Apelin-13在治療糖尿病腎病中的應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種用于治療糖尿病腎病的藥物，該藥物是Apelin-13，它是由13個(gè)氨基酸組成的短肽。本發(fā)明揭示了Apelin-13能有效降低腎小球系膜細(xì)胞系HBZY-1和SV40以及Akita小鼠腎皮質(zhì)細(xì)胞中HDAC1的表達(dá)水平從而抑制組蛋白ac-K，ac-H3K9和ac-H3K18的乙?；?，進(jìn)而抑制由高糖引起的炎癥因子MCP-1，ICAM-1和VCAM-1的水平的升高，最終抑制Akita小鼠由糖尿病引起的腎小球過(guò)度肥大和腎小球系膜的增大。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)Apelin-13能夠以降低組蛋白的乙?；癁榘悬c(diǎn)，能作為治療糖尿病腎病的藥物。
【專(zhuān)利說(shuō)明】Apel in-13在治療糖尿病腎病中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物藥學(xué)領(lǐng)域，涉及治療糖尿病腎病的藥物。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來(lái)中國(guó)已成為全球糖尿病發(fā)病率高速增長(zhǎng)的地區(qū)之一。隨著糖尿病病人人數(shù) 的急劇增多，糖尿病腎病已經(jīng)成為晚期腎臟疾病的主要原因，并且是引起糖尿病病人發(fā)病 和死亡的主要原因（參見(jiàn) Susztak，K，Bottinger, EP :Diabetic nephropathy :a frontier for personalized medicme. J Am Soc Nephrol2006 ; 17 (2) :361-367.)〇
[0003] 糖尿病腎病作為糖尿病嚴(yán)重并發(fā)癥之一，其最早表現(xiàn)為腎臟增大，隨著病程增長(zhǎng)， 腎小球毛細(xì)血管逐漸出現(xiàn)基底膜增厚，系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多；進(jìn)一步發(fā)展可出現(xiàn)蛋 白尿、腎小球硬化性病變和腎小管間質(zhì)纖維化，最后導(dǎo)致腎衰竭。探索治療糖尿病腎病的有 效治療方法和藥物是領(lǐng)域長(zhǎng)期以來(lái)的努力目標(biāo)。
[0004] Apelin是1998年由日本學(xué)者Tatemoto等利用反向藥理學(xué)的方法從牛胃的分泌物 中提取并純化出的孤兒G蛋白偶聯(lián)受體-血管緊張素受體ATl相關(guān)的受體蛋白（putative receptor protein related to the angiotensin receptor ATI,APJ)的天然配體（參見(jiàn) 張寶紅等，Apelin-新發(fā)現(xiàn)的孤兒G蛋白偶聯(lián)受體APJ的天然配體[J]。國(guó)外醫(yī)學(xué)?生理、病 理科學(xué)與臨床分冊(cè)，2003, 23 (6) :591-593)。Apelin是一個(gè)由77個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)前 體，在體內(nèi)可以進(jìn)一步分解成具有生理功能的由36、17、13或12個(gè)氨基酸組成的短肽（分 別命名為Apelin-36、Apelin-17、Apelin-13和Apelin-12)，然后與APJ受體結(jié)合以發(fā)揮生 理作用。其中Apelin-13(QRPRLSHKGPMPF)的生物活性最高，其生理功能包括調(diào)節(jié)葡萄糖的 利用、血壓和食物的攝取。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的任務(wù)是提供一種用于治療糖尿病腎病的藥物。
[0006] 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是：本發(fā)明提供的這種用于治療糖尿病腎病的藥物是 Apelin-13,它是由以下13個(gè)氨基酸組成的短肽：
[0007] Pyr-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe
[0008] 所述的Apelin-13為序列表中序列1所示的由13個(gè)氨基酸組成的短肽。本發(fā)明 使用固相多肽合成儀合成了 apelin-13,合成后的apelin-13使用高效液相色譜純化后，經(jīng) 質(zhì)譜鑒定其序列正確。本發(fā)明研究了 apelin-13在對(duì)糖尿病腎病發(fā)揮作用中對(duì)腎臟組蛋白 乙?；挠绊憽１景l(fā)明發(fā)現(xiàn)Apelin-13能有效降低腎小球系膜細(xì)胞系HBZY-I和SV40以及 Akita小鼠腎皮質(zhì)細(xì)胞中HDACl的表達(dá)水平從而抑制組蛋白ac-K，ac-H3K9和ac-H3K18的 乙酰化，進(jìn)而抑制由高糖引起的炎癥因子MCP-1，ICAM-I和VCAM-I的水平的升高，最終抑制 Akita小鼠由糖尿病引起的腎小球過(guò)度肥大和腎小球系膜的增大。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)Apelin-13 能夠以降低組蛋白的乙酰化為靶點(diǎn)，在制備治療糖尿病腎病藥物中具有極大的應(yīng)用價(jià)值。 本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)Apelin-13可以有效降低糖尿病引起的腎臟中組蛋白乙酰化水平升高，進(jìn) 而抑制腎臟炎癥因子基因的過(guò)度激活，從而降低由糖尿病引起的腎小球增大和腎臟系膜的 擴(kuò)張，為Apelin-13在制備治療糖尿病腎病的藥物中奠定了基礎(chǔ)。本專(zhuān)利申請(qǐng)?jiān)诰唧w實(shí)施 方式部分披露了本發(fā)明的具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果。根據(jù)本發(fā)明所揭示的結(jié)果，以Apelin-13作為活 性成分加上藥學(xué)上可接受的載體，可以制成用于治療糖尿病腎病的藥物。多肽Apelin-13 可以調(diào)節(jié)葡萄糖的利用、血壓和食物的攝取。本研究發(fā)現(xiàn)揭示Apelin-13可以抑制一型糖 尿病小鼠（Akita)的腎臟中由高糖引起的組蛋白的乙?；缴?，進(jìn)而抑制炎癥因子基 因的過(guò)度激活，從而降低由糖尿病引起的腎小球增大和腎臟系膜的擴(kuò)張，為Apelin-13在 制備治療糖尿病腎病的藥物中奠定了基礎(chǔ)。本發(fā)明研究了 Apelin-13在對(duì)糖尿病腎病發(fā)揮 作用中對(duì)腎臟組蛋白乙?；挠绊?。糖尿病患者中的高糖環(huán)境會(huì)導(dǎo)致腎臟病變，出現(xiàn)腎臟 增大，腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚，系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多，蛋白尿等癥狀。Apelin具 有擴(kuò)張血管、減少抗利尿激素釋放、降低血壓、調(diào)節(jié)垂體激素釋放、調(diào)節(jié)葡萄糖的利用、血壓 和食物的攝取等生物作用。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0009] 圖1正常小鼠和Akita小鼠的腎臟組織染色；
[0010] 圖2注射Apelin-13后Akita小鼠腎皮質(zhì)中的組蛋白乙酰化水平變化；
[0011] 圖3注射Apelin-13后Akita小鼠腎皮質(zhì)中的炎癥因子的變化水平；
[0012] 圖4大鼠系膜細(xì)胞HBZY-I的組蛋白乙?；脱装Y因子的變化水平；
[0013] 圖5小鼠系膜細(xì)胞MES13的組蛋白乙?；脱装Y因子的變化水平。

【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā) 明而不用于限制本發(fā)明要求保護(hù)的范圍，下列實(shí)施例中未注明具體實(shí)驗(yàn)條件和方法，通常 按照常規(guī)條件如：J.薩姆布魯克等主編，科學(xué)出版社，1992,分子克隆實(shí)驗(yàn)指南（第二版）； D. L.斯佩克特等，科學(xué)出版社，2001，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)指南；呂鴻聲，科學(xué)出版社，1982，或接照制 造廠商所建議的條件。Akita小鼠購(gòu)于南京大學(xué)動(dòng)物模型研究中心，Apelin-13按照標(biāo)準(zhǔn)的 固相多肽合成步驟合成。本發(fā)明使用固相多肽合成儀合成了 apelin-13,其序列為：Pyr-A rg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe，合成后的 apelin-13 使用高效液相 色譜純化后，經(jīng)質(zhì)譜鑒定其序列正確。
[0015] 實(shí)驗(yàn)I =Akita小鼠尾靜脈注射Apelin-13抑制糖尿病引起的腎臟功能異常。
[0016] 具體操作：九周齡的小鼠分為三組：正常小鼠組、Akita小鼠組和Akita小鼠注射 Apelin組。正常小鼠組和Akita小鼠組尾靜脈注射磷酸鹽緩沖液每天兩次，Akita小鼠注 射Apelin組按照每千克體重注射400pM的Apelin-13每天兩次。
[0017] 在小鼠20周齡時(shí)取腎臟測(cè)重，并收集血液。在取腎臟24h前，收集小鼠尿液。血 清白蛋白和球蛋白含量分別使用相應(yīng)的試劑盒檢測(cè)（上海復(fù)興長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司）。 尿液中的肌氨酸酐和總蛋白量使用肌氨酸酐試劑盒測(cè)量（上海復(fù)興長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公 司）。
[0018] 結(jié)果如表1所示，糖尿病小鼠的腎臟重量、腎臟/體重值、蛋白尿、血清白蛋白/ 球蛋白和腎小球?yàn)V過(guò)率與正常組相比顯著性升高，在注射Apelin-13后，這些指標(biāo)均顯著 地下降致接近正常水平。
[0019] TableL注射Apelin-13對(duì)各項(xiàng)生理指標(biāo)的影響
[0020]

【權(quán)利要求】
1. Apelin-13在制備用于治療糖尿病腎病藥物中的應(yīng)用，所述的Apelin-13為序列表 中序列1所示的由13個(gè)氨基酸組成的短肽。
2. -種用于治療糖尿病腎病的藥物，其特征在于以Apelin-13為活性成分，所述的 Apelin-13為序列表中序列1所示的由13個(gè)氨基酸組成的短肽。
3. -種用于治療糖尿病腎病的藥物制劑，由作為活性成分的Apelin-13和藥學(xué)上可接 受的載體組成，所述的Apelin-13為序列表中序列1所示的由13個(gè)氨基酸組成的短肽。
【文檔編號(hào)】A61P13/12GK104436158SQ201310433505
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月22日
【發(fā)明者】黃昆, 陳紅, 焦麗華 申請(qǐng)人:華中科技大學(xué)