專利名稱：肉蓯蓉多糖在制備改善學(xué)習(xí)記憶功能的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及肉蓯蓉多糖的應(yīng)用，尤其涉及肉蓯蓉多糖在制備改善學(xué)習(xí)記憶功能的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
記憶根據(jù)心理學(xué)特點和神經(jīng)生理生化機(jī)制可分為四個階段識記或獲得，是指通過學(xué)習(xí)在大腦留下記憶痕跡的過程；貯存和鞏固以及保持，這兩個過程均為學(xué)習(xí)訓(xùn)練后發(fā)生的記憶痕跡由短時不穩(wěn)定狀態(tài)逐漸轉(zhuǎn)化為長時牢固狀態(tài)并貯存下來的過程；再現(xiàn)，是指存貯在腦內(nèi)的記憶痕跡通過回憶或再現(xiàn)方式加以重現(xiàn)的過程。研究認(rèn)為，中樞膽堿能系統(tǒng)與學(xué)習(xí)記憶關(guān)系密切，乙酰膽堿(acetylcholine, Ach)是促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶的神經(jīng)遞質(zhì)，M膽 堿能突觸為記憶的基礎(chǔ)。ACh是中樞膽堿能系統(tǒng)中重要的神經(jīng)遞質(zhì)之一，其主要功能是維持意識的清醒，促進(jìn)學(xué)習(xí)和記憶的改善。ACh是由膽堿、乙酰輔酶A等在膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(choline, acety. transfertase, ChAT)的催化下合成，由AChE分解，其活力變化可間接反映腦內(nèi)Ach的代謝情況。肉灰蓉為列當(dāng)科植物肉灰蓉Cistanche deser-ticola Y. C. Ma.或管花肉灰蓉Cistanche Tubulosa(schrenk) R. Wight的干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖，成而溫，具有補(bǔ)腎陽、益精血、潤腸通便和延緩衰老等功能，有“沙漠人參”的美稱。歷代醫(yī)家視其為抗衰老佳品。在我國已有兩千多年的使用歷史，現(xiàn)代藥理學(xué)表明，肉蓯蓉除作為傳統(tǒng)的補(bǔ)腎壯陽中藥外，更兼具有抗衰老、增強(qiáng)記憶、提高免疫力等多種功能。肉蓯蓉的化學(xué)成分在同屬植物中研究的最為深入，現(xiàn)已分離得到69個化合物。隨著檢測和提取方法的迅速發(fā)展，已從肉蓯蓉中得到了多種類型的化學(xué)物質(zhì)，主要有烴類、生物堿、黃酮類、氨基酸、苯乙醇甙類、苯丙醇甙類、環(huán)烯醚萜類、D—甘露醇、B —谷留醇、多糖及無機(jī)微量元素等。多糖類是重要的生物高分子化合物，有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗輻射、降血糖、降血脂、保肝等多種生物活性，因此關(guān)于多糖的研究得以重視起來。肉蓯蓉屬植物中有多糖等主要成分。但文獻(xiàn)檢索未見肉蓯蓉多糖單獨在改善學(xué)習(xí)記憶功能方面的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供肉蓯蓉多糖在制備改善學(xué)習(xí)記憶功能的藥物中的應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn)乙酰膽堿對學(xué)習(xí)與記憶起重要作用，首先是從東蓑若堿可降低正常人回憶數(shù)字序列或一組物品以及復(fù)述一段文字的能力開始，以后在嚙齒類動物的研究過程中證實，阻滯乙酰膽堿的藥物如東莨菪堿、阿托品等能損害記憶和識別，東莨菪堿是M膽堿受體拮抗劑，可阻斷大腦皮質(zhì)、隔區(qū)及海馬結(jié)構(gòu)中的M膽堿受體引起膽堿能系統(tǒng)功能障礙，從而產(chǎn)生學(xué)習(xí)記憶能力減退。訓(xùn)練前給藥，可造成動物記憶獲得障礙。乙醇為中樞性抑制劑，灌服30%的乙醇主要導(dǎo)致動物記憶的再現(xiàn)障礙，測試前給藥，較低濃度下即可明顯破壞記憶過程，造成學(xué)習(xí)記憶再現(xiàn)障礙。訓(xùn)練前給藥，可造成動物記憶獲得障礙。本發(fā)明采用通道式水迷宮和Morris水迷宮法分別探討肉蓯蓉多糖對氫溴酸東莨菪堿所致小鼠學(xué)習(xí)記憶獲得性障礙、乙醇所致小鼠學(xué)習(xí)記憶再現(xiàn)性障礙、亞硝酸鈉所致小鼠學(xué)習(xí)記憶鞏固性障礙的影響，表明肉蓯蓉多糖具有促智作用，且本發(fā)明初步研究了肉蓯蓉多糖的作用機(jī)制，為降低小鼠海馬和大腦皮層AChE活性含量，為肉蓯蓉多糖進(jìn)一步的研發(fā)提供了臨床前藥理學(xué)實驗依據(jù)。


圖I為通道式(方形)水 迷宮；圖2為由VEDI0-PCI-XR圖象采集器及行為學(xué)軟件得到的各組小鼠定位航行軌跡具體實施例方式本發(fā)明所述的肉蓯蓉多糖用于改善學(xué)習(xí)記憶功能的動物實驗是按照如下實施示例所表示的方法進(jìn)行的研究。所涉及的方法是本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠掌握和運用的技術(shù)手段，但以下實施示例不得理解為任何意義上的對本發(fā)明權(quán)利要求的限制。實施示例I肉蓯蓉多糖對氫溴酸東莨菪堿所致小鼠學(xué)習(xí)記憶獲得性障礙、乙醇所致小鼠學(xué)習(xí)記憶再現(xiàn)性障礙、亞硝酸鈉所致小鼠學(xué)習(xí)記憶鞏固性障礙的影響(一)材料與方法I 藥物肉蓯蓉多糖；多奈哌齊(江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司國藥準(zhǔn)字H20030472)2實驗動物篩選及分組本實驗選用昆明小鼠，級別SPFNAF，體重20±2g，雌性各半，自由攝食飲水，12小時明暗交替照明。采用方形通道式水迷宮篩選動物，指引每只小鼠從入水點到出口兩次，進(jìn)行測試，若120s內(nèi)找到出口則保留，未找到則淘汰。將篩選出來的60只小鼠隨機(jī)分成6組，每組雌雄各半，包括空白組(注射用生理鹽水200mg/kg)、陽性對照組(多奈哌齊0. 6mg/kg)、模型組(東莨菪堿4mg/kg、30% C2H5OH 200mg/kg>NaNO2120mg/kg)、肉灰蓉多糖低劑量組(50mg/kg)、肉灰蓉多糖中劑量組(100mg/kg)、肉灰蓉多糖高劑量組(200mg/kg),除東莨菪堿和NaNO2腹腔注射，其余灌胃給藥。3氫溴酸東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙模型的建立及給藥模型組、陽性對照組、實驗組于通道式水迷宮實驗及Morris水迷宮實驗測試前30min分別腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(4mg/kg)，以此建立學(xué)習(xí)記憶獲得性障礙模型，空白組給予相應(yīng)體積的生理鹽水。4乙醇致學(xué)習(xí)記憶障礙模型的建立及給藥模型組、陽性對照組、實驗組于通道式水迷宮實驗及Morris水迷宮實驗測試前30min分別灌胃給予30% C2H5OH,以此建立學(xué)習(xí)記憶再現(xiàn)性障礙模型，空白組給予相應(yīng)體積的生理鹽水。5亞硝酸鈉致學(xué)習(xí)記憶障礙模型的建立及給藥模型組、陽性對照組、實驗組于Morris水迷宮實驗測試后立即腹腔注射亞硝酸鈉(120mg/kg)，24小時后進(jìn)行測試，以此建立學(xué)習(xí)記憶鞏固性障礙模型，空白組給予相應(yīng)體積的生理鹽水。6給藥方案除造模測試外，每天空白組、模型組灌胃給予注射用生理鹽水，陽性對照組灌胃給予0. 6mg/kg多奈哌齊,實驗組分別按劑量灌胃給予50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg肉灰蓉多糖。7通道式(方形)水迷宮行為測試水迷宮(本實驗室自制)由一黑色有機(jī)玻璃長方體水槽(73cmX42cmX30cm)組 成，其中有若干隔板組成迷宮，如圖I所示，其中1、2、3、4為盲端1、2、3、4，A、B、C、D為四個入水點，迷宮的一端有一組臺階為終點，迷宮中水深20cm，水溫22°C ±2°C。各模型及對照組動物依次進(jìn)行水迷宮實驗，第Id路徑包括I個盲端，第2d有2個盲端，第3d有3個盲端，
4、5、6、7d均為4個盲端。每天訓(xùn)練兩次，記錄每只動物在游泳中進(jìn)入盲端的次數(shù)及游出時間，如果120s內(nèi)未上岸，按120s計算。8 Morris水迷宮行為測試Morris (上海吉量軟件科技有限公司)水迷宮為一直徑120cm、高50cm的圓柱形水池，其內(nèi)部被分為4個大小相等的象限，在其中的一個象限中央放置一直徑為9. 5cm平臺，此平臺位置一旦被確定將在整個行為學(xué)測試中保持不變。放置水迷宮的房間內(nèi)物品位置固定以保證小鼠通過水迷宮外不變的物品信息來尋找平臺。試驗過程中控制水溫在(22±2)°C。從第13d開始進(jìn)行定位航行實驗，連續(xù)訓(xùn)練4d，每天訓(xùn)練兩次，第14d將安全島所在象限作為入水點，第15、16d將安全島旁邊的象限作為入水點，第17d將安全島對側(cè)象限作為入水點。記錄小鼠在120s內(nèi)尋找到平臺的時間即逃避潛伏期，若小鼠在120s內(nèi)未尋找到平臺則其逃避潛伏期記為120s，每只小鼠訓(xùn)練完畢后不論是否找到平臺均將之放于平臺上20s。在測試中除記錄逃避潛伏期外同時記錄小鼠的游泳路程。定位航行試驗結(jié)束后，撤去平臺，將小鼠從安全島對側(cè)象限面向池壁放入水中，測其在120s跨原平臺所在位置的次數(shù)(即穿梭次數(shù))和第I次到達(dá)原平臺的時間。試驗檢測指標(biāo)穿梭次數(shù)是指撤除平臺后，小鼠穿越原平臺所在位置的次數(shù)。第一次到達(dá)平臺時間式指撤除平臺后，小鼠第一次到達(dá)平臺所在位置的時間。在行為學(xué)測試中，小鼠的游泳活動由水迷宮水池上方的攝像裝置記錄，通過VEDI0-PCI-XR圖象采集器及行為學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)并存于計算機(jī)中。9統(tǒng)計學(xué)分析實驗數(shù)據(jù)用又± SD表示，對于水迷宮行為測試分析結(jié)果采用t檢驗，進(jìn)行組間比較( 二)實驗結(jié)果I通道式水迷宮行為測試結(jié)果分析(I)對東莨菪堿所致小鼠記憶獲得性障礙的影響在最初的訓(xùn)練中，小鼠表現(xiàn)為進(jìn)入盲端的錯誤次數(shù)多以及找到安全臺階的潛伏期長。隨著訓(xùn)練增加，以臺階為目標(biāo)的目的性游動逐漸產(chǎn)生和增強(qiáng)。在腹腔注射氫溴酸東莨菪堿后，模型組小鼠目的性游動明顯減少，再次出現(xiàn)進(jìn)入盲端的錯誤次數(shù)多以及找到安全臺階的潛伏期增長的現(xiàn)象，而在給予肉蓯蓉多糖提取物后具有顯著的改善作用，小、中、大三個劑量組的逃避潛伏期與模型組比較均有差異(P < 0. 05)，小劑量和大劑量組的撞壁次數(shù)與模型組比較有差異(P < 0. 05)。實驗結(jié)果見表I。表I :東莨菪堿模型對小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響(又土SD，n = 10)
權(quán)利要求
1.肉蓯蓉多糖在制備改善學(xué)習(xí)記憶功能的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述肉蓯蓉多糖的應(yīng)用，其特征在于肉蓯蓉多糖用于制備治療老年性癡呆的藥物。
3.肉蓯蓉多糖在制備降低海馬中AChE活性含量的藥物中的應(yīng)用。
4.肉蓯蓉多糖在制備降低大腦皮層中AChE活性含量的藥物中的應(yīng)用。
5.肉蓯蓉多糖在制備提高腦內(nèi)Ach含量的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了肉蓯蓉多糖在制備改善學(xué)習(xí)記憶功能的藥物中的應(yīng)用，采用通道式水迷宮和Morris水迷宮法分別探討肉蓯蓉多糖對氫溴酸東莨菪堿所致小鼠學(xué)習(xí)記憶獲得性障礙、乙醇所致小鼠學(xué)習(xí)記憶再現(xiàn)性障礙、亞硝酸鈉所致小鼠學(xué)習(xí)記憶鞏固性障礙的影響，表明肉蓯蓉多糖具有促智作用，且本發(fā)明初步研究了肉蓯蓉多糖改善學(xué)習(xí)記憶功能的作用機(jī)制為降低小鼠海馬和大腦皮層AChE活性含量，提高腦內(nèi)Ach的含量。
文檔編號A61P25/28GK102743408SQ20121018198
公開日2012年10月24日 申請日期2012年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月28日
發(fā)明者徐俊梅, 李剛, 武世奎, 馬慧 申請人:內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院