專利名稱：甘露醇在制備抗胰腺癌藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甘露醇的新用途，尤其是甘露醇在制備抗胰腺癌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前，在抗腫瘤研究中，誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡是一個(gè)重要的途徑，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡可達(dá)到腫瘤縮小，癌癥消退的目的，如傳統(tǒng)的抗腫瘤藥物順鉬、美法倫等均能刺激細(xì)胞線粒體凋亡途徑，引發(fā)凋亡。此種方式比采用殺傷腫瘤細(xì)胞的治療方式有明顯的優(yōu)越性，因?yàn)榭鼓[瘤藥物若能大量的誘發(fā)腫瘤細(xì)胞的凋亡，激活其自身的程序性死亡過程，將會(huì)避免因大量細(xì)胞壞死而釋放細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)引起的各種副作用，減輕化療對正常細(xì)胞的損傷，延長患者的生存期。然而，至今尚未篩選出能誘發(fā)腫瘤細(xì)胞大量凋亡的抗腫瘤藥。中藥誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡多為體外實(shí)驗(yàn)研究，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)較少，基本上處于初級研究階段。研究表明與細(xì)胞增殖 有關(guān)的原癌基因和抑癌基因都參與對細(xì)胞凋亡的調(diào)控，其中研究較多的有Bcl-2家族、細(xì)胞色素C、抑癌基因p53、Ice蛋白酶以及Fas/ΑΡΟ-Ι等。因此，以上述細(xì)胞凋亡的調(diào)控基因?yàn)榘谢?，尋找在引發(fā)細(xì)胞凋亡作用中具有區(qū)別腫瘤細(xì)胞及正常細(xì)胞(即能引發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡而對正常細(xì)胞無反應(yīng))能力的藥物是近年來各國科學(xué)家努力的方向和抗腫瘤藥物研究的新売點(diǎn)。在傳統(tǒng)的非抗癌藥物中，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)其中有一些具有可引起細(xì)胞凋亡的作用，這可能成為研發(fā)新的抗腫瘤藥物的途徑。然而，已發(fā)現(xiàn)的具有引起細(xì)胞凋亡作用的非抗癌藥物，僅僅在實(shí)驗(yàn)室中得到證實(shí)，且尚不能誘發(fā)大量腫瘤細(xì)胞的凋亡，在臨床上尚未真正用于治療腫瘤。甘露醇(Mannitol)是一種己六醇，傳統(tǒng)醫(yī)藥用作良好的利尿劑，也是降低顱內(nèi)壓、眼內(nèi)壓及治療腎病的藥物。常用制劑甘露醇注射液作為高滲透降壓藥，是臨床搶救特別是腦部疾患搶救常用的一種藥物，具有降低顱內(nèi)壓藥物所要求的降壓快、療效準(zhǔn)確的特點(diǎn)。國內(nèi)外未見甘露醇是否具有誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡作用的報(bào)道，也沒有將甘露醇用于抗腫瘤治療的臨床應(yīng)用先例。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種甘露醇在制備抗胰腺癌藥物中的應(yīng)用，特別是使用特定濃度的甘露醇注射液治療胰腺癌。為解決上述技術(shù)問題本發(fā)明采用如下技術(shù)方案甘露醇在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。上述腫瘤是肺癌、肝癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、胃腺癌。肺癌是肺鱗癌、肺腺癌。上述抗腫瘤藥物為甘露醇注射液。上述甘露醇注射液的質(zhì)量濃度為10% 19%。上述甘露醇注射液的質(zhì)量濃度為13% 17%。
發(fā)明人通過科學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甘露醇具有抗腫瘤活性，尤其是特定濃度的甘露醇注射液具有明顯引起細(xì)胞凋亡的作用。通過采用多項(xiàng)細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)及檢測凋亡相關(guān)基因bcl-2、bax，證實(shí)特定濃度甘露醇可誘導(dǎo)人多種癌細(xì)胞株明顯癌細(xì)胞凋亡，并掌握了其與濃度、時(shí)間的效應(yīng)關(guān)系，初步闡明其可能機(jī)理，而且，發(fā)明人已將研究結(jié)果用于腫瘤病人治療并取得明顯的療效，這些為甘露醇在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用及其臨床推廣提供了理論依據(jù)和實(shí)際病例。同時(shí)，本發(fā)明為科學(xué)廉價(jià)地尋找高效低毒的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥物開辟了新的思路，極具科研意義。


圖1是48小時(shí)MTT濃度-抑制率曲線圖。圖2 是 7 天 MTT 時(shí)間-抑制率曲線圖，圖中120ug/ul，240ug/ul，360ug/ul，480ug/ul,5100ug/ul,6120ug/ul。圖3是7天MTT濃度-抑制率曲線圖，圖中1 一天，2 二天，3三天，4四天，5五天，6六天,7七天。圖4是7天化學(xué)發(fā)光時(shí)間-抑制率曲線圖。圖5是對照組透射電鏡圖。圖6是對照組透射電鏡圖。圖7是24小時(shí)組透射電鏡圖。圖8是24小時(shí)組透射電鏡圖。圖9是48小時(shí)組透射電鏡圖。圖10是48小時(shí)組透射電鏡圖。圖11是H1299細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果對照I組圖。圖12是H1299細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果對照2組圖。圖13是H1299細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果對照3組圖。圖14是H1299細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果0%組圖。圖15是H1299細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果5%組圖。圖16是H1299細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果9%組圖。圖17是H1299細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果13%組圖。圖18是H1299細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果17%組圖。 圖19是H1299細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果20%組圖。圖20是早期+晚期凋亡細(xì)胞與劑量關(guān)系圖。圖21是晚期凋亡和壞死細(xì)胞與劑量關(guān)系圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1甘露醇抗腫瘤的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究(肺癌)I實(shí)驗(yàn)材料1.1 材料1.1.1細(xì)胞株SPC-A-1人肺癌細(xì)胞系引自上海腫瘤研究所。1.1. 2試劑RPMI1640、胰蛋白酶購自Gibcol BRL公司；新生牛血清購自杭州四季青生物工程材料有限公司；碳酸氫鈉(分析純)為河北磁州制藥廠生產(chǎn)；青霉素鈉和硫酸鏈霉素為哈藥集團(tuán)制藥總廠生產(chǎn)；噻唑藍(lán)(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)為Sigma公司產(chǎn)品；ATP試劑盒(ATP提取液、熒光素-熒光酶、稀釋液等)為德國DCS公司產(chǎn)品；檸檬酸鈉為廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)；碘化丙啶(PI)、RnaseA為Sigma公司產(chǎn)品；甘露醇注射液購自廣西南寧百會(huì)藥業(yè)集團(tuán)有限公司。1. 1.3器材C02培養(yǎng)箱(日本HERAEUS);倒置顯微鏡(日本NIKON);全自動(dòng)酶標(biāo)儀(芬蘭DENLEY DRAGON MK-2型)；自發(fā)光板式分析儀(德國BETH0LD);流式細(xì)胞儀(美國BECKMAN);透射電鏡。2實(shí)驗(yàn)方法及觀察指標(biāo)2.1細(xì)胞培養(yǎng)5%C02培養(yǎng)箱，用含10%新生牛血清，青霉素、鏈霉素各IX 105U/L及NaHCO3調(diào)PH值至7. 2-7. 4的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，收集對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 2. 2采用MTT法測定細(xì)胞抑制率將濃度為2X 104/ml的細(xì)胞懸液接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔體積100 μ L。細(xì)胞貼壁后，分別加入1-150 μ g/μ I濃度的甘露醇，對照組不加藥，只加相應(yīng)體積的培養(yǎng)基，同時(shí)設(shè)復(fù)孔，37°C、5%C02條件下培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入20 μ I ΜΤΤ，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，加入100 μ I DMS0，振蕩混勻，用全自動(dòng)酶標(biāo)儀比色，492nm波長處測定各孔的吸光度A值，計(jì)算平均值，并按下列公式計(jì)算細(xì)胞生長抑制率細(xì)胞生長抑制率(%)=(對照組A-實(shí)驗(yàn)組A)/對照組A X 100% ;同方法取20、40、60、80、100、120 μ g/μ I濃度的甘露醇，對照組不加藥，只加相應(yīng)體積的培養(yǎng)基，同時(shí)設(shè)復(fù)孔，分別培養(yǎng)7天，計(jì)算出每天不同濃度的抑制率。2. 3采用化學(xué)發(fā)光法測定細(xì)胞抑制率將濃度為2 X 104/ml的細(xì)胞懸液接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔體積100 μ I。細(xì)胞貼壁后，加入48小時(shí)MTT結(jié)果中半數(shù)抑制濃度(IC50)的甘露醇，對照組不加藥，只加相應(yīng)體積的培養(yǎng)基，同時(shí)設(shè)復(fù)孔，37°C、5%C02條件下培養(yǎng)1、2、3、4、5、6、7天，每孔加入5(^1八了？提取液，充分混勻，每孔吸出100 μ I混合液加入另一個(gè)96孔板相應(yīng)的孔中，新板的每孔中加入20 μ I熒光素-熒光酶，振蕩混勻，用自發(fā)光板式分析儀檢測每孔的值，然后計(jì)算平均值，并按下列公式計(jì)算細(xì)胞生長抑制率細(xì)胞生長抑制率(％)=(對照組-實(shí)驗(yàn)組)/ (對照組-空白組)X 100%。2. 4流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期2. 4.1PI染液的配制高精度天平上精確稱取PI5mg、RnaSeA10mg、枸櫞酸鈉O.1g,溶解于IOOml滅菌生理鹽水中。精確吸取NP-400. 3ml加入上液中，搖勻，4°C下避光保存。2. 4. 2流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期方法收集培養(yǎng)細(xì)胞，于PBS中洗兩次，然后按(1-2)X 106/ml加入70%冰乙醇并混勻，于4°C下固定過夜。檢測時(shí)標(biāo)本以1000r/min離5min, 3mlPBS重懸5min，以300目篩網(wǎng)過濾細(xì)胞懸液以除去粘連成團(tuán)的細(xì)胞群，再于1000r/min下離心5min,棄去上清液，加入PI染液lml/管，4°C下避光30min。取48小時(shí)MTT結(jié)果中的半數(shù)抑制濃度(IC5tl),分為24、48小時(shí)兩組和對照組，共三組，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期分析，收集數(shù)據(jù)，在MultiCycle分析軟件進(jìn)行細(xì)胞周期的分析，分別計(jì)算G1'S、G2/M期的相對比例。2. 5透射電鏡檢測收集培養(yǎng)細(xì)胞，少量PBS混懸后移入塑料錐形離心管中，在1000-1500r/min離心5_10min，棄去上清液，加入新生牛血清1_2滴，然后用吸管吹散離心物使其混合，離心3-5min后，盡量吸棄上層多余的新生牛血清；沿管壁緩慢加入戊二醛固定液，4°C下預(yù)固定30min，用細(xì)針沿管壁在標(biāo)本周圍輕輕劃一圈，使固定液充分滲入底部，并繼續(xù)固定至少2小時(shí)，取48小時(shí)MTT結(jié)果中的半數(shù)抑制濃度(IC5tl),分為24、48小時(shí)兩組和對照組，共三組，按常規(guī)電鏡包埋步驟處理。2. 6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用SPSS10. O軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料的比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的比較采用X2檢驗(yàn)。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1采用MTT法測定細(xì)胞抑制率結(jié)果顯示48小時(shí)內(nèi)，在1-150 μ g/μ I濃度范圍時(shí)甘露醇可抑制肺癌細(xì)胞的增殖活性，其抑制作用隨濃度的增高而增強(qiáng)，7天內(nèi)，隨著濃度和時(shí)間的增長，抑制率也不斷增加。見圖1、2、3。3. 2采用化學(xué)發(fā)光法測定細(xì)胞抑制率結(jié)果顯示取48小時(shí)MTT結(jié)果中的半數(shù)抑制 濃度(IC5tl)時(shí)，作用7天，甘露醇可抑制肺癌細(xì)胞的增殖活性，并且抑制作用隨時(shí)間的延長而增強(qiáng)，見圖4。3. 3流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期結(jié)果顯示取48小時(shí)MTT結(jié)果中的半數(shù)抑制濃度(IC50)時(shí)，作用24、48、72小時(shí)組細(xì)胞周期停止在G2+M期的較對照組明顯增多，見表I。表I甘露醇不同處理時(shí)間對細(xì)胞周期的影響
處理時(shí)間G1 (%)S (%)G2/M(%)
對照53,337, I9.62445.740.913.4
4854.527.817.6
7261, I26, I12.83. 4透射電鏡檢測結(jié)果顯示取48小時(shí)MTT結(jié)果中的半數(shù)抑制濃度(IC5tl)時(shí)，作用24小時(shí)組電鏡下可見細(xì)胞膜、核膜完整，核仁較清楚，胞質(zhì)中較多脂滴，可見凋亡小體，作用48小時(shí)組電鏡下可見細(xì)胞凋亡較明顯，大量凋亡小體，而對照組細(xì)胞電鏡下可見符合腫瘤細(xì)胞的特點(diǎn)，核大，見圖5至圖10。圖5、6為對照組可見細(xì)胞核大，核漿比例失調(diào)，核仁較清楚，胞質(zhì)中較多脂滴；圖7、8為24小時(shí)組可見細(xì)胞核膜完整，可見凋亡小體圖9、10為48小時(shí)組可見大量凋亡小體。實(shí)施例2特定濃度甘露醇誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞凋亡及機(jī)理的研究(肺腺癌)I材料和方法1.1主要試劑及儀器DMEM(高糖)培養(yǎng)液(美國hyclone公司賽默飛世爾生物化學(xué)制品北京有限公司分裝)，胰蛋白酶、新生小牛血清(FBS購自杭州四季青生物有限公司)，20%甘露醇(購自安雙鶴藥業(yè)有限公司)，Giemsa染色試劑盒(由廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)中心提供)，細(xì)胞凋亡hoechst33342試劑盒(購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司)細(xì)胞凋亡Dapi染色試劑盒、流式細(xì)胞儀試劑盒(均購自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司)、Bcl-2檢測試劑盒(購自福州邁新生物科技發(fā)展有限公司)，戊二醇、透射電子顯微鏡由廣西醫(yī)科大學(xué)電鏡室提供。CK41型倒置顯微鏡(日本Olympus)、照相系統(tǒng)(日本Nikon72000U倒置顯微鏡及DS-5MC高分辨率CXD數(shù)碼照相500萬像數(shù))，由廣西大學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，流式細(xì)胞儀(美國BD公司FACSCalibur)由廣西壯族自治人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心提供并協(xié)助檢測。
1. 2細(xì)胞培養(yǎng)H1299細(xì)胞株為人肺腺癌細(xì)胞，由廣西腫瘤防治研究所潘弘博士惠贈(zèng)。該細(xì)胞呈長梭形、葉形或多角形，貼壁生長，細(xì)胞質(zhì)飽滿，生長舒展，相鄰細(xì)胞生長融合成片。取稀釋成2X 104/ml處于對數(shù)生長期的細(xì)胞懸液，培養(yǎng)于37°C含5%C02細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)液為含10%新生小牛血清、100u/ml青霉素和100u/ml鏈霉素的DMEM(高糖)培養(yǎng)液，O. 25%胰蛋白酶消化傳代，CK41型倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)。1. 3 方法(I)Giemsa染色觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)將生長良好狀態(tài)細(xì)胞放入預(yù)先放取處于生長良好的H1299細(xì)胞懸浮液，加入預(yù)先放置有蓋玻片的六孔板，放到37°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)，讓細(xì)胞爬片生長，待其長到85% 90%，分別加入不同濃度的甘露醇(0%，5%，9%，13%，17%, 20%),培養(yǎng)48小時(shí)，取出蓋玻片，PBS洗2次，甲醇固定5min，Giemsa染色15min，晾干后中性樹脂封片，顯微鏡(日本Nikon72000U倒置顯微鏡及DS-5MC高分辨率CXD數(shù)碼照相500萬像數(shù)400倍)下觀察拍照細(xì)胞凋亡的特性變化。
(2)細(xì)胞凋亡Dapi染色觀察細(xì)胞核凋亡小體取處于生長良好的H1299細(xì)胞別加入含不同濃度0%、5%、9%、13%、17%、20%甘露醇-:DMEM(高糖)培養(yǎng)液(含10%FBS)10ml。繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)，PBS洗滌2次，O. 25%胰蛋白酶消化3min，立即加入DMEM(高糖)培養(yǎng)液(10%FBS)10ml終止消化，離心，棄上清，PBS洗滌2次，再離心，棄上清，后用PBS稀釋制成細(xì)胞懸液(10萬個(gè)細(xì)胞/lml),將細(xì)胞懸液500ul放入打靶固定離心管離心(8000r/min、5min,)到載玻片上,干燥,無水乙醇固定,再干燥。然后在避光條件下按細(xì)胞凋亡Dapi染色盒說明書染色，PBS在玻璃缸內(nèi)浸泡洗滌3次，每次15min，再干燥，晾干后中性數(shù)膠封片，熒光顯微鏡以340/380紫外光激發(fā)及DS-5MC高分辨率CXD數(shù)碼照相400倍)下觀察、拍照細(xì)胞核凋亡小體情況。細(xì)胞凋亡Dapi染色玻片4°C避光保存。結(jié)果判斷細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期I期的細(xì)胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased)，部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)；II a期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝集、邊緣化；II b期的細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。(3)細(xì)胞凋亡h0eChst33342試劑染色觀察細(xì)胞核凋亡小體步驟與(2)相同，然后在避光條件下按細(xì)胞凋亡hoechst33342試劑盒說明書染色，PBS在玻璃缸內(nèi)浸泡洗滌3次，每次15min，再干燥，晾干后中性數(shù)膠封片，熒光顯微鏡以340/380紫外光激發(fā)及DS-5MC高分辨率(XD數(shù)碼照相400倍)下觀察、拍照細(xì)胞核凋亡小體情況。細(xì)胞凋亡hoechst33342試劑染色玻片4°C避光保存。(4)透射電子顯微鏡觀察步驟與(2)相同，離心，棄上清，PBS洗滌2次，移入1.5EP管再離心，棄上清，用戊二醇固定后透射電子顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果判斷凋亡細(xì)胞體積變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮。凋亡I期(pro-apoptosis nuclei)的細(xì)胞核的染色質(zhì)高度盤繞，出現(xiàn)許多稱為氣穴(cavitations)的空泡結(jié)構(gòu)；II a期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝集、邊緣化；細(xì)胞凋亡的晚期，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。(5)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡步驟與(2)相同，收集所有的懸浮細(xì)胞分別倒入標(biāo)有0%，5%，9%，13%，17%，20%的離心管(IOml )，離心2000r/2min,棄去上清液，用PBS洗2次，再離心2000r/2min，棄清液，重懸，離心2000r/2min，再重懸，細(xì)胞計(jì)數(shù)(lX106)/ml，按表I加入相應(yīng)試劑，避光、放入冰浴在Ih內(nèi)上FACSCalibur進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)定量檢測，結(jié)果見表2。
表2流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡結(jié)果
權(quán)利要求
1.甘露醇在制備抗胰腺癌藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物為甘露醇注射液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于:所述甘露醇注射液的質(zhì)量濃度為:10%~19%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述甘露醇注射液的質(zhì)量濃度為13%~17%。
全文摘要
本發(fā)明公開了甘露醇在制備抗胰腺癌藥物中的應(yīng)用，特別是使用特定濃度(10%～19%)的甘露醇注射液治療胰腺癌。傳統(tǒng)上甘露醇僅作為利尿劑、高滲透降壓藥等，發(fā)明人通過科學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甘露醇具有抗腫瘤活性，通過采用多項(xiàng)細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)及檢測凋亡相關(guān)基因bcl-2、bax，證實(shí)特定濃度甘露醇可誘導(dǎo)人多種癌細(xì)胞株明顯癌細(xì)胞凋亡，并掌握了與濃度、時(shí)間的效應(yīng)關(guān)系，初步闡明其可能機(jī)理，而且，發(fā)明人已將研究結(jié)果用于腫瘤病人治療并取得明顯的療效，這些為甘露醇在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用及其臨床推廣提供了理論依據(jù)和實(shí)際病例。
文檔編號A61P35/00GK103006625SQ20121059059
公開日2013年4月3日 申請日期2011年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月18日
發(fā)明者黃鼎銘, 劉德森, 黎樂群, 黃亞銘, 張力圖, 曹驥, 黃其春, 吳軍, 岳惠芬, 李黃羿, 潘琪, 黎斌, 楊立, 黃亞芬, 茅乃權(quán), 左傳田, 謝彤, 潘泓, 黃耀元, 歐超, 梁新強(qiáng), 崔英 申請人:廣西壯族自治區(qū)腫瘤防治研究所