一種舒心寧片的應(yīng)用及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供舒心寧片在制備抑制B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，舒心寧片的制備方法為：取丹參100g、川芎100g、赤芍200g、紅花80g、當(dāng)歸80g、太子參80、薤白80g、瓜蔞皮80g、遠(yuǎn)志60g、降香60g、石菖蒲60g、甘草60g，以上十二味，按常規(guī)方法制備成片劑。
【專利說明】—種舒心寧片的應(yīng)用及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種舒心寧片的應(yīng)用及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]舒心寧片記載于衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)，制備方法為:取丹參100g、川芎100g、赤芍200g、紅花80g、當(dāng)歸80g、太子參80、薤白80g、瓜萎皮80g、遠(yuǎn)志60g、降香60g、石菖蒲60g、甘草60g,以上十二味，川芎、赤芍各50g粉碎成細(xì)粉，過篩，余量酌予碎斷；紅花用75°C溫水浸潰二次，每次2小時(shí)，合并浸液，濾過，濾液濃縮至稠膏狀；降香粉碎成粗粉，提取揮發(fā)油后，殘?jiān)c其余丹參等八味以及碎斷的川芎、赤芍、加水煎煮兩次，合并煎液，濾過，濾液濃縮至65°C時(shí)相對(duì)密度為1.40的清膏，加入上述細(xì)粉及稠膏，混勻，干燥，粉碎，過篩制成顆粒，加入降香揮發(fā)油，混勻，壓制成800片，包糖衣，即得，現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有其在制備抑制B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]發(fā)明目的:為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種舒心寧片的應(yīng)用及制備方法。
[0004]技術(shù)方案:本發(fā)明的目的是通過如下的方案實(shí)現(xiàn)的:
[0005]舒心寧片在制備抑制B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，舒心寧片的制備方法為:取丹參100g、川芎100g、赤芍200g、紅花80g、當(dāng)歸80g、太子參80、薤白80g、瓜萎皮80g、遠(yuǎn)志60g、降香60g、 石菖蒲60g、甘草60g,以上十二味,川彎、赤茍各50g粉碎成細(xì)粉，過篩，余量酌予碎斷；紅花用75°C溫水浸潰二次，每次2小時(shí)，合并浸液，濾過，濾液濃縮至稠膏狀；降香粉碎成粗粉，提取揮發(fā)油后，殘?jiān)c其余丹參等八味以及碎斷的川芎、赤芍、加水煎煮兩次，合并煎液，濾過，濾液濃縮至65°C時(shí)相對(duì)密度為1.40的清膏，加入上述細(xì)粉及稠膏，混勻，干燥，粉碎，過篩制成顆粒，加入降香揮發(fā)油，混勻，壓制成800片，包糖衣，SP得。
[0006]上述舒心寧片在制備抑制B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用中，降香粉碎成粗粉，提取揮發(fā)油后，殘?jiān)c其余丹參等八味以及碎斷的川芎、赤芍、加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的8-12倍量，煎煮1-2h，第二次加水為藥材重量的6-10倍量，煎煮
1-2h。
[0007]有益效果:舒心寧片能抑制B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖，可用于制備抑制B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0008]以下通過實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。[0009]實(shí)施例1
[0010]取丹參100g、川彎100g、赤芍200g、紅花80g、當(dāng)歸80g、太子參80、薤白80g、瓜萎皮80g、遠(yuǎn)志60g、降香60g、石菖蒲60g、甘草60g,以上十二味,川彎、赤茍各50g粉碎成細(xì)粉，過篩，余量酌予碎斷；紅花用75°C溫水浸潰二次，每次2小時(shí)，合并浸液，濾過，濾液濃縮至稠膏狀；降香粉碎成粗粉，提取揮發(fā)油后，殘?jiān)c其余丹參等八味以及碎斷的川芎、赤芍、加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的8倍量，煎煮lh，第二次加水為藥材重量的6倍量，煎煮lh，合并煎液，濾過，濾液濃縮至65°C時(shí)相對(duì)密度為1.40的清膏，加入上述細(xì)粉及稠膏，混勻，干燥，粉碎，過篩制成顆粒，加入降香揮發(fā)油，混勻，壓制成800片，包糖衣，即得。
[0011]實(shí)施例2
[0012]取丹參100g、川芎100g、赤芍200g、紅花80g、當(dāng)歸80g、太子參80、薤白80g、瓜萎皮80g、遠(yuǎn)志60g、降香60g、石菖蒲60g、甘草60g,以上十二味,川彎、赤茍各50g粉碎成細(xì)粉，過篩，余量酌予碎斷；紅花用75°C溫水浸潰二次，每次2小時(shí)，合并浸液，濾過，濾液濃縮至稠膏狀；降香粉碎成粗粉，提取揮發(fā)油后，殘?jiān)c其余丹參等八味以及碎斷的川芎、赤芍、加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的10倍量，煎煮1.5h，第二次加水為藥材重量的8倍量，煎煮1.5h，合并煎液，濾過，濾液濃縮至65°C時(shí)相對(duì)密度為1.40的清膏，加入上述細(xì)粉及稠膏，混勻，干燥，粉碎，過篩制成顆粒，加入降香揮發(fā)油，混勻，壓制成800片，包糖衣，SP得。
[0013]實(shí)施例3
[0014]取丹參100g、川彎100g、赤芍200g、紅花80g、當(dāng)歸80g、太子參80、薤白80g、瓜萎皮80g、遠(yuǎn)志60g、降香60g、石菖蒲60g、甘草60g,以上十二味,川彎、赤茍各50g粉碎成細(xì)粉，過篩，余量酌予碎斷；紅花用75°C溫水浸潰二次，每次2小時(shí)，合并浸液，濾過，濾液濃縮至稠膏狀；降香粉碎成粗粉，提取揮發(fā)油后，殘?jiān)c其余丹參等八味以及碎斷的川芎、赤芍、加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的12倍量，煎煮2h，第二次加水為藥材重量的10倍量，煎煮2h，合并煎液，濾過， 濾液濃縮至65°C時(shí)相對(duì)密度為1.40的清膏，加入上述細(xì)粉及稠膏，混勻，干燥，粉碎，過篩制成顆粒，加入降香揮發(fā)油，混勻，壓制成800片，包糖衣，SP得。
[0015]實(shí)施例4:舒心寧片抑制B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料
[0016]I實(shí)驗(yàn)材料
[0017]1.1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株
[0018]B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0019]1.2實(shí)驗(yàn)藥物
[0020]研究藥物:本發(fā)明舒心寧片:按實(shí)施例3方法制備。
[0021 ] 藥液儲(chǔ)液:稱取IOOmg舒心寧片，溶于5ml無水乙醇中，0.2 μ m濾器過濾，500 μ Idoff管分裝，-20°c存儲(chǔ)，同時(shí)0.2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對(duì)照組之用。
[0022]1.3實(shí)驗(yàn)試劑
[0023]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號(hào):2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號(hào):2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0 公司批號(hào):2010242);Str 印 tomycin Su I fat e( AMRE SCO公司批號(hào):2010382);無水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號(hào):080310182);MTT(Biosharp批號(hào):0793) ; PBS (實(shí)驗(yàn)室自配)；1.4實(shí)驗(yàn)器材
[0024]萊卡倒置顯微鏡(德國(guó)Leica型號(hào):DM1L);可見-紫外光微孔板檢測(cè)儀(美國(guó)MD公司型號(hào):SPECTRA MAX190) ；C02培養(yǎng)箱(FORMA型號(hào):3111);超凈臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司制造型號(hào):SW-CJ-ZFD);純水儀(美國(guó)Spring公司型號(hào):S/N020579);精密移液器(法國(guó)吉爾森公司型號(hào):P2);電子天平(德國(guó)賽多利斯有限公司型號(hào):BT323S);全自動(dòng)高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號(hào):MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號(hào):DHG9123A);冰箱(西門子公司型號(hào):KG18V21TI);液氮罐(CBS型號(hào):2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào):ΚΑ-1000) ;0.2μπι濾器(MILLIP0RE型號(hào):SLGP033RB) ;IOcm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
[0025]2實(shí)驗(yàn)方法
[0026]1) B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(10cm培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個(gè)/ml。
[0027]2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。
[0028]3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50%_70%，加入舒心寧片溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
[0029]4) 24h 后加入 20 μl MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0030]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μl 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)量各孔的吸光值。
[0031]6)同時(shí)設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。
[0032]7)結(jié)果以藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率表示:
[0033]細(xì)胞增值抑制率(％)=(對(duì)照孔OD值-給藥孔OD值)/對(duì)照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0034]3統(tǒng)計(jì)處理
[0035]采用Microsoft Excel2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean+ S.D.表不。
[0036]4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0037]MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì)B16細(xì)胞增殖抑制有差異(p〈0.05)，劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性(P〈0.01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異(Ρ〈0.001)。
[0038]表1舒心寧片對(duì)Β16小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖抑制影響研究(X土SD)
【權(quán)利要求】
1.舒心寧片在抑制B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于舒心寧片的制備方法為:取丹參100g、川芎100g、赤芍200g、紅花80g、當(dāng)歸80g、太子參80、薤白80g、瓜萎皮80g、遠(yuǎn)志60g、降香60g、石菖蒲60g、甘草60g,以上十二味,川彎、赤茍各50g粉碎成細(xì)粉，過篩，余量酌予碎斷；紅花用75°C溫水浸潰二次，每次2小時(shí)，合并浸液，濾過，濾液濃縮至稠膏狀；降香粉碎成粗粉，提取揮發(fā)油后，殘?jiān)c其余丹參等八味以及碎斷的川芎、赤芍、加水煎煮兩次，合并煎液，濾過，濾液濃縮至65°C時(shí)相對(duì)密度為1.40的清膏，加入上述細(xì)粉及稠膏，混勻，干燥，粉碎，過篩制成顆粒，加入降香揮發(fā)油，混勻，壓制成800片，包糖衣，SP得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種舒心寧片在抑制B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于降香粉碎成粗粉，提取揮發(fā)油后，殘?jiān)c其余丹參等八味以及碎斷的川芎、赤芍、加水煎煮兩次，第一次加水為藥材重量的8-12倍量，煎煮l_2h，第二次加水為藥材重量的6-10倍量，煎煮1-`2h。
【文檔編號(hào)】A61K9/20GK103690751SQ201310706650
【公開日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年12月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月20日
【發(fā)明者】李強(qiáng) 申請(qǐng)人:青島琴誠(chéng)醫(yī)藥技術(shù)有限公司