一種治療股骨頭壞死的藥物及其制法與檢測方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療股骨頭壞死的藥物組合物。發(fā)明名稱為一種治療股骨頭壞死的藥物及其制法與檢測方法及其應(yīng)用。該藥物組合物是由以下重量份的原料制成的：取五葉藤、牛耳巖白菜、冬葵根，混合，藥材加5～15倍量水微波提取1～5次，每次15～60min，提取液合并，濃縮，干燥，粉碎成細(xì)粉，加入輔料，混勻，制成顆粒劑，即得。該藥物組合物可用于制備治療股骨頭壞死的藥物。
【專利說明】一種治療股骨頭壞死的藥物及其制法與檢測方法及其應(yīng)用
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種由五葉藤、牛耳巖白菜、冬葵根組成的具有治療股 骨頭壞死的藥物組合物。

【背景技術(shù)】
[0003] 股骨頭壞死（ONFH)是由于不同病因引起的股骨頭血液供應(yīng)破壞或骨細(xì)胞死亡引 起的病理過程。臨床上可分為創(chuàng)傷性和非創(chuàng)傷性兩大類，前者發(fā)病機(jī)制已較清楚，后者常是 全身性疾病的一個合并癥，發(fā)病機(jī)制至今仍未明了。激素性股骨頭壞死（SANFH)，屬非創(chuàng)傷 性股骨頭壞死，多發(fā)生在長期或大劑量應(yīng)用超過自身生理需要量的腎上腺皮質(zhì)激素后引起 的股骨頭壞死，是股骨頭壞死中常見的類型。其主要臨床表現(xiàn)為髖關(guān)節(jié)疼痛、活動受限，跛 行為主，后期致殘率高，嚴(yán)重影響患者的健康水平和生活質(zhì)量。臨床上常見于自身免疫性疾 病、小兒腎病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、器官移植必須長期服用激素者。據(jù)國內(nèi)外統(tǒng)計資料顯示有 激素原因引起的ONFH占0Μ?總數(shù)近一半，而在我國需要治療的0Μ?患者為500?750萬， 每年新發(fā)病例數(shù)為15?20萬，且非創(chuàng)傷性0Μ?多發(fā)生在青壯年。目前，對于自身免疫性 疾病的治療主要采取激素療法，尤其在2003年抗擊非典型性肺炎（SARS)期間，激素在發(fā)揮 重要作用的同時，也造成了更多的股骨頭壞死患者，加之近年來激素的不規(guī)范應(yīng)用，造成因 過服激素而引起股骨頭壞死者呈明顯上升趨勢。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種治療股骨頭壞死的藥物組合物。
[0005] 本發(fā)明的另一目的是提供藥物組合物的制備方法。
[0006] 本發(fā)明的還提供該藥物組合物在制備治療股骨頭壞死以及骨質(zhì)增生、骨關(guān)節(jié)炎藥 物中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明的目的是通過以下方式實現(xiàn)的： 一種治療股骨頭壞死的藥物組合物，是由以下重量份的原料制成的：五葉藤1?3,牛 耳巖白菜1?3,冬葵根1?3。
[0008] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：五葉藤1，牛耳巖白菜2,冬 葵根3。
[0009] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：五葉藤2,牛耳巖白菜3,冬 葵根2。
[0010] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：五葉藤1，牛耳巖白菜1，冬 葵根1。
[0011] 所述藥物組合物采用藥學(xué)中常規(guī)的制藥方法制備成口服制劑。
[0012] 所述藥物組合物制備成的口服制劑為片劑、丸劑、硬膠囊劑、顆粒劑、口服液。
[0013] 所述藥物組合物采用如下方法制備：取干燥的五葉藤、牛耳巖白菜、冬葵根，混合， 藥材加5?15倍量水微波提取1?5次，每次15?60min，提取液合并，濃縮，干燥，粉碎成 細(xì)粉，加入輔料，混勻，制成顆粒劑，即得。
[0014] 所述藥物組合物優(yōu)選采用如下方法制備：取干燥的五葉藤、牛耳巖白菜、冬葵根， 混合，藥材加10倍量水微波提取3次，每次30min，提取液合并，濃縮，干燥，粉碎成細(xì)粉，力口 入輔料，混勻，制成顆粒劑，即得。
[0015] 所述藥物組合物的檢測方法為： (1) 色譜條件：色譜柱：C18柱，流動相：甲醇-1 %冰乙酸比例為10:90,流速：1. OmL/ min,檢測波長：280nm，理論塔板數(shù)按牛蒡苷元峰計算應(yīng)不< 2500 ; (2) 溶液制備： ① 供試品溶液：取本發(fā)明藥物l〇g，研細(xì)，取約〇. 8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密 加入50%甲醇25mL，稱定重量，超聲處理（200W，40kHz)30min，放冷，再稱定重量，用50%甲 醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； ② 對照品溶液：精密稱取牛蒡苷元對照品5. 95mg，置50mL容量瓶中，加50%甲醇溶解， 并稀釋至刻度，搖勻；然后再從中精密量取5mL，置IOmL容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度， 搖勻，即得濃度為53. 55 μ g/mL的牛蒡苷元對照品溶液； ③ 測定：分別精密量取上述供試品溶液、對照品溶液各5 μ L，注入HPLC儀，進(jìn)行檢測。
[0016] 所述藥物組合物可用于制備治療激素性股骨頭壞死的藥物。
[0017] 所述藥物組合物可用于制備治療骨質(zhì)增生的藥物。
[0018] 所述藥物組合物可用于制備治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物。
[0019] 本發(fā)明所述的藥物組合物中的五葉藤為柳葉菜旋花科番薯屬植物五爪金龍 Ipomoea cairica (L. ) Sweet [Convolvulus cairicus L. ; I. palmata Forsk.] --ΚΙ?Ι ; 牛耳巖白菜為苦苣苔科唇柱苣苔屬植物牛耳朵CXiri ia e/wraea /feflce ZiWjfflocarjDw1S 你 J的根莖及全草；冬葵根為錦葵科錦葵屬植物冬葵Malva verticillata L.的根。
[0020] 通過如下實驗研究驗證本發(fā)明的技術(shù)效果： 實驗例一：本發(fā)明藥物組合物治療激素性股骨頭壞死的實驗研究 本實驗通過觀測兔血清中的骨鈣素（BGP)和降鈣素（CT)的水平及股骨頭病理表現(xiàn)，探 討本發(fā)明藥物組合物治療SONHl的療效。
[0021] 1實驗材料與方法 1. 1實驗動物 6月齡新西蘭白兔60只，雌雄各半，體重（2. 0?2. 5)kg，由山東大學(xué)動物實驗中心提 供。
[0022] 1. 2實驗藥品及試劑 本發(fā)明藥物組合物：取干燥的五葉藤333g、牛耳巖白菜333g、冬葵根333g，混合，藥材 加 IOOOOmL水微波提取3次，每次30min，提取液合并，濃縮，干燥，粉碎成細(xì)粉，即得。
[0023] 對比藥物A :取干燥的五葉藤500g，牛耳巖白菜500g，混合，藥材加 IOOOOmL水微 波提取3次，每次30min，提取液合并，濃縮，干燥，粉碎成細(xì)粉，即得。
[0024] 對比藥物B :取干燥的牛耳巖白菜500g、冬葵根500g，混合，藥材加 IOOOOmL水微 波提取3次，每次30min，提取液合并，濃縮，干燥，粉碎成細(xì)粉，即得。
[0025] 對比藥物C :取干燥的冬葵根500g、五葉藤500g，混合，藥材加 IOOOOmL水微波提 取3次，每次30min，提取液合并，濃縮，干燥，粉碎成細(xì)粉，即得。
[0026] 醋酸潑尼松龍注射液，浙江仙琚制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字：H33020824。
[0027] 仙靈骨葆膠囊，貴州同濟(jì)堂制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字：Z20025337。兔BGP及 CT(ELISA)試劑盒：購自蘇州卡爾文生物科技有限公司。
[0028] 1.3實驗方法 60只新西蘭白兔隨機(jī)分成空白組（n=10)和造模組（n=50)。采用賀氏造模法(賀西京， 毛履真，王坤正，等.腎上腺皮質(zhì)激素引起股骨頭缺血壞死的機(jī)制實驗研究[J].中華骨科 雜志，1992,12 (6) :440?443)，造模組肌注醋酸潑尼松龍注射液7. 5mg/kg，每周2次，共6 周；空白組肌注生理鹽水0. 32mg/kg，每周2次，共6周，同時全部動物每周注射青霉素鈉2 次以預(yù)防感染，每次5萬U/只。在第7周分別隨機(jī)處死兩組動物各2只，每只動物分別取 兩側(cè)股骨頭縱切面做He染色切片以觀察造模情況。在第9周將造模組動物隨機(jī)分為6組： 本發(fā)明藥物組合物組（n=8)、仙靈骨德組（n=8)、對比藥物A組（n=8)、對比藥物B組（n=8)、 對比藥物C組（n=8)及陽性對照組（n=8),空白組：剩余的動物為空白對照組（n=10)。自 第9周起本發(fā)明藥物組合物組每天用本發(fā)明藥物組合物（45g · kf1 · Cf1)分兩次灌胃，對 比藥物A組每天用對比藥物A(45g · kg4 · (Γ1)分兩次灌胃，對比藥物B組每天用對比藥物 B(45g · kg4 · (Γ1)分兩次灌胃，對比藥物C組每天用對比藥物C(45g · kg4 · (Γ1)分兩次灌 胃，仙靈骨葆組用仙靈骨葆膠囊（〇. Ig ?kg4 ^cT1)制成混懸液分兩次灌胃，陽性對照組和空 白組都用生理鹽水灌胃，每次15ml/只，每天2次，共治療4周。分別在造模前、造模后及治 療后抽取每只兔的耳中央動脈血，測定血清中BGP和CT的水平。
[0029] 1. 4檢測項目 (1)肉眼觀察：實驗兔的一般情況如：精神、體重、體毛、進(jìn)食及股骨頭形態(tài)。
[0030] ⑵組織形態(tài)學(xué)觀察：于第8周處死空白組和造模組各2只動物，每只動物取出雙 側(cè)股骨頭沿冠狀面正中鋸開，10%的中性福爾馬林緩沖液固定48小時，5%的硝酸液脫鈣，流 水沖洗后石蠟包埋切片，He染色，5X40倍光鏡下觀察切片中骨小梁和骨細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)， 以了解造模情況。治療結(jié)束后處死全部動物，按上述方法制成股骨頭病理切片，每張切片在 10X40倍視野下在負(fù)重區(qū)隨機(jī)選取5個視野，計算骨陷窩總數(shù)和空虛骨陷窩數(shù)，取平均空 骨陷窩率作為股骨頭病理改變程度的指標(biāo)以觀察本發(fā)明藥物組合物的治療效果。
[0031] (3)血清中BGP和CT的測定：造模前、造模后及治療后每只動物均采取耳中央動 脈血4ml，將血液標(biāo)本在常溫下靜置3小時后離心，3000r/分鐘，10分鐘，吸取上層血清， 在-40°C下保存。應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA)測定標(biāo)本中的BGP和CT的水平，操作程序按試 劑盒說明書進(jìn)行。
[0032] 1. 5統(tǒng)計學(xué)處理方法 實驗數(shù)據(jù)結(jié)果均以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（i±s)表示，采用英文SPSS軟件進(jìn)行單因素方 差分析，多組間兩兩比較選用LSD法和成組t檢驗，P < 0. 05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0033] 2實驗結(jié)果 2. 1動物一般情況及股骨頭形態(tài) 造模2周后，造模組動物出現(xiàn)不同程度的精神差，體毛稀疏，光澤黯淡，食欲減少，體重 減輕，皮下脂肪減少，6周后最為明顯，空白組動物一般情況無明顯變化。經(jīng)4周治療后造模 動物上述一般情況較治療前部分改善，但仍差于空白組。造模組和空白組動物的股骨頭外 觀形態(tài)無明顯差異，但造模組較空白組股骨頭頸部骨皮質(zhì)脆，股骨頭骨質(zhì)疏松，易鑿取。 [0034] 2. 2股骨頭切片觀察結(jié)果 (1)造模結(jié)果： 空白組：骨小梁整齊清晰，排列規(guī)則，致密飽滿。骨小梁和骨皮質(zhì)中骨細(xì)胞清晰可見，核 較大，居中，偶見骨細(xì)胞空虛，軟骨下血管豐富，骨小梁周圍成骨細(xì)胞較多。
[0035] 造模組：軟骨下骨小梁萎縮，較多的細(xì)胞核固縮，核偏位，染色深，骨髓內(nèi)大量脂肪 細(xì)胞堆積。骨小梁內(nèi)正常骨細(xì)胞數(shù)量減少，部分骨陷窩內(nèi)骨細(xì)胞消失，空骨陷窩數(shù)明顯增 多，提示股骨頭發(fā)生病理性壞死。
[0036] (2)治療結(jié)果：治療4周后全部動物處死，取股骨頭制成He切片。光鏡下： 空白組：呈正常組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)；陽性對照組：呈股骨頭壞死表現(xiàn)，壞死程度較造模結(jié) 束時無明顯改變，平均空骨陷窩率達(dá)29. 3±2. 60%，明顯高于空白組（P < 0. 05);本發(fā)明藥 物組合物組、對比藥物A組、對比藥物B組、對比藥物C組和仙靈骨葆組：部分骨細(xì)胞核邊 聚，較大部分骨細(xì)胞正常，軟骨下萎縮骨小梁和正常骨小梁并存，萎縮的仍占較大部分，部 分骨小梁得到恢復(fù)，骨髓內(nèi)有部分脂肪細(xì)胞堆積。視野下空骨陷窩仍然明顯，但較陽性對照 組明顯減少，兩組空骨陷窩率均低于空白組（P < 0.05)，本發(fā)明藥物組合物組和仙靈骨葆 組對比空骨陷窩率無明顯差異（P > 0. 05)。對比藥物A組、對比藥物B組、對比藥物C組和 仙靈骨葆組對比空骨陷窩率明顯差異（P< 0.05)。說明，本發(fā)明藥物組合物組的效果優(yōu)于 對比藥物A組、對比藥物B組、對比藥物C組。見表1。
[0037] 表1治療4周后各組的空骨陷窩率^ ±s)

【權(quán)利要求】
1. 一種治療股骨頭壞死的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的 原料制成的：五葉藤1?3,牛耳巖白菜1?3,冬葵根1?3。
2. 如權(quán)利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：五葉藤1，牛耳巖白菜2,冬葵根3。
3. 如權(quán)利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：五葉藤2,牛耳巖白菜3,冬葵根2。
4. 如權(quán)利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：五葉藤1，牛耳巖白菜1，冬葵根1。
5. 如權(quán)利要求1?4中任意一項所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物采用藥 學(xué)中常規(guī)的制藥方法制備成片劑、丸劑、硬膠囊劑、顆粒劑、口服液。
6. 如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物采用如下方法制備： 取五葉藤、牛耳巖白菜、冬葵根，混合，藥材加5?15倍量水微波提取1?5次，每次15? 60min，提取液合并，濃縮，干燥，粉碎成細(xì)粉，加入輔料，混勻，制成顆粒劑，即得。
7. 如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物采用如下方法制備：取 五葉藤、牛耳巖白菜、冬葵根，混合，藥材加10倍量水微波提取3次，每次30min，提取液合 并，濃縮，干燥，粉碎成細(xì)粉，加入輔料，混勻，制成顆粒劑，即得。
8. 如權(quán)利要求1?4任意一項所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物的檢測方 法為： (1) 色譜條件：色譜柱：C18柱，流動相：甲醇-1 %冰乙酸比例為10:90,流速：1. OmL/ min,檢測波長：280nm，理論塔板數(shù)按牛蒡苷元峰計算應(yīng)不< 2500 ; (2) 溶液制備： ① 供試品溶液：取本發(fā)明藥物l〇g，研細(xì)，取約〇.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密 加入50%甲醇25mL，稱定重量，200W，40kHz超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇 補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； ② 對照品溶液：精密稱取牛蒡苷元對照品5. 95mg，置50mL容量瓶中，加50%甲醇溶解， 并稀釋至刻度，搖勻；然后再從中精密量取5mL，置10mL容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度， 搖勻，即得濃度為53. 55 y g/mL的牛蒡苷元對照品溶液； ③ 測定：分別精密量取上述供試品溶液、對照品溶液各5 y L，注入HPLC儀，進(jìn)行檢測。
9. 如權(quán)利要求1?4任意一項所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物在制備治 療激素性股骨頭壞死的藥物中的應(yīng)用。
10. 如權(quán)利要求1?4任意一項所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物在制備 治療骨質(zhì)增生、骨關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P19/08GK104435055SQ201410770944
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月15日
【發(fā)明者】陳志祥, 楊龍彪, 唐文 申請人:陳志祥