一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部給藥的方法和裝置制造方法
【專利摘要】本發(fā)明是一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部給藥的方法，采用了對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部埋管法，使對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部注射更加便捷，按以下步驟進(jìn)行：采用特殊連續(xù)給藥裝置，以小鼠或大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；1、將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用30%的水合氯醛麻醉，固定于小鼠腦定位儀上，確定側(cè)腦室位置；2、按上述步驟對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的側(cè)腦室埋入的給藥導(dǎo)管，見腦脊液從導(dǎo)管中溢出，遂以牙科水泥將導(dǎo)管固定在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物頭部；3、埋管成功后4天內(nèi)，每天連續(xù)肌肉注射0.2ml80萬單位青霉素鈉，對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行消炎；4、給藥：取10μl的微量注射器吸取待實(shí)驗(yàn)的藥品溶液適量，將微量進(jìn)樣器的針頭部分插入已經(jīng)埋入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部的導(dǎo)管中，插入深度為0.5～2.0cm，可以連續(xù)從導(dǎo)管中對小鼠腦部進(jìn)行給藥。
【專利說明】一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部給藥的方法和裝置

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及小鼠及大鼠腦室給藥的方法，是一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部 給藥的方法和裝置。
[0002] 和給藥裝置。

【背景技術(shù)】
[0003] 現(xiàn)代藥物研究開發(fā)過程中，藥物的的活性篩選是其中一個(gè)重要環(huán)節(jié)，現(xiàn)有的藥物 活性篩選多采用體外篩選法和體內(nèi)篩選法。其中體內(nèi)篩選法能夠更直接的反應(yīng)藥物在體內(nèi) 環(huán)境中的作用，在藥物篩選過程中該方法具有重要地位。
[0004] 采用體內(nèi)藥物篩選方法就必須首先建立合適的動(dòng)物模型，其次還需要合適的給藥 方法。藥物研究者們通過各種方式已經(jīng)建立了許多有效的動(dòng)物模型，例如常見的有高血壓 模型、老年癡呆模型、血栓模型等等。給藥方式一般傳統(tǒng)的有灌胃口服，肌肉注射或者靜脈 注射等。在藥物研究過程中，往往出現(xiàn)新開發(fā)的藥物的量很小，若采用灌胃或者注射等傳 統(tǒng)方法就需要較大的需求量，這就導(dǎo)致一些存量小的化合物或藥物得不到有效的藥效學(xué)研 究。同時(shí)，藥物在動(dòng)物體內(nèi)存在首過效應(yīng)和血腦屏障，對藥物的吸收利用和到達(dá)有效部位形 成障礙。特別是進(jìn)行腦部相關(guān)疾病研究的過程中，出現(xiàn)藥物不能吸收利用或者不能透過血 腦屏障，不能真是體現(xiàn)藥物的相關(guān)藥效。為了克服以上情況，研究者們發(fā)明了腦室注射的方 法，腦室注射具有用藥量小、直接使藥物到達(dá)腦部從而避開血腦屏障，突破了傳統(tǒng)方法中許 多限制。但是在腦室注射方法應(yīng)用的過程中也遇到許多問題，譬如在一些藥物篩選的過程 中需要多次給藥，由于腦部給藥過程中容易造成物理性損傷，多次注射后給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成 的損傷加大，可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，嚴(yán)重時(shí)會(huì)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡。本發(fā)明中采用新的給藥裝 置，實(shí)現(xiàn)了給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦室連續(xù)給藥，避免了對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的物理損傷，提高實(shí)驗(yàn)的成功率。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有的給藥技術(shù)不足，提供一種一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部給藥的方 法和裝置。
[0006] 本發(fā)明的目的是按照以下步驟實(shí)現(xiàn)的：采用連續(xù)給藥裝置， 1、 以健康的或經(jīng)造模的小鼠或大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物； 2、 將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用30%的水合氯醛麻醉，固定于腦定位儀上，確定側(cè)腦室位置； 3、 按上述步驟獲得埋管定位坐標(biāo)，對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的側(cè)腦室埋入上述中的給藥導(dǎo)管，見腦 脊液從導(dǎo)管中溢出，即標(biāo)志埋管成功，遂以牙科水泥將導(dǎo)管固定在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物頭部； 4、 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物埋管成功后4天內(nèi)，每天連續(xù)肌肉注射0. 2ml80萬單位青霉素鈉（80萬單 位）對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行消炎； 給藥：取10 μ 1的微量注射器吸取待實(shí)驗(yàn)的藥品溶液適量，將微量進(jìn)樣器的針頭部分 插入已經(jīng)埋入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部的導(dǎo)管中，插入深度為0. 5?2cm，勻速給藥，根據(jù)實(shí)驗(yàn)安排，可 以連續(xù)從導(dǎo)管中對小鼠腦部進(jìn)行給藥。
[0007] 實(shí)施本發(fā)明方法，需要使用專門的給藥裝置。
[0008] 本發(fā)明的給藥裝置包括一支給藥導(dǎo)管，一能固定在導(dǎo)管的套環(huán)，一平頭微量注射 器，給藥導(dǎo)管可以選擇從4?12號頭皮針上截取，長度約為8?20mm，材質(zhì)為金屬。套環(huán)選 擇在導(dǎo)管2?12mm處固定，材質(zhì)可以為橡膠布或不銹鋼，由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部體積和尺寸均 較小，上述裝置的尺寸范圍均是為實(shí)施本發(fā)明而通過多次試驗(yàn)和數(shù)據(jù)分析確定的，為實(shí)現(xiàn) 本發(fā)明所必須。例如，導(dǎo)管的內(nèi)徑過大可能會(huì)引起對腦組織的損傷或破壞，若導(dǎo)管的內(nèi)徑過 小會(huì)影響給藥的速度，延長給藥時(shí)間以致影響給藥效果。套環(huán)的固定位置過長，在給藥過程 中插入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦內(nèi)過深，對腦組織形成破壞；若固定位置過短，導(dǎo)管插入深度不夠，未能 進(jìn)入腦室到達(dá)目標(biāo)位置，影響給藥效果。
[0009] 需要明確指出的是：上述步驟描述的本發(fā)明實(shí)驗(yàn)方法不是用于疾病的診斷或治 療，而是藥物研究過程中藥理學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法。該方法也不是以治療為目的的外科手術(shù)方 法。本發(fā)明中方法的實(shí)施具有再現(xiàn)性，醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】的工作人員能夠重復(fù)實(shí)施專利申請中 上述步驟描述的本發(fā)明方法。
[0010] 本發(fā)明中方法的積極效果：采用了對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部埋管法，使對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部注 射更加便捷，并且解決了以往腦部連續(xù)給藥多次穿刺對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的物理性損傷比較大的問 題，避免物理損傷對藥物研究過程的影響。本發(fā)明是一種實(shí)用性很強(qiáng)的對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦室連 續(xù)給藥的新方法。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0011] 圖1為給藥裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0012] 圖2是空白組海馬神經(jīng)切片 圖中神經(jīng)細(xì)胞排列緊密，無核固縮溶解腫脹發(fā)生，細(xì)胞突觸明顯。
[0013] 圖3是給藥組海馬神經(jīng)切片 圖中神經(jīng)細(xì)胞排列緊密，偶見核固縮，無溶解和腫脹發(fā)生。
[0014] 圖4是模型組海馬神經(jīng)切片 圖中神經(jīng)細(xì)胞排列稀疏，細(xì)胞溶解消失，可見核固縮。

【具體實(shí)施方式】
[0015] 實(shí)施例1 : 實(shí)驗(yàn)材料：取經(jīng)造模成功的老年癡呆癥小鼠（AD小鼠）20只，體重為30?35g。其中 10只用于海馬注射多奈哌齊；10只用于空白實(shí)驗(yàn)(注射生理鹽水)。多奈哌齊為大連美 侖生物制藥有限公司生產(chǎn)，生理鹽水為吉林都邦藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。
[0016] 給藥裝置見圖1，包括有給藥導(dǎo)管1，導(dǎo)管為一段從12號頭皮針截取的長12_的 不銹鋼導(dǎo)管。一能固定在導(dǎo)管上的套環(huán)2,套環(huán)在導(dǎo)管上的位置如3所示，在導(dǎo)管上的高度 為 Smnin
[0017] 步驟：1、將實(shí)驗(yàn)小鼠用30%的水合氯醛麻醉，固定于小鼠腦定位儀上，確定海馬位 置。
[0018] 2、按上述步驟獲得埋管定位坐標(biāo)，對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的海馬埋入本發(fā)明上述中的給藥導(dǎo) 管，見腦脊液從導(dǎo)管中溢出，即標(biāo)志埋管成功。遂以牙科水泥將導(dǎo)管固定在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物頭部。 3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物埋管成功后3天內(nèi)，每天連續(xù)肌肉注射0. 2ml青霉素鈉（80萬單位)對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 進(jìn)行消炎。
[0019] 4、給藥：用微量注射器(采購)吸取0. 2mg/ml的多奈哌齊溶液0. 2 μ 1，將微量進(jìn)樣 器的針頭部分插 入已經(jīng)埋入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部的導(dǎo)管中，插入深度為I. 2cm，用時(shí)2分鐘將藥液勻速注入海 馬。給藥頻次為每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物每天一次，連續(xù)給藥5天。
[0020] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：經(jīng)本發(fā)明中給藥系統(tǒng)給藥后，小鼠腦海馬神經(jīng)細(xì)胞切片經(jīng)蘇木精曙紅 染色后，觀察發(fā)現(xiàn)模型組中海馬神經(jīng)細(xì)胞排列稀疏，細(xì)胞溶解消失，可見核固縮。給藥組(注 射多奈哌齊）神經(jīng)細(xì)胞排列緊密，偶見核固縮。空白組(注射生理鹽水）細(xì)胞排列緊密，無核 固縮溶解腫脹現(xiàn)象產(chǎn)生，無炎性細(xì)胞浸潤。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明通過本發(fā)明中的給藥系統(tǒng)注射多 奈哌齊達(dá)到了抗老年癡呆作用。
[0021] 實(shí)施例2 本實(shí)施例中與實(shí)施例1的區(qū)別僅在于：給藥組小鼠腦室注射的藥物為2mg/ml石杉堿甲 的溶液2 μ 1，連續(xù)給藥5天，通過本方法注射石杉堿甲溶液達(dá)到抗老年癡呆作用。
[0022] 實(shí)施例3 本實(shí)施例中與實(shí)施例1的區(qū)別僅在于：給藥組小鼠腦室注射的藥物為3mg/ml的依達(dá)拉 奉溶液2 μ 1，連續(xù)給藥5天，通過本方法注射依達(dá)拉奉溶液達(dá)到鎮(zhèn)靜催眠作用。
[0023] 實(shí)施例4 本實(shí)施例中與實(shí)施例1的區(qū)別僅在于：給藥組小鼠腦室注射的藥物為2mg/ml的酸棗仁 皂苷A溶液2 μ 1，連續(xù)給藥5天，通過本方法注射酸棗仁皂苷A溶液達(dá)到鎮(zhèn)靜催眠作用。
[0024] 實(shí)施例5 本實(shí)施例中與實(shí)施例1的區(qū)別僅在于：給藥組小鼠腦室注射的藥物為2mg/ml的鹽酸氟 西汀溶液2 μ 1，連續(xù)給藥5天，通過本方法注射鹽酸氟西汀溶液達(dá)到抗抑郁作用。
[0025] 本發(fā)明方法中給藥裝置參數(shù)對給藥效果影響實(shí)驗(yàn)舉例： 給藥裝置的結(jié)構(gòu)相同，均為一導(dǎo)管，一能在導(dǎo)管上固定的套環(huán)，一平頭微量注射器組 成，但導(dǎo)管的型號和長度，套環(huán)的固定位置和注射器插入導(dǎo)管中的深度不同，導(dǎo)管材質(zhì)為不 銹鋼，套環(huán)材質(zhì)為橡膠布。實(shí)驗(yàn)的其余條件同實(shí)施例1:

【權(quán)利要求】
1. 一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部給藥的方法，其特征在于：按以下步驟進(jìn)行：采用連續(xù)給藥裝置， 以健康的或經(jīng)造模的小鼠或大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物； 將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用30%的水合氯醛麻醉，固定于小鼠腦定位儀上，確定側(cè)腦室位置； 按上述步驟獲得埋管定位坐標(biāo)，對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的側(cè)腦室埋入連續(xù)給藥裝置中的給藥導(dǎo) 管，見腦脊液從導(dǎo)管中溢出，即標(biāo)志埋管成功，遂以牙科水泥將導(dǎo)管固定在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物頭部； 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物埋管成功后4天內(nèi)，每天連續(xù)肌肉注射0. 2ml80萬單位青霉素鈉，對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 進(jìn)行消炎； 給藥：取10 μ 1的微量注射器吸取待實(shí)驗(yàn)的藥品溶液適量，將微量進(jìn)樣器的針頭部分 插入已經(jīng)埋入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部的導(dǎo)管中，插入深度為0. 5?2. 0cm，勻速給藥，根據(jù)實(shí)驗(yàn)安排， 可以連續(xù)從導(dǎo)管中對小鼠腦部進(jìn)行給藥。
2. 如權(quán)利要求1所述的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部給藥的方法，其特征在于：所說的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為小 鼠及大鼠。
3. -種如權(quán)利要求1所述的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部給藥的方法中的連續(xù)給藥裝置，其特征在于 包括一支給藥導(dǎo)管，一能固定在導(dǎo)管的套環(huán)，一平頭微量注射器，給藥導(dǎo)管可以選擇從4? 12號頭皮針上截取，長度約為8?20mm，材質(zhì)為金屬，套環(huán)以可以固定在導(dǎo)管上為佳，套環(huán) 選擇在導(dǎo)管2?12mm處固定，材質(zhì)可以為橡膠布或不銹鋼。
【文檔編號】A61K31/43GK104274255SQ201310618576
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2013年11月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月29日
【發(fā)明者】賈英, 趙旭, 毛歆, 許璇, 吳博, 畢開順 申請人:沈陽藥科大學(xué)