一種含有外異蛋白Eda的用于眼表及角膜疾病治療的藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種含有外異蛋白Eda的用于眼表及角膜疾病治療的藥物，其有效成分包括濃度為1ng/mL～1mg/mL的外異蛋白Eda，該蛋白為天然外異蛋白Eda和/或重組外異蛋白Eda。本發(fā)明以Eda蛋白作為有效成分，對(duì)角膜沒有毒性，具有促進(jìn)角膜上皮修復(fù)和治療Eda基因突變所產(chǎn)生的眼表疾病的作用。
【專利說明】一種含有外異蛋白Eda的用于眼表及角膜疾病治療的藥物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于眼表及角膜疾病治療領(lǐng)域，具體涉及一種用于眼表及角膜疾病治療的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002]Ectodysplasin,中文名為外異蛋白，簡(jiǎn)稱Eda。它是一種保守的蛋白，在不同種屬中，Eda蛋白氨基酸序列幾乎相同，結(jié)構(gòu)相似。先天性缺乏Eda蛋白可以引起少汗型外胚層發(fā)育不良綜合癥(XLHED)。該疾病是一種較為常見的遺傳病綜合性疾病，患者會(huì)有干眼，角膜炎結(jié)膜炎等臨床表現(xiàn)。但應(yīng)用該Eda蛋白進(jìn)行眼表及角膜相關(guān)疾病的治療藥物卻未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種用于眼表及角膜疾病治療的藥物，該藥物中含有外異蛋白Eda。
[0004]本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下:
[0005]一種用于眼表及角膜疾病治療的藥物，其有效成分包括濃度為Ing/mL~lmg/mL的外異蛋白Eda，該蛋白為天然外異蛋白Eda和/或重組外異蛋白Eda，具有促進(jìn)角膜上皮增殖修復(fù)的功能。
[0006]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，該藥物為滴眼液，包括如下組分:外異蛋白Eda、溶解劑、pH調(diào)節(jié)劑、等滲劑、穩(wěn)定劑和水。
[0007]進(jìn)一步優(yōu)選的，所述溶解劑為丙二醇和/或羥丙基β環(huán)糊精；所述pH調(diào)節(jié)劑為磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、鹽酸、磷酸、硼酸、硼砂、醋酸、醋酸鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、酒石酸、酒石酸鈉、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉和碳酸氫鉀中的至少一種；所述等滲劑為氯化鈉、氯化鉀、硼酸、硼砂、硫酸鈉、硫酸鉀、硝酸鈉、硝酸鉀、醋酸鈉、甘露醇、甘油、丙二醇和葡萄糖中的至少一種。
[0008]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，該藥物為眼膏，包括如下組分:外異蛋白Eda和
眼膏基質(zhì)。
[0009]進(jìn)一步優(yōu)選的，該眼膏還包括乳化劑和眼用藥物抑菌劑。
[0010]進(jìn)一步優(yōu)選的，所述眼膏基質(zhì)中包括凡士林、液體石蠟和無水羊毛脂；所述乳化劑為卡波姆、丙二醇或聚山梨酯80 ;所述眼用藥物抑菌劑為羥苯乙酯或苯扎氯銨。
[0011]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，該藥物為眼用凝膠制劑，包括如下組分:外異蛋白Eda、凝膠基質(zhì)、溶解劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH調(diào)節(jié)劑、防腐劑和水。
[0012]進(jìn)一步優(yōu)選的，所述凝膠基質(zhì)為卡波姆、羥丙基纖維素、玻璃酸鈉和黃原膠中至少一種；所述溶解劑為丙二 醇和/或羥丙基β環(huán)糊精；所述滲透壓調(diào)節(jié)劑為氯化鈉和/或甘露醇；所述PH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉水溶液、三乙醇胺溶液、氨水和碳酸鈉溶液中的至少一種；所述防腐劑為苯扎氯銨、苯扎溴銨、三氯叔丁醇和尼泊金中的至少一種。[0013]進(jìn)一步優(yōu)選的，所述凝膠基質(zhì)為卡波姆。
[0014]一種上述天然或重組外異蛋白Eda在制備用于眼表及角膜疾病治療的藥物中的應(yīng)用。
[0015]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明以Eda蛋白作為有效成分，對(duì)角膜沒有毒性，具有促進(jìn)角膜上皮修復(fù)和治療Eda基因突變所產(chǎn)生的眼表疾病的作用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖，第一行為對(duì)照組，第二行為10ng/mL Eda組；
[0017]圖2為本發(fā)明實(shí)施例2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖，第一行為普通顯微鏡觀察結(jié)果，第二行為熒光素鈉的染色結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0018]以下通過【具體實(shí)施方式】結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步的說明和描述。
[0019]實(shí)施例1
[0020]取4只同齡C57小鼠，去除中央角膜上皮后，摘取眼球，將眼球放入含I %的FBS中進(jìn)行培養(yǎng)，隨機(jī)分為Eda給藥組和對(duì)照組,在Eda給藥組中加入10ng/ml的Eda蛋白，12h給藥一次，連續(xù)給藥36h，并在0h，12h，24h，36h，對(duì)角膜進(jìn)行用熒光素鈉著色，測(cè)量其損傷和修復(fù)面積，計(jì)算出角膜上皮修復(fù)率(具體如圖1所示)?？梢缘贸鯡da蛋白具有促進(jìn)角膜上皮修復(fù)的作用。
[0021]實(shí)施例2
[0022]選取出生后5周的野生型(WT)小鼠和Eda基因突變(Ta)小鼠各6只，每次對(duì)小鼠右眼給予7ul濃度為10ng/ml的Eda眼藥水，6小時(shí)給藥一次，連續(xù)給藥三周，對(duì)其左眼給藥等劑量的Eda眼藥水溶劑PBS。三周后，如圖2所示，對(duì)比Ta-PBS組，Ta-Eda組的角膜的熒光素鈉著色明顯減輕，眼表病變得到改善；在WT-Eda組和WT-PBS組中，均未見角膜異常?？梢缘贸鯡da蛋白對(duì)角膜沒有毒性，且具有治療Eda基因突變小鼠的眼表疾病的作用。
[0023]實(shí)施例3
[0024]滴眼液的制備方法，包括如下步驟:
[0025]1、精密稱取天然Eda蛋白或Eda重組蛋白0.0Ol-1OOOmg> PH調(diào)節(jié)劑0.l_50g、等滲劑 0.l_50g、穩(wěn)定劑 0.01-5g ；
[0026]2、先用1-50倍量的溶解劑將天然Eda蛋白或Eda重組蛋白充分溶解，攪拌混合，調(diào)PH范圍為:7.0-8.0，用注射用水定容至1000ml，得藥液；
[0027]3、在百級(jí)環(huán)境下，將步驟I所得藥液可經(jīng)微孔濾膜過濾I至5次；
[0028]4、在百級(jí)環(huán)境下，灌裝藥液至單劑量包裝容器中，封口，既得成品。
[0029]所述溶解劑為丙二醇和/或羥丙基β環(huán)糊精；所述pH調(diào)節(jié)劑為磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、鹽酸、磷酸、硼酸、硼砂、醋酸、醋酸鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、酒石酸、酒石酸鈉、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉和碳酸氫鉀中的至少一種；所述等滲劑為氯化鈉、氯化鉀、硼酸、硼砂、硫酸鈉、硫酸鉀、硝酸鈉、硝酸鉀、醋酸鈉、甘露醇、甘油、丙二醇和葡萄糖中的至少一種。[0030]實(shí)施例4
[0031]眼膏的制備方法，包括如下步驟:
[0032]1、無水羊毛脂和白凡士林加熱融化后無菌紗布過濾后150度高溫干燥滅菌Ih ；
[0033]2、液體石蠟150度高溫干燥滅菌Ih ；
[0034]3、稱取適量的天然Eda蛋白或Eda重組蛋白(使眼膏中該蛋白的終濃度為
0.0Ol-lOOOmg/mL，可加入適當(dāng)乳化劑)，加入少量液體石蠟，研成細(xì)膩糊狀，再加入滅菌的其余眼膏基質(zhì)少量，研勻，再分次加入剩余基質(zhì)(還可加入眼用藥物抑菌劑)，使成全量，無菌分裝即得Eda蛋白眼膏。
[0035]所述乳化劑為卡波姆、丙二醇或聚山梨酯80 ;所述眼用藥物抑菌劑為羥苯乙酯或苯扎氯銨。
[0036]實(shí)施例5
[0037]眼用凝膠制劑的制備方法，包括如下步驟:
[0038]1、首先用1-50倍量的溶解劑把天然Eda蛋白或Eda重組蛋白溶解；
[0039]2、再與滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH調(diào)節(jié)劑、防腐劑和水混合加熱熔解，1.5% -3.0%的凝膠基質(zhì)溶脹制成透明乳膏，與上述材料混合即得眼用凝膠制劑，眼用凝膠制劑中Eda蛋白的終濃度為 0.001-1000mg/mL。
[0040]所述凝膠基質(zhì)為卡波姆、羥丙基纖維素、玻璃酸鈉和黃原膠中至少一種；所述溶解劑為丙二醇和/或羥丙基β環(huán)糊精；所述滲透壓調(diào)節(jié)劑為氯化鈉和/或甘露醇；所述PH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉水溶液、三乙醇胺溶液、氨水和碳酸鈉溶液中的至少一種；所述防腐劑為苯扎氯銨、苯扎溴銨、三氯叔丁醇和尼泊金中的至少一種。
[0041] 以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，故不能依此限定本發(fā)明實(shí)施的范圍，SP依本發(fā)明專利范圍及說明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種含有外異蛋白Eda的用于眼表及角膜疾病治療的藥物，其特征在于:其有效成分包括濃度為Ing/mL~lmg/mL的外異蛋白Eda,該蛋白為天然外異蛋白Eda和/或重組外異蛋白Eda，具有促進(jìn)角膜上皮增殖修復(fù)的功能。
2.如權(quán)利要求1所述的一種含有外異蛋白Eda的用于眼表及角膜疾病治療的藥物，其特征在于:該藥物為滴眼液，包括如下組分:外異蛋白Eda、溶解劑、pH調(diào)節(jié)劑、等滲劑、穩(wěn)定劑和水。
3.如權(quán)利要求2所述的一種含有外異蛋白Eda的用于眼表及角膜疾病治療的藥物，其特征在于:所述溶解劑為丙二醇和/或羥丙基β環(huán)糊精；所述pH調(diào)節(jié)劑為磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、鹽酸、磷酸、硼酸、硼砂、醋酸、醋酸鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、酒石酸、酒石酸鈉、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉和碳酸氫鉀中的至少一種；所述等滲劑為氯化鈉、氯化鉀、硼酸、硼砂、硫酸鈉、硫酸鉀、硝酸鈉、硝酸鉀、醋酸鈉、甘露醇、甘油、丙二醇和葡萄糖中的至少一種。
4.如權(quán)利要求1所述的一種含有外異蛋白Eda的用于眼表及角膜疾病治療的藥物，其特征在于:該藥物為眼膏，包括如下組分:外異蛋白Eda和眼膏基質(zhì)。
5.如權(quán)利要求4所述的一種用于眼表及角膜疾病治療的藥物，其特征在于:還包括乳化劑和/或眼用藥物抑菌劑。
6.如權(quán)利要求4或5所述的一種含有外異蛋白Eda的用于眼表及角膜疾病治療的藥物，其特征在于:所述 眼膏基質(zhì)中包括凡士林、液體石蠟和無水羊毛脂；所述乳化劑為卡波姆、丙二醇或聚山梨酯80 ;所述眼用藥物抑菌劑為羥苯乙酯或苯扎氯銨。
7.如權(quán)利要求1所述的一種含有外異蛋白Eda的用于眼表及角膜疾病治療的藥物，其特征在于:該藥物為眼用凝膠制劑，包括如下組分:外異蛋白Eda、凝膠基質(zhì)、溶解劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、PH調(diào)節(jié)劑、防腐劑和水。
8.如權(quán)利要求7所述的一種含有外異蛋白Eda的用于眼表及角膜疾病治療的藥物，其特征在于:所述凝膠基質(zhì)為卡波姆、羥丙基纖維素、玻璃酸鈉和黃原膠中至少一種；所述溶解劑為丙二醇和/或羥丙基β環(huán)糊精；所述滲透壓調(diào)節(jié)劑為氯化鈉和/或甘露醇；所述PH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉水溶液、三乙醇胺溶液、氨水和碳酸鈉溶液中的至少一種；所述防腐劑為苯扎氯銨、苯扎溴銨、三氯叔丁醇和尼泊金中的至少一種。
9.如權(quán)利要求8所述的一種含有外異蛋白Eda的用于眼表及角膜疾病治療的藥物，其特征在于:所述凝膠基質(zhì)為卡波姆。
10.一種天然或重組外異蛋白Eda在制備用于眼表及角膜疾病治療的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P27/02GK103961689SQ201410215900
【公開日】2014年8月6日 申請(qǐng)日期:2014年5月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月21日
【發(fā)明者】李煒, 李三明, 張麗穎, 李娟 , 劉祖國(guó) 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)