抑制作用(P < 0.01)，其中正丁醇及乙酸乙酯提取部位的作用強度明 顯高于阿司匹林和復(fù)方丹參組，對ADP、凝血酶誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集的抑制率分別為 51.99%,61.56%,56. 68%,63. 60%，均高于乙醇組，表明維藥羅勒正丁醇及乙酸乙酯提取 部位對大鼠ADP和凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集具有明顯的抑制作用，可明顯降低血小板聚集 率，抑制血小板依賴性血栓的形成。實驗動物二組用實施例1、2的方法獲取羅勒精制提取物；實驗材料SD大鼠90只，體重250 300g，雌雄兼半，隨機分為9組，即生理鹽水組，阿司匹 林組(5mg · kg—1)，復(fù)方丹參組(300mg · kg—1)，OBL-乙醇高、低劑量組，OBL-正丁醇高、低劑 量組，OBL-乙酸乙酯高、低劑量組(300、IOOmg · kg-1)，每組10只。實驗步驟大鼠灌胃給藥，給藥容量為IOml · kg—1，每天給藥1次，連續(xù)給藥12d，實驗前禁食 12h，給藥后Ih進行實驗。給鼠腹腔注射1.5%戊巴比妥鈉35mg/kg麻醉，仰臥位固定于 手術(shù)板上，頸部正中切口，分離氣管，并分離右側(cè)頸總動脈和左側(cè)頸外靜脈，取一根由三段 聚乙烯管組成的套管，中段放入一根長7cm已稱重的4號手術(shù)絲線，將肝素生理鹽水溶液 (50U · πιΓ1)充滿聚乙烯管，結(jié)扎左頸外靜脈遠心端，以眼科剪小心于頸外靜脈遠心端剪開 一小口，小心將聚乙烯管插入，1號手術(shù)絲線結(jié)扎固定；結(jié)扎右頸總動脈遠心端，以動脈夾 夾閉近心端，以眼科剪于右頸總動脈遠心端剪開一小口，小心將聚乙烯管插入，以1號手術(shù) 絲線結(jié)扎固定。打開動脈夾，(將聚乙烯管的一端插入左頸外靜脈后，另一端塑料管注入 肝素(50U · mno. 2ml抗凝，然后再將此端插入右側(cè)頸總動脈)讓血液從右側(cè)頸總動脈流 入聚乙烯管內(nèi)，返回左側(cè)頸外靜脈，血小板遇絲線聚集形成血栓。動-靜脈血流旁路開放 15min后，中斷血流，迅速取出絲線稱重(濕重)，60°C干燥lh，冷卻后立即稱重，總重量減去絲線重量，即為血栓干重，并計算血栓抑制率，其抑制率=(生理鹽水組血栓干重-給藥組 血栓干重)/生理鹽水組血栓干重X 100 %。數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計軟件處理，所有結(jié)果用Jtl5表示，采用單因素方差分析和SNK兩 兩比較，P < 0. 05為有統(tǒng)計學(xué)意義。本發(fā)明提取物對大鼠動_靜脈旁路血栓形成的影響()，見表2表 權(quán)利要求
一種羅勒提取物的精制方法，其特征在于包括以下步驟；其1將羅勒干草切段1 2cm，用8 10倍量的蒸餾水浸泡1 2h，經(jīng)超聲振蕩提取，過濾，合并濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，溫度為55 70℃；將濃縮液與正丁醇以1∶1體積比實施萃取，用力振搖，靜止2 4h后，分離正丁醇層，連續(xù)萃取3 4次，合并正丁醇層溶液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓回收正丁醇，溫度為85 100℃；將濃縮液進行冷凍干燥，即得羅勒正丁醇提取物；其2將羅勒干草切段1 2cm，用8 10倍量的75％或95％的乙醇溶液浸泡1h后，經(jīng)超聲振蕩提取，過濾，合并濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，溫度為50 60℃，回收乙醇得流浸膏；用1倍量的蒸餾水溶解浸膏，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯進行萃取，其體積比為1∶1；用力振搖靜止2 4h后，分離有機層，繼續(xù)萃取2 3次，直至無色，合并乙酸乙酯層，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，回收乙酸乙酯，溫度為35 50℃；再將濃縮液進行冷凍干燥，即得羅勒乙酸乙酯提取物；其次將回收的乙酸乙酯殘液以1∶1體積比繼續(xù)用正丁醇進行萃取，用力振搖后，靜止2 4h，分出正丁醇層，連續(xù)萃取3 4次，合并正丁醇層，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，回收正丁醇，溫度為85 100℃；將濃縮液進行冷凍干燥，即得羅勒正丁醇提取物；其3將羅勒干草切段1 2cm，置于連續(xù)加熱的回流提取器中，并加入8 10倍量石油醚，加熱到60 90℃，煎煮2 3次，每次1 3h，棄濾液，將末次殘渣的石油醚完全揮發(fā)后，加入8 10倍量氯仿，加熱到60 70℃，煎煮2 3次，每次1 3h，過濾，合并濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，回收氯仿，溫度為35 50℃；再將濃縮液進行冷凍干燥，即得羅勒氯仿提取物；其次將回收的氯仿殘渣，加入8 10倍量乙酸乙酯，加熱75 90℃，煎煮2 3次，每次1 3h，過濾，合并濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮回收乙酸乙酯，溫度為35 50℃；將濃縮液進行冷凍干燥，即得羅勒乙酸乙酯提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的精制方法，其特征在于采用超聲振蕩提取為2-3次，每次 30min ；使用頻率為25Hz，控制溫度為< 60°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的精制方法，其特征在于精制后的提取物比直接用水或乙醇 進行提取的粗提取物具有更好的抗炎、抗血栓等防治心血管疾病的作用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的精制方法，其特征在于選用的試劑均為市售產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種羅勒提取物的精制方法，主要的步驟包括將羅勒切段約1-2cm，用8-10倍量蒸餾水或60％至95％的乙醇回流或超聲提取后，回收溶劑得流浸膏，將流浸膏用水分散后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，回收各溶劑后，得到羅勒的乙酸乙酯或正丁醇提取物；或?qū)⒘_勒藥材直接放入連續(xù)加熱回流提取器中，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯回流提取，減壓濃縮回收溶劑，冷凍干燥后即得羅勒的氯仿或乙酸乙酯提取物。采用超聲振蕩提取為2-3次，每次30min，使用頻率為25Hz，控制溫度為＜60℃。精制后的提取物比直接用水或乙醇進行提取的粗提取物具有更好的抗炎、抗血栓等防治心血管疾病的作用。
文檔編號A61P7/02GK101961376SQ20101023516
公開日2011年2月2日 申請日期2010年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月23日
發(fā)明者何志琴, 依巴代提·吐乎提, 加米拉·托乎提, 古蘭·托來西, 周文婷, 艾尼瓦爾·吾買爾 申請人:新疆醫(yī)科大學(xué)