細胞色素c注射液的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種細胞色素C注射液。具體地說，本發(fā)明涉及一種藥物組合物，其中包含細胞色素C、雙甘氨肽、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、注射用水。本發(fā)明的細胞色素C藥物組合物可用于各種組織缺氧急救的輔助治療，如一氧化碳中毒、催眠藥中毒、氰化物中毒、新生兒窒息、嚴重休克期缺氧、腦血管意外、腦震蕩后遺癥、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困難和各種心臟疾患引起的心肌缺氧的治療。
【專利說明】細胞色素C注射液
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術領域】，涉及一種藥物制劑，特別是涉及一種細胞色素C的藥物組合物例如注射液。本發(fā)明的細胞色素C藥物組合物可用于各種組織缺氧急救的輔助治療，如一氧化碳中毒、催眠藥中毒、氰化物中毒、新生兒窒息、嚴重休克期缺氧、腦血管意外、腦震蕩后遺癥、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困難和各種心臟疾患引起的心肌缺氧的治療。
【背景技術】
[0002]細胞色素C (Cytochrome C, Cyt C)或稱細胞色素復合體(Cytochrome Complex),是一種與粒線體內膜有關，結構松散而微小的血紅素蛋白。它和其他細胞色素不同，是一種高度可溶性蛋白，可溶性達每升100克。細胞色素C是電子傳遞鏈不可或缺的元件，負責攜帶一粒電子，在復合物III和復合物IV之間傳遞。此外，它能夠接受氧化和還原反應，但不與氧結合。在人體中，細胞色素C已經(jīng)由CYCS基因完成編碼。細胞色素C和細胞程序性死亡有關。
[0003]臨床上使用的細胞色素C是一種細胞呼吸激動劑，它存在于細胞線粒體中的一種以鐵卟啉為輔基的蛋白質。細胞色素C擔負傳遞電子的作用，是細胞呼吸不可少的物質。當組織缺氧時，外源性細胞色素C即能進入細胞內，從而發(fā)揮其糾正細胞呼吸和物質代謝作用。本品是存在于細胞線粒體中的一種以鐵卟啉為輔基的蛋白質，目前已能提純分離。藥用制劑是從動物心臟或酵母中分離出來的，細胞色素是呼吸鏈的一環(huán)。各種細胞色素按一定順序排列組成細胞呼吸所不可少的。細胞色素C不能透過細胞膜，因此對正常人無作用，當組織缺氧時、細胞膜通透性增高，外源性制劑即能進入細胞內，從而發(fā)揮其糾正細胞呼吸和物質代謝作用。
[0004]現(xiàn)有技術已有諸多關于細胞色素C及其藥品的制備方法。例如，中國專利申請?zhí)?4110756.6 (CN1106019A，陳慶功)公開了一種從動物心臟中提取細胞色素C粗品的生產工藝，它由原料處理、一次提取、二次提取、吸附、沸石的清洗、洗脫、鹽析、沉淀、透析等工藝步驟完成，其特征是吸附工藝采用分層沉淀動態(tài)吸附的方法，這樣可以縮短吸附時間，提高吸附效率，避免了因吸附時間過長而造成母液變質。
[0005]中國專利申請?zhí)?00910229517.7 (CN101709086A，東誠)公開了一種細胞色素C的
提取方法。以哺乳動物心肌為原料，采用硫酸鋁溶液提取法制備，提取過程中硫酸鋁的濃度控制在0.1_10%，硫酸鋁溶液的體積控制在1-5倍量心肌體積，提取pH值控制在3-6，反應溫度控制在0-30°C，提取時間控制在l_4h。再經(jīng)吸附洗脫，最終得到細胞色素C。本發(fā)明具有方法成本低、步驟簡單、提取條件溫和、引入雜質少、反應物無污染、適合工業(yè)化大生產的特點。
[0006]中國專利申請?zhí)?01110094755.9 (CN102206265A，宏業(yè))公開了以哺乳動物心提取細胞色素C溶液的生產方法。將哺乳動物心臟經(jīng)酸水提取，吸附材料吸附，酸水洗脫，鹽析，沉淀及透析法制得細胞色素c溶液粗品，粗品經(jīng)離子交換純化，最終精制得細胞色素C溶液。[0007]中國專利申請?zhí)?01110268301.9 (CN102295699A，西北大學)公開了一種細胞色素C的純化新工藝，包括以下步驟:(I)從動物臟器或者酵母中提取得到細胞色素C的粗提液；(2)向粗提液中加入無機鹽進行鹽析，靜置離心棄去沉淀的雜蛋白，收集上清液；(3)加緩沖液調節(jié)上清液中無機鹽濃度至20%~35%，再用前沿疏水色譜法對其進行純化，即將所得溶液連續(xù)上樣于預先用20%~35%的無機鹽溶液平衡過的疏水色譜柱中，收集穿透液；
(4)用20%~35%無機鹽溶液沖洗色譜柱至吸光度達到穩(wěn)定，收集色譜流出液，與穿透液合并，即為純化后的細胞色素C。本發(fā)明操作簡便，分離純化效果好，效率高，成本低。
[0008]中國專利申請?zhí)?00710086421.0(CN101019836A，蔡海德)公開了細胞色素C納米脂質體藥物及其制備方法。其中細胞色素C納米脂質體藥物，包括如下重量份數(shù)的原料:中性磷脂40-80 ;谷留醇10-20 ;膽固醇20-40 ;胞色素C10-30 ;聚乙二醇20-25 ;還原性谷胱甘肽5-10 ;維生素C40-50。據(jù)信該發(fā)明提供的脂質體藥物可用于臨床各種缺氧的急救或輔助治療。
[0009]中國專利申請?zhí)?01210578970.0 (CN103055305A，豐原)公開了一種注射用含細胞色素C藥物組合物的凍干制劑，包括如下重量份的組分:細胞色素C75~300份；L-精氨酸30~60份；依地酸二鈉2~5份；甘露醇150份。該凍干制劑選用依地酸二鈉和L-精氨 酸作為輔料，有利于提高細胞色素C的穩(wěn)定性，藥液配制過程選用甘露醇作為凍干賦形劑，選用磷酸或磷酸鈉溶液作為PH值調節(jié)劑，可使產品質量更穩(wěn)定；在甘露醇溶液中經(jīng)活性炭處理后再加入細胞色素C，避免了細胞色素C因活性炭吸附而引起的含量降低的問題；該發(fā)明采用的制備方法，將凍干時間由23小時縮短至14~16小時，降低能耗30%，同時在不增加硬件投入的情況下，可提高產能30%左右，顯著降低了生產成本。
[0010]由于細胞色素C是一種含鐵元素的有色蛋白質，是生物體中酶氧化系統(tǒng)中一個非常重要的酶。細胞色素C是含鐵卟啉鹽基性結合蛋白質，由N、S、Fe、C、H五種元素組成。從豬心肌提取的細胞色素C的Fe含量為0.43%，分子量為13000，等電點pHIO。
[0011]細胞色素C的大分子化學結構決定了其制劑配制存在諸多需要克服的困難。例如制劑的澄明度就是經(jīng)常出現(xiàn)的問題。例如，郁福年(醫(yī)藥工業(yè)，細胞色素C注射液工藝改革，1980年08期)中探討了細胞色素C注射液澄明度不夠好，探討其主要原因是細胞色素C原料中雜蛋白未除盡所致。又例如，姜洪志等(醫(yī)藥工業(yè)，細胞色素C注射液澄明度的改進，1986年10期)從提高原料純度，改進過濾方法，控制配劑pH值等方面進進行研究以期獲得具有更好澄明度的細胞色素C注射液。
[0012]因此，提供一種具有良好藥學性能例如物理性質和/或化學性質和/或生物學性質的細胞色素C產品，仍然是本領域技術人員極其期待的。

【發(fā)明內容】

[0013]本發(fā)明的目的在于提供一種具有良好藥學性能例如物理性質和/或化學性質和/或生物學性質的細胞色素C產品，特別是一種可注射用的細胞色素C產品。本發(fā)明人已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，具有本發(fā)明特征的細胞色素C藥物組合物具有優(yōu)良的藥學性能。本發(fā)明基于此發(fā)現(xiàn)而得以完成。
[0014]為此，本發(fā)明第一方面提供了一種藥物組合物，其中包含細胞色素C、雙甘氨肽、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、注射用水。[0015]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實施方案的藥物組合物，其每Iml中包含:
[0016]
【權利要求】
1.一種藥物組合物，其中包含細胞色素C、雙甘氨肽、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、注射用水。
2.根據(jù)權利要求1的藥物組合，，其每1ml中包含:_
3.根據(jù)權利要求1-2的藥物組合物，其中還包含L-半胱氨酸； 或者，其每1ml中包含:
4.根據(jù)權利要求1-3的藥物組合物，其特征在于: 其為溶液型的藥物組合物； 其為注射液； 其為無菌注射液； 還任選地包含酸堿調節(jié)劑；在一個實施方案中，所述酸堿調節(jié)劑選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、鹽酸、磷酸、硝酸、硫酸、枸櫞酸、枸櫞酸鈉、乙酸、乙酸鈉或其組合；和/或 其PH值為6.0~8.0,例如其pH值為6.0~7.5，例如其pH值為6.5~7.5，例如其pH值為7.0~7.5。
5.根據(jù)權利要求1-4的藥物組合物，其特征在于: 其為注射液，其在配制時經(jīng)過活性炭吸附處理過程； 其為注射液，其在配制時經(jīng)過活性炭吸附處理過程，所述活性炭吸附處理中與活性炭一起還添加有紙漿；和/或 其為注射液，其在配制時經(jīng)過活性炭吸附處理過程，該活性炭吸附處理過程是:向包含活性成分的藥液中加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入紙漿，攪拌10~30分鐘；其中所述與活性炭一起加入的紙漿的量，以干濾紙計，在藥液中的濃度為0.05%~0.2%(w/v)，優(yōu)選 0.05% ~0.l%(w/v) ο
6.根據(jù)權利要求1-5的藥物組合物，其為注射液，其是照以下方法配制得到的: (1)將各固體輔料與細胞色素C溶解于適量注射用水中，使溶液體積達到理論處方體積的70~80% ； (2)用酸堿調節(jié)劑調節(jié)溶液的pH值至7.0~7.2 ; (3)加熱至50-60。。，加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入紙漿，保溫攪拌10~30分鐘； (4)將步驟(3)所得藥液先用濾紙過濾，接著依次用0.8 μ m和0.45 μ m的微孔濾膜進行過濾，以除去活性炭和紙漿； (5)補加注射用水至全量；測定溶液的PH值，必要時調節(jié)溶液的pH值至7.0~7.5，充入氮氣，4-6 °C冷藏48h,依次 用0.45 μ m、0.22 μ m的微孔濾膜無菌過濾,濾液灌裝入玻璃瓶中，密封，即得。
7.制備細胞色素C藥物組合物例如權利要求1-6的細胞色素C藥物組合物例如注射液的方法，所述細胞色素C藥物組合物中包含:細胞色素C、雙甘氨肽、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、注射用水；該方法包括以下步驟: (1)將各固體輔料與細胞色素C溶解于適量注射用水中，使溶液體積達到理論處方體積的70~80% ； (2)用酸堿調節(jié)劑調節(jié)溶液的pH值至7.0~7.2 ; (3)加熱至50-60。。，加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入紙漿，保溫攪拌10~30分鐘； (4)將步驟(3)所得藥液先用濾紙過濾，接著依次用0.8 μ m和0.45 μ m的微孔濾膜進行過濾，以除去活性炭和紙漿； (5)補加注射用水至全量；測定溶液的pH值，必要時調節(jié)溶液的pH值至7.0~7.5，充入氮氣，4-6°C冷藏48h,依次用0.45 μ m>0.22 μ m的微孔濾膜無菌過濾,濾液灌裝入玻璃瓶中，密封，即得。
8.根據(jù)權利要求7的方法，其中所述的紙漿是以干濾紙配制的。
9.根據(jù)權利要求8的方法，其中與活性炭一起加入的紙漿的量，以干濾紙計，在藥液中的濃度為0.05%~0.2%(w/v)，優(yōu)選0.05%~0.l%(w/v);進一步地，其如說明書第二方面任一實施方案所述。
10.權利要求1-6所述細胞色素C藥物組合物或者權利要求7-9所制備的細胞色素C藥物組合物在制備用于各種組織缺氧急救及其的輔助治療，如一氧化碳中毒、催眠藥中毒、氰化物中毒、新生兒窒息、嚴重休克期缺氧、腦血管意外、腦震蕩后遺癥、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困難和各種心臟疾患引起的心肌缺氧的治療的藥物中的用途。
【文檔編號】A61P39/00GK103536910SQ201310532764
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年10月31日 優(yōu)先權日:2013年10月31日
【發(fā)明者】趙東明, 賈紅軍, 方專, 羅雋, 潘旭, 茍治君 申請人:成都天臺山制藥有限公司