一種治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的中藥組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的中藥組合物。為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，減輕系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的痛苦，本發(fā)明提供了一種治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的中藥組合物該治療藥物具有顯著的調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群活性，其療效顯著、安全可靠，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。
【專利說(shuō)明】一種治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的中藥組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的中藥組合物及其醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002]系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus ；SLE)是一種彌漫性、全身性自身免疫病，主要累及皮膚粘膜、骨骼肌肉、腎臟及中樞神經(jīng)系統(tǒng)，同時(shí)還可能累及肺、心臟、血液等多個(gè)器官和系統(tǒng)，表現(xiàn)出多種臨床表現(xiàn)，其病因及發(fā)病機(jī)理尚不明確，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中可檢測(cè)到多種自身抗體和免疫學(xué)異常，淋巴細(xì)胞功能異常及多種細(xì)胞因子分泌失衡在該病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，有研究證實(shí)系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人外周血中⑶3+⑶4+T細(xì)胞下降，⑶3+⑶8+T上升，IL-10水平上調(diào)，其中IL-10作為Th類細(xì)胞因子的代表在SLE發(fā)病機(jī)制中倍受關(guān)注。白介素是一大類非均一的調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、介導(dǎo)信號(hào)傳遞的多肽類，IL-10在系統(tǒng)性紅斑狼瘡研究中較受關(guān)注。IL-10是一個(gè)多效性細(xì)胞因子，具有免疫刺激和免疫抑制雙重作用，其免疫刺激作用主要是提高B細(xì)胞的存活率，促進(jìn)B細(xì)胞的增殖、MHC-1I類抗原表達(dá)以及抗體的分泌。有研究表明IL-10可以刺激系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者PBMCs產(chǎn)生抗dsDNA抗體，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者無(wú)論在活動(dòng)期還是緩解期，其體內(nèi)IL-10水平始終高于正常人。
[0003]系統(tǒng)性紅斑狼瘡目前尚無(wú)根治辦法，很多患者需要長(zhǎng)期甚至終身治療。西醫(yī)治系統(tǒng)性紅斑狼瘡多采用激素的療法，激素治系統(tǒng)性紅斑狼瘡具有卓著的療效，但激素具有相當(dāng)大的副作用，長(zhǎng)期大量的使用激素不利于患者的身心健康，不僅如此，激素的減停極有可能導(dǎo)致病情加重。中醫(yī)治系統(tǒng)性紅斑狼瘡多采用中藥調(diào)劑的辦法，中藥調(diào)劑治系統(tǒng)性紅斑狼瘡雖具有卓著療效，但療效僅停留在緩解癥狀側(cè)面上，很難從根本上對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡進(jìn)行治療，中醫(yī)治系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一個(gè)長(zhǎng)期的過(guò)程，一般堅(jiān)持治療半年后才看到療效。因此，目前系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療方法都存在一定局限性。尋找一種新的有效藥物來(lái)治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者有非常重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，減輕系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的痛苦，本發(fā)明提供了一種治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的中藥組合物其療效顯著、安全可靠，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案為:
一種治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的中藥組合物，該中藥組合物由下列重量份的原料制成:青蒿10-12份、丹皮5-8份、淫羊藿6-9份、石斛3-5份、懷牛膝10_12份、蓮心10-12份、雞血藤3-5份、陳皮3-5份、丹參10-12份、金銀花8-10份、赤芍6_9份、茯苓10-12份、半夏10-12份、黨參10-12份、車前子12-15份、玄參9-12份。
[0006]上述所 述的中藥組合物中，還可以含有甘草5-8份和女貞子12-15份。該兩種中藥可以進(jìn)一步增強(qiáng)本發(fā)明上述中藥組合物的治療效果。[0007]本發(fā)明還請(qǐng)求保護(hù)上述中藥組合物在制備治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡藥物中的用途。本發(fā)明藥效實(shí)施例7顯示，在T淋巴細(xì)胞亞群分析試驗(yàn)中，與SLE模型組相比，本發(fā)明能使SLE樣小鼠下降的⑶3+⑶4+T細(xì)胞上升，使上升的⑶3+⑶8+T下降，糾正T細(xì)胞亞群的失衡狀態(tài)；在血清IL-10、抗ds-DNA抗體含量測(cè)定試驗(yàn)中，與SLE模型組相比，本發(fā)明能顯著降低SLE小鼠血清IL-10和抗ds-DNA抗體水平的升高，其中中藥組合物中劑量組與正常對(duì)照組無(wú)顯著性差異，說(shuō)明本發(fā)明的藥物對(duì)于SLE小鼠治療效果顯著；在尿微量白蛋白的測(cè)定試驗(yàn)中，SLE模型組白蛋白含量明顯升高，反映SLE小鼠腎臟有損傷，本發(fā)明能顯著降低SLE小鼠尿液中白蛋白的含量，中藥組合物低、中劑量組效果尤為顯著，優(yōu)于陽(yáng)性藥，并且中藥組合物低、中劑量組與正常對(duì)照組無(wú)顯著性差異，表明本發(fā)明的藥物對(duì)于SLE小鼠腎臟損傷具有突出的治療效果。
[0008]為了更好地表達(dá)本發(fā)明的中藥組合物，本發(fā)明的中藥組合物可以制備成臨床上常用的劑型。如，粉狀制劑、散劑、丸劑、丹劑、膏劑、顆粒劑、口服液、糖漿、片劑、膠囊劑等制劑，所述藥物制劑均可按照本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的中藥制劑制備方法制備得到。優(yōu)選地，本發(fā)明中藥組合物按照常規(guī)制備工藝制備成散劑、水劑、片劑或膠囊劑。
[0009]本發(fā)明還提供了一種上述所述中藥組合物的制備方法，其主要包含下述步驟:取處方量上述中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的4-9倍加入體積濃度為40%-95%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時(shí)間為2-5h，濾過(guò)，濾液回收乙醇，冷卻過(guò)濾，用水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；本領(lǐng)域技術(shù)人員可在該制備方法技術(shù)上制備得到臨床上常用中藥藥物劑型，如片劑、膠囊劑等。
[0010]本發(fā)明中藥組合物在治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡方面，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)勢(shì):
I)與當(dāng)前治療的化學(xué)治療藥物相比，本發(fā)明中藥組合物為天然純中藥制劑，不良反應(yīng)
和副作用顯著降低，且本發(fā)明中藥組合物作用全面，藥物治療效果更佳，并提高了患者的生活質(zhì)量。
[0011]2)本發(fā)明中藥組合物中含有多種藥物組分，作用靶點(diǎn)眾多，藥理實(shí)驗(yàn)顯示其與現(xiàn)有的系統(tǒng)性紅斑狼瘡治療藥物在治療方面具有顯著的協(xié)同作用，并且可以大幅度減少系統(tǒng)性紅斑狼瘡并發(fā)癥，提高病人的用藥依從性。
【具體實(shí)施方式】
[0012]以下通過(guò)具體實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該知曉，所述實(shí)施例并不以任何方式限制本發(fā)明。
[0013]一)制劑實(shí)施例部分
實(shí)施例1本發(fā)明中藥組合物及制備工藝
中藥組分的重量份:青蒿10份、丹皮5份、淫羊藿6份、石斛3份、懷牛膝10份、蓮心10份、雞血藤3份、陳皮3份、丹參10份、金銀花8份、赤芍6份、茯苓10份、半夏10份、黨參10份、車前子12份、玄參9份。
[0014]取處方量上述中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的4-9倍加入體積濃度為40%-95%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時(shí)間為2-5h，濾過(guò)，濾液回收乙醇，冷卻過(guò)濾，用水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；本領(lǐng)域技術(shù)人員可在該制備方法技術(shù)上制備得到臨床上常用中藥藥物劑型，如片劑、膠囊劑等。[0015]實(shí)施例2本發(fā)明中藥組合物及制備工藝
中藥組分的重量份:青蒿12份、丹皮8份、淫羊藿9份、石斛5份、懷牛膝12份、蓮心12份、雞血藤5份、陳皮5份、丹參12份、金銀花10份、赤芍9份、茯苓12份、半夏12份、黨參12份、車前子15份、玄參12份。
[0016]制備工藝同實(shí)施例1。
[0017]實(shí)施例3本發(fā)明中藥組合物及制備工藝
中藥組分的重量份:青蒿11份、丹皮7份、淫羊藿7份、石斛4份、懷牛膝11份、蓮心11份、雞血藤4份、陳皮4份、丹參11份、金銀花9份、赤茍8份、獲茶11份、半夏11份、黨參11份、車前子13份、玄參10份。
[0018]制備工藝同實(shí)施例1。
[0019]實(shí)施例4本發(fā)明中藥組合物及制備工藝
中藥組分的重量份:青蒿10份、丹皮5份、淫羊藿6份、石斛3份、懷牛膝10份、蓮心10份、雞血藤3份、陳皮3份、丹參10份、金銀花8份、赤芍6份、茯苓10份、半夏10份、黨參10份、車前子12份、玄參9份、甘草5份、女貞子13份。
[0020]制備工藝同實(shí)施例1。
[0021]實(shí)施例5本發(fā)明 中藥組合物及制備工藝
中藥組分的重量份:青蒿12份、丹皮8份、淫羊藿9份、石斛5份、懷牛膝12份、蓮心12份、雞血藤5份、陳皮5份、丹參12份、金銀花10份、赤芍9份、茯苓12份、半夏12份、黨參12份、車前子15份、玄參12份、甘草8份、女貞子12份。
[0022]制備工藝同實(shí)施例1。
[0023]實(shí)施例6本發(fā)明中藥組合物及制備工藝
中藥組分的重量份:青蒿11份、丹皮7份、淫羊藿7份、石斛4份、懷牛膝11份、蓮心11份、雞血藤4份、陳皮4份、丹參11份、金銀花9份、赤茍8份、獲茶11份、半夏11份、黨參11份、車前子13份、玄參10份、甘草6份、女貞子15份。
[0024]制備工藝同實(shí)施例1。
[0025](二)藥效實(shí)施例部分
實(shí)施例7中藥組合物注射劑對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡MRL/lpr小鼠的影響
.1.實(shí)驗(yàn)材料
. 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組
8周齡系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE) MRL/lpr小鼠50只，雌性，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只。ICR小鼠10只，雌性，作為正常對(duì)照組小鼠。
[0026]正常對(duì)照組:灌胃給予溶劑；
SLE模型組:灌胃給予溶劑；
潑尼松組:灌胃給予5mg/kg ；
中藥組合物低劑量組:灌胃給予本發(fā)明實(shí)施例1制備的藥物0.5mg/kg ；
中藥組合物中劑量組:灌胃給予本發(fā)明實(shí)施例1制備的藥物lmg/kg ；
中藥組合物高劑量組:灌胃給予本發(fā)明實(shí)施例1制備的藥物4mg/kg。
[0027]所有試驗(yàn)組每天給藥1次，連續(xù)給藥3周，于給藥結(jié)束時(shí)取血備用，摘取脾臟。[0028]1.2 試劑
Cl) IL-10、抗ds-DNA抗體試劑盒購(gòu)自上海柯豐生物試劑有限公司。
[0029](2) PBS:稱取下列試劑 8.5g NaCl,0.2g KCl，2.85g Na2HPO4 12Η20，0.27gKH2PO4，用IL雙蒸水定容，以上試劑均是為市售分析純。
[0030](3)紅細(xì)胞裂解液:先配制0.83%NH4C1，再配制tris溶液(稱取tris 20.594g溶于500-700ml蒸餾水中，再用IM HCl調(diào)pH 7.65至1L)，把0.83%NH4C1與tris溶液按9:1比例混合后即得。
[0031](4)抗小鼠熒光標(biāo)記單克隆抗體⑶3 (FITC)，為Beckman Coulter公司產(chǎn)品。
[0032](5)抗小鼠突光標(biāo)記單克隆抗體⑶4 (PE)、Q)8a (PE), Caltag laboratories產(chǎn)品。
[0033]實(shí)驗(yàn)方法
2.1T淋巴細(xì)胞亞群分析
脾細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備:把小鼠的脾臟放入盛有冷PBS液的培養(yǎng)皿中清洗，在玻璃勻漿器中加入3mlPBS研磨，再用200目不銹鋼網(wǎng)過(guò)濾，把脾勻漿液離心以轉(zhuǎn)速1500rpm/min離心7分鐘，棄上清液，并加入紅細(xì)胞裂解液2.5ml，混勻，靜置2分鐘后再加入PBS液2ml終止裂解反應(yīng)，再以1500rpm/min離心7分鐘，棄去上清液，用PBS洗三次后加入PBS，在熒光顯微鏡下計(jì)算細(xì)胞數(shù)。以上的操作均需在冰上。
[0034]用以上脾細(xì)胞單細(xì)`胞懸液，計(jì)細(xì)胞數(shù)后，把細(xì)胞濃度調(diào)整為5X IO6 cells/ml。每一組取其中一只小鼠脾細(xì)胞樣本做亞群分析，把已調(diào)整濃度的小鼠脾細(xì)胞樣本加入流式細(xì)胞分析專用管，每只小鼠脾細(xì)胞樣本制備兩管，每管加入樣本100 μ I。
[0035]在含有樣品專用管的第一管加5μ1⑶3 (FITC)和3μ1⑶4 (ΡΕ)，第二管加5μ1⑶3(FITC)和3μ1⑶8 (ΡΕ)。室溫閉光孵育20min，各管加入500 μ I鞘液，振蕩混勻。準(zhǔn)備上機(jī)分析。
[0036]2.2血清IL-10、抗ds-DNA抗體含量測(cè)定 按試劑盒操作說(shuō)明操作即可。
[0037]2.3尿微量白蛋白的測(cè)定:
實(shí)驗(yàn)試劑:10% (v/v)的冰醋酸溶液(PH2.8) ;0.303mol/L甘氨酸-冰醋酸緩沖液(PH3.0):稱取22.72g甘氨酸，用10%冰醋酸溶液稀釋成1000ml，加NaN3IOOmg,室溫密封可穩(wěn)定I年；溴酚藍(lán)(1.924mmol/L)貯存液:精確稱取257.36mgBPB，用無(wú)水乙醇溶至200ml，4°C冰箱可穩(wěn)定I年；溴酚藍(lán)(0.231mmol/L)顯色劑:取60mlBPB貯存液，加入2.5mlTritonX-100，用甘氨酸-冰醋酸緩沖液稀釋至500ml，室溫密封可保存I年。
[0038]標(biāo)本的采集和檢測(cè):于第20天將小鼠分別放于代謝籠中飼養(yǎng)，收集隔夜12小時(shí)尿，準(zhǔn)確記錄尿量。疊氮鈉處理后，離心(2000r/min)10min，量取儲(chǔ)存的小鼠尿液2ml，各加顯色劑1ml，混勻(防止產(chǎn)生氣泡)，用紫外分光光度計(jì)于600nm下測(cè)定吸光度A。吸光度A反映尿微量白蛋白的含量大小，A值越小，尿微量白蛋白含量越低。
[0039]實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)按照以下方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)算數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土 S)表示，多組資料比較采用方差分析，組內(nèi)比較采用t檢驗(yàn)。以P < 0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0040]實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1本發(fā)明對(duì)SLE小鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響
⑶3+⑶4+淋巴細(xì)胞是輔助性T細(xì)胞(Th)，⑶3+⑶8+淋巴細(xì)胞主要起抑制性調(diào)節(jié)作用，SLE小鼠模型組⑶3+⑶4+淋巴細(xì)胞水平比正常對(duì)照組的下降，SLE小鼠模型組⑶3+⑶8+淋巴細(xì)胞水平比正常對(duì)照組的上升，本發(fā)明能使SLE小鼠下降的⑶3+⑶4+T細(xì)胞上升，使上升的⑶3+⑶8+T下降，其中中藥組合物中劑量組效果較好，這表明，本發(fā)明的藥物能夠糾正SLE小鼠T細(xì)胞亞群的失衡狀態(tài)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
[0041]表1本發(fā)明對(duì)SLE小鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響
【權(quán)利要求】
1.一種治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的中藥組合物，其特征在于，其由下列重量份的原料制成:青蒿10-12份、丹皮5-8份、淫羊藿6-9份、石斛3-5份、懷牛膝10_12份、蓮心10-12份、雞血藤3-5份、陳皮3-5份、丹參10-12份、金銀花8-10份、赤芍6_9份、茯苓10-12份、半夏10-12份、黨參10-12份、車前子12-15份、玄參9-12份。
2.如權(quán)利要求1所述的治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的中藥組合物，其特征在于:所述的中藥組合物還含有甘草5-8份和女貞子12-15份。
3.如權(quán)利要求1或2所述的治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的中藥組合物，其特征在于:所述的中藥組合物為散劑、水劑、片劑或膠囊劑。
4.如權(quán)利要求1或2所述的治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的中藥組合物，其特征在于所述的中藥組合物的制備工藝包含下述步驟:取處方量上述中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的4-9倍加入體積濃度為40%-95%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時(shí)間為2-5h，濾過(guò)，濾液回收乙醇，冷卻過(guò)濾，用水洗 滌，干燥后即得中藥浸膏；本領(lǐng)域技術(shù)人員可在該制備方法技術(shù)上制備得到臨床上常用中藥藥物劑型。
5.權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物在制備治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡藥物中的用途。
【文檔編號(hào)】A61P37/02GK103705754SQ201410000841
【公開(kāi)日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2014年1月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月2日
【發(fā)明者】劉成俠, 張靖 申請(qǐng)人:王雪雁