本發(fā)明涉及免疫細(xì)胞治療，尤其涉及3'3'-cgamp在制備增強(qiáng)muc16?car-t對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效果藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、卵巢癌（ovarian-cancer,?ov）是女性婦科的三大腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌，由于卵巢位于盆腔深處，發(fā)病隱匿，早期疾病臨床特征不明顯，絕大多數(shù)患者就診時(shí)已經(jīng)為晚期，甚至多數(shù)已向遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，大部分患者失去根治性手術(shù)治療的最佳時(shí)機(jī)，導(dǎo)致卵巢癌的死亡率居?jì)D科惡性腫瘤首位，5年生存率僅有20%。近些年出現(xiàn)許多新型藥物和新型療法，但均未能徹底根治、清除癌細(xì)胞。目前臨床針對(duì)卵巢癌的治療以腫瘤細(xì)胞減滅手術(shù)聯(lián)合鉑類(lèi)藥物化療為主，但腫瘤的復(fù)發(fā)與耐藥性是治療最終失敗的原因。近些年來(lái)，靶向治療和免疫療法的快速發(fā)展，為治療卵巢癌提供了新的希望。

2、隨著免疫學(xué)、分子生物學(xué)與基因工程技術(shù)的進(jìn)展，腫瘤免疫治療已經(jīng)成為腫瘤治療手術(shù)、放療和化療之后的第四種模式。其中cgas-sting通路引起了廣泛關(guān)注，cgas-sting-tbk1軸在不同物種中是先天免疫應(yīng)答的主要信號(hào)通路。針對(duì)cgas-sting-tbk1信號(hào)通路的藥物開(kāi)發(fā)在腫瘤免疫治療方面前景廣闊，其中sting激動(dòng)劑已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)，與大多數(shù)大分子免疫檢查點(diǎn)抑制劑不同，sting激動(dòng)劑是一類(lèi)具有開(kāi)創(chuàng)性意義的小分子固有免疫激動(dòng)劑。一方面，它的分子量小，可以通過(guò)系統(tǒng)給藥在腫瘤內(nèi)實(shí)現(xiàn)較高濃度。另一方面，sting激動(dòng)劑能夠彌補(bǔ)免疫檢查點(diǎn)抑制劑的不足，通過(guò)啟動(dòng)和招募瘤內(nèi)腫瘤特異性t細(xì)胞，對(duì)“冷腫瘤”也具有良好的抗腫瘤效應(yīng)。因此，開(kāi)發(fā)新型sting激動(dòng)劑，挖掘其抗腫瘤作用機(jī)制，具有非常重要的意義。

3、當(dāng)細(xì)胞受到病原體（如病毒、細(xì)菌等）入侵時(shí)，它們會(huì)通過(guò)一系列信號(hào)通路啟動(dòng)免疫反應(yīng)。其中，3'3'-cgamp作為一種重要的第二信使分子和sting激動(dòng)劑，在這些信號(hào)通路中扮演著關(guān)鍵角色。3'3'-cgamp是由兩個(gè)核苷酸單元組成的二核苷酸，通常由環(huán)腺苷酸（camp）和環(huán)鳥(niǎo)苷酸（cgmp）構(gòu)成。它的合成通常是由細(xì)胞內(nèi)的環(huán)腺苷酸合成酶（cgas）介導(dǎo)的，在感染或細(xì)胞壓力情況下，cgas可以識(shí)別并結(jié)合到病原體的dna或rna，引發(fā)其活化并催化3'3'-cgamp的合成。一旦3'3'-cgamp被合成出來(lái)，它會(huì)作為細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)分子，通過(guò)與受體蛋白sting結(jié)合，啟動(dòng)下游免疫信號(hào)通路，導(dǎo)致干擾素的產(chǎn)生，激活天然免疫系統(tǒng)，并誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)。這些免疫反應(yīng)有助于清除病原體，保護(hù)機(jī)體免受感染。

4、黏蛋白16?(mucin16,?muc16)，是1981年美國(guó)科學(xué)家bast等從卵巢上皮癌抗原中檢測(cè)出且能被單克隆抗體oc125識(shí)別的一種糖蛋白抗原，muc16在多種腫瘤中高表達(dá)，與配體結(jié)合，通過(guò)多種腫瘤相關(guān)信號(hào)通路，對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展、遷移侵襲及腫瘤免疫具有重要作用。muc16在正常卵巢組織中不存在，但在卵巢上皮癌患者的血清中常見(jiàn)升高，是卵巢上皮癌診斷和監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)最常用的血清學(xué)生物標(biāo)志物。目前，靶向muc16的car-t（chimericantigen?receptor?t?cells,?嵌合抗原受體）治療方案已經(jīng)取得一定成效，相關(guān)臨床前研究以及臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行當(dāng)中，這些受體融合了腫瘤特異性抗體的單鏈可變片段（scfv）與效應(yīng)t細(xì)胞的信號(hào)分子，共同靶向腫瘤細(xì)胞，作為腫瘤相關(guān)抗原之一，muc16在大多數(shù)卵巢癌上過(guò)度表達(dá)，因此被認(rèn)為是car-t治療卵巢癌的理想靶點(diǎn)。

5、然而，car-t細(xì)胞治療的效果容易受機(jī)體免疫狀態(tài)影響，并且car-t細(xì)胞注射進(jìn)體內(nèi)以后，殺傷效率會(huì)隨時(shí)間增長(zhǎng)而降低。因此，如何消除免疫抑制、激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，是提高car-t治療效果的關(guān)鍵所在。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供3'3'-cgamp在制備增強(qiáng)muc16?car-t對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效果藥物中的應(yīng)用，3'3'-cgamp可以非常顯著的增強(qiáng)muc16?car-t殺傷表達(dá)muc16抗原的腫瘤靶細(xì)胞的效果，提高癌癥的治療效果。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了3'3'-cgamp在制備增強(qiáng)muc16?car-t對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效果的藥物中的應(yīng)用。

4、優(yōu)選的，所述3'3'-cgamp可增強(qiáng)muc16?car-t對(duì)表達(dá)muc16抗原的腫瘤細(xì)胞的殺傷效率。

5、優(yōu)選的，所述腫瘤細(xì)胞為表達(dá)muc16抗原的腫瘤細(xì)胞。

6、優(yōu)選的，所述表達(dá)muc16抗原的腫瘤細(xì)胞為卵巢癌細(xì)胞。

7、優(yōu)選的，所述增強(qiáng)muc16?car-t對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效果的3'3'-cgamp濃度為5~30?μm。

8、本發(fā)明所述的天然免疫激活劑3'3'-cgamp與現(xiàn)有技術(shù)相比的有益效果為：

9、（1）本發(fā)明的天然免疫激活劑環(huán)二核苷酸3'3'-環(huán)狀鳥(niǎo)苷酸-腺苷酸(3'3'-cgamp)能直接激活鼠和人樹(shù)突狀細(xì)胞，促進(jìn)免疫細(xì)胞的活化，激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的應(yīng)答，進(jìn)一步顯著的增強(qiáng)muc16?car-t殺傷表達(dá)muc16抗原的腫瘤靶細(xì)胞的效果，提高癌癥治療的效果。

10、（2）本發(fā)明所述的小分子化合物3'3'-cgamp是一種安全的抗腫瘤試劑。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，無(wú)論是普通顯微鏡還是熒光顯微鏡觀察，均未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)在3'3'-cgamp處理后發(fā)生任何異變，證明該小分子化合物很大程度上是一種安全、無(wú)顯著毒副作用的抗腫瘤試劑。并且可以適用于多種不同種類(lèi)的培養(yǎng)細(xì)胞和小鼠動(dòng)物模型，其應(yīng)用范圍廣泛，有利于多種不同抗腫瘤環(huán)境的使用，有望在臨床抗腫瘤試驗(yàn)中獲得使用和推廣。

11、（3）本發(fā)明所述的小分子免疫激活劑能夠很迅速的穿過(guò)細(xì)胞表面進(jìn)入細(xì)胞，使用非常簡(jiǎn)便易行，直接共孵育即可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤反應(yīng)。避免了其他類(lèi)型藥物活性有限、半衰期短、需要血液注射給藥等局限性。

技術(shù)特征：

1.3'3'-cgamp在制備增強(qiáng)muc16?car-t對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效果的藥物中的應(yīng)用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述3'3'-cgamp在制備增強(qiáng)muc16?car-t對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效果的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述3'3'-cgamp可增強(qiáng)muc16?car-t對(duì)表達(dá)muc16抗原的腫瘤細(xì)胞的殺傷效率。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述3'3'-cgamp在制備增強(qiáng)muc16?car-t對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效果的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤細(xì)胞為表達(dá)muc16抗原的腫瘤細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述天然免疫激活劑3'3'-cgamp在制備增強(qiáng)muc16?car-t對(duì)表達(dá)muc16抗原的腫瘤細(xì)胞的殺傷效率藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述表達(dá)muc16抗原的腫瘤細(xì)胞為卵巢癌細(xì)胞。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述3'3'-cgamp在制備增強(qiáng)muc16?car-t對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效果的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述增強(qiáng)muc16?car-t對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效果的3'3'-cgamp濃度為5~30?μm。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了3'3'?cGAMP在制備增強(qiáng)MUC16?CAR?T對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效果藥物中的應(yīng)用，屬于免疫細(xì)胞治療技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的3'3'?cGAMP能直接激活鼠和人樹(shù)突狀細(xì)胞，促進(jìn)免疫細(xì)胞的活化，增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的應(yīng)答，進(jìn)一步顯著的增強(qiáng)MUC16?CAR?T殺傷表達(dá)MUC16抗原的腫瘤靶細(xì)胞的效果，提高癌癥治療的效果。并且，3'3'?cGAMP是一種安全、無(wú)顯著毒副作用的抗腫瘤試劑，能夠很迅速的穿過(guò)細(xì)胞表面進(jìn)入細(xì)胞，使用非常簡(jiǎn)便易行，直接共孵育即可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤反應(yīng)。避免了其他類(lèi)型藥物活性有限、半衰期短、需要血液注射給藥等局限性。

技術(shù)研發(fā)人員：周翔,張文,黃文武,蔡苗苗
受保護(hù)的技術(shù)使用者：武漢科技大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/9