專利名稱：一種梔子提取物在制備藥物中的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種梔子提取物的新用途，特別是涉及ー種梔子提取物在制備治療心肌梗死、冠心病、心肌缺血、以及心律失常藥物中的用途?！?br> 背景技術(shù)：
梔子,菌草科植物山桅Gardenia iasminoides Ellis的果實(shí)、性苦寒、無(wú)毒。常綠灌木，高O. 5 2米，幼枝有細(xì)毛。常生于低山溫暖的疏林中或荒坡、溝旁、路邊。根、葉、花均供藥用。入心、肝、肺、胃經(jīng)。能清熱瀉火涼血。臨床用于急性黃疸型肝炎、止血、扭挫傷等疾病。梔子主要含有含黃酮類梔子素、果膠、鞣質(zhì)、藏紅花素、藏紅花酸、D-甘露醇、廿九烷、β-谷留醇。另含多種具環(huán)臭蟻醛結(jié)構(gòu)的甙桅子甙、去羥桅子甙泊素-1-葡萄糖甙，格尼泊素-1-β -D-龍膽ニ糖甙及小量的山桅甙。梔子的藥理作用很豐富①利膽作用梔子水提取液及醇提取液給予家兔ロ服，對(duì)輸膽管導(dǎo)出的膽汁量及固形成分無(wú)影響，但有人用同樣制劑注射于家免，15 30分鐘膽汁分泌開(kāi)始增加，持續(xù)I小時(shí)以上。給兔靜脈注射藏紅花素和藏紅花酸鈉后，膽汁分泌量增カロ。梔子水煎劑或沖服劑給人口服后作膽囊拍片，證明服藥后20及40分鐘膽囊有明顯的收縮作用。家兔總輸膽管結(jié)扎后，ロ服梔子水提取液則血中膽紅素減少，用藥愈多，減少愈顯著，尤其連續(xù)服用適量藥物以后結(jié)扎，所得效果最佳，醇提取液亦具有相同的作用，但較水提取液作用稍弱。梔子醇提取液注射于家免，2小時(shí)血中膽紅素較對(duì)照組稍增加，6小時(shí)后較對(duì)照組低，24 48小時(shí)后明顯減少，藏紅花素及藏紅花酸鈉亦有同樣作用。在總膽管結(jié)扎的家兔，注射醇提取液，24小時(shí)末梢淋巴液中膽紅素減少，藏紅花素及藏紅花酸鈉亦有同樣作用。梔子可用于膽道炎癥引起的黃疸。②鎮(zhèn)靜作用給予小白鼠皮下注射梔子流浸膏后，可見(jiàn)其自發(fā)活動(dòng)減少閉目、低頭、肌肉松弛，井能對(duì)抗戊四氮所致的驚厥，而不能對(duì)抗士的寧引起的驚厥，但能減少其死亡率，以流浸膏灰分作對(duì)照則未見(jiàn)以上作用。也有用以消除失眠及過(guò)度疲勞者。梔子煎劑和醇提取液對(duì)麻醉或不麻醉貓、大白鼠和兔，不論ロ服或腹腔注射，均有持久性降壓作用，靜脈注射降壓迅速而維持時(shí)間短，其降壓部位似在延腦副交感中樞。③抗微生物作用。梔子水浸液對(duì)許蘭氏黃癬菌，腹股溝表皮癬菌、紅色表皮癬菌等多種真菌有抑制作用，其水煎劑15毫克/毫升能殺死鉤端螺旋體，在體外，梔子煎劑能使血吸蟲(chóng)停止活動(dòng)，煎劑對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)無(wú)抑制作用。④其他作用梔子醇提取液對(duì)家兔及大白鼠離體腸管平滑肌，具有低濃度興奮，高濃度抑制的作用。去羥梔子甙對(duì)小鼠有瀉下作用，其提取物制成油膏，可加速軟組織的愈合?！独坠谥苏摗?凡使梔子，先去皮須了，取人，以甘草水浸一宿，漉出焙干，搗篩如赤金末用。"

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于公開(kāi)ー種梔子提取物在制備治療心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常藥物中的用途。
本發(fā)明目的是通過(guò)如下方案實(shí)現(xiàn)的梔子提取物在制備治療心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)術(shù)后再狹窄造成的急性心肌缺血藥物中的應(yīng)用梔子提取物在治療心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)術(shù)后再狹窄造成的急性心肌缺血是指保護(hù)心肌和心肌細(xì)胞損傷或者對(duì)抗心肌細(xì)胞的炎性病變、氧化損傷。本發(fā)明梔子提取物可以通過(guò)如下方法制備的取梔子100重量份，加1000-2000體積份的水，加熱煮沸O. 5-2小時(shí)，分別提取2
次。將兩次所得藥液合并，進(jìn)行薄膜蒸發(fā)濃縮至密度為1.25g/ml(60°C測(cè)定)。繼續(xù)進(jìn)行水浴蒸發(fā)至密度為I. 30-1. 40g/ml (60°C測(cè)定)，放置于干燥箱中，進(jìn)行真空減壓干燥至恒·重，得梔子提取物。本發(fā)明梔子提取物優(yōu)選通過(guò)如下方法制備取梔子100重量份，加1500體積份的水，加熱煮沸I小時(shí)，分別提取2次。將兩次所得藥液合并，進(jìn)行薄膜蒸發(fā)濃縮至密度為I. 20-1. 30g/ml (60°C測(cè)定)。繼續(xù)進(jìn)行水浴蒸發(fā)至密度為I. 35g/ml (60°C測(cè)定)，放置于干燥箱中，進(jìn)行真空減壓干燥至恒重，得梔子提取物。本發(fā)明梔子提取物還優(yōu)選通過(guò)如下方法制備取梔子100重量份，加1200體積份的水，加熱煮沸O. 8小時(shí)，分別提取2次。將兩次所得藥液合并，進(jìn)行薄膜蒸發(fā)濃縮后，濃縮至密度為1.25g/ml(60°C測(cè)定)。繼續(xù)進(jìn)行水浴蒸發(fā)至密度為I. 35g/ml (60°C測(cè)定)，放置于干燥箱中，進(jìn)行真空減壓干燥至恒重，得桅子提取物。本發(fā)明藥物提取物還優(yōu)選通過(guò)如下方法制備的取梔子100重量份，加1800體積份的水，加熱煮沸I. 5小時(shí)，分別提取2次。將兩次所得藥液合并，進(jìn)行薄膜蒸發(fā)濃縮至密度為I. 25g/ml (60°C測(cè)定)。繼續(xù)進(jìn)行水浴蒸發(fā)至密度為I. 35g/ml (60°C測(cè)定)，放置于干燥箱中，進(jìn)行真空減壓干燥至恒重，得梔子提取物。本發(fā)明制備得到的梔子提取物，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)エ藝制備得到臨床上可接受的劑型。所述臨床上可接受的劑型可以是片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、散劑、丸劑、滴丸劑、顆粒劑、ロ服液體制劑、凍干粉針劑、注射劑、速釋制劑或緩釋制劑。其中，每單位制劑中含桅子提取物有效劑量為2 6g。其中，每單位制劑中含梔子提取物的最有效劑量為5g。梔子在制備治療心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)術(shù)后再狹窄造成的急性心肌缺血藥物中的應(yīng)用梔子在治療心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)術(shù)后再狹窄造成的急性心肌缺血是指保護(hù)心肌和心肌細(xì)胞損傷或者對(duì)抗心肌細(xì)胞的炎性病變、氧化損傷。其中，每單位制劑中含梔子有效劑量為8 18g。其中，每單位制劑中含梔子的最有效劑量為17g。本發(fā)明中所述的重量份和體積份的關(guān)系為kg/L或g/ml。
以ー個(gè)成年人體重為60千克，每天服藥兩次計(jì)算有效劑 量=小鼠每千克體重的有效劑量劑量X60千克+2本發(fā)明所述的單位制劑針對(duì)不同的制劑有不同的計(jì)算方式，片劑以每片中含梔子提取物的量，膠囊劑以每粒膠囊中含梔子提取物的量計(jì)算，其他劑型，以此類推。本發(fā)明梔子提取物在心肌和心肌細(xì)胞保護(hù)作用上的應(yīng)用，效果顯著，明顯高于對(duì)照藥組和空白組。下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例進(jìn)ー步說(shuō)明本發(fā)明藥物組合的作用，但不限于本發(fā)明的組合，凡是以本發(fā)明藥物組合為基礎(chǔ)進(jìn)行加減而成的組合也屬本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)驗(yàn)例I不同劑量梔子提取物對(duì)急性心梗大鼠心肌缺血及心肌細(xì)胞保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備和實(shí)驗(yàn)方法的選擇I、實(shí)驗(yàn)材料(I)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，雄性，體重(220±20) g，以及I 3d SD大鼠乳鼠，SPF級(jí)，均由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供(許可證編號(hào)SCXK (京)2006-0008)。(2)藥物及制備梔子，由北京人衛(wèi)飲片廠提供，批號(hào)8021801。鹽酸地爾硫卓片，天津田邊制藥有限公司，批號(hào)0802001，梔子提取物，本發(fā)明實(shí)施例I制備。(3)試劑肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒，均為中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品；過(guò)氧化物歧化酶(S0D)、丙ニ醛(MDA)試劑盒，均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品；DMEM培養(yǎng)基(GIBC0產(chǎn)品)，胎牛血清(四季青公司)；胰蛋白酶、膠原酶II (科海軍舟)；噻唑藍(lán)(MTT)、ニ甲基亞砜(DMSO)(美國(guó)sigma公司)。⑷儀器多導(dǎo)生理記錄儀(BIOPAC Systems InC產(chǎn)品)，XL_300全自動(dòng)生化分析儀(上海圣荷西醫(yī)療用品有限公司)，microlab-300半自動(dòng)生化分析儀(荷蘭制造)，LYMPUS SZX7解剖顯微鏡(日本制造)，DL-LJ-ZN醫(yī)用型潔凈工作臺(tái)(北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司)，C02 培養(yǎng)箱(Thermo Electron Corporation 產(chǎn)品)。2、實(shí)驗(yàn)方法(I)動(dòng)物分組、給藥處理及造模將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、地爾硫卓組(37. Smg · kg—1 · cf1)和梔子提取物組(279. 72mg · kg—1 · d'559. 442mg · kg—1 · cf1),相當(dāng)于臨床等效劑量及其兩倍。灌胃給藥，I次/ld，連續(xù)7d。假手術(shù)與模型組給予同體積的蒸餾水。末次給藥30min后，腹腔麻醉，背位固定，記錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖，行人工呼吸。胸部去毛、消毒、沿左鎖骨中線縱行切開(kāi)皮膚約2cm，3、4肋間開(kāi)胸，左冠狀動(dòng)脈起2 3mm處結(jié)扎，復(fù)制心肌缺血模型。假手術(shù)組僅穿線不結(jié)扎。(2)心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)無(wú)菌取出生I 3d乳鼠心尖部組織，將其剪成約Imm3大小碎塊，以適量0. 125%胰酶和O. 05% II型膠原酶消化制成細(xì)胞懸液，IOOOr · min—1，離心IOmin, PBS洗3次。用含20% (體積分?jǐn)?shù))胎牛血清、100萬(wàn)U青霉素、鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)I. 5 2h，差速貼壁分離法純化心肌細(xì)胞。以6X IO5個(gè)· mr1的接種密度，接種到培養(yǎng)板中。48h后換液,培養(yǎng)3d后用于實(shí)驗(yàn)。(3)缺氧-復(fù)氧模型的建立及分組取培養(yǎng)3d的心肌細(xì)胞，去除培養(yǎng)基，加入事先用95% N2+5% CO2飽和的無(wú)糖D-hanks 液，置于低氧盒中(95% N2+5% C02，流速 IL .mirT1，通氣 15min) 37°C >5% CO2 培養(yǎng)箱內(nèi)孵育I I. 5h,再放回5% CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)，孵育2h。于缺氧I小時(shí)，及復(fù)氧2小時(shí)后取細(xì)胞培養(yǎng)液上清，測(cè)定相應(yīng)的LDH值。含藥血清的制備SD大鼠20只，分為空白對(duì)照組及梔子組，各10只。梔子組(559. 442mg· kg—1 · cf1)，灌胃給藥，I次/ld，連續(xù)3d，第三天給藥I小時(shí)后，取血制備血清，加熱滅活備用。
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實(shí)驗(yàn)分組在各組中添加不同濃度的空白血清或梔子含藥血清?？瞻籽鍖?duì)照組4個(gè)(5%、10%、15%、20% )、梔子含藥血清4個(gè)劑量組(5%、10%、15%、20% )。均在缺氧和復(fù)氧過(guò)程的開(kāi)始分別加入相應(yīng)濃度的藥物，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔。(4)觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法①心電圖觀察術(shù)后IOminII導(dǎo)聯(lián)心電圖ST段的變化，計(jì)算各組ST-T段上移幅度的Amv值。②血清酶學(xué)指標(biāo)按照CK、LDH試劑盒說(shuō)明書(shū)，測(cè)定血清心肌酶CK和LDH活力。③氧化損傷相關(guān)指標(biāo)按照SOD、MDA試劑盒說(shuō)明書(shū)，測(cè)定血清SOD活性、MDA含量。④細(xì)胞上清液于缺氧I小時(shí)，及復(fù)氧2小時(shí)后取細(xì)胞培養(yǎng)液上清，測(cè)定相應(yīng)的LDH值。(5)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本發(fā)明統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13. O軟件包，檢測(cè)結(jié)果用X土SD表示。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(ANOVA)，P < O. 05，認(rèn)為差異有顯著性；p < O. 01，差異有極顯著性。利用上述實(shí)驗(yàn)例I中所述的實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法對(duì)不同劑量梔子提取物對(duì)急性心梗大鼠心肌缺血及心肌細(xì)胞的保護(hù)作用進(jìn)行研究，得出下述實(shí)驗(yàn)例1-4的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)例I梔子提取物對(duì)急性心肌梗死大鼠心電圖的影響觀察本發(fā)明實(shí)施例I中制備的桅子提取物對(duì)急性心肌缺血大鼠II導(dǎo)聯(lián)心電圖ST-T段的影響。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表I。表I桅子提取物對(duì)急性心肌缺血大鼠II導(dǎo)聯(lián)心電圖ST-T段的影響(η = 10, χ + ^)
權(quán)利要求
1.梔子在制備治療心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)術(shù)后再狹窄造成的急性心肌缺血藥物中的應(yīng)用，其特征在于每單位制劑中含梔子有效劑量為8 18g。
2.如權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于所述治療心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)術(shù)后再狹窄造成的急性心肌缺血是指保護(hù)心肌和心肌細(xì)胞損傷或者對(duì)抗心肌細(xì)胞的炎性病變、氧化損傷。
3.如權(quán)利要求I或2所述的用途，其特征在于所述每單位制劑中含梔子有效劑量為17g。
4.ー種梔子提取物在心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)術(shù)后再狹窄造成的急性心肌缺血藥物中的應(yīng)用，其中梔子提取物是通過(guò)如下方法制備 取梔子100重量份，加1000-2000體積份的水，加熱煮沸O. 5-2小吋，分別提取2次；將兩次所得藥液合并，進(jìn)行薄膜蒸氣濃縮至60°C密度為I. 20-1. 30g/ml，繼續(xù)進(jìn)行水浴蒸發(fā)至60°C，密度為I. 30-1. 40g/ml，放置于干燥箱中，進(jìn)行真空減壓干燥至恒重，得梔子提取物25-35重量份，其中所述的重量份和體積份的關(guān)系為kg/L ;每單位制劑中含梔子提取物有效劑量為2 6g。
5.如權(quán)利要求4所述的梔子提取物的制備方法，其特征在于該方法為 取梔子100重量份，加1500體積份的水，加熱煮沸I小時(shí)，分別提取2次；將兩次所得藥液合并，進(jìn)行薄膜蒸發(fā)濃縮至60°C至密度為I. 25g/ml ;繼續(xù)進(jìn)行水浴蒸發(fā)至60°C，密度為I. 35g/ml，放置于干燥箱中，進(jìn)行真空減壓干燥至恒重，得梔子提取物29. 6重量份，其中所述的重量份和體積份的關(guān)系為kg/L ;每單位制劑中含梔子提取物有效劑量為2 6g。
6.如權(quán)利要求4所述的梔子提取物的制備方法，其特征在于該方法為 取梔子100重量份，加1200體積份的水，加熱煮沸O. 8小時(shí)，分別提取2次；將兩次所得藥液合并，進(jìn)行薄膜蒸發(fā)濃縮至60°C至密度為1.25g/ml ;繼續(xù)進(jìn)行水浴蒸發(fā)至60°C，密度為I. 35g/ml，放置于干燥箱中，進(jìn)行真空減壓干燥至恒重，得梔子提取物26. 5重量份，其中所述的重量份和體積份的關(guān)系為kg/L ;每單位制劑中含梔子提取物有效劑量為2 6g。
7.如權(quán)利要求4所述的梔子提取物的制備方法，其特征在于該方法為 取梔子100重量份，加1800體積份的水，加熱煮沸I. 5小吋，分別提取2次；將兩次所得藥液合并，進(jìn)行薄膜蒸發(fā)濃縮至60°C至密度為I. 25g/ml ;繼續(xù)進(jìn)行水浴蒸發(fā)至60°C，密度為I. 35g/ml，放置于干燥箱中，進(jìn)行真空減壓干燥至恒重，得梔子提取物33. 2重量份，其中所述的重量份和體積份的關(guān)系為kg/L ;每單位制劑中含梔子提取物有效劑量為2 6g。
8.如權(quán)利要求4-7之一所述的用途，其特征在于所述每單位制劑中含梔子提取物有效劑量為5g。
9.如權(quán)利要求4-7之一所述的梔子提取物，其特征在于制備得到的梔子提取物后，カロ入常規(guī)輔料，按照常規(guī)エ藝制備得到臨床上可接受的片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、散劑、丸剤、滴丸剤、顆粒劑、ロ服液體制劑、凍干粉針劑、注射劑、速釋制劑或緩釋制劑。
全文摘要
本發(fā)明通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明梔子及梔子提取物在制備治療心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常藥物的用途。特別是在經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)(PTCA)術(shù)后再狹窄造成的急性心肌缺血或冠心病心肌缺血中的應(yīng)用。并通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明上述的各種用途是通過(guò)保護(hù)心肌和心肌細(xì)胞損傷或者是對(duì)抗心肌細(xì)胞的炎性病變、氧化損傷達(dá)到，并測(cè)定得到單位制劑中梔子和梔子提取物的有效劑量。
文檔編號(hào)A61P9/10GK102716230SQ20111007892
公開(kāi)日2012年10月10日 申請(qǐng)日期2011年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月30日
發(fā)明者張加晏, 張翰濤, 連增林, 遲玉明, 陳霞, 靳冉 申請(qǐng)人:北京中研同仁堂醫(yī)藥研發(fā)有限公司