專利名稱：Hiv疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含Hiv-1抗原的免疫原性組合物及其在預(yù)防和/或治療HIV-1中的用途。具體來說，發(fā)明涉及來自一個進(jìn)化支的HIV-1抗原在預(yù)防和/或治療疾病中的用途，所述疾病與異源HIV-1進(jìn)化支的HIV-1感染相關(guān)。
背景技術(shù)：
人免疫缺陷病毒I型(HIV-1)是被認(rèn)為是全球主要健康問題之一的獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的主要致病原因。在全球有三千兩百萬以上的感染人口，因此開發(fā)安全和有效的抗HIV-1疫苗是全球健康領(lǐng)域的研究重點。HIV-1是逆轉(zhuǎn)錄病毒科的RNA病毒。HIV-1基因組編碼被分為三類的至少9個蛋白質(zhì):主要的結(jié)構(gòu)蛋白Gag、Pol和Env ;調(diào)控蛋白Tat和Rev ；以及輔助蛋白Vpu、Vpr> Vif和 Nef0HIV-1可以分為幾個不同的進(jìn)化支，例如A、B、C、D、E、F、G、H、J和K，它們在世界
上的盛行率各有不同。例如，HIV-1B進(jìn)化支多見于北美和歐洲，而HIV-1C進(jìn)化支主要造成了南美、印度和中國的HIV-1蔓延。已知還有被稱為流行重組型(CRFs)的HIV-1進(jìn)化支的重組形式流行。這些重組形式是當(dāng)不同進(jìn)化支在感染者細(xì)胞內(nèi)重組形成新的雜交病毒時產(chǎn)生的。但多數(shù)雜交形式生存期短，那些繼續(xù)感染一個以上人的被稱為CRFs。例子包括A/E，它被認(rèn)為是由A亞型和某種其它“親代"E亞型雜交產(chǎn)生的。但目前還未發(fā)現(xiàn)純的E亞型形式。 在塞浦路斯分離的一株病毒原本被歸于新的I亞型，后來被重新分類為重組形式A/G/I?，F(xiàn)在認(rèn)為該病毒代表一種由A、G、H、K亞型和未分類區(qū)域組成的更復(fù)雜的CRF。每個進(jìn)化支(clade)包含不同的HIV-1株，這些株根據(jù)它們的遺傳相似度被歸類到一起。因此來自不同進(jìn)化支的HIV-1株的遺傳差別比同一進(jìn)化支中的不同HIV-1株大。HIV-1的遺傳多樣性使得開發(fā)一種能夠在全球使用，抗來自多個HIV-1進(jìn)化支的病毒株的安全有效疫苗極端困難。目前仍需要可以解決這些需求的疫苗。過去二十年間，進(jìn)行了大量工作來開發(fā)預(yù)防性疫苗。至今只有三種候選HIV-1疫苗進(jìn)行了 IIb或III期試驗，全都未能防止HIV-1感染[Flynn NM7Forthal DN7Harro CD，Judson FN,Mayer KH,et al.(2005)Placebo-controlIedphase 3 trial of a recombinantglycoprotein 120 vaccine to prevent HIV-linfection.J Infect Dis 191:654—665;Pitisuttithum PiGilbert PiGurwith M,Heyward WiMartin M，et al.(2006)Randomized,Double-Blind， Placebo-Controlled Efficacy Trial of a Bivalent RecombinantGlycoprotein 120HIV—1 Vaccine among Injection Drug Users in Bangkok， Thailand.J Infect Disl94:1661-1671 ;Buchbinder SP, Mehrotra DV, Duerr A, Fitzgerald DW,MoggR， et al.(2008)Efficacy assessment of a cell-mediated immunity HIV-1vaccine (the Step Study):a double-blind，randomised，placebo-controlled,test-of-concepttrial.Lancet 372:1881-1893]。開發(fā)能夠防止感染，產(chǎn)生消除性免疫的預(yù)防性疫苗是一項重點工作，但也希望能有基于誘導(dǎo)強(qiáng)烈T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的治療性或疾病調(diào)節(jié)性疫苗。⑶8+T細(xì)胞應(yīng)答在控制持續(xù)性病毒感染中的作用已被廣泛接受[Barouch DH，Letvin NL(2001)CD8+cytotoxic T lymphocyte responses tolentiviruses andherpesviruses.Curr Opin Immunol 13:479-482]。就 HIV-1 感染而言，病毒特異性 CD8+T細(xì)胞的出現(xiàn)與原發(fā)HIV-1感染時發(fā)生的病毒血的下降緊密關(guān)聯(lián)[Koup RA，Safrit JT，Cao Y，Andrews CA，McLeod G，et al.(1994)Temporal association of cellular immuneresponses with the initial controlof viremia in primary human immunodeficiencyvirus type I syndrome.J Virol68:4650-4655]，而且⑶8+T細(xì)胞的消除導(dǎo)致猴免疫缺陷病毒(SIV)病毒血癥發(fā)生極具惡化[Schmitz JE, Kuroda MJ, Santra S，SassevilleVG, Simon MA, etal.(1999)Control of viremia in simian immunodeficiency virusinfection byCD8+lymphocytes.Science 283:857-860 ；Jin X，Bauer DE, TuttletonSE，LewinS，Gettie A，et al.(1999)Dramatic rise in plasma viremia after CD8 (+)T celldepletion in simian immunodeficiency virus-1nfected macaques.J Exp Med189:991-998] o還發(fā)現(xiàn)那些在沒有高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法(HAART)的情況下感染不惡化的患者，體內(nèi)優(yōu)先保持多能性CD8+T細(xì)胞[Betts MR, Nason MC，West SM，De RosaSC， Migueles SA, et al.(2006)HIV nonprogressorspreferentially maintain highlyfunctional HIV-specific CD8+T cells.Blood 107:4781-4789]。病毒特異性⑶4+T細(xì)胞已知在許多病毒(包括HIV-ι)感染的免疫控制中有關(guān)鍵作用[Day CL, Walker BD(2003)Progress in defining CD4 helper cellresponsesin chronic viral infections.J Exp Med 198:1773-1777 ；Klenerman P，Hill A(2005)T cells and viral persistence:lessons from diverse infections.NatImmunol
6:873-879] o更具體地說，CD4+T細(xì)胞對于功能性CD8+T細(xì)胞的誘發(fā)和維持是必須的[Bourgeois C，Veiga-Fernandes H，Joret AM，Rocha B，Tanchot C(2002)CD8 lethargyin the absence of CD4 help.Eur J Immunol 32:2199-2207 ； Janssen EM, Lemmens EE,Wolfe T， Christen U， von Herrath MG， etal.(2003)CD4+T cells are required forsecondary expansion and memory inCD8+T lymphocytes.Nature 421:852-856 ;ShedlockDJ, Shen H(2003)Requirement for CD4T cell help in generating functional CD 8Tcell memory.Science 300:337-339 ;Sun JC，Bevan MJ(2003)Defective CD8 T cellmemoryfoIlowing acute infection without CD4T cell help.Science 300:339-342 ；Sun JCiWilliams MAiBevan MJ(2004)CD4+T cells are required for the maintenance，not programming, of memory CD 8+T cells after acute infection.Nat Immunol 5:927-933 ；Yang TC, Millar J, Groves T，Zhou W,Grinshtein N，et al.(2007)Onthe roleof CD4+T cells in the CD8+T_cell response elicited by recombinantadenovirusvaccines.Mol Therl5:997-1006] 0 HIV-1感染患者體內(nèi)存在的多能和具有增殖能力的HIV-1特異性⑶4+T細(xì)胞與長期感染不惡化相關(guān)[BoazMJ，Waters A，Murad S，EasterbrookPJ, Vyakarnam A(2002)Presence ofHIV-1Gag-specific IFN-gamma+1L-2+andCD28+IL—2+CD4T cell responsesis associated with nonprogression in HIV-1infection.J Immunol 169:6376-6385 ;Harari A，Petitpierre S，Vallelian F，Pantaleo G(2004)Skewedrepr`esentation of functionally distinct populationsof virus-specific CD4 T cellsin HIV-l-1nfected subjects with progressivedisease:changes after antiretroviraltherapy.Blood 103:966-972 ；KannanganatS, Kapogiannis BG, Ibegbu C, Chennareddi L, Goepfert P, et al.(2007)Humanimmunodeficiency virus type !controllers but not noncontrollers maintain CD4 Tcells coexpressing threecytokines.J Virol 81:12071-12076 ;Potter SJ,LacabaratzC, Lambotte 0,Perez-Patrigeon S,Vingert B,et al.(2007)Preserved central memoryandactivated effector memory CD4+T_cell subsets in human immunodeficiencyviruscontrollers:an ANRS EP36 study.J Virol 81:13904-13915]。此外，在急性 HIV-1 感染后HIV-1特異性⑶8+T細(xì)胞增殖的喪失可以利用疫苗誘發(fā)的HIV-1特異性⑶4+Τ細(xì)胞(體外和體內(nèi)產(chǎn)生 IL-2)來恢復(fù)[Lichterfeld M, Kaufmann DE, Yu XG, Mui SK, Addo MM,et al.(2004)Loss of HIV-l-specificCD8+T cell proliferation after acute HIV-1infection and restoration byvaccine-1nduced HIV-l-specific CD4+T cells.J ExpMed 200 =701-712]。這些發(fā)現(xiàn)表明有效的AIDS疫苗必須也能夠誘發(fā)強(qiáng)⑶4+T細(xì)胞應(yīng)答?？紤]到HIV-1的強(qiáng)大遺傳多樣性，有效的疫苗應(yīng)當(dāng)能夠有利地誘發(fā)可以覆蓋廣譜流行HIV-1株的CD4+T細(xì)胞應(yīng)答。仍存在對這樣的疫苗的需求。本發(fā)明致力于解決這些需求。

發(fā)明概述本發(fā)明提供了用于誘導(dǎo)預(yù)防和/或治療HIV的免疫反應(yīng)的組合物。更具體地說，本發(fā)明提供了含有HIV抗原的組合物，所述組合物用于誘導(dǎo)抗一個以上HIV進(jìn)化支的免疫反應(yīng)和/或誘導(dǎo)抗與組合物中使用的HIV抗原異源的進(jìn)化支的免疫反應(yīng)。附圖簡述

圖1:F4的核苷酸序列圖2:F4的氨基酸序列圖3:F4co的核苷酸序列圖4:p24氨基酸序列比對
圖5:RT氨基酸序列比對圖6 =Nef氨基酸序列比對圖7:pl7氨基酸序列比對圖8:不同進(jìn)化支的序列同一性和表位保守性分析圖9A:F4的考馬斯染色膠和western印跡圖9B:p24-RT-Nef-pl7 溶解性測定圖10:F4co的考馬斯染色膠和western印跡圖11:F4co純化復(fù)查圖12:CB染色的SDS膠和抗F4western印跡圖13:抗F4中單個的抗原的Western印跡圖14:三個純化批次的SEC分析圖15:抗大腸桿菌Western印跡圖16:批次3制備過程中采集的所有組分的SDS膠和抗F4western印跡圖17:F4/AS01b和F4/WFI群的致反應(yīng)性
圖18:表達(dá)IL-2和至少一種其它標(biāo)記蛋白的⑶4+T細(xì)胞圖19:對以F4/AS01b_輔佐的HIV-1疫苗候選物的⑶4+T細(xì)胞應(yīng)答:響應(yīng)率圖20:對輔以F4/AS01b的HIV-1疫苗候選物的⑶4+T細(xì)胞應(yīng)答:每種抗原的響應(yīng)百分比圖21:表達(dá)IL-2和至少一種其它標(biāo)記物、且應(yīng)答F4融合蛋白的⑶4+T細(xì)胞的百分比圖22:給予劑II兩周后，10 μ gF4/AS01B組中F4特異性CD4+CD40L+T細(xì)胞的細(xì)胞因子共表達(dá)譜圖23:F4特異性CD4+CD40L+T細(xì)胞的細(xì)胞因子共表達(dá)譜:10 μ gF4/AS01B組的所有時間點的餅24:抗原特異性⑶4+T細(xì)胞的細(xì)胞因子共表達(dá)譜圖25:抗原特異性⑶4+T細(xì)胞的細(xì)胞因子共表達(dá)譜圖26:⑶4+T細(xì)胞應(yīng)答的交叉反應(yīng)性圖27:⑶4+T細(xì)胞應(yīng)答的交叉反應(yīng)性圖28 -M F4融合蛋白的體液免疫反應(yīng)圖29:對 Nef、RT、pl7、p24抗原的抗體反應(yīng)圖30:A進(jìn)化支特異性⑶4+T細(xì)胞應(yīng)答圖31:B進(jìn)化支特異性⑶4+T細(xì)胞應(yīng)答圖32:C進(jìn)化支特異性⑶4+T細(xì)胞應(yīng)答圖33:A進(jìn)化支特異性⑶8+T細(xì)胞應(yīng)答圖34:B進(jìn)化支特異性⑶8+T細(xì)胞應(yīng)答圖35:C進(jìn)化支特異性⑶8+T細(xì)胞應(yīng)答圖36:交叉進(jìn)化支T細(xì)胞應(yīng)答總結(jié)發(fā)明詳述本發(fā)明提供了免疫原性組合物，其包含a.一或多種多肽，其包含一或多種選自Nef、Pol和/或Gag的抗原；其中所述一或多種抗原是選自來源于一或多種HIV-1進(jìn)化支的一或多種病毒株；和b.優(yōu)選是Thl型免疫反應(yīng)誘導(dǎo)劑的佐劑，所述組合物用于治療或預(yù)防由來自和免疫組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支的HIV-1病毒株引起的疾病或感染。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)包含來自一個特定進(jìn)化支的HIV-1病毒株的HIV-1蛋白抗原的免疫原性組合物可以誘發(fā)對來自其它不同的HIV-1進(jìn)化支的HIV-1病毒株產(chǎn)生強(qiáng)CD4+T細(xì)胞應(yīng)答。例如，來自HIV-1B進(jìn)化支病毒株的HIV-1抗原可以誘發(fā)對來自不是HIV B進(jìn)化支病毒株的HIV-1抗原的交叉免疫反應(yīng)，或者對來自HIV-1B進(jìn)化支的不同病毒株的HIV-1抗原的交叉免疫反應(yīng)，其中所述不是HIV B進(jìn)化支病毒株的HIV-1抗原是例如來自進(jìn)化支A、進(jìn)化支C或者諸如重組進(jìn)化支CRF-Ol (進(jìn)化支A和E的流行重組形式)的HIV-1抗原。該交叉反應(yīng)性是除了可以看到的抗來自相同HIV-1株的HIV-1抗原的“同源”免疫反應(yīng)之外的活性。相應(yīng)地，例如包含來自B進(jìn)化支HIV-1株的HIV-1抗原的免疫原性組合物，可以用于治療或預(yù)防由下述HIV-1株引起的感染和疾病:相同HIV-1株、來自B或其它進(jìn)化支的不同HIV-1株、非B進(jìn)化支的HIV株，例如來自A進(jìn)化支和/或C進(jìn)化支和/或CRF-Ol進(jìn)化支的病毒株。對抗原產(chǎn)生的免疫反應(yīng)是通過抗原與免疫系統(tǒng)的細(xì)胞的相互作用形成的。得到的免疫反應(yīng)可以大概分成兩個主要類別:先天性免疫反應(yīng)，多樣性不高但作用獨(dú)立；和適應(yīng)性免疫反應(yīng),多樣性極高,但對先天性免疫有強(qiáng)依賴性，因此自主性有限。有效的抵抗入侵病原體的宿主防御是通過復(fù)雜的將先天性和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)聯(lián)系在一起的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)的協(xié)作實現(xiàn)的?？共《靖腥镜谋Ｗo(hù)作用主要是通過適應(yīng)性免疫介導(dǎo)的，既有體液也有細(xì)胞介導(dǎo)的。體液免疫的抗病毒效果是通過產(chǎn)生能夠阻斷病毒進(jìn)入/感染靶細(xì)胞的中和抗體介導(dǎo)的。CD4+和CD8+T細(xì)胞是細(xì)胞介導(dǎo)的免疫的效應(yīng)子成分，它們通過分泌細(xì)胞因子和殺傷已被病毒感染的靶細(xì)胞來介導(dǎo)抗病毒效應(yīng)。多項研究有力地支持了 HIV-1特異性T細(xì)胞應(yīng)答在控制病毒復(fù)制和防止HIV-1相關(guān)疾病中的保護(hù)性作用。當(dāng)與諸如樹突 細(xì)胞(DCs)的抗原呈遞細(xì)胞所呈遞的抗原發(fā)生相互作用時，⑶4+T細(xì)胞可以分化成各種效應(yīng)細(xì)胞亞群，包括經(jīng)典的Thl細(xì)胞和Th2細(xì)胞、Thl7細(xì)胞、濾泡輔助T(Tfh)細(xì)胞，和誘導(dǎo)型調(diào)節(jié)性T(iTreg)細(xì)胞。分化的決定主要是由細(xì)胞因子的存在以及從某種程度上由抗原和T細(xì)胞抗原受體之間的相互作用的強(qiáng)度決定的。Thl細(xì)胞的特征在于它們能夠產(chǎn)生IFN-Y，和參與抗細(xì)胞內(nèi)微生物的細(xì)胞免疫。IL-12由先天免疫細(xì)胞產(chǎn)生，它引導(dǎo)細(xì)胞走向Thl細(xì)胞分化程序，以及由NK細(xì)胞和T細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-Y。Th2細(xì)胞產(chǎn)生IL-4、IL_5和IL-13，是控制蠕蟲和其它胞外病原體的體液免疫所必需的。Th2細(xì)胞分化需要IL-4和Stat6下游的GATA3的作用。Thl7細(xì)胞產(chǎn)生IL-17A、IL-17F和IL-22，在清除胞外，特別是粘膜表面的細(xì)菌和真菌中有重要作用。Thl7細(xì)胞分化需要類視黃醇相關(guān)孤核受體(ROR) gt，所述受體是由TGF-β聯(lián)合促炎性細(xì)胞因子IL-6、IL-21和IL_23a誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子，它們都能激活Stat3
磷酸化。Tfh細(xì)胞是輔助性T細(xì)胞的一個亞群，調(diào)節(jié)B細(xì)胞應(yīng)答的成熟。這些細(xì)胞的分化需要細(xì)胞因子IL-21，并且可能要依賴轉(zhuǎn)錄因子Bcl-6。效應(yīng)T細(xì)胞應(yīng)答的嚴(yán)格調(diào)控對于有效地控制感染和避免自身免疫和免疫病理疾病是必需的。除了已知的在許多病毒感染的免疫控制中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，病毒特異性CD4+T細(xì)胞也是功能性CD8+T細(xì)胞的誘導(dǎo)和維持所必需的，其中的功能性CD8+T細(xì)胞正如以上討論過的已知在控制持續(xù)性病毒感染，包括HIV-1感染中有作用。HIV-1基因組編碼多種不同蛋白。包膜蛋白包括例如gpl20和它的前體gpl60。HIV-1的非包膜蛋白包括例如內(nèi)部結(jié)構(gòu)蛋白(比如gag和pol基因的產(chǎn)物)和其它非結(jié)構(gòu)蛋白(比如 Rev、Nef、Vif 和 Tat)。因為這類能夠抗最可能廣泛的流行性HIV-1病毒株譜的CD4+T細(xì)胞應(yīng)答是有利的，期望的HIV-1疫苗含有來自各種病毒蛋白的盡可能多的不同CD4表位。含有最大數(shù)量的保守T細(xì)胞表位的病毒抗原是Gag、Pol和Nef。
發(fā)明的免疫原性組合物包含一或多種含有一或多種這些抗原的多肽。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物包含一或多種含有Nef的多肽。HIV-1Nef是一種早期蛋白，即它是在感染早期并且沒有結(jié)構(gòu)蛋白的情況下表達(dá)的。Nef基因編碼早期輔助性HIV-1蛋白，該蛋白已被證實具有幾種活性。例如，Nef蛋白已知造成⑶4、HIV-1受體和來自細(xì)胞表面的MHCI型分子的下調(diào)，雖然這些功能的生物學(xué)重要性還未定論。此外，Nef與T細(xì)胞的信號途徑能夠相互作用，誘發(fā)活化狀態(tài)，這種活化狀態(tài)隨之又能促進(jìn)更有效的基因表達(dá)。某些HIV-1分離株在該區(qū)域帶有突變，導(dǎo)致它們不能編碼有功能的蛋白并且它們的體內(nèi)復(fù)制和發(fā)病機(jī)制被嚴(yán)重?fù)p害。
提及Nef時，是指全長Nef以及全長Nef的片段、變體和衍生物。該術(shù)語還包括包含Nef的多肽，包括含有Nef的片段、變體和衍生物的多肽。在實施方案中，Nef來自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支的HIV-1病毒株或者HIV-1的流行重組型(CRF)。方便地，Nef來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物包含一或多種含有Pol的多肽。Pol基因編碼兩種含有早期感染中病毒所需兩種活性的蛋白、RT和病毒DNA整合到細(xì)胞DNA所需要的整合酶蛋白。Po I的初級產(chǎn)物被病毒粒子蛋白酶切割產(chǎn)生氨基端RT肽，該肽含有DNA合成所需要的活性(RNA和DNA依賴性DNA聚合酶活性和RNase H功能)；和羧基端整合酶蛋白。因此RT是Pol的片段的例子。HIV-1RT是全長RT (p66)和缺少羧基端RNase H結(jié)構(gòu)域的切割產(chǎn)物(p51)的雜二聚體，p66和p51也是Pol的片段的例子。提及Pol時，是指全長Pol和全長Pol的片段、變體和衍生物。該術(shù)語還包括包含Pol的多肽，包括含有Pol的片段、變體和衍生物的多肽。在實施方案中，Pol包含RT片段。RT片段是Pol的片段的例子。提到的RT也是全長RT和全長RT的片段、變體和衍生物。該術(shù)語還包括包含RT的多肽，包括含有RT的片段、變體和衍生物的多肽。按照這種方式，RT可以包含p66片段、p51片段和/或p66和/或P51的片段、變體和衍生物。在實施方案中，Pol來自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支的HIV-1病毒株或者HIV-1的流行重組型(CRF)。方便地，Pol來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物包含一或多種含有Gag的多肽。Gag基因被翻譯為前體多肽，后者經(jīng)蛋白酶切割產(chǎn)生的產(chǎn)物包含基質(zhì)蛋白(pl7)、衣殼蛋白(P24)、核衣殼(p9)、p6和兩個間隔臂肽(p2和pi)，這些都是Gag的片段的例子。Gag基因能夠產(chǎn)生由未被剪切的病毒mRNA表達(dá)的55-千道爾頓(kD)Gag前體蛋白，又稱為P55。在翻譯過程中，p55的N端被豆蘧?；|發(fā)它與細(xì)胞膜的胞漿面結(jié)合。膜結(jié)合的Gag多聚蛋白召集兩個拷貝的病毒基因組RNA以及其它病毒蛋白和細(xì)胞蛋白，它們弓I發(fā)病毒顆粒從被感染細(xì)胞的表面出芽。出芽后，在病毒的成熟過程中，P55被病毒編碼的蛋白酶(pol基因的產(chǎn)物)切割成四個小一些的蛋白，被命名為MA(基質(zhì)[pl7])、CA(衣殼[p24])、NC(核衣殼[p9])和p6，它們都是Gag的片段的例子。pl7(MA)多肽來自p55的N端豆蘧?；┒恕６鄶?shù)MA分子保持與毒粒脂雙層內(nèi)表面的附著，使顆粒穩(wěn)定。一個MA亞群被召集到毒粒的更深層，在這里它成為將病毒DNA護(hù)送到細(xì)胞核的復(fù)合體的一部分。這些MA分子能夠促進(jìn)病毒基因組的核轉(zhuǎn)運(yùn)，因為MA上的親核信號能被細(xì)胞的核輸入機(jī)制識別。這個現(xiàn)象使得HIV-1能夠感染非分裂細(xì)胞。p24(CA)蛋白形成病毒顆粒的圓錐形。親環(huán)蛋白A經(jīng)證實與p55的p24區(qū)域相互作用，導(dǎo)致它被整合到HIV-1顆粒中。Gag和親環(huán)蛋白A之間的相互作用非常重要因為環(huán)孢素A打斷該相互作用時會抑制病毒的復(fù)制。Gag的NC區(qū)域負(fù)責(zé)特異識別HIV-1的所謂包裝信號。所述包裝信號由位于病毒RNA的5’端附近的四個莖環(huán)結(jié)構(gòu)構(gòu)成，并且能有效介導(dǎo)異源RNA整合到HIV-1毒粒中。NC通過兩個鋅指基元介導(dǎo)的相互作用與包裝信號結(jié)合。NC還能促進(jìn)逆轉(zhuǎn)錄。p6多肽區(qū)域介導(dǎo)p55Gag和輔助性蛋白Vpr之間的相互作用，導(dǎo)致Vpr整合到正在組裝的毒粒中。P6區(qū)域還含有所謂晚期結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域是出芽毒粒從感染細(xì)胞有效釋放所必需的。

在實施方案中，Gag來自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支的HIV-1病毒株或者HIV-1的流行重組型(CRF)。方便地，Gag來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。在實施方案中，Gag是pl7。在這種實施方案中，pl7來自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支的HIV-1病毒株或者HIV-1的流行重組型(CRF)。方便地，pl7來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。在實施方案中，Gag是p24。在這種實施方案中，p24來自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支的HIV-1病毒株或者HIV-1的流行重組型(CRF)。方便地，p24來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。在實施方案中，Gag包含了作為分開的蛋白抗原成分或者融合在一起的pl7和p24。方便地，P17和p24融合在一起，由異源氨基酸序列隔開。本發(fā)明中描述的抗原是全長抗原，例如全長Nef、全長Pol、全長Gag。發(fā)明還涵蓋不是全長的抗原，包括抗原的片段或變體，所述片段或變體可能是或者可能不是與全長對應(yīng)。合適地，片段是免疫原性片段，變體是免疫原性變體。一般來說，“片段”，無論是否具有免疫原性，都含有來自包含Hiv-1抗原的多肽的連續(xù)氨基酸序列，其中所述“片段”是所述多肽的片段。方便地，所述片段含有來自它們是其片段的多肽的至少5-8個氨基酸、至少9-15個氨基酸，至少20個，至少50個或者至少100個連續(xù)氨基酸。用于本文的“免疫原性片段”包含抗原的至少一種表位并且展示出Hiv-1抗原性。這類片段獨(dú)立或者在合適構(gòu)建物中呈遞時，能夠誘發(fā)抗天然抗原的免疫反應(yīng)，所述在合適構(gòu)建體中呈遞是比如與其它HIV-1表位或抗原融合、與蛋白性和/或免疫原性融合伙伴融合，或者在載體上或者在載體中呈遞時。用于本文的術(shù)語“變體”包括與它們的非變體對應(yīng)分子相比，發(fā)生了有限的改變的多肽。這包括點突變，所述點突變能夠通過例如提高在表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)或者去除不希望的活性(包括不希望的酶活性)來改變多肽特性。但是，包含HIV-1抗原的多肽變體必須保留與天然多肽的足夠相似性，以便保留在免疫原性組合物或疫苗中所希望具有的抗原特性，從而仍能夠引發(fā)抗天然抗原的免疫反應(yīng)。特定變體是否能夠引發(fā)這種免疫反應(yīng)可以在合適的免疫學(xué)檢驗中測定，比如ELISA (對于抗體反應(yīng))或者利用合適的細(xì)胞標(biāo)記物和細(xì)胞因子染色進(jìn)行的流式細(xì)胞術(shù)(對于細(xì)胞應(yīng)答)。方便地，本發(fā)明的“變體”包含一或多種氨基酸的添加、缺失或取代。它們涵蓋截斷的抗原，其中抗原的C端和/或N端被切割去一或多種氨基酸。方便地，“變體”包括截斷分子或者片段，其中從抗原的C端和/或N端切割去1-5個氨基酸、6-10個氨基酸、11-15個氨基酸、16-20個氨基酸、21-25個氨基酸或25個以上氨基酸。本發(fā)明的變體可以引入一或多種含有一或多種氨基酸的缺失、添加或取代。相應(yīng)地，抗原截斷分子可以在肽的不同部分另外包含一或多種氨基酸的缺失、添加或取代。本發(fā)明的變體還包括與Nef、Po I和/或Gag的多肽序列具有70、80、90、95或98%同一'I"生的多肽序列。在發(fā)明的實施方案中，免疫原性組合物包含兩個含有一或多種抗原的多肽、三個含有一或多種抗原的多肽、四個含有一或多種抗原的多肽或者五個含有一或多種抗原的多肽。Nef、Pol和/或Gag中的每一個可以在免疫原性組合物中出現(xiàn)一次以上。例如，本發(fā)明的免疫原性組合物可以包含兩個或以上含有Nef的多肽、兩個或以上含有Pol的多肽和/或兩個或以上含有Gag的多肽。在其它實施方案中，一或多種多肽中的每一個可以包含一個Nef、Pol和/或Gag、兩個Nef > Pol和/或Gag、三個Nef > Pol和/或Gag、四個Nef > Pol和/或Gag等等。如果組合物中存在一個以上多肽，每個多肽可以包含相同的抗原數(shù)量和/或組分，或者每個多肽可以包含不同的抗原數(shù)量和/或組分。如果組合物中存在三個或以上多肽，兩個或以上的多肽可以包含相同的抗原數(shù)量和/或組分，而其余的多肽可以包含不同的抗原數(shù)量和/或組分。眾多文獻(xiàn)記載表明這些抗原的多肽序列在不同病毒株中，包括不同HIV-1進(jìn)化支的病毒株中的保守性很好。但是，對跨越不同進(jìn)化支的Hiv-1抗原的CD4+T細(xì)胞表位保守性進(jìn)行的分析顯示雖然這些抗原的序列在不同進(jìn)化支之間保守性較好，CD4+T細(xì)胞表位表現(xiàn)出令人驚奇的不太好的保守性(見圖8的分析)。分析觀察“已知”⑶4+T細(xì)胞表位并“預(yù)測”⑶4+T細(xì)胞表位。表位“預(yù)測”使用三種軟件:SVMHC (www~bs.1nformatik.un1-tuebingen.de/SYMHC)、ProPred (www.1mtech.res,in/raghava/propred/)和一個 GSKbio 程序(Tepitope)。為了被選為潛在的“表位”，9 聚體肽需要被這三種程序預(yù)測是白人群體中最有代表性的17種等位基因中給定HLA等位基因的表位。然后計算預(yù)測的在這些序列中保守的⑶4+T細(xì)胞表位的數(shù)量。盡管在研究的進(jìn)化支中只觀察到較小程度的表位保守性，發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)交叉反應(yīng)的程度被預(yù)期的大得多。交叉反應(yīng)在本文意味著本發(fā)明的免疫原性組合物誘發(fā)識別HIV-1病毒株的免疫反應(yīng)的能力，所述病毒株來自免疫原性組合物中沒有的進(jìn)化支。例如，發(fā)明的免疫原性組合物包含的多肽含有來自B進(jìn)化支HIV-1病毒株的抗原，如果被該組合物誘發(fā)的HIV特異性免疫反應(yīng)(比如HIV特異性CD4+T細(xì)`胞應(yīng)答)能夠與組合物中沒有的不同HIV-1病毒株反應(yīng)，例如與B進(jìn)化支之外的HIV-1病毒株反應(yīng)，則該組合物被認(rèn)為具有交叉反應(yīng)性。
組合物誘發(fā)的對來自不同進(jìn)化支的HIV-1病毒株的免疫反應(yīng)取決于被誘發(fā)的免疫反應(yīng)的類型。對于CD4特異性免疫反應(yīng)，這可能包括相關(guān)細(xì)胞因子的分泌。CD8特異性免疫反應(yīng)可能包括溶細(xì)胞活性的誘導(dǎo)和/或相關(guān)細(xì)胞因子的分泌?？贵w特異性反應(yīng)可能包括例如中和抗體的誘導(dǎo)。在本發(fā)明中，優(yōu)選被發(fā)明所述免疫原性組合物中沒有的進(jìn)化支的HIV-1病毒株誘發(fā)的免疫反應(yīng)是CD4特異性免疫反應(yīng)。交叉反應(yīng)性免疫反應(yīng)可以針對多肽上的免疫原性區(qū)域，即表位，所述表位在不同HIV-1進(jìn)化支的不同病毒株的序列中是保守的；或者可以針對在不會取消免疫識別的情況下容忍一定程度序列變異的表位。交叉反應(yīng)性可以利用給定免疫反應(yīng)的強(qiáng)度和/或應(yīng)答物百分比來測量。當(dāng)考慮免疫反應(yīng)的強(qiáng)度時，可以表述為由來自與免疫原性組合物中的進(jìn)化支相同的進(jìn)化支的多肽誘發(fā)的給定免疫反應(yīng)，相對由來自與免疫原性組合物中的進(jìn)化支不同的多肽誘發(fā)的免疫反應(yīng)的強(qiáng)度。為了分析免疫 反應(yīng)的強(qiáng)度，免疫原性組合物中包含抗原的多肽可以用于免疫學(xué)分析檢驗中，例如以蛋白的形式分析抗體反應(yīng)，或者以重疊的合成肽組的形式分析T細(xì)胞應(yīng)答。合適的免疫學(xué)分析檢驗是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，在以下實施例中有描述。免疫反應(yīng)的強(qiáng)度還可以表述為通過合適的血清學(xué)檢測確定的免疫原性組合物誘發(fā)的抗原特異性抗體的效價(或濃度)。T細(xì)胞應(yīng)答的強(qiáng)度可以表述為免疫原性組合物誘發(fā)的抗原特異性細(xì)胞在總的T細(xì)胞群體中的出現(xiàn)頻率(或者數(shù)量)，這可以通過細(xì)胞因子的產(chǎn)生進(jìn)行監(jiān)測。免疫反應(yīng)，例如交叉反應(yīng)性免疫反應(yīng)的強(qiáng)度，會被完全或部分保守的表位的數(shù)量以及被識別的表位的優(yōu)勢度影響。例如，高強(qiáng)度免疫反應(yīng)可能是由于識別大量較弱保守表位造成的，或者是識別少數(shù)優(yōu)勢表位造成的。方便地，觀察到的交叉反應(yīng)水平是總的T細(xì)胞群體中免疫原性組合物誘發(fā)的抗原特異細(xì)胞中的最多10%、最多15%、最多20%、最多25%、最多30%、最多35%、最多40%、最多45%、最多50%、最多55%、最多60%、最多65%、最多70%、最多80%、最多90%或最多100%，或者免疫原性組合物誘發(fā)的抗原特異性抗體效價(或濃度)的最多10%、最多15%、最多20%、最多25%、最多30%、最多35%、最多40%、最多45%、最多50%、最多55%、最多60%、最多65%、最多70%、最多80%、最多90%或最多100%。從對來自不同進(jìn)化支的HIV-1病毒株有應(yīng)答者百分比的角度測量交叉反應(yīng)性時，可以測量接種了疫苗的個體在后續(xù)攻擊后在免疫學(xué)檢驗中表現(xiàn)出陽性反應(yīng)的數(shù)量或百分t匕。所述有應(yīng)答者可以對抗原上的一或多種表位有反應(yīng)。有應(yīng)答者還可以對發(fā)明所述免疫原性組合物中的一或多種多肽，和/或發(fā)明所述免疫原性組合物中的一或多種抗原有反應(yīng)?？梢杂糜诜治鲇袘?yīng)答者百分比或者免疫反應(yīng)強(qiáng)度的免疫學(xué)檢驗和血清學(xué)檢查是本領(lǐng)域已知的。這類檢驗的例子是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，在下文實施例部分有描述。優(yōu)選地，樣品中觀察到的交叉反應(yīng)水平最多10%、最多15%、最多20%、最多25%、最多30%、最多35%、最多40%、最多45%、最多50%、最多55%、最多60%、最多65%、最多70%、最多80%、最多90%或最多100%的受試對象是有應(yīng)答者。無論使用哪種測量方法，本發(fā)明不要求對來自免疫原性組合物中不存在的進(jìn)化支的HIV-1病毒株有完全的交叉反應(yīng)性，例如100%交叉反應(yīng)性。發(fā)明的免疫原性組合物包含佐劑，所述佐劑是Thl免疫反應(yīng)的優(yōu)選誘導(dǎo)劑。Vaccine Design-the Subunit and Adjuvant Approach, edited by PowellandNewman, Plenum Press, New York, 1995中概括描述了佐劑,該文獻(xiàn)通過引用并入本文。作為免疫刺激劑的例子的佐劑是指免疫原性組合物中能夠加強(qiáng)或者強(qiáng)化對抗原的特異性免疫反應(yīng)(抗體和/或細(xì)胞介導(dǎo)的)的成分。佐劑可以誘發(fā)Thl型和Th2型免疫反應(yīng)。Thl型細(xì)胞因子(例如IFN-Y、IL_2和IL-12)傾向于誘發(fā)細(xì)胞介導(dǎo)的針對給定抗原的免疫反應(yīng)，而Th2型細(xì)胞因子(例如IL-4、IL-5、11-6、IL-10)傾向于誘發(fā)對抗原的體液免疫反應(yīng)。在本發(fā)明中，佐劑是Thl免疫反應(yīng)的優(yōu)選誘導(dǎo)劑。Thl和Th2型免疫反應(yīng)的區(qū)別不是絕對的?，F(xiàn)實中,個體支持的免疫反應(yīng)會被描述為 Thl 優(yōu)勢或 Th2 優(yōu)勢型。但是，按照 Mosmann and Coffman (Mosmann, T.R.and Coffman,R.1.(1989)THl and TH2 cells !different patternsof lymphokine secretion lead todifferent functional properties.Annual Review oflmmunology, 7, pl45-173,通過弓I用并入本文)描述過的鼠CD4+T細(xì)胞克隆來考慮細(xì)胞因子的家族往往是方便的。傳統(tǒng)上，Thl型應(yīng)答與T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的INF- Y和IL-2細(xì)胞因子關(guān)聯(lián)。其它經(jīng)常直接與Thl型免疫反應(yīng)誘導(dǎo)相關(guān)的細(xì)胞因子不是由T細(xì)胞產(chǎn)生的，比如IL-12。相反，Th2型反應(yīng)與11-4、IL-5、IL-6、IL -10的分泌關(guān)聯(lián)。促進(jìn)Thl優(yōu)勢型反應(yīng)的合適的佐劑系統(tǒng)包括:單磷酰脂質(zhì)A或其衍生物(或者一般的脫毒的脂質(zhì)A-參見例如W02005107798)，尤其是3-de_0-?；膯瘟柞Ｖ|(zhì)A(3D-MPL)(其制備見GB 2220211 A);和單磷酰脂質(zhì)A、優(yōu)選3-de-O-酰基化的單磷酰脂質(zhì)A以及鋁鹽(例如磷酸鋁或者氫氧化鋁)或者水包油乳劑的組合。在這種組合中，抗原和3D-MPL被包含在相同的顆粒結(jié)構(gòu)中，從而能夠更有效地遞送抗原性和免疫刺激性信號。研究顯示3D-MPL能夠進(jìn)一步加強(qiáng)明礬吸附的抗原的免疫原性[Thoelen etal.Vaccine (1998) 16:708-14 ；EP 689454-B1，均通過引用并入本文]。加強(qiáng)型系統(tǒng)包括單磷酰脂質(zhì)A和皂苷衍生物的組合，特別是W094/00153(通過引用并入本文)中公開的QS21和3D-MPL的組合；或者致反應(yīng)性較低的組合物，其中正如WO96/33739(通過引用并入本文)中描述的QS21被膽固醇進(jìn)行了抑制。WO 95/17210中描述了一種特別強(qiáng)力的在水包油乳劑中包含QS21、3D-MPL和生育酚的佐劑制劑。在一個實施方案中，免疫原性組合物還包含可以是QS21的皂苷。制劑還可以包含水包油乳劑和生育酚(W0 95/17210，通過引用并入本文)。在發(fā)明的實施方案中，佐劑包含的一或多種成分選自有免疫活性的皂苷組分和/或脂多糖和/或免疫刺激性寡核苷酸。在實施方案中，佐劑包含有免疫活性的皂苷組分和脂多糖。方便地，所述有免疫活性的皂苷組分是QS21，和/或所述脂多糖是脂質(zhì)A衍生物。合適地，脂質(zhì)A衍生物是3D-MPL。合適的佐劑是3D-MPL和QS21的組合(EP O 671 948 BI，通過引用并入本文)，包含3D-MPL和QS21的水包油乳劑(W0 95/17210，WO 98/56414，均通過引用并入本文)或者與其它載體一起配制的3D-MPL(EP O 689 454 BI，通過引用并入本文)。3D-MPL可以從Glaxo SmithKline Biologicals North America獲得，它主要促進(jìn)帶有IFN-Y (Thl)表現(xiàn)型的⑶4+T細(xì)胞應(yīng)答?？梢愿鶕?jù)GB 2 220211A中公開的方法進(jìn)行制備。從化學(xué)上講，它是帶有3、4、5或6個?；湹?-脫酰單磷酰脂質(zhì)A的混合物。優(yōu)選在本發(fā)明的組合物中使用的是小顆粒3D-MPL。小顆粒3D-MPL的顆粒大小使得它可以通過0.22 μ m的濾膜進(jìn)行過濾除菌。這種制品在WO 94/21292中有描述，該專利申請通過引用并入本文。適合本發(fā)明使用的另一種佐劑是Quil A及其衍生物。Quil A是從南美樹種智利阜莢樹(Quilaja Saponaria Molina)分離的阜苷制品，由Dalsgaard等在1974年首次描述具有佐劑活性(“Saponin adjuvants”,Archiv.fiir die gesamteVirusforschung, Vol.44,Springer Verlag, Berlin, p243_254,通過引用并入本文)。已經(jīng)通過HPLC分離到保持了Quil A的佐劑活性而沒有相關(guān)毒性的純化Quil A片段(EP 0362278，通過引用并入本文)，例如QS7和QS21 (又稱為QA7和QA21)。QS21是從智利皂莢樹的樹皮得到的天然皂苷，能夠誘導(dǎo)CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTLs)、Thl細(xì)胞和優(yōu)勢性IgG2a抗體反應(yīng)，是就本發(fā)明來說優(yōu)選的皂苷。具體的特別合適的QS21制劑已有描述，這些制劑包含固醇(W096/33739，通過引用并入本文)。構(gòu)成本發(fā)明一部分的皂苷在與膽固醇和脂質(zhì)配制時，可以是分開的膠束形式、混合的膠束(優(yōu)選，但不是排他地含有膽汁鹽)或者是ISCOM母體的形式(EP O 109942 BI，通過引用并入本文)、脂質(zhì)體或相關(guān)的膠體結(jié)構(gòu)，比如蟲樣的或者環(huán)樣的多聚復(fù)合體或者脂質(zhì)層狀結(jié)構(gòu)和片層，或者處于水包油乳劑的形式(例如象WO 95/17210中那樣，通過引用并入本文)。皂苷可以與金屬鹽結(jié)合，比如氫氧化鋁或者磷酸鋁(W098/15287，通過引用并入本文)。加強(qiáng)型系統(tǒng)涉及單磷酰脂質(zhì)A(或脫毒的脂質(zhì)A)和皂苷衍生物的組合，特別是象WO 94/00153(通過引用并入本 文)中公開的QS21和3D-MPL的組合，或者是象WO96/33739(通過引用并入本文)中公開的其中的QS21用膽固醇進(jìn)行了抑制的致反應(yīng)性較低的組合物。WO 95/17210(通過引用并入本文)中描述的一種特別強(qiáng)力的佐劑制劑涉及生育酚和水包油乳劑中有或沒有QS21和/或3D-MPL。在實施方案中，佐劑包含固醇，合適的是膽固醇。合適的固醇(例如膽固醇)能夠在保持皂苷的佐劑效應(yīng)的情況下減少組合物的反應(yīng)原活性。在發(fā)明的實施方案中，佐劑包含脂質(zhì)體載體。在實施方案中，佐劑包含的皂苷和固醇的比率是皂苷:固醇在1: 1-1: 100 (w/W)。方便地，皂苷:固醇的比率在1: 1-1: 10(w/w)或者皂苷:固醇的比率在
1: 1-1: 5 (w/w)ο在實施方案中，佐劑包含的皂苷和脂多糖的比率是皂苷:脂多糖為1:1。方便地，佐劑包含脂多糖，所述脂多糖在每劑中的量是1-60 μ g。合適地，脂多糖在每劑中的量是50 μ g、25 μ g、10 μ g或者5 μ g。方便地，佐劑包含皂苷，所述皂苷在每劑中的量是1-60 μ g。合適地，皂苷在每劑中的量是 50 μ g、25y g>10y g 或者 5 μ g。在實施方案中，佐劑包含(每個0.5mL 劑量)0.025-2.5、0.05-1.5、0.075-0.75、0.1-0.3 或 0.125-0.25mg (例如 0.2-0.3、0.1-0.15,0.25 或 0.125mg)固醇(例如膽固醇)。在實施方案中，佐劑包含(每個0.5mL劑量)5-60、10-50或20-30 μ g (例如5-15、40-50、10、20、30、40 或 50 μ g)脂質(zhì) A 衍生物(例如 3D-MPL)。在實施方案中，佐劑包含(每個0.5mL劑量)5-60、10-50或20-30 μ g (例如5-15、40-50、10、20、30、40 或 50 μ g)皂苷(例如 QS21)。在發(fā)明的實施方案中，佐劑包含水包油乳劑。方便地，所述水包油乳劑包含角鯊烯和/或α生育酚。合適地，水包油乳劑是可以代謝的水包油乳劑。具體來說，水包油乳劑適合包含諸如Tween 80的乳化劑。佐劑可以方便地包含皂苷和脂多糖。具體來說，佐劑可以包含皂苷:脂多糖比率在1: 10-10: I (w/w)范圍的皂苷和脂多糖。佐劑可以方便地包含皂苷和固醇。具體來說，佐劑可以包含皂苷:固醇比率在1:1-1: 20 (w/w)范圍的皂苷和固醇。佐劑可以方便地包含皂苷和可代謝的油。具體來說，佐劑可以包含可代謝油:皂苷比率在1: 1-250: I (w/w)范圍的皂苷和可代謝油。佐劑可以方便地包含α生育酚。在實施方案中，佐劑包含(每個0.5mL劑量)0.5-15、1-13、2-11、4-8或5-6mg(例如2-3、5-6或10-llmg)可代謝油(比如角鯊烯)。在實施方案中，佐劑包含(每個0.51^劑量)0.1-10、0.3-8、0.6-6、0.9-5、1-4或2-3mg(例如 0.9-1.1、2-3 或 4_5mg)乳化劑(比如 Tween 80)。在實施方案中，佐劑包含(每個0.5mL劑量)0.5-20、l-15、2-12、4-10、5-7mg(例如11-13,5-6或2-3mg)母生育酚(比如α生育酚)。在實施方案中，佐劑包含(每個0.5mL劑量)5-60、10-50或20-30 μ g (例如5-15、40-50、10、20、30、40 或 50 μ g)脂質(zhì) A 衍生物(例如 3D-MPL)。在實施方案中，佐劑包含(每個0.5mL 劑量)0.025-2.5、0.05-1.5、0.075-0.75、0.1-0.3 或 0.125-0.25mg (例如 0.2_0.3、0.1-0.15、0.25 或 0.125mg)固醇(例如膽固醇)。在實施方案中，佐劑包含(每個0.5mL劑量)5-60、10-50或20-30 μ g (例如5-15、40-50、10、20、30、40 或 50 μ g)皂苷(例如 QS21)。另一個實施方案中，佐劑包含金屬鹽和脂質(zhì)A衍生物。這類感興趣的佐劑系統(tǒng)包括那些基于與脂多糖3-de-O-?；瘑瘟柞Ｖ|(zhì)A組合的鋁鹽的佐劑?？乖?-de-O-酰基化單磷酰脂質(zhì)A可以一起吸附在相同的金屬鹽顆粒上或者吸附在不同金屬鹽顆粒上。合適地，佐劑包含(每個0.5mL劑量)100-750、200-500或300-400 μ gAl，例如以磷酸鋁的形式。這類實施方案中，佐劑包含(每個0.5mL劑量)5-60，10-50，or 20-30 μ g(e.g.5-15，40-50，10，20，30，40or 50 μ g)脂質(zhì) A 衍生物(例如 3D-MPL)。在發(fā)明的實施方案中，佐劑包含含有CpG基元的免疫刺激性寡核苷酸。
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免疫刺激性寡核苷酸可以用于本發(fā)明的免疫原性組合物中。用于佐劑或本發(fā)明的免疫原性組合物中的優(yōu)選寡核苷酸是含有CpG的寡核苷酸，優(yōu)選寡核苷酸含有兩個或以上的二核苷酸CpG基元，所述基元被至少三個，更優(yōu)選至少六個或以上的核苷酸隔開。CpG基元是胞嘧啶核苷酸跟著一個鳥嘌呤核苷酸。本發(fā)明的CpG寡核苷酸一般是脫氧核苷酸。在優(yōu)選實施方案中，寡核苷酸中的寡核苷酸間是二硫代磷酸酯，或者更優(yōu)選硫代磷酸酯鍵，雖然磷酸二酯和其它核苷酸間連鍵也在發(fā)明的范圍內(nèi)。還包括在發(fā)明范圍內(nèi)的是帶有混合核苷酸間鍵合的寡核苷酸。制備硫代磷酸酯寡核苷酸或二硫代磷酸酯的方法在US5，666，153、US5, 278，302和W095/26204中有描述，這些文獻(xiàn)均通過引用并入本文。優(yōu)選的寡核苷酸的例子具有以下序列。這些序列優(yōu)選含有硫代磷酸修飾的核苷酸間鍵合。OLIGO 1(SEQ ID NO:1):TCC ATG ACG TTC CTG ACG TTOLIGO 2 (SEQ ID NO:2):TCT CCC AGC GTG CGC CATOLIGO 3 (SEQ ID NO:3):ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACGOLIGO 4 (SEQ ID NO:4):TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTTOLIGO 5 (SEQ ID NO:5):TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT
OLIGO 6 (SEQ ID NO:6):TCG ACG TTT TCG GCG CGC GCC G替代的CpG寡核苷酸可以包含以上的優(yōu)選序列，其中含有不連續(xù)的缺失或添加。本發(fā)明使用的CpG寡核苷酸可以通過本領(lǐng)域已知的任何方法合成(例如，參見EP468520，通過引用并入本文)。這類寡核苷酸可以方便地利用自動合成儀來合成。根據(jù)發(fā)明的一個方面，本發(fā)明的免疫原性組合物是用于治療或預(yù)防由來自與免疫原性組合物中的一或多種進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支的HIV-1病毒株引起的疾病或感染。另外，在發(fā)明的實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物是用于治療或預(yù)防由免疫原性組合物中的一或多種進(jìn)化支的HIV-1病毒株引起的疾病或感染。相應(yīng)地，免疫原性組合物能夠誘導(dǎo)對組合物中存在的進(jìn)化支的同源免疫反應(yīng)，也能誘導(dǎo)對組合物中存在的抗原株未涵蓋的進(jìn)化支的交叉免疫反應(yīng)。免疫原性組合物因此能夠廣泛地治療或預(yù)防由來自多個進(jìn)化支的多個HIV-1病毒株引起的疾病或感染。方便地，在發(fā)明的所有實施方案中，組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支選自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支或者HIV-1的流行重組形式(CRF)。具體來說，免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支是進(jìn)化支B。同樣方便地，在發(fā)明的所有實施方案中，與免疫原性組合物中存在的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支選自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支或者HIV-1的流行重組形式(CRF)。具體來說，與免疫原性組合物中存在的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支選自A或C進(jìn)化支。合適地，與免疫原性組合物中存在的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支是A和C進(jìn)化支。這些HIV-1進(jìn)化支在全世界的流行率不同。相應(yīng)地，發(fā)明的免疫原性組合物的適用地域不應(yīng)當(dāng)受到限制，可以用于治療和預(yù)防全世界的HIV-1感染和疾病。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物是用于誘發(fā)抗HIV-1病毒株的體液免疫反應(yīng)，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。方便地，在這類實施方案中，也可以誘發(fā)抗來自免疫原性組合物中的一或多種進(jìn)化支HIV-1病毒株的體液免疫反應(yīng)。在本發(fā)明中，體液免疫反應(yīng)的特征在于強(qiáng)的抗原特異性抗體效價。免疫反應(yīng)是通過基于ELISA的分析檢測的。誘發(fā)了強(qiáng)體液反應(yīng)表明本發(fā)明的免疫原性組合物具有廣泛的免疫原性。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物是用于給感染了 HIV-1病毒株的個體賦予長期不進(jìn)展者狀態(tài)，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。方便地，在這類實施方案中，也可以給感染了來自免疫原性組合物中的一或多種進(jìn)化支HIV-1病毒株的個體賦予長期不進(jìn)展者狀態(tài)。長期不進(jìn)展者(LTNPs)是這樣的感染了 HIV-1的患者，所述患者能夠控制HIV-1感染，從而阻止疾病的進(jìn)展。這樣的狀態(tài)往往是與存在多功能和有增殖能力的HIV-1特異性⑶4+T細(xì)胞有關(guān)。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物是用于誘發(fā)能夠產(chǎn)生多重細(xì)胞因子的抗病毒CD4+T細(xì)胞，所述T細(xì)胞能夠抗來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支的HIV-1病毒株。方便地，在這類實施方案中，可以誘導(dǎo)能夠產(chǎn)生多重細(xì)胞因子的抗病毒CD4+T細(xì)胞，所述T細(xì)胞抗來自免疫原性組合物中的一或多種進(jìn)化支的HIV-1病毒株。方便地，⑶4+T細(xì)胞產(chǎn)生IL2、IFNy和TNF α中的兩種或更多種。這些細(xì)胞可以被認(rèn)為是多功能的。在這方面，⑶4+Τ細(xì)胞產(chǎn)生IL2和IFN Y，或者⑶4+Τ細(xì)胞產(chǎn)生IL2和TNFa，或者CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生IFNy和TNF α。合適地，CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生IL2、IFN Y和TNF a。在實施方案中，⑶4+T細(xì)胞表達(dá)⑶40L。展示出多功能表 現(xiàn)型的CD4+T細(xì)胞的誘發(fā)表明了本發(fā)明的免疫原性組合物的廣泛免疫原性。這類多功能CD4+T細(xì)胞的存在與控制HIV-1感染和病毒血癥相關(guān)，例如在長期不進(jìn)展者中感染和/或疾病沒有進(jìn)展。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物是用于防止感染了 HIV-1病毒株的個體中的進(jìn)展型CD4+T細(xì)胞下降，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。方便地，在這類實施方案中，還防止了感染來自免疫原性組合物中一或多種進(jìn)化支的HIV-1病毒株的個體中的進(jìn)展型CD4+T細(xì)胞下降。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物是用于減少或消除感染了 HIV-1病毒株的個體中的病毒儲庫，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。方便地，在這類實施方案中，可以減少或消除感染了來自免疫原性組合物中的一或多種進(jìn)化支的HIV-1病毒株的個體的病毒儲庫。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物是用于在感染了 HIV-1病毒株的個體中引發(fā)大量長期的HIV-1特異性多功能CD4+T細(xì)胞，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。方便地，在這類實施方案中，可以在感染了免疫原性組合物中存在的一或多種進(jìn)化支的HIV-1病毒株的個體中引發(fā)大量長期的HIV-1特異性多功能⑶4+T細(xì)胞。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物是用于控制或減輕感染了 HIV-1病毒株的個體中的病毒血癥，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。方便地，在這類實施方案中，可以控制或減輕感染了 HIV-1病毒株的個體的病毒血癥，所述HIV-1病毒株來自免疫原性組合物中的一或多種進(jìn)化支。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物是用于誘發(fā)抗HIV-1病毒株的抗病毒免疫反應(yīng)的長期記憶，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。方便地，可以誘發(fā)抗病毒免疫反應(yīng)的長期記憶，所述抗病毒免疫反應(yīng)能夠抵抗來自免疫原性組合物中的一或多種進(jìn)化支的HIV-1病毒株。合適地，抗病毒免疫反應(yīng)包括誘導(dǎo)持久性的抗病毒CD4+T細(xì)胞。這種T細(xì)胞是應(yīng)答來自免疫原性組合物中存在的進(jìn)化支以及免疫原性組合物中沒有的進(jìn)化支的抗原而誘發(fā)的，因此根據(jù)本發(fā)明是交叉反應(yīng)性免疫反應(yīng)。方便地，⑶4+T細(xì)胞保持至少6個月?！氨３帧币馕吨?+T細(xì)胞能夠以和它們開始被誘導(dǎo)時的表型狀態(tài)等同的狀態(tài)存在相當(dāng)一段時間。例如，如果CD4+T細(xì)胞在最初被誘導(dǎo)時釋放兩種或更多種特異性細(xì)胞因子，保持的CD4+T細(xì)胞會在延續(xù)一段時間后，例如至少6個月后仍展現(xiàn)出相同的細(xì)胞因子特性。合適地，⑶4+T細(xì)胞保持6-24個月或者9_18個月，例如保持12個月。相應(yīng)地，本發(fā)明還提供了治療或預(yù)防HIV感染的方法，所述方法包括將免疫原性組合物給予受試對象 ，誘發(fā)受試對象體內(nèi)抗HIV-1病毒株的免疫反應(yīng)，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。在其它實施方案中，本發(fā)明提供了本文描述的組合物的使用方法。W02006/013106中公開了包含本發(fā)明免疫原性組合物中可以有的一或多種抗原的融合蛋白，該申請通過引用并入本文?？乖璓ol、Nef、Gag以及它們的變體和片段曾被選中包含在融合蛋白中以用于免疫原性組合物，因為它們被認(rèn)為在不同HIV病毒株間有較好的保守性，因此比不太保守的抗原更可能與來自不同HIV病毒株的抗原發(fā)生交叉反應(yīng)。但是，融合蛋白中引入這些抗原可能會招致無法預(yù)見的并發(fā)癥，因為其中的抗原沒有對應(yīng)的天然蛋白。相應(yīng)地，不能直接地產(chǎn)生融合蛋白，并且不應(yīng)當(dāng)假設(shè)融合蛋白與天然蛋白作用方式相同。在發(fā)明的實施方案中，免疫原性組合物中的兩、三、四或更多種抗原被融合形成融合蛋白。方便地，將Gag融合到Pol上，或者Pol融合到Gag上；將Pol融合到Nef上或者Nef融合到Pol上，和/或Nef融合到Gag上或者Gag融合到Nef上。合適地，在發(fā)明的融合蛋白中，Gag是P17和/或p24，和/或Pol是RT。具體來說，將免疫原性組合物中的抗原融合形成融合蛋白是方便的，所述融合蛋白包含處于任何順序的Nef、RT、pl7和p24。合適地，抗原被融合形成包含p24-RT-Nef-pl7的融合蛋白。該融合蛋白被稱為F4，在實施例中有描述。融合蛋白中的抗原可以直接相互融合或者借助連接分子融合。這類連接分子可以包含含有一或多種氨基酸的異源氨基酸序列。融合蛋白中的抗原可以來自相同的HIV病毒株，可以來自相同HIV-1進(jìn)化支中的不同病毒株，或者可以來自不同HIV-1進(jìn)化支中的不同病毒株。在一個實施方案中，融合蛋白中的抗原來自兩、三或四種不同HIV-1進(jìn)化支的HIV-1病毒株。替代地，融合蛋白中的所有抗原來自相同HIV-1進(jìn)化支中的HIV-1病毒株(們)。發(fā)明所述的肽可以與其它抗原聯(lián)用。具體來說，這包括HIV-1env蛋白及其片段或變體。優(yōu)選的env形式是gpl20、gpl40和gpl60。所述env可以是例如WO 00/07631中描述的來自被稱為R2的HIV-1B進(jìn)化支包膜克隆的包膜蛋白，或其片段或變體。Env也可以是被稱為W61.D的gpl20顆粒，或其片段或變體。因此發(fā)明還提供了根據(jù)發(fā)明還包含HIV-1env蛋白或其片段或變體的免疫原性組合物。為了清楚起見，這里使用的術(shù)語“片段”和“變體”的含義如上文的定義。在實施方案中，本發(fā)明的包含融合蛋白的免疫原性組合物還包含一或多種含有抗原的非融合多肽。在實施方案中，非融合多肽中的抗原所來自的HIV-1病毒株與融合蛋白中的至少一種抗原是來自相同進(jìn)化支。替代地，非融合多肽中的抗原所來自的HIV-1病毒株與融合蛋白中的一或多種進(jìn)化支不同。在實施方案中，非融合多肽包含Env。例如，所述非融合多肽包含gpl20、gpl40或gpl60中的一或多種。HIV-1包膜糖蛋白gpl20是用于附著在宿主細(xì)胞上的病毒蛋白。gpl20蛋白是中和抗體的主要靶點，但不幸的是蛋白中最有免疫原性的區(qū)域(V3環(huán))也是蛋白中最多變的部分。gpl20蛋白還含有能被細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)識別的表位。這些效應(yīng)細(xì)胞能夠清除感染了病毒的細(xì)胞，因此構(gòu)成了第二種主要的抗病毒免疫機(jī)制。較之中和抗體的靶點區(qū)域，一些CTL表位在不同HIV-1病毒株之間似乎較為保守。因為這個原因，gpl20和gpl60可以作為用于引發(fā)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)(特別是CTL)的疫苗中的抗原成分。在一個實施方案中，發(fā)明所述免疫原性組合物中的一或多種抗原之一來自HIV-1，所述HIV-1來自選自 A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支的任何一個進(jìn)化支或者HIV-1流行重組型(CRF)。當(dāng)免疫原性組合物中存在一個以上抗原時，則所有抗原可以來自相同的進(jìn)化支。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物中的一或多種抗原之一來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。例如在某些實施方案中，當(dāng)免疫原性組合物中存在兩種抗原時，兩種抗原都是來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株；或者當(dāng)免疫原性組合物中存在三種抗原時，三種抗原都是來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株；或者當(dāng)免疫原性組合物中存在四種抗原時，四種抗原都是來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株等等。替代地，在發(fā)明的免疫原性組合物中，免疫原性組合物中的一或多種抗原之一來自C進(jìn)化支的HIV-1病毒株。例如在某些實施方案中，當(dāng)免疫原性組合物中存在兩種抗原時，兩種抗原都是來自C進(jìn)化支的HIV-1病毒株；或者當(dāng)免疫原性組合物中存在三種抗原時，三種抗原都是來自C進(jìn)化支的HIV-1病毒株；或者當(dāng)免疫原性組合物中存在四種抗原時，四種抗原都是來自C進(jìn)化支的HIV-1病毒株等等。本發(fā)明的免疫原性組合物或疫苗含有免疫保護(hù)或免疫治療量的多肽，可以通過常規(guī)技術(shù)進(jìn)行制備。在實施方案中，單個劑量免疫原性組合物中每種抗原的總量是0.5-25 μ g,2-20 μ g、5_15 μ g 或大約 10 μ g。合適地，單個劑量免疫原性組合物中的融合蛋白的總量是10μ g，和/或單個劑量免疫原性組合物中的非融合多肽的總量是20 μ g0在實施方案中，單個劑量免疫原性組合物中所有抗原的總量是0.5_50μ8、2-40 μ g、5_30 μ g、7_20 μ g 或者大約 30 μ g、大約 20 μ g 或大約 10 μ g。免疫原性組合物劑量中的蛋白含量要挑選能夠在典型受體中誘發(fā)免疫反應(yīng)，但沒有明顯的有害副作用的量。根據(jù)采用的具體免疫原和所選的給劑或接種方案，這個量會有所變化。通過包括對受試對象中的相關(guān)免疫反應(yīng)進(jìn)行觀察的標(biāo)準(zhǔn)研究可以明確對于特定免疫原性組合物來說最佳的用量。
藥物組合物的給藥可以采取一個或者一個以上的個別劑量，例如以含有相同多肽的組合物的重復(fù)劑量，或者異質(zhì)“初免-強(qiáng)化”接種方案的形式。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物首先以兩個或三個劑量給予受試對象，其中所述劑量間隔兩周到三個月的時間，優(yōu)選一個月。方便地，將組合物每6-24或9-18個月，例如每年一次給予受試對象(例如作為加強(qiáng)劑)。例如，將組合物以6個月或I年的間隔給予受試對象(例如作為加強(qiáng)劑)。合適地在這方面，之后將組合物給予受試對象能夠加強(qiáng)先期給予相同受試對象的組合物引發(fā)的免疫反應(yīng)。在實施方案中，發(fā)明的免疫原性組合物被作為治療或預(yù)防HIV-1病毒株引起的疾病或感染的初免-強(qiáng)化方案的一部分，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。方便地，組合物是初免劑量。替代地，組合物是強(qiáng)化劑量。合適地，給予了兩種或更多種初免和/或強(qiáng)化劑量。異質(zhì)初免-強(qiáng)化方案在初免和強(qiáng)化步驟中給予的是不同形式的免疫原性組合物或疫苗，其中每個本身可以包括兩次或更多次給藥。初免組合物和強(qiáng)化組合物應(yīng)當(dāng)有至少一種共同的抗原，雖然不一定是抗原的相同形式，但可以是相同抗原的不同形式。根據(jù)本發(fā)明，初免強(qiáng)化接種可以是同質(zhì)初免強(qiáng)化方案或者異質(zhì)初免強(qiáng)化方案。同質(zhì)初免強(qiáng)化方案使用相同的組分進(jìn)行初免和強(qiáng)化，例如本發(fā)明的免疫原性組合物.
異質(zhì)初免強(qiáng)化方案可以用基于蛋白和DNA的制劑來進(jìn)行。這種策略被認(rèn)為可以有效地誘發(fā)廣泛的免疫反應(yīng)。有佐劑輔佐的蛋白疫苗主要誘發(fā)抗體、CD4+T細(xì)胞免疫反應(yīng)，而以質(zhì)?；蛑亟M載體形式遞送DNA可以誘發(fā)強(qiáng)烈的CD8+T細(xì)胞應(yīng)答。因此，聯(lián)合接種蛋白和DNA可以提供更多樣的免疫反應(yīng)。這對HIV來說特別相關(guān)，因為中和抗體、CD4+T細(xì)胞和⑶8+T細(xì)胞被認(rèn)為對抗HIV-1的免疫防御是重要的。在一個實施方案中，以病毒載體來遞送DNA。例如，病毒載體可以衍生自腺病毒。在其它實施方案中，病毒載體可以是象US20100055166中描述的，該申請對病毒載體和初免強(qiáng)化方法的公開通過引用并入本文。在另一個實施方案中，病毒載體可以衍生自麻疹病毒。在其它實施方案中，病毒載體可以是象W02010/023260中描述的重組麻疹病毒，該申請對病毒載體和初免強(qiáng)化方法的公開通過引用并入本文。相應(yīng)地，本發(fā)明還提供了治療或預(yù)防HIV感染的方法，所述方法包括將第一組合物給予受試對象和隨后將第二組合物給予受試對象，其中給藥后，受試對象有可檢測到的抗HIV-1株的免疫反應(yīng)，所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。在替代實施方案中，方法可以是同質(zhì)初免加強(qiáng)方案或者異質(zhì)初免加強(qiáng)方案。在發(fā)明其它方面中，本發(fā)明的免疫原性組合物身疫苗組合物。New Trends and Developments in Vaccines, edited by Voller et al.,University Park Press, Baltimore, Maryland, U.S.A.1978 中概括描述了疫苗的制備，該文獻(xiàn)通過引用并入本文。在發(fā)明其它方面中，提供了發(fā)明的免疫原性組合物或疫苗在制造用于治療或預(yù)防HIV-1病毒株引起的疾病或感染的藥物中的用途。在發(fā)明其它方面中，提供了根據(jù)以上描述的所有情況治療或預(yù)防HIV-1疾病或感染的方法，所述方法包括將發(fā)明的免疫原性組合物或疫苗給予受試對象的步驟。發(fā)明人希望本文中的術(shù)語“包含(comprising、comprise和comprises) ”在任何情況下任選可以分別被術(shù)語“由...構(gòu)成(consisting of、consist of和consistsof) ”代替。文中與本發(fā)明的“免疫原性組合物”相關(guān)的實施方案還適用于與本發(fā)明的“疫苗”相關(guān)的實施方案，反之亦然。為了更好地理解本發(fā)明，給出了以下實施例。這些實施例僅用于闡述的目的，無論如何也不應(yīng)當(dāng)理解為對發(fā)明范圍的限制。
實施例以下實施例和數(shù)據(jù)用 于對發(fā)明的闡述，而非限制。1.制備佐劑溶于有機(jī)溶劑的脂質(zhì)(比如來自卵黃的或者合成的磷脂酰膽堿)和膽固醇以及3D-MPL混合物在真空下(或者替代地在惰性氣體氣流下)干燥。然后加入水溶液(比如磷酸鹽緩沖液)，攪動容器直至所有的液體懸浮起來。然后將懸浮液高壓微射流均質(zhì)，直至脂質(zhì)體大小被減小到大約lOOnm，然后經(jīng)0.2μπι濾膜過濾除菌。可以用擠壓或超聲處理代替該步驟。一般地，膽固醇:磷脂酰膽堿的比率是1: 4 (w/w)，加入水溶液使膽固醇的終濃度達(dá)到10mg/ml。脂質(zhì)體大小約IOOnm,以SUV(小單室囊泡(small unilamelar vesicles))來稱呼。脂質(zhì)體本身隨時間推移是很穩(wěn)定的，沒有致融合能力。將大體積無菌SUV 加入 PBS。PBS 成分是 Na2HPO4:9mM、KH2PO4:48mM、NaCl:1OOmMpH 6.10將溶于水溶液的QS21加入SUV。3D-MPL和QS21的終濃度是各100 μ g/ml。在每次加入成分時，將中間產(chǎn)物攪拌5分鐘。檢查pH，需要時用NaOH或HCl調(diào)節(jié)到6.1+/-0.1。2.制各 HIV-1 杭原2.1構(gòu)建和表達(dá)HIV-lp24-RT-Nef_pl7融合(“F4”)以及密碼子優(yōu)化的F4(co)(“F4co”)。2.1.1未經(jīng)密碼子優(yōu)化的F4HIV-1gag p24 (衣殼蛋白)和pl7 (基質(zhì)蛋白)、逆轉(zhuǎn)錄酶以及Nef蛋白在大腸桿菌B834菌株(Β834ΦΕ3)，是BL21(DE3)的甲硫氨酸營養(yǎng)缺陷型親代)中表達(dá)，受噬菌體T7啟動子(PET表達(dá)系統(tǒng))調(diào)控。
它們被表達(dá)為單個融合蛋白，含有四種蛋白的完整序列。成熟的P24編碼序列來自HIV-1BH10分子克隆，成熟pl7序列和RT基因來自HXB2，Nef基因來自BRU分離物。誘導(dǎo)后，重組細(xì)胞表達(dá)相當(dāng)高水平的p24-RT-Nef-pl7融合蛋白，達(dá)到總蛋白的10%。當(dāng)在22°C培養(yǎng)和誘導(dǎo)細(xì)胞時，p24-RT-Nef-pl7融合蛋白主要局限在細(xì)菌裂解物的可溶組分中(即使是冷凍/解凍后)。當(dāng)在30°C培養(yǎng)時，大約30%的該重組蛋白與不溶組分結(jié)合。融合蛋白p24-RT-Nef_pl7由1136個氨基酸構(gòu)成，分子量約為129kDa。全長蛋白在SDS膠上遷移到大約130kDa。根據(jù)其氨基酸序列預(yù)期其理論等電點(pi)為7.96，通過2D凝膠電泳證實了這一點。重組質(zhì)粒的詳情:名字:pRIT15436(或?qū)嶒炇颐?pET28b/p24-RT-Nef_pl7)
宿主載體:pET28b復(fù)制子:colEl選擇方法:卡那霉素啟動子:T7插入片段:p24-RT-Nef-pl7融合基因重組蛋白的詳情:p24-RT-Nef-pl7 融合蛋白:1136 個氨基酸.
N末端-p24:232個氨基酸-鉸鏈:2個氨基酸-RT:562個氨基酸-鉸鏈:2個氨基酸-Nff:206個氨基酸-P17:132個氨基酸-C末端核苷酸和氨基酸序列:核苷酸序列
^t^cii^aiHatica^^caaai^ti^iHciiu^ccatatcaccia^tactttaaatgcatgggtaaaagtagtagaagagaaggct
gcagccatgcaaatgttaaaagagaccatcaatgaggaagcticagaafegat8gagtacatccagtgcai^ca ii i'cuiu cacca ^ccii
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JiaJiaaatficcfSi JiSiaUaaataaaaragtaagaatgt 費(fèi)
aga^ceftffagauiK'hH^u^^ce^tU'tataaaactcraa^a^cc^a^caEgcttcacaggag^tnaiia^itt^at^aca^aaaccttuttg;
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aggseceiiccateaiieaaiagtttti^fll ggccccattagccctattgagactgtgtcagtaaaattaaagccaggaatggatggcccaaaagttaaacaatggccattgacagaagaaaaaataaaagcattagtagaaatttgtacagagatggaaaaggaagggaaaatttcaaaaattgggcctgaaaatccatacaatactccagtatttgccataaagaaaaaagacagtactaaatggagaaaattagtagatttcagagaacttaataagagaactcaagacttctgggaagttcaattaggaataccacatcccgcagggttaaaaaagaaaaaatcagtaacagtactggatgtgggtgatgcatatttttcagttcccttagatgaagacttcaggaaatatactgcatttaccatacctagtataaacaatgagacaccagggattagatatcagtacaatgtgcttccacagggatggaaaggatcaccagcaatattccaaagtagcatgacaaaaatcttagagccttttagaaaacaaaatccagacatagttatctatcaatacatggatgatttgtatgtaggatctgacttagaaatag
權(quán)利要求
1.免疫原性組合物，其包含 a.—或多種多肽，包含選自Nef、Pol和/或Gag的一或多種抗原； 其中所述一或多種抗原選自一或多種HIV-1進(jìn)化支中的一或多種病毒株；和 b.佐劑，所述佐劑是Thl型免疫反應(yīng)的優(yōu)選誘導(dǎo)劑， 所述組合物用于治療或預(yù)防由來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支的HIV-1病毒株引起的疾病或感染。
2.權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述組合物包含一或多種含有Nef的多肽。
3.權(quán)利要求2所述的免疫原性組合物，其中Nef來自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支的HIV-1病毒株或者HIV-1的流行重組型(CRF)。
4.權(quán)利要求2或3所述的免疫原性組合物，其中Nef來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。
5.權(quán)利要求1-4所述的免疫原性組合物，其中所述組合物包含一或多種含有Pol的多肽。
6.權(quán)利要求5所述的免疫原性組合物，其中Pol是RT片段。
7.權(quán)利要求5或6所述的免疫原性組合物，其中Pol來自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支的HIV-1病毒株或者HIV-1的流行重組型(CRF)。
8.權(quán)利要求5-7所述的免疫原性組合物，其中Pol來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。
9.權(quán)利要求1-8所述的免疫原性組合物，其中所述免疫原性組合物包含一或多種含有Gag的多肽。
10.權(quán)利要求9所述的免疫原性組合物，其中Gag來自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支的HIV-1病毒株或者HIV-1的流行重組型(CRF)。
11.權(quán)利要求9或10所述的免疫原性組合物，其中Gag來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。
12.權(quán)利要求9-11所述的免疫原性組合物，其中Gag是pl7。
13.權(quán)利要求12所述的免疫原性組合物，其中pl7來自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支的HIV-1病毒株或者HIV-1的流行重組型(CRF)。
14.權(quán)利要求12或13所述的免疫原性組合物，其中pl7來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。
15.權(quán)利要求9-14所述的免疫原性組合物，其中Gag是p24。
16.權(quán)利要求15所述的免疫原性組合物，其中p24來自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支的HIV-1病毒株或者HIV-1的流行重組型(CRF)。
17.權(quán)利要求15或16所述的免疫原性組合物，其中p24來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。
18.權(quán)利要求9-17所述的免疫原性組合物，其中Gag包含pl7和p24，它們作為分開的蛋白抗原成分或者融合在一起。
19.權(quán)利要求18所述的免疫原性組合物，其中pl7和p24被融合在一起并由異源氨基酸序列隔開。
20.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其(a)部分包含兩個或以上的多肽。
21.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含一或多種成分，所述成分選自有免疫活性的皂苷組分和/或脂多糖和/或免疫刺激性寡核苷酸。
22.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含有免疫活性的皂苷組分和脂多糖。
23.權(quán)利要求20或21所述的免疫原性組合物，其中所述有免疫活性的皂苷組分是QS21。
24.權(quán)利要求20-22所述的免疫原性組合物，其中所述脂多糖是脂質(zhì)A衍生物。
25.權(quán)利要求23所述的免疫原性組合物，其中所述脂質(zhì)A衍生物是3D-MPL。
26.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含固醇。
27.權(quán)利要求25所述的免疫原性組合物，其中所述固醇是膽固醇。
28.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含脂質(zhì)體載體。
29.權(quán)利要求1-27所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含皂苷:固醇的比率在1:1-1:100 (w/w)的阜苷 和固醇。
30.權(quán)利要求28所述的免疫原性組合物，其中皂苷:固醇的比率是1:1-1:10(w/w)。
31.權(quán)利要求28或29所述的免疫原性組合物，其中皂苷:固醇的比率是1:1-1:5(w/w)。
32.權(quán)利要求1-30所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含皂苷:脂多糖的比率是I: I (w/w)的阜苷和脂多糖。
33.權(quán)利要求1-32所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含脂多糖并且所述脂多糖在每個劑量中的量為1- 60 μ g。
34.權(quán)利要求33所述的免疫原性組合物，其中所述脂多糖在每個劑量中的量為50μ g。
35.權(quán)利要求33所述的免疫原性組合物，其中所述脂多糖在每個劑量中的量為25μ g。
36.權(quán)利要求1-32所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含皂苷并且所述皂苷在每個劑量中的量為1-eoyg。
37.權(quán)利要求36所述的免疫原性組合物，其中所述皂苷在每個劑量中的量為50μ g。
38.權(quán)利要求36所述的免疫原性組合物，其中所述皂苷在每個劑量中的量為25μ g。
39.權(quán)利要求1-32所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含(每個0.5mL劑量)0.025-2.5,0.05-1.5,0.075-0.75,0.1-0.3 或0.125-0.25mg(例如0.2-0.3,0.1-0.15、0.25或0.125mg)固醇(例如膽固醇)。
40.權(quán)利要求1-32所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含(每個0.5mL劑量)5-60、10-50 或 20-30 μ g (例如 5_15、40_50、10、20、30、40 或 50 μ g)脂質(zhì) A 衍生物(例如 3D-MPL)。
41.權(quán)利要求1-32所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含(每個0.5mL劑量)5-60、10-50 或 20-30 μ g (例如 5_15、40_50、10、20、30、40 或 50 μ g)皂苷(例如 QS21)。
42.權(quán)利要求1-27所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含水包油乳劑。
43.權(quán)利要求42所述的免疫原性組合物，其中所述水包油乳劑包含角鯊烯和/或α生育酚。
44.權(quán)利要求41或42所述的免疫原性組合物，其中所述水包油乳劑是可代謝的水包油乳劑。
45.權(quán)利要求42-44所述的免疫原性組合物，其中所述水包油乳劑包含乳化劑如Tween80。
46.權(quán)利要求42-45所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含皂苷和脂多糖。
47.權(quán)利要求46所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含皂苷:脂多糖的比率范圍在l:10-10:l(w/w)的皂苷和脂多糖。
48.權(quán)利要求42-46所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含皂苷和固醇。
49.權(quán)利要求48所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含皂苷:固醇的比率范圍在1: l-l:20(w/w)的阜苷和固醇。
50.權(quán)利要求42-49所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含皂苷和可代謝的油。
51.權(quán)利要求50所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含皂苷:可代謝油的比率范圍在l:l-250:l(w/w)的皂苷和固醇。
52.權(quán)利要求42-51所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含α生育酚。
53.權(quán)利要求42-52所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含(每個0.5mL劑量)0.5-15、1-13、2-11、4-8或5-611^(例如2-3、5-6或10-1111^)可代謝油(比如角鯊烯)。
54.權(quán)利要求42-52所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含(每個0.5mL劑量)0.1-10,0.3-8,0.6-6,0.9-5、1-4 或 2_3mg(例如 0.9-1.1、2_3 或 4_5mg)乳化劑(比如Tween 80)。
55.權(quán)利要求42-52所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含(每個0.5mL劑量)0.5-20、1-15、2-12、4-10、5-711^(例如11-13、5-6或2-311^)母生育酚(比如 α 生育酚)。
56.權(quán)利要求42-52所述的免疫原性組合物42-52，其中所述佐劑包含(每個0.5mL劑量)5-60、10-50 或 20-30 μ g (例如 5_15、40_50、10、20、30、40 或 50 μ g)脂質(zhì) A 衍生物(例如 3D-MPL)。
57.權(quán)利要求42-52所述的免疫原性組合物42-52，其中所述佐劑包含(每個0.5mL劑量)0.025-2.5,0.05-1.5,0.075-0.75,0.1-0.3 或0.125-0.25mg(例如0.2-0.3,0.1-0.15、0.25或0.125mg)固醇(例如膽固醇)。
58.權(quán)利要求42-52所述的免疫原性組合物42-52，其中所述佐劑包含(每個0.5mL劑量)5-60、10-50 或 20-30 μ g (例如 5_15、40_50、10、20、30、40 或 50 μ g)皂苷(例如 QS21)。
59.權(quán)利要求1-21所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含金屬鹽和脂質(zhì)A衍生物。
60.權(quán)利要求59所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含(每個0.5mL劑量)100-750、200-500 或 300-400 μ gAl，例如磷酸鋁。
61.權(quán)利要求59或60所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含(每個0.5mL劑量)5-60、10-50 或 20-30 μ g (例如 5_15、40_50、10、20、30、40 或 50 μ g)脂質(zhì) A 衍生物(例如 3D-MPL)。
62.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含含有CpG基序的免疫刺激性寡核苷酸。
63.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，是用于治療或預(yù)防由來自該免疫組合物中一或多種進(jìn)化支的HIV-1病毒株引起的疾病或感染。
64.權(quán)利要求6 3所述的免疫原性組合物，其中所述免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支選自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支或者HIV-1的流行重組型(CRF)。
65.權(quán)利要求63或64所述的免疫原性組合物，其中所述免疫原性組合物中的HIV-1進(jìn)化支是B進(jìn)化支。
66.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中與組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支選自A、B、C、D、E、F、G、H、J、K進(jìn)化支或者HIV-1的流行重組型(CRF)。
67.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支選自A或C進(jìn)化支。
68.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支是A和C進(jìn)化支。
69.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，是用于誘導(dǎo)體液免疫反應(yīng)的組合物，所述體液免疫反應(yīng)抵抗與所述免疫原性組合物中一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支的HIV-1株。
70.權(quán)利要求69所述的免疫原性組合物，是用于誘導(dǎo)體液免疫反應(yīng)的組合物，所述體液免疫反應(yīng)抵抗所述免疫原性組合物中的一或多種進(jìn)化支的HIV-1株。
71.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，是用于給個體賦予長期不進(jìn)展者狀態(tài)的組合物，所述個體感染了與所述免疫原性組合物中一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支的HIV-1株。
72.權(quán)利要求71所述的免疫原性組合物，是用于給個體賦予長期不進(jìn)展者狀態(tài)的組合物，所述個體感染了所述免疫原性組合物中一或多種HIV-1進(jìn)化支的HIV-1株。
73.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，是用于針對與免疫原性組合物中一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支的HIV-1株，而誘導(dǎo)能產(chǎn)生多種細(xì)胞因子的抗病毒⑶4+T細(xì)胞。
74.權(quán)利要求73所述的免疫原性組合物，是用于針對所述免疫原性組合物中一或多種HIV-1進(jìn)化支的HIV-1株，而誘導(dǎo)能產(chǎn)生多種細(xì)胞因子的抗病毒⑶4+T細(xì)胞。
75.權(quán)利要求73或74所述的免疫原性組合物，其中所述⑶4+T細(xì)胞產(chǎn)生IL2、IFNY和TNFa中的兩種或更多種。
76.權(quán)利要求73-75所述的免疫原性組合物，其中所述⑶4+T細(xì)胞產(chǎn)生IL2和IFNY。
77.權(quán)利要求73-75所述的免疫原性組合物，其中所述⑶4+T細(xì)胞產(chǎn)生IL2和TNFa。
78.權(quán)利要求73-75所述的免疫原性組合物，其中所述⑶4+T細(xì)胞產(chǎn)生IFNy和TNFa。
79.權(quán)利要求73-75所述的免疫原性組合物，其中所述⑶4+T細(xì)胞產(chǎn)生IL2、IFNy和TNFa。
80.權(quán)利要求73-79所述的免疫原性組合物，其中所述⑶4+T細(xì)胞表達(dá)⑶40L。
81.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，是用于防止感染了HIV-1病毒株的個體中的進(jìn)展型CD4+T細(xì)胞下降，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。
82.權(quán)利要求81所述的免疫原性組合物，是用于防止感染了HIV-1病毒株的個體中的進(jìn)展型CD4+T細(xì)胞下降，其中所述HIV-1病毒株來自所述免疫原性組合物中的一或多種進(jìn)化支。
83.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，是用于減少或消除感染了HIV-1病毒株的個體中的病毒儲庫，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。
84.權(quán)利要求83所述的免疫原性組合物，是用于減少或消除感染了HIV-1病毒株的個體中的病毒儲庫，其中所述HIV-1病毒株來自所述免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支。
85.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，是用于在感染了HIV-1病毒株的個體中引發(fā)大量且長期的HIV-1特異性多功能CD4+T細(xì)胞，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。
86.權(quán)利要求85所述的免疫原性組合物，是用于在感染了HIV-1病毒株的個體中引發(fā)大量且長期的HIV-1特異性多功能CD4+T細(xì)胞，其中所述HIV-1病毒株來自所述免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支。
87.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，是用于控制或減輕感染了HIV-1病毒株的個體中的病毒血癥，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。
88.權(quán)利要求87所述的免疫原性組合物，是用于控制或減輕感染了HIV-1病毒株的個體中的病毒血癥，其中所述HIV-1病毒株來自所述免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支。
89.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述抗原中的兩、三、四種或更多種被融合在一起形成融合蛋白。
90.權(quán)利要求89所述的免疫原性組合物，其中所述融合蛋白包含Gag融合到Pol上，或者Pol融合到Gag上。
91.權(quán)利要求89或90所述的免疫原性組合物，其中所述融合蛋白包含Pol融合到Nef上或者Nef融合到Pol上。
92.權(quán)利要求89-91所述的免疫原性組合物，其中所述融合蛋白包含Nef融合到Gag上或者Gag融合到Nef上。
93.權(quán)利要求90或92所述的免疫原性組合物，其中Gag是pl7和/或p24。
94.權(quán)利要求90或91所述的免疫原性組合物，其中Pol是RT。
95.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述抗原被融合形成以任何順序包含Nef、RT、pl7和p24的融合蛋白。
96.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述抗原被融合形成包含p24-RT-Nef-pl7的融合蛋白。
97.權(quán)利要求89-96所述的免疫原性組合物，其中融合蛋白中的抗原來自兩、三或四種不同HIV-1進(jìn)化支的HIV-1病毒株。
98.權(quán)利要求89-96所述的免疫原性組合物，其中融合蛋白中的所有抗原來自相同HIV-1進(jìn)化支的HIV-1病毒株。
99.權(quán)利要求89-98所述的免疫原性組合物，還包含一或多種含有抗原的非融合的多肽。
100.權(quán)利要求99所述的免疫原性組合物，其中所述非融合多肽中的抗原與所述融合蛋白中的至少一種抗原來自相同進(jìn)化支的HIV-1病毒株。
101.權(quán)利要求99所述的免疫原性組合物，其中所述非融合多肽中的抗原來自與所述融合蛋白中的一或多種進(jìn)化支不同的進(jìn)化支的HIV-1病毒株。
102.權(quán)利要求99-101所述的免疫原性組合物，其中非融合多肽包含Env。
103.權(quán)利要求99-102所述的免疫原性組合物，其中非融合多肽包含gpl20、gpl40或gpl60中的一或多種。
104.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中免疫原性組合物中的一或多種抗原之一來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。
105.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中當(dāng)免疫原性組合物中存在兩種抗原時，兩種抗原均來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。
106.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中當(dāng)免疫原性組合物中存在三種抗原時，三種抗原均來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。
107.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中當(dāng)免疫原性組合物中存在四種抗原時，四種抗原均來自B進(jìn)化支的HIV-1病毒株。
108.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中單個劑量免疫原性組合物中每個抗原的總量是0.5-25 μ g、2-20 μ g、5-15 μ g或大約10 μ go
109.權(quán)利要求95-98所述的免疫原性組合物，其中單個劑量免疫原性組合物中的融合蛋白的總量是10 μ go
110.權(quán)利要求99-103所述的免疫原性組合物，其中單個劑量免疫原性組合物中的非融合多肽的總量是20 μ g。
111.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，其中單個劑量免疫原性組合物中所有抗原的總量是0.5-50 μ g、2-40 μ g、5-30 μ g、7-20 μ g或者大約30 μ g、大約20 μ g或大約 10 μ go
112.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，是用于誘發(fā)對抗HIV-1病毒株的抗病毒免疫反應(yīng)的長期記憶，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支。
113.權(quán)利要求112所述的免疫原性組合物，是用于誘發(fā)對抗HIV-1病毒株的抗病毒免疫反應(yīng)的長期記憶，其中所述HIV-1病毒株來自免疫原性組合物中的一或多種進(jìn)化支。
114.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，是用于誘發(fā)持久性抗病毒CD4+T細(xì)胞。
115.權(quán)利要求114所述的免疫原性組合物，其中所述⑶4+T細(xì)胞保持至少6個月。
116.權(quán)利要求114-115所述的免疫原性組合物，其中所述⑶4+T細(xì)胞保持6_24個月或者9-18個月，例如保持12個月。
117.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，是用于治療或預(yù)防HIV-1病毒株導(dǎo)致的疾病或感染，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支，其中組合物首先以兩個或三個劑量被給予受試對象，其中所述各劑量間隔兩周到三個月的時間，優(yōu)選一個月。
118.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，是用于治療或預(yù)防HIV-1病毒株導(dǎo)致的疾病或感染，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支，其中組合物被每6-24或9-18個月，例如每年一次給予受試對象(例如作為加強(qiáng)劑)。
119.權(quán)利要求1-117所述的免疫原性組合物，是用于治療或預(yù)防HIV-1病毒株導(dǎo)致的疾病或感染，其中所述HIV-1病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支，其中所述組合物被以6個月或I年的間隔給予受試對象(例如作為加強(qiáng)劑)。
120.權(quán)利要求118或119所述的免疫原性組合物，其中所述組合物對受試對象的后續(xù)給藥加強(qiáng)所述組合物對相同受試對象的在先給藥所引發(fā)的免疫反應(yīng)。
121.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物用于治療或預(yù)防HIV-1病毒株導(dǎo)致的疾病或感染，其中所述病毒株來自與免疫原性組合物中的一或多種HIV-1進(jìn)化支不同的一或多種進(jìn)化支，其中所述組合物被作為初免-強(qiáng)化方案的一部分。
122.權(quán)利要求121所述的免疫原性組合物，其中所述組合物是初免劑。
123.權(quán)利要求121所述的免疫原性組合物，其中所述組合物是加強(qiáng)劑。
124.權(quán)利要求121-123所述的免疫原性組合物，其中給予了兩種或更多種初免和/或強(qiáng)化劑量。
125.前述權(quán)利要求中任一項所述的免疫原性組合物，所述組合物是疫苗組合物。
126.權(quán)利要求1-124所述的免疫原性組合物或權(quán)利要求125所述的疫苗在制備用于治療或預(yù)防權(quán)利要求1-125所述的HIV-1病毒株導(dǎo)致的疾病或感染的藥物中的用途。
127.治療或預(yù)防權(quán)利要求1-125所述的HIV-1疾病或感染的方法，所述方法包括將權(quán)利要求1-124所述的免疫原性組合物或權(quán)利要求125所述的疫苗給予受試對象的步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含HIV-1的免疫組合物及其在預(yù)防和/或治療HIV-1中的用途。尤其是，本發(fā)明涉及來自一個進(jìn)化支的HIV-1抗原在預(yù)防和/或治療與異源HIV-1進(jìn)化支的HIV-1感染有關(guān)的疾病。
文檔編號A61K39/21GK103221065SQ201180025999
公開日2013年7月24日 申請日期2011年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月26日
發(fā)明者P.布圭吉翁, M.C.庫特索科斯, C.洛林, L.麥克納利, G.H.沃斯 申請人:葛蘭素史密斯克萊生物公司