專利名稱：預防干眼癥的組合物、包括其的眼貼膜及該眼貼膜的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及應用生物技術領域，具體而言，涉及ー種預防干眼癥的組合物、包括其的眼貼膜及該眼貼膜的制備方法。
背景技術：
互聯(lián)網(wǎng)、電腦和各種終端顯示器的普及和應用，標志著時代的進步，使人們的工作和生活習慣發(fā)生了巨大的變化，但同時也伴隨著人們眼睛亞健康問題的日益嚴重。干眼癥發(fā)病率不斷攀升是其中ー個典型案例。干眼癥流行病學調(diào)查顯示，普通人群干眼癥的發(fā)病率為11 15%左右，但是長期使用電腦或其它終端顯示器工作的人、配戴隱形眼鏡的人和 糖尿病人干眼癥或疑似干眼癥的發(fā)病率可高達80 90%。據(jù)不完全統(tǒng)計，以下三類人群急需日常的眼保健I)長期利用終端顯示器(電腦)工作的人員根據(jù)國務院新聞辦公室2009年7月公布的信息，我國網(wǎng)民數(shù)已超過3. 3億人。隨著互聯(lián)網(wǎng)和信息化的普及，依賴終端顯示器進行工作的人員不斷増加，同時也給這些人的眼睛健康帶來了嚴重的問題。美國全國職業(yè)保健與安全研究所的一項調(diào)查報告顯示，每天在電腦前工作3小時以上者，90%的眼睛有問題。根據(jù)我國有關部門的調(diào)查顯示，有66. 3%的學生平均每天的上網(wǎng)時間超過3 4小吋。我國進行過的正常人群干眼癥流行病學調(diào)查顯示，普通人群發(fā)病率11%左右，北京的患病人數(shù)可能在200萬左右，白領人群占了很大比例。最近有ー份調(diào)查報告稱，白領ー族干眼癥的發(fā)生率高達100%。2)佩戴隱形眼鏡的人佩戴隱形眼鏡的人，在發(fā)達國家占人群的10%左右，在我國估計1%左右，人數(shù)超過一千三百萬。流行病學的調(diào)查結果顯示，長期使用隱形眼鏡容易患上干眼癥和角膜逐漸變薄。上海楊浦區(qū)的衛(wèi)生工作者協(xié)會曾對復旦大學、上海財經(jīng)大學、上海水產(chǎn)大學、上海體育學院等7所高校1500名大學生的眼病狀況作了調(diào)查。發(fā)現(xiàn)80%隱形眼鏡配戴者不同程度出現(xiàn)了眼角干澀、鏡片粘附沉淀物、眼部感染、發(fā)炎等不適癥狀。有意識主動治療眼病的大學生為數(shù)很少。3)糖尿病患者對干眼癥流行病學的調(diào)查顯示，糖尿病患者干眼癥發(fā)病率為37%，而目前我國糖尿病患者已達九千二百多萬人。事實上干眼癥已經(jīng)成為危害人們眼睛健康的一種高發(fā)病。干眼癥的高發(fā)人群包括長期使用終端顯示器工作的人、佩戴隱形眼鏡的人、進行過眼科手術的病人、糖尿病人和老年性干眼癥等，其總和在我國保守估計可能超過了 3億人。而這部分人中絕大多數(shù)從來沒有主動到過醫(yī)院診斷或治療。更為嚴重的是，包括像美國這樣高度文明的社會，仍有75%以上的干眼癥患者從來不到醫(yī)院診治，也沒有聽說過干眼癥。這種現(xiàn)狀提示我們，ー種針對預防干眼癥的日常眼保健護理產(chǎn)品可能比通過醫(yī)院獲得的治療用藥更容易為人們所接受，接觸的人群更為廣泛。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明g在提供一種預防干眼癥的組合物、包括其的眼貼膜及該眼貼膜的制備方法，即提供了ー種更容易為人們所接受的預防干眼癥的日常眼保健護理產(chǎn)品。為了實現(xiàn)上述目的，根據(jù)本發(fā)明的ー個方面，提供了一種預防干眼癥的組合物。該組合物包括有效劑量的Y-聚谷氨酸和細胞生長因子。進ー步地，細胞生長因子選自由表皮生長因子、酸性或堿性成纖維細胞生長因子、角質(zhì)細胞生長因子組成的組中的ー種或多種。進ー步地，該組合物包括Y-聚谷氨酸O. 01 lg/1000ml，細胞生長因子I 100 μ g/ml和液體的輔助成分,優(yōu)選地，Y-聚谷氨酸O. 02 O. 5g/1000ml。進ー步地，組合物包括以下組份Y-聚谷氨酸O. 04 O. lg/1000ml,細胞生長因子4 20 μ g/ml,甘油35 45g/1000ml,甘露醇4 6g/1000ml,憐酸鹽0. 8
I.2g/1000ml，尼泊金丙酯0. 2 0. 3g/1000ml，尼泊金丁酯0. 2 · 3g/1000ml，以及余量的水。進ー步地，包括以下組份甘油40g/1000ml,甘露醇5g/1000ml,磷酸鹽lg/1000ml，尼泊金丙酷 0. 25g/1000ml、尼泊金丁酷 0. 25g/1000ml, Y -聚谷氨酸 0. 04
0.lg/1000ml，細胞生長因子10 15 μ g/ml以及余量的水，組合物的pH值為6. 8 7. 2。進ー步地，細胞生長因子來源于人、動物或植物；細胞生長因子是天然提取的、人エ化學合成的、干細胞來源的、或通過基因重組技術制造的細胞生長因子或細胞生長因子的衍生物。進ー步地，Y -聚谷氨酸是天然提取的、人工化學合成的、或通過微生物發(fā)酵制造的Y-聚谷氨酸。根據(jù)本發(fā)明的另ー個方面，提供一種預防干眼癥的眼貼膜。該眼貼膜包括上述預防干眼癥的組合物和惰性支持物。進ー步地，惰性支持物選自無紡布、濾紙、蠶絲織物、細菌纖維膜或化學合成的水凝膠。根據(jù)本發(fā)明的再ー個方面，提供一種眼貼膜的制備方法。該方法包括以下步驟1)把惰性支持物裝入鋁箔袋中，在輻照劑量為4 15kGy的條件下進行輻照；2)把上述預防干眼癥的組合物加入到裝有惰性支持物的鋁箔袋中，封ロ。本發(fā)明的預防干眼癥的組合物，含有有效劑量的Y-聚谷氨酸(Y-PGA)和細胞生長因子為主要活性成分，這些活性成分在功能上能夠相互補充、相得益彰，有效地預防干眼癥。根據(jù)本發(fā)明技術方案制造的眼貼膜可廣泛用于人眼睛保健，特別適合長時間使用電腦或其它終端顯示器工作的人群、佩戴隱形眼鏡的人和糖尿病人的眼睛保健。本發(fā)明是首次把Y-聚谷氨酸運用在眼保健品的配方中，其作為本發(fā)明的預防干眼癥的組合物的活性成分與另ー種活性成分細胞生長因子配合使用，使其功能相互補充、相得益彰。并且這兩類物質(zhì)出人意料的具有協(xié)同作用，其配合使用的效果大于其各自使用加和的效果。本發(fā)明中所述的細胞生長因子是對小鼠3T3細胞的増殖有明顯的劑量依賴關系的細胞生長因子，其中包括但不限于表皮生長因子(EGF)、酸性或堿性成纖維細胞生長因子(a/bFGF)和角質(zhì)細胞生長因子(KGF)等，這些細胞生長因子是健康人淚液中含有的重要的細胞生長調(diào)節(jié)因子，具有廣泛的促細胞生長活性，在醫(yī)學臨床上可加速創(chuàng)傷愈合、提高愈合質(zhì)量。大量的醫(yī)學臨床基礎研究表明，這些細胞生長因子對于維持角膜上皮的完整性、從而在保持淚膜的穩(wěn)定性中起著非常重要的作用(Ahmet Satici等0phthalmicResearch2。。3 ；35 :301-305)。本發(fā)明中的Y-聚谷氨酸(Y-PGA)是由谷氨酸聚合而成的天然生物大分子，具有很好的生物相容性、無毒、沒有免疫原性，比透明質(zhì)酸更加穩(wěn)定。 Y-聚谷氨酸水凝膠具有超強的保濕功能，其保濕能力是透明質(zhì)酸(HA)的500倍。干眼癥患者因瞼板腺功能障礙，淚膜外脂質(zhì)層缺損，淚膜破裂，水分蒸發(fā)，因而淚液滲透壓增高，其結果導致角膜上皮缺損。角膜完整性的破壞又反過來影響淚膜的穩(wěn)定性，這是ー個相互作用、惡性循環(huán)的過程，其最終結果將導致包括干眼癥在內(nèi)的眼表疾病日趨嚴重。因此適當增加淚液水分、維持淚液正常的滲透壓是治療干眼癥的ー個重要手段。Y -聚谷氨酸高保濕功能在這方面可能會有突出的表現(xiàn)。Y-聚谷氨酸是某些革蘭氏陽性細菌(Bacillus sp)細胞壁的成分，是形成細菌自身保護機制的產(chǎn)物，具有抗菌、抗病毒的功能。γ -聚谷氨酸還具有抗輻射功能。雖然現(xiàn)代技術已經(jīng)把電腦顯示屏的輻射劑量降低到了極限，但是仍有輻射存在，這是事實。大批依賴終端顯示器工作的人員，他們的眼睛不得不長年累月地接受這種累積輻射劑量的傷害。這是造成白領一族干眼癥患病率不斷攀升的元兇。Y-聚谷氨酸可以在眼表形成一道天然的保護屏障，把來自顯示屏輻射對眼睛的累積傷害減低到最少。Y -聚谷氨酸具有與正常淚液中維持淚膜穩(wěn)定性的主要成分粘蛋白類似的物理化學性狀，可以把Y-聚谷氨酸理解為外源人工粘蛋白，對維持淚膜的穩(wěn)定性、延長淚膜破裂時間具有輔助作用。根據(jù)本發(fā)明ー種典型的實施方式，預防干眼癥的組合物包括有效劑量的Y-聚谷氨酸和細胞生長因子。本發(fā)明中的細胞生長因子包括但不限于細胞生長因子選自由表皮生長因子、酸性或堿性成纖維細胞生長因子、角質(zhì)細胞生長因子組成的組中的ー種或多種。優(yōu)選地，該組合物包括Y-聚谷氨酸0.01 lg/1000ml，細胞生長因子I 100 μ g/ml和液體的輔助成分。進ー步優(yōu)選地，Y-聚谷氨酸O. 02 O. 5g/1000ml，細胞生長因子2 50 μ g/ml。再一步優(yōu)選地，Y -聚谷氨酸O. 03 O. 2g/1000ml。更進ー步優(yōu)選地，Y-聚谷氨酸O. 04 O. lg/1000ml，細胞生長因子4 20 μ g/ml。根據(jù)本發(fā)明ー種典型的實施方式，組合物包括以下組份甘油40g/1000ml，甘露醇 5g/1000ml，磷酸鹽 lg/1000ml，尼泊金丙酷 0. 25g/1000ml、尼泊金丁酷 0. 25g/1000ml,
Y-聚谷氨酸0. 04 0. lg/1000ml，細胞生長因子10 15 μ g/ml以及余量的水，組合物的pH值為6. 8 7. 2。優(yōu)選地，本發(fā)明中的細胞生長因子對小鼠3T3細胞的増殖有明顯的劑量依賴關系，這種細胞生長因子具有可促進角膜上皮細胞、結膜杯狀細胞、淚腺腺泡細胞和瞼板腺上皮細胞等的生長與分化，對維持角膜上皮超微結構的完整性，促進淚液、粘蛋白和脂質(zhì)的分泌，從而保持淚膜的穩(wěn)定性都具有十分重要的生物學功能的作用。本發(fā)明中的細胞生長因子可以是源于人、動物或植物；可以是天然提取的、人工化學合成的、干細胞來源的、或通過基因重組技術制造的細胞生長因子或細胞生長因子的衍生物。本發(fā)明中的Y-聚谷氨酸可以是天然提取的、人工化學合成的、或通過微生物發(fā)酵制造的Y-聚谷氨酸。該化合物用鹽酸水解后經(jīng)C18柱高壓液相分離可呈現(xiàn)單ー的谷氨酸特征吸收峰。本發(fā)明中的輔助成分包括但不限干甘油、甘露醇、磷酸鹽等。甘油、甘露醇在本發(fā)明中用于穩(wěn)定組合物中細胞生長因子的生物活性，在含有甘油、甘露醇的溶液中，細胞生長因子的活性可以在常溫中保持較長時間；磷酸鹽用于穩(wěn)定組合物的PH值；尼泊金丙脂、丁酯是眼科用藥常用的防腐剤。根據(jù)本發(fā)明的另ー個方面，提供一種預防干眼癥的眼貼膜。該眼貼膜包括上述預防干眼癥的組合物和惰性支持物，組合物浸泡在惰性支持物上。本發(fā)明的惰性支持物包括但不限于選自無紡布、濾紙、蠶絲織物、細菌纖維膜或化學合成的水凝膠。本發(fā)明的眼貼膜可直接敷貼在眼表面。根據(jù)本發(fā)明的再ー個方面，提供ー種的眼貼膜制備方法。該方法包括以下步驟1)把惰性支持物裝入鋁箔袋中，在輻照劑量為4 15kGy的條件下進行輻照；2)把上述預防干眼癥的組合物加入到裝有惰性支持物的鋁箔袋中，封ロ。本發(fā)明在治療干眼癥時，首次選擇了 Y-聚谷氨酸和細胞生長因子的組合，兩者之間有良好的協(xié)同作用，加之輔料的作用，使得制得的干眼劑有效改善眼睛干澀感。
具體實施例方式需要說明的是，在不沖突的情況下，本發(fā)明中的實施例及實施例中的特征可以相互組合。下面結合實施例來詳細說明本發(fā)明。根據(jù)本發(fā)明ー種典型的實施方式，眼貼膜由兩部分組成一部分是以細胞生長因子和Y_PGA(Y-聚谷氨酸)為主要活性成分以及其它輔助性成分組成的混合溶液，輔助成分其配方如下甘油40g/1000ml,甘露醇5g/1000ml,磷酸鹽lg/1000ml，尼泊金丙酯O. 25g/1000ml、丁酯尼泊金O. 25g/1000ml，余量的水。Y-PGA的加入量是O. 4g/1000ml，細胞生長因子的加入量是10 15 μ g/ml。眼貼膜配方中，除
Y-PGA和細胞生長因子外的輔助成分按比例定量配制、過濾后高壓滅菌，Y -PGA和細胞生長因子用O. 45 μ m濾膜過濾除菌后加入輔助成分中。另一部分是惰性支持物，可以是無紡布、濾紙、蠶絲織物、細菌纖維膜等。惰性支持物裝入鋁箔袋中送輻照消毒，輻照劑量為4 15kGy。把配制好的混合溶液加入裝有惰性支持物并經(jīng)輻照滅菌的鋁箔袋中，每袋裝3 5ml。熱塑封ロ，存放于陰涼處備用。 下面將結合實施例進ー步說明本發(fā)明的有益效果。第一步,按配方I至6配制混合溶液1000ml。在6個潔凈的玻璃容器按配方加入
配方I
甘油40g
甘露醇5g
磷酸鹽Ig
細胞生長因子IOmg(其中；EGF(表皮生長因子)5mg，F(xiàn)GF (成纖維細胞生長因子)2.5mg，KGF (角質(zhì)細胞生長因子)2. 5mg)
γ-PGA ( Y-聚谷氨酸)0_4g
尼泊金丙酯0.25g
尼泊金丁酯0.25g 加雙蒸水至IOOOml
混合溶液調(diào)pH6.8 7.2配方2
甘油40g
甘露醇5g
磷酸鹽Ig
細胞生長因子15mg(其中EGF(表皮生長因子)10mg，F(xiàn)GF (成纖維細胞生長因子)2. 5mg，KGF (角質(zhì)細胞生長因子)2. 5mg)
γ-PGA (Y-聚谷氨酸)0_4g
尼泊金丙酯0.25g
尼泊金丁酯0.25g
加雙蒸水至IOOOmI
混合溶液調(diào)pH6.8~7.2配方3甘油40g
甘露醇5g
磷酸鹽Ig
復合細胞生長因子IOmg(其中；EGF(表 皮生長因子)5mg，F(xiàn)GF (成纖維細胞生長因子)2.5mg，KGF (角質(zhì)細胞生長因子)2. 5mg)
尼泊金丙酯0.25g
尼泊金丁酯0.25g
加雙蒸水至IOOOml
混合溶液調(diào)pH6.8 7.2配方4
甘油40g
甘露醇5g
磷酸鹽Ig
γ-PGA ( Y-聚谷氨酸)0.4g
尼泊金丙酯0.25g
尼泊金丁酯0.25g
加雙蒸水至IOOOml
混合溶液調(diào)pH6.8~7.2配方5
甘油40g
甘露醇5g
磷酸鹽Ig
γ-PGA (Y-聚谷氨酸)Ig
尼泊金丙酯0.25g
尼泊金丁酯0.25g
加雙蒸水至IOOOml
混合溶液調(diào)pH6.8 7.2
配方6
γ-PGA (Y-聚谷氨酸)Ig
尼泊金丙酯0.25g
尼泊金丁酷0.25g
加雙蒸水至IOOOml
混合溶液調(diào)pH6.8 7.2配方中除Y -PGA和細胞生長因子外按比例定量配制、過濾后高壓滅菌，Y -PGA和 細胞生長因子用O. 45 μ m濾膜過濾除菌后加入配方中。配方I和配方2的區(qū)別僅在于EGF的用量不同，其它成分和比例不變。觀察結果顯示，兩者的效果沒有明顯差異，說明本發(fā)明所述的細胞生長因子可以在較大濃度范圍使用。本發(fā)明按配方I實施。配方I和配方2的區(qū)別僅在于EGF的用量不同，其它成分和比例不變；配方3僅加入復合細胞生長因子lOyg/ml，不加Y-PGA，其它成分和比例不變；配方4僅加入Y-PGA0. 04%，不加復合細胞生長因子，其它成分和比例不變；配方5加入Y-PGA0. 1%，不加復合細胞生長因子，其它成分和比例不變。觀察結果顯示，配方I和配方2的效果沒有明顯差異，說明本發(fā)明所述的細胞生長因子可以在10 100 μ g/ml濃度范圍使用。配方3與配方4的效果也沒有明顯差異，但與配方I和配方2有較明顯差異，說明Y-PGA和復合細胞生長因子間有較好的協(xié)同作用。配方5與配方4沒有明顯差異，說明Y -PGA可以在O. 04
O.1%的濃度范圍使用，觀察結果如下表2所示。配方6沒有加入甘油、甘露醇和磷酸鹽等輔助原料，僅用于觀察其在常溫條件下的穩(wěn)定性。室溫存放2個月后配方6出現(xiàn)渾濁并伴有沉淀，配方I 5在同樣存放條件下觀察24個月沒有出現(xiàn)類似現(xiàn)象(表I)，說明甘油、甘露醇和磷酸鹽等輔助原料對于維持產(chǎn)品的穩(wěn)定性是必要。在應用實例中的其中3例使用在常溫存放24個月后的配方I的眼貼膜，其效果沒有明顯差別。配方6沒有參與試用效果的觀察。表I.配方穩(wěn)定性觀察，主要觀察指標溶液是否渾濁、出現(xiàn)沉淀配方I 2 3 4 5 6.............. 24 個月I 5澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清6 澄清渾濁沉淀沒有繼續(xù)觀察有明顯眼睛干澀感的志愿受試者821人參與了本發(fā)明的觀察，將志愿受試者隨機分成5組，分別用含有上述I 5個配方組合物的眼貼膜進行觀察，其對改善眼睛干澀感的觀察結果如下表2
配方I志愿受試者 S覺改善者有效率％
I15614995.5 '
權利要求
1.一種預防干眼癥的組合物，其特征在于，包括有效劑量的Y-聚谷氨酸和細胞生長因子。
2.根據(jù)權利要求I所述的組合物，其特征在干，所述細胞生長因子選自由表皮生長因子、酸性或堿性成纖維細胞生長因子、角質(zhì)細胞生長因子組成的組中的ー種或多種。
3.根據(jù)權利要求I所述的組合物，其特征在干，進ー步包括Y-聚谷氨酸O.Ol .lg/1000ml，細胞生長因子I 100 μ g/ml和液體的輔助成分，優(yōu)選地，Y-聚谷氨酸O. 02 O. 5g/1000ml，細胞生長因子2 50 μ g/ml
4.根據(jù)權利要求3所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括以下組份Y-聚谷氨酸O. 04 O. lg/1000ml，細胞生長因子4 20 μ g/ml。
5.根據(jù)權利要求2所述的組合物，其特征在于，包括以下組份；Y-聚谷氨酸.0. 04 O. lg/1000ml,細胞生長因子4 20μ g/ml，甘油35 45g/1000ml，甘露醇4 .6g/1000ml,磷酸鹽0. 8 I. 2g/1000ml，尼泊金丙酷0. 2 0. 3g/1000ml，尼泊金丁酷.0.2 · 3g/1000ml,以及余量的水。
6.根據(jù)權利要求5所述的組合物，其特征在于，包括以下組份甘油40g/1000ml，甘露醇 5g/1000ml，磷酸鹽 lg/1000ml，尼泊金丙酷 0. 25g/1000ml，尼泊金丁酷 0. 25g/1000ml,Y-聚谷氨酸0. 04 0. lg/1000ml，所述細胞生長因子10 15yg/ml以及余量的水，所述組合物的pH值為6. 8 7. 2。
7.根據(jù)權利要求I所述的組合物，其特征在于，所述細胞生長因子來源于人、動物或植物；所述細胞生長因子是天然提取的、人工化學合成的、干細胞來源的、或通過基因重組技術制造的細胞生長因子或所述細胞生長因子的衍生物。
8.根據(jù)權利要求I所述的組合物，其特征在于，所述Y-聚谷氨酸是天然提取的、人工化學合成的、或通過微生物發(fā)酵制造的Y-聚谷氨酸。
9.一種預防干眼癥的眼貼膜，其特征在于，包括如權利要求I至8中任一項所述的預防干眼癥的組合物和惰性支持物。
10.根據(jù)權利要求9所述的眼貼膜，其特征在于，所述惰性支持物選自無紡布、濾紙、蠶絲織物、細菌纖維膜或化學合成的水凝膠。
11.一種如權利要求9或10所述的眼貼膜的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 .1)把惰性支持物裝入鋁箔袋中，在輻照劑量為4 15kGy的條件下進行輻照； .2)把如權利要求I至8中任一項所述的預防干眼癥的組合物加入到裝有所述惰性支持物的鋁箔袋中，封ロ。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種預防干眼癥的組合物、包括其的眼貼膜及該眼貼膜的制備方法。其中，該組合物包括有效劑量的γ-聚谷氨酸和細胞生長因子。本發(fā)明的預防干眼癥的組合物，含有有效劑量的γ-聚谷氨酸(γ-PGA)和細胞生長因子為主要活性成分，這些活性成分在功能上能夠相互補充、相得益彰，可以有效地預防干眼癥。根據(jù)本發(fā)明技術方案制造的眼貼膜可廣泛用于人眼睛保健，特別適合長時間使用電腦或其它終端顯示器工作的人群、佩戴隱形眼鏡的人和糖尿病人的眼睛保健。
文檔編號A61P27/02GK102688479SQ20121020455
公開日2012年9月26日 申請日期2012年6月20日 優(yōu)先權日2012年6月20日
發(fā)明者涂桂洪, 鄧惠平 申請人:涂桂洪